AMINOCIDOS Y PROTENAS Ramrez E. (0623357); Grueso S.

(0536930) Laboratorio de Qumica Orgnica II Departamento de Qumica Octubre 29-2010 DATOS, CLCULOS Y RESULTADOS: Acidez de los aminocidos: Compuesto Cantidad (mL) 0,1mL 0.1 La reaccin general entre el xido de cobre (II) y el cido aminoactico mejor conocido como glicina esta dado por la ecuacin 15:

cido aminoactico 2% Tabla1.Cantidades utilizadas en prueba de acidez de los aminocidos.1 Resultados: Al adicionar un pedazo papel tornasol, no hubo cambio, se not una muy leve coloracin amarilla por decoloracin del papel. Formacin de una sal compleja de cido aminoactico: Compuesto Cantidad (g) 0,1g cido 0.28 1 aminoactico xido de Cobre 1.0 1 (II) Sal compleja 0.1364 obtenida1 Rendimiento de la 34.23% reaccin Tabla2. Cantidades utilizadas en la formacin de la sal compleja de cido aminoactico1.

Ecuacin1. Formacin de la sal compleja de cido aminoactico y cobre (visto en Principios de qumica analtica de Skoog 8Ed 458p) 5. Clculo del reactivo limitante: ( )

( ) ( )

( ) ( )

Calculo de la cantidad terica de sal compleja que se debi obtener:

Coagulacin de la albmina: Mezcla Solucin de clara de Huevo sometida a calentamiento Solucin de clara de huevo y Etanol Comportamiento de coagulacin Coagula a 69C

Solucin clara de huevo y HCl concentrado Clculo del porcentaje de rendimiento:

Resultados: La mezcla de cido aminoactico y agua fue transparente con la sal de cido aminoactico blanco al fondo. Al aadir el xido de cobre (II) la mezcla se puso negra. Con el calentamiento la solucin va aclarando a un azul menos oscuro. Los cristales de la sal compleja de cido aminoactico recolectados fueron de color azul claro. Se sintetiz la sal compleja de xido de cobre (II) con un rendimiento 34,23%.

Solucin clara de huevo y HNO3 concentrado Solucin clara de huevo y NaOH concentrado Tabla3.Observaciones prueba de coagulacin de la albmina1. Reaccin Xantoproteica: Compuesto Cantidad (mL) 0,1mL 1.0

Coagula poco, se ve opaco, menor que la solucin sometida a calentamiento Coagulacin considerable, mayor que la solucin sometida a calentamiento Coagulacin considerable, mayor que la de la mezcla con HCl No hay coagulacin

Solucin de clara de huevo cido ntrico 0.6 Concentrado Hidrxido de gotas sodio Tabla4. Cantidad de reactivos usados en la reaccin 1 xantoproteica .

Resultados: La solucin de clara de huevo tena un tono ligeramente blancuzco y al mezclarse con cido ntrico concentrado se torna amarillenta con presencia de cogulos. Al someter la mezcla a calentamiento se solubilizaron los cogulos y la solucin continu de color amarillo. Al aadir el hidrxido de sodio la mezcla se torn color anaranjado rojizo (rojo ladrillo). Reaccin de Biuret: Compuesto Cantidad (mL) 0,1mL 1.0

Reaccin coloreada del formaldehido para protenas: Compuesto Cantidad (mL) 0,1mL 0.2

Solucin de clara de huevo Formaldehido gotas cido sulfrico gotas concentrado Tabla6. Cantidad de reactivos usados en la reaccin coloreada del formaldehido1. Resultados: Despus de realizar el proceso de mezclado se formaron dos capas, donde la capa superior fue blancuzca y la capa inferior caf traslucido. ANLISIS DE RESULTADOS: Durante esta prctica se llevaron a cabo varios ensayos y pruebas qumicas para la determinacin los aminocidos y las protenas. Los aminocidos son los monmeros de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin que libera agua formando un enlace peptdico. Estos dos restos aminoacdicos forman un dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as, sucesivamente para formar un polipptido2. Acidez de los aminocidos: Los aminocidos exhiben propiedades no comunes, son menos cidos que la mayora de los cidos carboxlicos y menos bsicos que la mayora de las aminas, esto hace que los aminocidos

