Biodegradacin

Mara Consuelo Daz Bez

Biloga, M.Sc., Doctor Profesor Especial Universidad Nacional de Colombia

Ctedra Internacional de Ingeniera 2008 - Salud Pblica y Saneamiento Ambiental Universidad Nacional de Colombia Bogot, D. C. Junio 17 Julio 11, 2008

Antecedentes del Problema: (Estados Unidos)

Zonas Industriales: 14.000 265 ton/ao de residuos peligrosos Instalaciones con Depsitos Subterrneos donde se almacenan residuos peligrosos : 750.000
ms de 350.000 han tenido fugas ms de 30.000 nuevas emisiones/ao

ms de la mitad almacenan hidrocarburos derivados del petrleo nmero ms pequeo: Disolventes y Pesticidas

Evaluacin de la contaminacin
Criterios para establecer los valores lmites de concentracin de contaminantes: Riesgo humano y ambiental Lmite del mtodo de deteccin

Biodegradacin
Utilizacin de un sistema biolgico (generalmente microorganismos) para eliminar o reducir la concentracin de sustancias contaminantes presentes en un sitio o en un residuo contaminante. Implica la transformacin de sustancias a CO2, agua y biomasa (aerobia)

Biodegradacin primaria: la sustancia slo pierde una propiedad especfica, ej. Absober luz a determinada . Mineralizacin o biodegradacin final: cuando se extiende hasta la formacin de CO2, H2O y sales minerales

Trminos relacionados con la biodegradacin Biotransformacin = modificacin biolgica del compuesto parental Biodegradacin = destruccin biolgica de un compuesto Biomineralizacin = transformacin biolgica de un compuesto con la formacin de CO2 y H2O como productos finales

Trminos relacionados con la biodegradacin

Transformaciones Catablicas que producen energa Transformaciones co-metablicas que no producen energa durante la reaccin cataltica; se requiere un sustrato primario. Ejemplo: oxidacin del TCE por metanotrofos

Biotransformacin/Biodegradacin
Biotransformacin (fenmeno, mecanismo, ruta, tasa, y grado) es funcin de
capacidad cataltica sustrato medio ambiente

Toxicidad
Los sustratos contaminantes tambin pueden ser txicos y se manifiesta en
Periodo Lag Lenta tasa de crecimiento Bajo rendimiento / baja eficiencia de crecimiento

Los metabolitos pueden afectar otros miembros de la comunidad Se afectan otros procesos: por ejemplo el Ni inhibe la nitrificacin, la mineralizacin del carbono y la actividad de enzimas especficas

Aclimatacin
Tiempo de retraso previo al proceso de degradacin Dependiente de la concentracin Se reduce despus de la exposicin Ocurre porque:
Pequea poblacin inicial Toxinas: lento crecimiento, son removidas, presin selectiva, intermediarios Depredacin Cambio gentico + transferencia de genes + crecimiento Diauxico (sustrato preferencial) Induccin enzimtica (menor), fase lag (menor)

100 2,4,5-T (Porcentaje Remanente)

Puerto Rico

75
Nigeria

50

Nigeria Trinidad Trinidad

25

Filipinas

Filipinas

2 Meses

Degradacin del 2,4,5-T en suelos de diferentes pases

2,4-D (mg/L)

HORAS
Metabolizacin del 2,4-D por una poblacin bacteriana aclimatada y otra que crece con glucosa

Reacciones de Biotransformacin
Detoxificacin
Hidrlisis: rompimiento del enlace ester (C-OC) en el malation; (activacin de algunos herbicidas (metil diclorofop) Hidroxilacin : reemplazo del H por un OH en el 2.4-D Dehalogenacin:
Reductiva = reemplazo del halgeno por H Hidroltica = reemplazo con un OH, (ocurre cuando se transforma el DDT en DDE)

Detoxificacin mediante dehalogenacin

Reacciones de Biotransformacin
Detoxificacin
Dealquilacin: demetilacin del cloroneb Metilacin: pentaclorofenol; conversin del 2,4, dinitrofenol a 2-amino-4 y 4-amino-2-nitrofenol Nitroreduccin Deaminacin Rompimiento del enlace eter : 2,4-D perdida de la fitotoxicidad Conversin de nitrilo a amida Conjugacin: pireno + glucose = conjugado glucosidico

Detoxificacin de pesticidas por dealquilacin

Reacciones de Biotransformacin
Activacin
Hidrlisis: activacin de algunos herbicidas (metil diclorofop) Dehalogenacin: formacin de cloruro de vinilo durante el metabolismo anaerobio del tricloroetileno (TCE) Metilacin del Hg, As y estao Formacin de nitros amina

