UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO PRACTICA Nro. .

CULTIVO DE VIRUS EN HUEVO EMBRIONADO

MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II

ANTECEDENTES En la dcada del 50, el hospedador estndar para cultivo de muchos virus fue el huevo embrionado de gallina. A pesar que actualmente esta tcnica ha sido sustituida por cultivos celulares, continua usndose para aislamiento y produccin de vacunas

AIZLAMIENTO/IDENTIFICACION DE VIRUS
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SISTEMAS VIVOS Cultivo celular Huevos embrionados Animales -EFECTOS Efecto citopatico ECP Enfermedad/muerte Hemoaglutinacion

Mtodos de propagacin
Huevos embrionados Este sistema se usa para propagacin viral con fines diagnsticos y de investigacin. Para fines diagnsticos la inoculacin de animales es un medio para detectar virus en muestras clnicas, como el virus de la rabia en ratones lactantes. Actualmente el uso de animales experimentales como hospederos para propagacin viral est limitado por razones ticas.

 La membrana coreoalantoidea y el saco amniotico son sustratos adecuados y sensibles para el crecimiento de muchos poxvirus, virus de la influenza. El alantoides permite obtener rendimientos elevados del virus de la influenza y newcastle.

ALGUNOS EJEMPLOS DE CULTIVO DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS

VIA DE INOCULACION Saco vitelino Membrana coreoalantoidea Amniotica Alantoidea Intravenosa VIRUS Virus de la bronquitis V. de la encefalomielitis Ortopoxvirus Virus influenza Virus influenza V. Del Newcastle V. De la lengua azul SIGNOS DE CRECIMIENTO Enanismo del embrin Encefalitis Pstulas Hemoaglutinacin Hemoaglutinacin Muerte del embrin

OBJETIVOS
Familiarizar al estudiante con las tcnicas de inoculacin de agentes virales en huevos embrionados

MATERIALES:
Huevos embrionados de 6 a 11 das Jeringa de tuberculina. Estufa. Incubadora Algodn. Cera o parafina Muestras de virus en dilucin Mechero bunzen Ovoscopio casero

METODO DE INOCULACION DE LOS VIRUS

Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 das de incubacin (verificar por transluminacin) Ordene los huevos en el soporte, con la cmara de aire hacia arriba, rotular. Con algodn embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzn al centro de la cmara de aire. Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilucin preparada. Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en direccin del objetivo. Retire la aguja del huevo y selle el orificio con parafina u otro materia no toxico. Incube los huevos inoculados a 33 C por tres das.

1.-Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 das de incubacin (verificar por transluminacin)

2.- Ordene los huevos en el soporte, con la cmara de aire hacia arriba, rotular.

Con algodn embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzn al centro de la cmara de aire.

Virologia (AV): Inoculacin of huevos embrionados

- Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilucin preparada. - Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en direccin del objetivo.

7.1.- Miraje durante la incubacin: 1. Ninguna seal de desarrollo = huevo no frtil. 2. Frtil con vasos sanguneos. 3. Mancha roja o negra = muerto precozmente. 4. Embrin con anillo rojo = muerto precozmente. 5. Embrin vivo con el pico en la cmara de aire = eclosin dentro de 48 horas. 6. Evolucin normal de la cmara de aire en funcin de los das de incubacin