Solucin de clara de huevo Hidroxido de 1.0 sodio 10% Sulfato de cobre gotas (II) Tabla5. Cantidad de reactivos usados en la reaccin de Biuret1. Resultados: La mezcla de reactivos antes de ser calentada tena un color violeta. Despus del calentamiento la mezcla tom un una coloracin caf clara.

tenga un comportamiento anftero se refiere a que, en disolucin acuosa, los aminocidos son capaces de ionizarse, dependiendo del pH, como un cido (cuando el pH es bsico), como una base (cuando el pH es cido) o como un cido y una base a la vez (cuando el pH es neutro). En este ltimo caso adoptan un estado dipolar inico conocido como zwitterion. El pH en el cual un aminocido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual nmero de cargas positivas que negativas) se denomina punto isoelctrico. La solubilidad en agua de un aminocido es mnima en su punto isoelctrico. La prueba de acidez de los aminocidos se obtuvo un pH entre 6-7 debido a que no se observo un cambio de coloracin prominente cuando se puso el papel tornasol en la solucin de cido aminoactico, lo cual muestra la presencia de una especie moderadamente cida, a pesar de la presencia de un grupo carboxilo (cido), la presencia del grupo amino, hace que disminuya la acidez por tanto se puede afirmar que la especie est presente en el estado dipolar zwitterion que es3:

Formacin de una sal compleja de cido aminoactico: Cuando se hace reaccionar cido aminoactico o glicina con xido de cobre (II) pulverizado (color negro) se obtiene una solucin azul con precipitado negro que corresponde al exceso de xido de cobre, el cual se desech. Posteriormente se calent el filtrado de color azul claro hasta que empez la formacin de los cristales de color azul claro igualmente. La coloracin azul de la solucin tanto como la del la sal se presentaron por la formacin del complejo neutro de cobre/cido aminoactico de formula Cu(NH2CH2COO)2, en el cual cada molcula de cido aminoactico que es un ligando bidentado se coordinan al cobre con el par de electrones libres del tomo de nitrgeno del grupo amino y con el oxigeno que porta la carga negativa en el grupo carbonilo de las molculas de cido aminoactico, el cual puede tomar dos configuraciones trans o cis, pues se coordina con dos dos molculas de cido aminoactico para dar una estructura cuadrado planar5 como se puede observar en la ecuacin 1. La sal compleja del cido se sintetiz con un porcentaje de rendimiento de 34.23% (tabla 2) porque el slido filtracin si no por evaporacin del solvente en una cpsula de porcelana, por lo que una gran cantidad de la sal qued adherida en la misma y adems el complejo de cobre/cido aminoactico se hidrata con facilidad formndose as [Cu(NH2CH2COO)2].H2O

Ecuacin2. Equilibrio del zwitterion en diferentes medios. (Grfico elaborado por Simn grueso y Edward Ramrez con ChemBiodraw Ultra 12.0 visto en Organic chemistry 6th Ed. de Morrison 1139p).

de gran estabilidad lo que dificulta que se precipite una cantidad ms considerable de la sal. Coagulacin de Albmina Se estudi el comportamiento de las protenas bajo condiciones de calor y variacin del pH. Cuando una protena es sometida a las condiciones ya nombradas, se puede desnaturalizarla, en ste fenmeno se pierde la estructura tridimensional de la albmina, dicha desnaturalizacin se atribuye a la interaccin de los enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos, como tambin en los enlaces no-covalentes (dipolodipolo, puentes de hidrgeno) con el cido mineral o base que se adiciona, lo que se observ experimentalmente es un cambio en la consistencia de la solucin de clara de huevo un cambio de color (incoloro a blanco), que se conoce como coagulacin o 2 precipitacin irreversible , se observ coagulacin de la albmina para lo cidos minerales, lo que muestra que la albmina tiene sitios bsicos que pueden se perturbados por la presencia de cidos, perdiendo el arreglo tridimensional, como con el hidrxido de sodio no se observa coagulacin, entonces se puede decir que los sitios cidos de la albmina no se ven afectados por la presencia del hidrxido de sodio, probablemente por que estn un lugar donde el contacto con el medio es mnimo. La albmina coagula al aumentar la temperatura por que se aumenta los