Proceso General asociado con la Activacin

Reacciones de Biotransformacin
Activacin
Epoxidacin (aldrin a dieldrin) Conversin de fosforotionato a fosfato (conversin del paration a un anlogo oxigenado, el S de la molcula se reemplaza con O) Compuestos anlogos: cido 6-(2,4diclorofenoxi) hexanoico a 4-(2,4-DB) y entonces a 2,4-D (herbicida)

Genes codificados en plsmidos y expresados en ciertos procesos de biodegradacin

Sustrato Primario Alquil-benceno-sulfonato Benzoato Bifenilo Alcanfor 4-clorobifenilo 2,4-diclorofenoxiacetato Dibenzotiofeno S-etil-N,N-dipropiltiocarbamato Naftaleno Octano Paration Estireno Tolueno
---- a no se le ha dado nombre

Plsmido ASL pCB1 pBS241 PpG1 (CAM) pSS50 pJP1 ---- a ---- a Nah7 OCT pPDL2 pEG pWW0 (TOL)

Tamao (kb) 91.5 17.4 195 500 53.2 87 82.5 75.7 83 500 43 37 117

Cepa bacteriana huesped Pseudomonas testosteroni Alcaligenes xilosoxidans subsp.denitrificans PN1 Ps. putida BS893 Pseudomonas sp. Alcaligenes spp. A. paradoxus Jmp 216 Pseudomonas sp.DBT2 Arthrobacter sp.TE1 Ps. putida PpG7 Ps. oleovorans Flavobacterium ATCC27551 Ps. fluorescens PAW 340 Ps. putida mt-2

Biodegradacin del Petrleo

Petrleo (crudo, refinado, clases estructurales) Vas (aerbicas, anaerobias) Factores Ambientales

Petrleo Refinado

Investigadores de la Degradacin Microbiolgica del Petrleo

Zobell (1940s):
biodegradacin

Atlas & Bartha (1970s):

sistemas marinos

Gibson, Ratledge (1970s):

rutas de degradacin

Chakrabarty (1970s)
degradaciones especficas, compuestos de cadenas largas, cepas obtenidas por ingeniera gentica

Grbic Galic, Lovely (1980s):

degradacin anaerobia

Bordon, Tiedje (1980s):

donacin de electrones

1990s:
sistemas ingenieriles, bioaumentacin, biodisponibilidad

BIODEGRADACIN DEL TOLUENO

Degradacin Aerobia de Compuestos del Grupo BTEX

Aerobico: Dependiente de mono o dioxigenasas Aromticos, poli-aromticos, intermediarios aromticos sustituidos antes del rompimiento del anillo Rompimiento: orto or meta Productos del rompimiento del anillo van al CAC Mltiples rutas para molculas complejas

Degradacin Anaerobia de Compuestos del Grupo BTEX

Anaerobico:
La mejor estudiada es para el tolueno bajo condiciones de desnitrificacin o sulfato reduccin. El mecanismo es un ataque nucleoflico a la unin carbono-metilo por la SuccinilCoA dando dos compuestos finales: cido bencil-succinico cido bencil-fumrico Hay una va productiva?

Hidroxilacin del benceno a catecol por monoxigenasas y el NADH es el donador de electrones

Factores que afectan la degradacin del petrleo

Microorganismos con potencial gentico en nmero suficiente Disponibilidad de nutrientes y aceptores de electrones Temperatura y disponibilidad de agua Biodisponibilidad Estructura del contaminante (forma estereoqumica y electrnica) Toxicidad

Pasos en la oxidacin de un hidrocarburo aliftico

El primer paso est catalizado por una monoxigenasa

Compartimientos
Suelo Superficial = aerobia y rpida Zona Vadosa = aerobia y rpida una vez el tamao de la poblacin ha aumentado Aguas Subterrneas = lenta debido a los bajos tamaos poblacionales; se puede volver anaerobia por el lento abastecimiento de oxgeno

Formas de utilizacin del petrleo

Lquidos
Utilizacin en forma soluble Contacto directo con NAPL Dispersin y contacto directo con las micro-gotas

Slidos (Hidrocarburos Poli-cclicos Aromticos, PAHs)

Contacto directo Utilizacin de formas solubles

Solventes Clorados
Aerbica: degradacin co-metablica (oxidacin de TCE por metantrofos con metano, formiato o metanol como sustrato primario Anaerbico: decloracin reductiva, puede generarse un producto final ms txico

