Medicamentele trebuie s urmreasc logica molecular a viului

MEDICAMENT BIOLOGIC: produs medicamentos care posed structuri identice sau similare cu cele ale compuilor endogeni, existeni n condiii fiziologice n organismul uman

DINASTIA INTERFERONIC

Factori celulari secretori ce declaneaz mecanismele de aprare antiviral

Citokine (IFN)
tipuri de interferoni:
tipul I IFN / / / / / / / / Se numesc interferoni virali sunt eseniali n rspunsul imun al celulei-gazd la atacul viral IFN interferonul leucocitar IFN interferonul fibroblatilor tipul II IFN tipul III IFN

Aplicaii clinice: IFN , : hepatit B, hepatit C, hepatit D, carcinom renal, melanom malign, sarcom Kaposi, mielom multiplu, limfom non-Hodgkin, scleroz multipl IFN : granulomatoz cronic, lepr, tuberculoz, infecii oportuniste n SIDA

DINASTIA INTERFERONIC Roferon Intron Pegasys PegIntron Viraferon PEG Alfatronol Infergen Alferon Virtron Shanferon Avonex Betaferon Betaseron Albuferon-beta Soluferon Rebif

Boli rare, neacoperite terapeutic

Albuferon-

Metod revoluionar Are ca int refacerea unor pri din diferite esuturi, distruse sau mbolnvite, nlocuindu-le cu celule noi, sntoase Repar sau nlocuiesc celulele dintr-un esut distrus sau deteriorat
1998 izolarea celulelor stem din embrionii umani i multiplicarea lor in vitro, n culturi de laborator

Celule stem = celule non-specializate

au proprietatea de a se autoregenera pentru intervale mari de timp dau natere la celule specializate care refac esuturile i organele originale

3 categorii mari de celule stem: 1. CELULE STEM TOTIPOTENTE n momentul concepiei, ovulul i spermatozoidul fuzioneaz, cu formarea zigotului. Zigotul i cele 8 celule create din acesta, n primele 3 diviziuni succesive, sunt capabile s se dezvolte separat i s dea natere organismului uman n ntregime (celule stem totipotente)

2. CELULE STEM PLURIPOTENTE diviziunea celular continu

Blastocistul (100 de celule) Stratul intern (aprox. 50 de celule stem)

Celule stem embrionare (ES)
dei ele pot forma, n continuare, majoritatea tipurilor de celule embrionare, ele nu au capacitatea de a da natere tuturor esuturilor necesare unei dezvoltri complete

Stratul extern

placenta

esuturile embrionare

Surse de celule stem pluripotente: Izolarea acestora din surplusul de blastociti creai n timpul fertilizrii in vitro Extragerea din celule destinate s formeze ovule sau spermatozoizi, din foetusi pierdui n ntreruperi de sarcin Producerea de celule stem embrionare din celulele adulte proprii, folosind tehnici de clonare

3. CELULE STEM MULTIPOTENTE

BLASTOCIST

O mic parte din celulele stem parial difereniate dintr-un esut persist n unele esuturi adulte
Acestea au proprietatea de a forma un numr limitat de tipuri de celule specializate = celule stem multipotente

Ex.: celulele stem din mduva osoas rennoiesc anumite tipuri de celule din snge

TIPURI DE CELULE STEM

TOTIPOTENTE

Se afl n studiu: Celulele stem embrionare, pluripotente

caracteristici:

Celulele stem adulte (somatice), multipotente

caracteristici :
Sunt greu de izolat din diferitele organe i esuturi Nu dezvolt tumori

Pot dezvolta foarte multe tipuri de celule somatice

Necesit tehnologie de nalt performan pentru purificarea i separarea diferitelor tipuri de celule generate Potenial mare de formare al tumorilor (diviziune necontrolat) Rejecie imunologic

Nu necesit separare celular

(celul stem hepatic esut hepatic) Aplicaii:

Aplicaii:
Transplantul terapeutic Dezvoltarea medicamentelor Teste privind toxicitatea medicamentelor

Transplantul terapeutic (clonare terapeutic)

TERAPIA CU CELULE STEM N LEUCEMIE

Transplantul de mduv osoas

Celulele stem, sntoase, ale donatorului sunt introduse n fluxul sanguin

Celulele stem migreaz n mduva osoas a pacientului

Producerea de leucocite normale, sntoase

TRANSPLANTUL CELULELOR STEM DIN VASELE DE SNGE OMBILICALE

Probabilitatea de a fi respinse de organism este mai mic, pentru c aceste celule nu i-au dezvoltat caracteristici care s le fac recunoscute de ctre sistemul imunitar Se afl n derulare un proiect de cercetare al crui obiectiv este obinerea esutului osos din celule stem ombilicale i placentare

In Romnia transplant de celule stem hepatice

TERAPIA CU CELULE STEM: UN POTENIAL TRATAMENT PENTRU INFARCTUL MIOCARDIC

TERAPIA CU CELULE STEM: UN POTENIAL TRATAMENT PENTRU BOLILE NEURODEGENERATIVE

n prezent, terapiile cu celule stem se bazeaz pe celule donate de o alt persoan Acest lucru crete posibilitatea ca celula stem s fie respins de sistemul imunitar al organismului

Se studiaz utilizarea unor mostre din propriile sale celule stem

Manipularea n laborator pentru crearea unui nou esut (clonare terapeutic)

Transplantul esutului afectat (sigurana compatibilitii imunologice)

TERAPIA GENIC
Tehnic modern pentru corectarea defectelor genetice care determin apariia anumitor afeciuni Presupune transferul unei gene terapeutice n interiorul celulelor somatice umane pentru a trata o boal
1990 primul protocol clinic pentru terapie genic