choques moleculares y las vibraciones moleculares, en presencia de etanol se observa coagulacin por que el etanol es un solvente polar que perturba los enlaces de hidrgenos de la albmina, en los dos casos ocurre una desnaturalizacin. Con el cido ntrico adems de observarse coagulacin se ve un color amarillo en el fondo por que la albmina tiene anillos aromticos, que se nitran formando acido pcrico, el cual le da el color amarillo caracterstico (tabla 3).

Figura1.Desnaturalizacin de las protenas (Tomado de http://www.angelfire.com/scifi/anarki mia/Reconocimiento%20de%20Protena s.htm). Reaccin Xantoprotica La reaccin xantoprotica es un mtodo para determinar la presencia de protenas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente tirosina, lo que se observa es un color amarillo debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado. Una vez realizada la prueba se neutraliz con un NaOH para dar un color anaranjado oscuro, como con la albmina se observaron los colores amarillo y naranja entonces se puede afirmar que la albmina posee sustituyentes aromticos (cido 2-

amino-3-fenil-propinico) la reaccin es:

Figura2. Reaccin Xantoprotica (Tomado de (http://www.angelfire.com/scifi/anarki mia/Reconocimiento%20de%20Protena s.htm). Reaccin de Biuret La reaccin de biuret sirve para detectar la presencia de protenas, pptidos cortos y compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composiciones desconocidas4. Cuando se realiz la reaccin con el reactivo de Biuret con la albmina se observ un color violeta, con esto se confirma que la albmina que est presente en la clara de huevo es una protena, el cambio de color se explica por la formacin del complejo cuadrado planar con el cobre proveniente del sulfato de cobre, el cual se coordina por que el cido 2amino-3-fenil-propinico (pptido presente en la albmina), posee dos grupos (amino y carboxilo) que pueden actuar como dadores de pares de electrones para convertir en un ligando bidentado, la reaccin es:

Figura3.Reaccin de Biuret (Tomado de http://www.angelfire.com/scifi/anarki mia/Reconocimiento%20de%20Protena s.htm). Reaccin coloreada del formaldehdo para protenas Cuando se adicion formaldehdo a la solucin de clara de huevo que contena albmina se observ la formacin de un precipitado color blanco (coagulacin), lo que sucede es un ataque nucleoflico del grupo amino del pptido (cido 2-amino-3-fenilpropinico) al electrfilo formaldehdo, formando una imina, cuando se agrega cido sulfrico se observa la formacin de dos capas (acuosa y orgnica) y una coloracin amarilla la cual se puede explicar por la sulfonacin del anillo que es reactivado por la presencia de la imina, la primera reaccin es:
O CH2-CH-COOH NH2

+
C H H N C H H CH2-CH-COOH

Figura4. Reaccin del formaldehdo para protenas.

PREGUNTAS 1) En qu consiste la prueba de Milln? Cules protenas den positiva sta prueba? Cul es la reaccin qumica fundamental? R/ La prueba de Milln consiste en adicionar el reactivo de Milln (mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en cido ntrico) a las protenas, en el cual se obtiene un precipitado blanco y que al hervir se vuelve rojo. Las protenas que dan positiva la prueba de Milln son las que tienen tirosina, pues la reaccin de la protena con el reactivo de Milln se debe a la presencia de grupos hidroxifenilos (C6H5OH) en la molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3, 5, como la tirosina, fenol y timol, dan lugar a la reaccin. La reaccin qumica fundamental con albmina es:

nitran formando acido pcrico, el cual le da el color amarillo caracterstico. 3) Describa el ensayo de la reaccin coloreada del formaldehdo para protenas. R/ . El ensayo de la reaccin coloreada del formaldehdo para protenas es el siguiente:
H O C H H H COOH C H R N C H

+ H2N

C R

COOH

Hg CH2-CH-COOH NH2

Al adicionar una solucin diluida de formaldehdo, la amina primaria ataca el carbonilo del aldehdo formando una imina con salida de agua, donde al quedar bloqueado el grupo amino, desaparece el carcter anfotrico de amino, por lo que al adicionar el acido sulfrico concentrado, se forma una capa separada en el fondo del tubo. Este mtodo de valoracin se llama Nformol y se utiliza para determinar amino cido libres totales en alimentos hidrolizados de protenas y lquidos biolgicos. 4) Qu es una protena globular?