Algunos hechos en relacin con la degradacin de hidrocarburos

C10 a C18 es ms rpida que cadenas ms largas o ms cortas H. alifticos < C8 son txicos a muchas bacterias (ms solubles pocas pueden degradarlos) Cadenas largas (peso molecular 500-600) se degradan lentamente H. ramificados son ms recalcitrantes Hongos pueden crecer sobre H. de hasta 34 Carbonos ciclo parafinas (ali-cclicos) se degradan lentamente La dificultad para degradar H. aromticos es funcin de: (peso molecular y los sustituyentes) La degradacin anaerobia de aromticos ocurre pero la mineralizacin est todava bajo estudio H. saturados y alquenos se degradan en forma similar La ramificacin disminuye la biodegradabilidad Sustituyentes halogenados disminuyen la biodegradabilidad

Algunos hechos en relacin con la degradacin de hidrocarburos poli-cclicos aromticos (PAHs)

De 2 a 3 anillos se degradan 4 anillos + recalcitrantes Los intermediarios de la oxidacin pueden ser carcingenos La solubilidad puede ser limitante Se requiere co-metabolismo para compuestos con alto peso molecular

Algunos hechos en relacin con la degradacin de explosivos Nitro-aromticos: TNT, Dinoseb, dinitro-o-cresol
Aerbico por rompimiento oxidativa del grupo nitro Conversin anaerbica del grupo nitro a grupo amino con la formacin de una hidroxilamina txica

Reglas
PCBs
Ms Cls, ms resistentes aerbico: la mayora se degrada a clorobenzoato, y es transformado por otros organismos a:
a) clorocatecol y despues decloracin b) decloracin y dioxigenacin, c) dehalogenacin.

anaerbico: decloracin reductiva y despus degradacin aerobia

Dioxinas
Puede ser co-metabolizado: TCDD: 2,3,7,8 tetra-cloro-dibenzop-dioxina (TCDD)

Reglas
En aromticos: las posiciones y p son mas resistentes que m Dehalogenacin anaerobia seguida por rompimiento del anillo aerobio y posterior mineralizacin TCE (tricloro-etileno), PCE (percloro-etileno):
Decloracin reductiva a cloruro de vinilo Co-metabolismo aerbico

Cintica de la biodegradacin
Tasas: que tan rpido ocurre la transformacin? Depende del proceso cataltico y de los factores ambientales
Aerbicamente: horas Anaerbicamente: das o meses

Biodegradacin: como sabemos que est pasando?

Perdida del material parental Produccin de metabolitos
CO2 (marcado o no) Intermediarios Mejor si hay una relacin directa con el contaminante

Incremento en biomasa
Degradadores Depredadores (protozoarios)

Crecimiento de Burkholderia (conocida como Pseudomonas) cepacia sobre 2,4,5-T como nica fuente de carbono y energa.

La cepa fue enriquecida del medio natural utilizando un quimiostato manteniendo la concentracin del herbicida baja. Crecimiento aerobio sobre 1.5 g/l of 2,4,5,-T. La liberacin de cloruros es el indicador de la biodegradacin

Umbral/Persistencia
Biodegradacin puede parar a bajas concentraciones
Una inadecuada concentracin de sustrato no induce la produccin de enzimas (sorcin)
Leva a una baja biodisponibilidad La mayora de los compuestos necesitan estar en la fase acuosa para que ocurra la biodegradacin.

Mineralizacin de diferentes concentraciones de 2,4-D adicionadas a agua de ro

Concentracin a la cual la biodegradacin no ocurre o es menor que la esperada

Compuesto Fuente Ambiental Concentracin (g/L o kg de agua o suelo) 2.2 3.0 0.1 1.0 2.0 2.5 0.0015 10,100 100 0.2 7.1 Referencia

2,4-D Sevin Anilina 4-Nitrofenol 2,4-diclorofenol Estireno Fenol Carbofurano 2,4,5-T 1,2-, 1,3-, 1,4Diclorobencenos

Ro Ro Lago Lago Lago Lago Lago Suelo Suelo Biopelcula sobre vidrio

Boethling y Alexander, 1979 Boethling y Alexander, 1979 Hoover et al, 1986 Hoover et al, 1986 Hoover et al, 1986 Fu y Alexander, 1992 Rubin y Alexander, 1983 Chapman et al, 1986 McCall et al, 1981 Bouwer y McCarty, 1982