TERAPIA GENIC 3 strategii:

nlocuirea unei gene nonfuncionale cu gena normal (cel mai des) Este necesar inserarea genei normale n genomul celular Corectarea unei gene ce genereaz proteine mutante Metode de corecie: Recombinare omoloag Inhibiia translaiei cu oligonucleotide anti-sens Repararea ARNm cu ajutorul ribozimelor (enzime specifice cu ARN ce catalizeaz reacii de clivare, ligare sau polimerizare) Aceast strategie are drept int oncoproteinele Inactivarea oncogenelor Manipulare genetic pentru inducerea apoptozei

Distrugerea (inactivarea) genei ce exprim proteine aberante

Localizarea acesteia n genom este non-specific, aleatorie, ceea ce poate determina alterarea expresiei unor gene funcionale, normale
Noul ADN trebuie s se pstreze i la generaiile urmtoare

PROTOCOLUL EXPERIMENTAL AL TERAPIEI GENICE

Este necesar utilizarea unor molecule-carrier care s transporte gena terapeutic la nivelul celulei-int
VECTORI VIRALI Virusurile au proprietatea de a-i integra genele n structura genomului uman Genomul viral este modificat genetic, astfel nct s nu produc proteine virale, ci s transporte i s insereze gene terapeutice n celula-gazd infectat Permit transferul unor gene relativ mari Cei mai utilizai sunt vectorii retrovirali (ex. virusul leucemiei murine)

gag (genom associated gene)-codific proteinele interne structurale ale miezului pol (polymerase)-codific revers transcriptaza env (envelope)- codific proteinele de suprafa ale membranei

VECTORI NON-VIRALI

LIPOZOMII
anticorpi modificai, alctuii dintr-un singur lan sunt direcionai ctre un domeniu funcional specific al proteinei-int (de ex. domeniul tirozin-kinazic) blocndu-i funcia

INTRACORPII

ANTICORPII

anticorpii sunt proteine (imunoglobuline) care cautantigenele i particip la distrugerea lor Antigenele - sunt recunoscute ca non-self de ctre organism i determin activarea mecanismelor naturale de aprare

Un agent patogen (bacterie, virus) e recunoscut de ctre sistemul imunitar prin intermediul antigenelor. Un antigen posed n general mai muli epitopi diferii care reprezint tot attea situsuri de legare a anticorpilor.
Se poate clasifica o populaie de anticorpi n funcie de capacitatea sa de a recunoate unul sau mai muli epitopi.

Anticorpii monoclonali nu recunosc dect un singur epitop pe un antigen dat. Ex: anticorpii monoclonali utilizai n testul de sarcin

Anticorpii policlonali sunt un amestec de anticorpi ce recunosc epitopi diferii pe un antigen dat. n cursul rspunsului imunitar un organism sintetizeaz anticorpi dirijai ctre mai muli epitopi ai unui antigen = rspuns policlonal

CONCEPT MODERN ANTICORPI MONOCLONALI (MAb)

Anticorpi identici structural, cu specificitate unic, produi de un singur tip de celule imunitare, clone ale unei celule parentale Anticorpii monoclonali sunt foarte larg utilizai n domeniul biomedical, att n diagnostic, ct i n scopuri terapeutice Se utilizeaz n procesele de izolare i purificare a substanelor preparate prin inginerie genetic Pentru producerea anticorpilor monoclonali (MAb) se utilizeaz numai celule mielom din mduva osoas (care se adapteaz pentru a crete continuu n culturi de celule) fuzionate cu celule productoare de anticorpi (limfocite B normale)

Obinerea anticorpilor monoclonali

Se recolteaz celule B de la animalul tratat cu antigen Aceste celule fuzioneaz cu celule de tip mielom (cancer al celulelor medulare) prin permeabilizarea membranelor celulare

Celulele hibride se multiplic la infinit (sunt celule canceroase) i produc continuu anticorpi Se selecteaz (prin metoda ELISA) celulele hibride care produc anticorpii monoclonali dorii

Domenii de utilizare terapeutic a anticorpilor monoclonali (FDA)

Afeciuni inflamatorii (poliartrit reumatoid)
Infliximab 1998 Eculizumab 2000 Omalizumab 2004

Imunosupresoare (rejecia grefelor)

Muronomab 1986 Daclizumab 1997 Basiliximab 1998

Infecii virale
Palivizumab 1998

Maladii canceroase
Rituximab 1997 Trastuzumab 1998 Gemtuzumab ozogamicin 2000 Alemtuzumab 2001 Ibritumomab 2002 Cetuximab 2004 Bevacizumab 2004

Afeciuni cardiovasculare
Abciximab 1994

Denumirea anticorpului monoclonal

Denumire depus

Utilizare terapeutic

Introdus n

Rituximab
Trastuzumab Gemtuzumab ozogamicin Alemtuzumab Ibritumomab tiuxetan Tositumomab Cetuximab Bevacizumab

Rituxan
Herceptin Mylotarg Campath Zevalin Bexxar Erbitux Avastin

limfom non-Hodgkin
cancer de sn leucemie acut mieloid leucemie cronic limfocitar limfom non-Hodgkin limfom non-Hodgkin cancer colorectal cancer al gtului cancer colorectal

1997
1998 2000 2001 2002 2003 2004 2006 2004

Mecanisme moleculare de aciune anticanceroas a anticorpilor monoclonali

ADEPT - antibody directed enzyme prodrug therapy; ADCC - antibody dependent cell-mediated cytotoxicity; CDC - complement dependent cytotoxicity; MAb - monoclonal antibody; scFv - single-chain Fv fragment.