3 Genetic molecular

n capitolele precedente am vzut cum studiul transmiterii caracterelor ereditare s-a desfurat la nceput n planul macroscopic ajungnd s stabileasc principiile generale ale ereditii sintetizate magistral de Gr.Mendel. Acest studiu s-a deplasat apoi n planul microscopic i datorit unei pleiade de naturaliti a dus la creerea geneticei celulare s-au mai precis a celei cromozomiale cu rezultatele impresionante obinute n prima jumtate a secolului XX . ntre timp,naturalitii,biologii,medicii i chimiti au nceput s ia din ce in ce mai mult n considerare rolul chimiei i al chimiei fizice pentru descifrarea misterelor biologice. Acest demers va da studiului ereditii o dimensiune nou i va face din genetic una din disciplinele cele mai importante ale celei de a dou jumti a secolului XX i ale nceputului secolului XXI nc de la sfritul veacului XIX chimia biologic a nceput s fac pai importani ncepnd cu identificarea moleculelor organice ce intr n alctuirea fiinelor vii. n acest sens merit s amintim c n 1869 Fr. Meicher a descoperit prezena n nucleul celulelor(din sperma de pete i din puroiul unor rni deschise) a moleculelor de nucleoproteine (pe care le-a numit nucleine)fr ns nici mcar s bnuiasc ce imens importan au n economia organismelor vii. Structura acestor molecule a fost stabilit de abia n 1920 e chimistul Levene De la acesta tim c aceste mari molecule sunt constituite dintr-un lan format din glucide pentozice (desoxiriboz)interconectate printr-un fosfat i c de fiecare glucid este ataat cte o baz azotat Aceste baze aparin unui grup format din dou baze purinice :adenina i guanidina,i dou baze primidinice :timina i citozina
Fosfaii care unesc ntre ele glucidele se leag cu un capt de carbonul 5' al glucidului precedent i de carbonul 3' al glucidului urmtor. Acest fapt permite orientarea lanului care va avea totdeauna un capt 3' i altul 5' Fiecare cuplu baz glucid se numete nucleotid .De aceea acizii nucleici sunt lanuri de nucleotizi reunii de fosfai

Trebuie s precizm universalitatea acestor molecule care se gsesc n nucleul tuturor fiinelor vii animale sau plante .
-

Baze

Fosfat Desoxiriboz

Lanul de acid desoxiribonucleic

Prin 1928 n urma unor laborioase experiene cu dou tulpini de bacterii(Streptococus pneumoniae)ncepute n 1920 Fr.Griffith a demonstrat c se pot modifica proprietile ereditare acionnd asupra unor misterioase molecule chimice din structura organismelor vii,fr s poat preciza care ns sunt acestea. Nimeni nu se gndea atunci la acizii nucleici,cci toat comunitatea tiinific era fascinat de proteine Doar la Institul Rokefeler din New York ,Oswald Averry i colab si ncepnd din 1944 pe baza unor cercetri considerate ns de unii drept neconcludente susineau rolul acizilor nucleici n ereditate
Menionez c prin 1949 prof Litarcek - revenit n ar de la Institutul Rokefeler din S,U.A, - susinea pentru prima oar la noi n ar n prelegerile sale de la spitalul Colentina din Bucureti c nucleoproteinele trebuie s fie suportul ereditii

De abia n 1952 n urma unor experiene pe bacteriofag(un virus care agreseaz colibacilul Escheria colli)fcute de A.Hershey i Marta Chase acetia au demonstrat c indiscutabil suportul biochimic al ereditii sunt acizii nucleici. Cu aceast descoperire genetica a intrat ntr-o er nou Odat fcut aceast preciziune ,oamenii de tiin au fost curioi s afle prin ce secret aceste molecule sunt capabile s asigure ereditatea. Mingea a fost aruncat n curtea fizicienilor i cristalografilor care au nceput s cerceteze cu metodele lor(mai ales prin difracia razelor X),forma

i organizarea intern a moleculelor de acid desoxiribonucleic(ADN).O serie de fizicieni ca M.Willkins,J.Randall,R,Gossling,Linus Pauling .a, s-au angajat n cercetri laborioase.