C Hg

NH2OH

NO2- +

NO3-

CH2-CH-C6H5 NH2

2) Por qu el cido ntrico colorea la piel de amarillo? Qu sucede en esta reaccin? R/ El acido ntrico concentrado colorea la piel de amarillo debido a que en la piel hay presentes protenas que poseen anillos aromticos, en esta reaccin los ncleos aromticos se

R/ Protenas Globulares: Estn constituidas por cadenas polipeptdicas plegadas estrechamente, de modo que adoptan formas esfricas o globulares compactas. Son solubles en sistemas acuosos, su funcin dentro de la clula es mvil y dinmica. Ej: (enzimas, anticuerpos, hormonas). Existen protenas que se encuentra entre las fibrosas por sus largas

estructuras y las globulares por su solubilidad en las soluciones salinas. Ej: (miosina, fibringeno). 5) Qu es el punto isoelctrico de una protena? R/ El punto isoelctrico es el pH al que una sustancia anftera tiene carga neta cero. El concepto es particularmente interesante en los aminocidos y tambin en las protenas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula. Para calcularlo se deben utilizar los pKa. R/

6) Escriba las frmulas de los siguientes aminocidos: alanina, leucina, valina, prolina, fenilalanina, triptfano, cistena, arginina, histidina, tirosina.

Alanina

Arginina

pI

pK a1 pK a 2 2
Leucina Valina

(Los pKa a considerar para esta ecuacin, en una tabla de pH, son los que contienen a la especie qumica con carga igual a cero, cuando tienen ms de un pKa). Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los iones hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a la carga neta de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al pH, para el cual la concentracin del ion hbrido de una protena es mxima y el movimiento neto de las molculas de soluto en un campo elctrico es prcticamente nulo, se le denomina punto isoelctrico. Los aminocidos pueden existir como sal interna, llamada zwitterion. Esto ocurre porque el protn del grupo carboxilo es abstrado por el grupo amino NH2 que est en posicin alfa y quedando este como grupo amonio NH3+ (3).

Prolina

Fenilalanina

Tirosina

Triptfano

Cistena

Histidina

7) Cmo se detecta la presencia de azufre en las protenas? R/ La presencia de azufre en las protenas se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo. sta reaccin se basa en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo4.

Con la reaccin de Biuret se evidencio la presencia de protenas (albmina y otras) en la clara de huevo. La coagulacin de la albmina cuando se adiciona formaldehdo se puede explicar por una reaccin nucleoflica entre este y un pptido de la albmina. REFERENCIAS
1

. Tablas, datos experimentales y grficos elaborados por Edward Ramrez y Simn Grueso. CONCLUSIONES Los aminocidos tienen un rango de pH entre 6-7, lo cual confirma la presenta del estado dipolar zwitterion, en medio neutro. La albmina coagula con el aumento de temperatura, y la presencia de cidos minerales, por que se altera la estructura tridimensional de la misma. El color amarillo cuando se adiciona cido ntrico a una solucin de clara de huevo evidencia la presencia de anillos aromticos en la estructura de la albmina.
2

. Chang, R., Qumica, 7 ed., Mc-Graw Hill, Ciudad de Mxico 2002, 982-991p.
3

. Morrison & Boyd, Organic Chemistry, 6th ed., Prentice-Hall, New Jersey, 2002, 1132-1138p.
4

.http://www.angelfire.com/scifi/anarki mia/Reconocimiento%20de%20Protena s.htm vista el 04-11-10 a las 23:50 pm.

5

. Skoog, D. A., West, D. M., Holle F. J., Crouch, S. R., Fundamentos de qumica analtica, 8 ed., Thomson, Madrid, 2005, 458p.