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Techniques de dnombrement en microbiologie alimentaire en milieu solide

(les pages indiques font rfrence au livre Activits technologiques en microbiologie Terminale BGB CRDP Bordeaux.
Type de microorganisme dnombr Moisissures (p25) Flore totale (p86) = micro-organismes arobies totaux 30C Nom Milieu au malt et saccharose PCA (plate count agar) Milieu Principaux composants Malt Saccharose Chloramphnicol Glucose extraits de levures + 1 % de lait crm pour analyse du lait cru) Technique d'ensemencement Conditions d'incubation Dilutions dnombres Tests complmentaires ou poursuite d'analyse. Aucun Aucun

Etalement de 0,1 mL de dilution en surface. 1 mL de dilution dans la masse + double couche (sauf pour eau et lait).

25C, 2 3 jours 24 heures 30C Autres possibles : 45C micro-organismes totaux thermophiles 20C micro-organismes totaux cryophiles 24 heures : 30C pour les coliformes totaux 44C pour coliformes thermotolrants (ou fcaux) 24 heures : 37C pour les coliformes totaux 44C pour les coliformes thermotolrants 24 48 heures 37C

entre 5 et 50 thalles (moisissures) et entre 30 et 300 colonies de levures. entre 30 et 300 colonies.

Coliformes (p101)

Dsoxycholate 0,1 %

Lactose Rouge neutre Dsoxycholate de Na Lactose BBT Tergitol 7 TTC (chlorure de 2-3-5 triphnyl ttrazolium) Jaune d'uf Tellurite de potassium

1 mL de dilution dans la masse + double couche Filtration sur membrane d'eau : dpos le filtre sur le milieu (face septique vers le haut) Etalement de 0,1 mL de dilution en surface.

Glose lactose au TTC et Tergitol 7

entre 15 et 150 colonies. On dnombre les colonies rouges d'au moins 0,5 mm de diamtre. Entre 15 et 150 colonies. Colonies lactose+ : colonie rouge ou rose (rduction TTC) halo jaune (virage du BBT) Entre 1 et 100 colonies. On dnombre les colonies noires avec liser blanc et entoures d'un halo d'claircissement

Aucun

identification de chaque colonie suspecte par test IMVIC (p100) ou galerie classique. Identifier : toutes les colonies suspectes s'il y en a moins de 10. Racine carr du nombre de colonies, s'il y en a moins de 100, mais tester au moins 5 colonies. S'il y a plus de 100 colonies, proposer un nouveau dnombrement avec de nouvelles dilutions. Identification des colonies suspectes par repiquage sur glose BEA (on doit obtenir des colonies noires. Identification possible de Clostridium perfringens

Staphylococcus aureus (p94)

Baird Parker

Streptocoques fcaux Enterococcus (p113) Anarobies sulfito rducteurs 46C (p103)

Slanetz Milieu TSC Milieu TSN

Glucose Azide de sodium TTC Tryptone-sulfite-cyclosrine Tryptone sulfite nomycine

Filtration sur membrane d'eau : dpos le filtre sur le milieu (face septique vers le haut) En tube : 1 mL de dilution dans la masse pour aliments frais ou surgels. 10 mL pour semi-conserves (Cf p105)

24 37C 24 48 h 46C

Entre 15 et 150 colonies. On dnombre les colonies roses ou rouges (rduction du TTC) On dnombre les colonies noires (rduction des sulfites)

En bote : 1 mL de dilution 20 h 46C en anarobiose. dans la masse + double couche Spores de Clostridium Milieu TSC Tryptone-sulfite-cyclosrine En tube : analyse de 20 mL 24 48 h 37C On dnombre les colonies Identification possible de Clostridium sulfito rducteurs d'eau rparties en 4 tubes noires (rduction des sulfites) perfringens (p103) Milieu Wilson-Blair Milieu VF + sulfite et alun de fer (ensemencement de 5 mL dans la masse) (Cf p105) Pour les coliformes on dnombre entre 15 et 150 colonies car au del on risque d'avoir des colonies faussement ngatives par r-alcalinisation du milieu. Dans tous les cas si le dnombrement est suprieur ou infrieur aux fourchettes fixes (ex : moins de 15 colonies ou plus de 150 sur TTC) on ralise le dnombrement et l'interprtation en prcisant que le rsultat est soumis caution car les conditions de dnombrement ne sont pas optimale. Composition des milieux de culture : Baird Parker page 96 BEA page 114 BLBVB page 102 Dsoxycholate 0,1 % (Glose au) page 102 EMB (Glose) page 102 Glose l'ADN + bleu de toluidine page 96 Slanetz page 114 TSC page 105 TSN page 105 TTC (Glose) page 102 VRBL (Glose) page 102 Wilson Blair page 105