Rosalind Franklin

Una din contribuiile cele mai importante le-a adus Rosalind Franklin (1920-1058)de la Kings College din Londra care printre altele a obinut i imaginile de difracie ce au fundamentat modelul helicoidal. al moleculei de ADN Din motive obscure a fost marginalizat,i cum a murit foarte tnr a fost foarte nedreptit de colegiiei. I s-a spus Te Dark Lady of DNA(Doamna din intunerec al ADN-ului)(Brenda Maddox).Fotografiile pe care le-a fcut cu privire la difracia razelor X prin moleculele de ADN i care i-au fost luate fr permisiune au ngduit lui Watson i Crik s realizeze modelul helicoidal al ADN-ului

Una din fotografiile lui Rosalind Franklin

Dup minuioase cercetri duse n anii 1950-1953 n fine a putut fi descifrat structur ADN-ului din nucleii tuturor celulelor i J Wastson(n.1928)i Fr Crick(1916-2004)au putut realiza modelul acestei

molecule eseniale pentru viaa pe planeta noastr (publicat prima oar n 1953) pentru care au luat mpreun cu M.Wilkins premiul Nobel n 1962

Francisc Harrzy Compton Crick

James Dewey Watson

Watson i Crick erau fizicieni iar lipsa lor de cunotine chimice (cu care de altfel se ludau)a impresionat, n cursul unei reuniuni tiinifice, negativ pe marele chimist E,Chargaff care i-a numit clovni ai tiinei

Dubla spiral ADN

ADN-ul nuclear este o macromolecul format din dou lanuri de nucleotide paralele rsucite spre dreapta sub forma unei spirale.Fiecare lan reprezint structura primar a ADN-ului n timp ce spiral este structura ei secundar
Am vzut c fiecare lan nucleotidic are o orientare determinat de modul cum se leag fosfaii de moleculele de desoxiriboz aa c la un capt al lanului se gsete carbonul 5' i la cellalt carbonul 3'. n molecula de ADN unul din lanuri este orientat de la 5' la 3' iar cellalt de la 3' la 5'

Reconstituiri spaiale ale dublei spirale ADN

Cele dou lanuri sunt legate ntre ele prin nite puni .Fiecare punte e format de o baz azotat de pe un lan cu baza azotat de pe lanul cellalt situat n dreptul ei unite printr-o legtur de hidrogen Bazele azotate se leag intre ele potrivit unei reguli fundamentale _adenina se leag totdeauna numai cu timina i guanidina numai cu citozina. De aceea cele dou lanuri sunt stric complementare i se comport ca o fotografie alb-negru i negativul ei negru-alb. Cum bazele azotate de pe un lan realizeaz prin distribuia lor nite configuraii,regsim aceste configuraii pe lanul pereche sub o form complementar dictat de regula de legare a bazelor azotate. Acest aspect este esenial pentru modul de funcionare al ADN-ului,aa cum vom vedea
5' 3'

3' 5'

Punile S-a crezut c aceast surprinztoare form de dubl spiral este prezent numai n materialul genetic nuclear. Recent ns s-a vzut c i n imensitatea cosmosului pot apare astfel de structuri sub forma unor nebuloase alctuite dintr-o dubl spiral de astre. De asemenea fizicienii au pus n eviden c n anumite condiii microgrunele de praf se organizeaz n interiorul plasmelor tot sub form de spirale asemntoare cu cele ale lui Crick i Watson

Cele dou lanuri se pot desface sub efectul nclzirii. Este ceea ce s-a numit denaturarea ADN-ului. Odat desprite cele dou lanuri se pot resuda dac molecula se rcete treptat realiznd procesul de renaturare Dubla spiral formeaz un filament gros de 20 sau 2 nanomicroni (2nm,). Acest filament din loc n loc se nfoar n jurul unor mosoare de 11nm.numite nucleozomi formai fiecare din 8 proteine numite histone.

Filamentul de ADN cu nucleosomii formeaz o fibr perlat cu un diametru de 30nm. Aceast fibr la rndul ei se rsucete i formeaz un cordon bobinat(un solenoid) cu un diametru de 300nm. Acest cordon se ngrmdete i formeaz cromatidele cromozomiale care au un diametru de 1400nm Din cele de mai sus reiese clar c o cromatid cromozomial, vizibil cu microscopul optic, nu este dect o uria molecul de ADN nghesuit prin spiralri i plicri la care se adaug histonele din nucleosomii. Astfel ansamblul moleculelor de ADN care realizeaz o lungime de circa 2 m n fiecare nucleu celular somatic are loc in cei 46 de cromozomi a cror lungime total este de 220 microni n perioada de diviziune celular fibrele de ADN,cu histonele din nucleosomi se nghesuie ,devin mai groase i mai compacte. Acum cromatidele (i cromozomii) sunt colorabile i devin vizibile pe toat perioada de diviziune mitotic sau meiotic .

