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La coloration diffrentielle ou coloration de gram est ltape essentielle de lidentification bactrienne, surtout dans le domaine mdical , partir dune

e culture pure (culture pure contenant une seule espce), elle est aussi appelecoloration V.L.A.F ( V iolet, L ugol, A lcool, F uschine)La coloration de gram est un caractre Tinctorial cset dire laffinit de la cellule bactrienne se colorer. La coloration de Gram doit son nom au bactriologiste danois Hans Christian Gram qui a mis au point leprotocole en 1884. C'est une coloration qui permet de mettre en vidence les proprits de la paroi bactrienne ,et d'utiliser ces proprits pour les distinguer et les classifier. Son avantage est de donnerune information rapide sur les bactries prsentes dans un produit ou un milieu tant sur le type que sur laforme. But : La coloration de Gram est la mthode de coloration la plus utilise en bactriologie mdicale; elle permetde colorer lesbactrieset de les distinguer l'examen direct par leur aptitude fixer le violet de gentiane(Gram +) ou la fuschine (Gram -). L'intrt de cette coloration est de donner une information rapide etmdicalement importante. Principe : La coloration de Gram est fonde sur l'action successive d'un colorant d'aniline, le cristal violet, d'iodepuis d'un mlange d'alcoolet d'actone. Dans un premiertemps,le colorant pntre dans la paroi et lecytoplasme.Dans un second temps, l'iode ragit avec le colorant et le rend insoluble. La permabilitplus grande desbactries Gram ngatif l'alcool permet la dcoloration. Lesbactries Gram positif restent colores en violet ou mauve. Une contrecoloration (par exemple en rose) permet devisualiser nouveau, les corps cellulaires des bactries Gram ngatif. Mode opratoire : Ractif :-

le violet phnique : violet de gentiane (Crystal de violet) + alcool absolu + eau phnique- liquide de Lugol : iode + iodure de potassium + eau distille- alcool 96 (agent de dcoloration)- solution de fuschine ou de safranine (colorant de contraste) : solution de fuschine sature a lalcool+eau distill Matriels :Microscope optique, lame, bec de bunsen, pipette pasteur, anse de platine, huile de cdre, ainsi que lematriel habituel du laboratoire de M