Fibr bobinat din cromatid 300 nm Neurosom 11 nm Bobin din cromatid 300 nm Histone Fibr Cromatid 1400 nm Fibre 30 nm Spirala DNA 2 nm

Solenoid

CROMOZOM
n metafaz

Nivelele de organizare a cromatidelor(de la ADN la cromozom)

n interfaz pe molecula de ADN exist zone condensate hipercrome care formeaz ceea ce s-anumit heterocromatina nuclear,vizibil pe imaginile nucleului Sunt zone nefuncionale n care ADN-ul este condensat i nu poate fi transcris. Un exemplu tipic este corpuscul lui Barr din nucleul celulelor aparinnd exemplarelor feminine i care rezult din condensarea

unuia din cei doi cromozomi X care zace inactiv. Alte poriuni sunt slab colorabile i formeaz eucromatina nuclear ce conine zone funcionale ale ADN-ului care pot fi transcrise. La acest nivel ADN-ul este relaxat
Eucromatin

Heterocromatin

NUCLEU Nucleu celular cu hetero i eucromatin

Una din proprietile cele mai de seam ale moleculei de ADN este aceea de a se replica.Aceast proprietate definete funcia autocatalitic a ADN-ului Graie ei n profaza diviziunii celulare spirala de ADN se dubleaz i apare cromatida sor realizndu-se cum am vzut cromozomul Aceast dublare const n construcia,cu ajutorul enzimelor din nucleu, a unei copii identice a ADN-ului existent.
Replicare

ADN iniial ADN fiice Bucla de replicare ADN fiice

Furc

ADN iniial

ADN iniial

Replicarea ADN-ului

Pentru aceasta, iniial ,cele dou lanuri se dezrsucesc i se separ graie unor proteine iniiatoare a replicrii i unei enzime(helicaze)ca cele dou poriuni ale unui fermoar. Separarea poate ncepe n unul sau mai multe

locuri de pe lungimea moleculei de ADN(numite origini) care au aspectul unor bulbi sau bucle .De aici separaia se extinde n ambele sensuri pn ce se obin dou lanuri independente n lungul crora stau nirate bazele azotate cu extremitile libere. Locul unde se separ cele dou lanuri se numete din cauza aspectului su furc la nivelul creia exist o intens activitate enzimatic. Evident c totul implic un consum de energie care este asigurat de mitocondrii i de sistemul ATP n lichidul nuclear plutesc molecule libere de nucleotizi formate din cte o baz azotata ancorat de cte o desoxiriboz Acestea sunt atrase de extremitile libere ale bazelor de pe lanurile separate ,i se fixeaz prin legturi de hidrogen pe ele potrivit regulii generale:adenina cu timina (i vice versa)i guanindina cu citozina(i vice versa).graie unor enzime speciale ( polimeraze) Apoi componentele desoxiribozice se conecteaz intre ele prin fosfai i astfel spirala este completat ntr-o form identic cu cea din care provine
Procesul este mult mai complicat i implic intervenia a multor enzime dar din motive didactice l-am expus intr-o form simplificat. Printre altele menionm c unul din noile ADN-uri(care este sintetizat pe direcia 5' -3') este sintetizat ntr-un flux continuu n timp ce cellalt(care este sintetizat pe direcia 3'-5')este sintetizat fragmentar(prin fragmentele Okazaky)

FURCA Lan vechi

Lan nou

ADN vechi

ADN uri noi

Replicarea ADN-ului

Una din constatrile revoluionare din cursul pasionantei istorii a geneticei a fost descoperirea ADN-ului mitocodrial. Se tie c mitocondriile sunt organele celulare care funcioneaz ca nite centrale energetice.

MITOCONDRIE
Spaiu intermembranar MATRICE sintetaz Membran intern Membran extern Creste

ADN

N UCL EU

CI T O PL ASMA

w.w.w. w.w.w.

MI T O CO N DR I I

Mitocondrie

Celul cu mitocondrii

Originea lor este obscur .Se pare c este vorba de nite microorganisme care parazitau formele ancestrale de Eucariote i care s-au adaptat devenind pri constitutive ale tuturor celulelor animalelor. Ele au propriul lor material genetic reprezentat de nite molecule circulare de ADN cu o structur similar cu ADN-ul nuclear. Acest ADN nu este implicat n diviziunea celular ci are propriul su ritm de multiplicare care este impus de necesitile energetice ale celulelor
Suportul genetic mitocondrial

Molecul circular

16567 duble baze 37 gene

ADN mitochondrial (mtADN)

Replicarea ADN-ului mitocondrial se face la fel ca aceea a ADN-ului nuclear numai c n loc s fie vorba de un filament liniar este vorba de unul circular care genereaz alte dou filamente circulare

Comparaie ntre genomul nuclear i cel cromozomial la om (dup Ene i col.)

Am vzut c Mendel a precizat c transmisia fiecrui caracter ereditar se face independent. Aceasta nseamn c pe structurile ce transmit aceste caractere fiecare din ele are ca suport un loc special .De asemenea am vzut c Morgan folosind analiza statistic a experienelor de crossing-over,a precizat locul rspunztor pentru foarte multe caractere ereditare de pe cromozomi realiznd primele hri cromozomiale. Odat cu descoperirea faptului c o cromatid cromozomial este o molecul de ADN.,a devenit clar c fiecare caracter ereditar este determinat de un anume loc de pe spirala de ADN. Locurile acestea poart numele de gene. Fiecare gen ocup un loc precis pe cromatide(pe dubla spiral de ADN) i dou locuri identice simetrice pe cele dou cromatide surori din cromozomi n perioada de diviziune Un anume caracter ereditar este determinat ns de o pereche de cromatide n interfaz sau de o pereche de cromozomi n perioada de diviziune. Nu trebuie confundate cromatidele surori care fac parte din acelai cromozom,cu cromatidele pereche care aparin la doi cromozomi diferii ce formeaz ns o pereche determinat. Gena de pe o cromatid are o copie pe cromatida sor i o gen omoloag pe cromatida pereche, iar genele(original i copie prin replicarea ADN) de pe un cromozom au dou gene omoloage(original i copie) pe cromozomul pereche. Fiecare gen

ns poate prezenta diferite variante(pricinuite prin modificri ale uneia sau mai multor baze) Variantele unei gene situate pe acelai loc de pe molecula de ADN sunt numite alele Cnd alele omoloage de pe perechea de cromozomi sunt identice(adic determin o aceiai variant a caracterului ereditar respectiv)alelele sunt homozigote n timp ce dac nu sunt identice( determin variante diferite )alelele sunt heterozigote.

Gene n poziia trans

Caractere morfofuncionale

ALELE

ENZIME

== / =

Homozigot

Gene n poziia cis

Heterozigot

Cnd dou gene diferite se gsesc pe acelai bra al unui cromozom(pe aceeai molecul de ADN) se zice c sunt n poziia cis n timp ce dac una se afl pe un bra iar cealalt pe alt bra(pe cele dou molecule surori) sunt n poziia trans

La nceputul anilor '50 era clar pentru toat lumea c orice caracter fie el somatic(d.ex. culoarea ochilor,tipul constituional,mplntarea dinilor,etc.) psihologic(d.ex. aptitudini profesionale,trsturi de personalitate,nivel cognitiv etc.)sau patologic(d.ex. coreea cronic,hemofilia,unele depresii etc.)este determinat de un fragment anume din molecula de ADN nuclear dar modul cum se face aceast determinare era obscur. Trecerea de la genom la fenotip, numit exprimarea genei ,era un mister dei se tia c presupune o cascad de evenimente biochimice moleculare Biologii au putut constata c aspectele morfologice i funcionale ale organismelor vii sunt determinate de celule. De asemenea au precizat c procesele de construcie,difereniere i dezvoltare a celulelor,ca i funcionarea lor sunt asigurate de nite molecule de proteine specifice numite enzime(de la = n levure) fiecare din ele avnd o aciune proprie pe cte un substrat determinat ntre molecula de enzim i cea a substratului pe care acioneaz trebuie s existe o compatibilitate geometric astfel ca cele dou molecule s se recunoasc i s se reuneasc(modelul

broasca i cheia a lui E Fischer - 1894)Aciunea enzimelor este cea de a cataliz unele reacii chimice specifice De aici rezult principiul fundamental al exprimrii fenotipului : o gen o enzim una sau mai multe gene una sau mai multe enzime un caracter n capitolul urmtor vom vedea cum se realizeaz acest principiu