MICROBIOLOGÍA I

“EQUIPO 7”
OBJETIVO

Predeterminar si se ha liberado
enzimaticamente ácido sulfhídrico (H2S)
gaseoso a partir de los aminoácidos
sulfurados azufrados para producir una
reacción coloreada visible, negra en
presencia de un sistema indicador de H2S.
BIOQUIMIC
A
 La proteólisis de la proteína produce a.a. individuales;
ciertas bacterias heterotróficas pueden liberar
enzimáticamente el azufre de los diversos a.a.
azufrados, produciendo H2S gaseoso peptona, cisteína,
cistina, metionina y tiosulfato son fuentes de azufre,
pero las especies utilizan diferentes compuestos o a.a.
azufrados para producir H2S. las enzimas responsables
de esta actividad son la cisteína, desulfhidrasa y la
tiosulfato reductasa. los a.a. azufrados son:
El catabolismo anaerobio de la cisteina
produce H2S, ácido pirúvico y amoniaco.
 Existen muchos medios de cultivo como la
peptona y hierro para detectar la
producción H2S entre los miembros de la
familia Enterobacteriaceae. Los indicadores
de sulfuro varían entre los medios de
cultivo: hierro peptonizado, sulfato ferroso,
sulfato de amonio ferroso o férrico, citrato
férrico, tiosulfato de sodio, sulfito de
bismuto o acetato de plomo; pero el
principio es el mismo.
 En uno de estos medios, el KIA, los
indicadores de h2s son una sal, el citrato
de amonio férrico, y otro producto químico,
el tiosulfato de sodio. ambos indicadores
deben estar presentes, puesto que el
procedimiento final es en dos pasos.
PASO 1.
El tiosulfato es un intermediario en la reducción de
sulfato a H2S por las bacterias reductoras de sulfatos.
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio en una
reacción de reducción que da un sulfito y un sulfato.
debe haber un pH ácido y una fuente de iones H+ en el
KIA para que tenga lugar la reducción de tiosulfato. hay
dos carbohidratos presentes para proporcionar la acidez
y el exceso de iones H+. éste es un proceso de
respiración anaerobia, donde el átomo de azufre sirve
como
 aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos
orgánicos.
El tiosulfato S2O32- reemplaza al sulfato como aceptor
de electrones y es la fuente de azufre del
microorganismo.

4H+ + 4e + 3S2O32- 2SO 32- + H2S

El H2S es un gas incoloro; por lo que es necesario un

segundo indicador para observar la producción de H2S.
PASO 2.
El gas incoloro H2S reacciona con una sal fuerte de
hierro, el citrato de amonio férrico, para producir un
precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso
metálico. se recomienda el uso de citrato de amonio
férrico en lugar de citrato férrico por que es mas
soluble. el sulfato ferroso puede sustituir la sal férrica.
 La producción de H2S se detecta cuando
el gas entra en contacto con ciertos
metales, como plomo, hierro o bismuto, y
forma sulfuros de estos metales.

SULFURO

DE HIDROGENO + IONES FÉRRICOS SULFURO

FERROSO
GASEOSO PP NEGRO
Reacción global
Bacteria en medio + tiosulfato de sodio H2S gas
Acido
H2S + Iones férricos sulfuro ferroso
pp negro insoluble
El H2S gaseoso puede ser producido por la reducción
de una fuente de azufre inorgánica como le tiosulfato o por
la reducción del grupo SH de la cisteina que esta presente
en la peptona.
Otro indicador de la producción de H2S es el acetato de
plomo ya que al entrar en contacto el H2S produce
sulfuros de plomo que es un precipitado negro..el acetato
de plomo es sumamente sensible por lo que es capaz de
detectar cantidades pequeñas de H2S.
 Pb(C2H3O2) · 3H2O + H2S PbS + H2O + Ac
Ac de plomo sulfuro sulfuro
de hidrógeno de plomo acetato

La capacidad de un microorganismo de

producir H2S es una característica
consistente y un productor de H2S es
normalmente produce (CO2 + H2) en los
medios de cultivo con hidratos de carbono.
 Al determinarla producción de H2S se debe de tomar en
cuenta tres factores:

o El tipo y la disponibilidad de la fuente de azufre

o La sensibilidad de la prueba para la detección de H2S

o La presencia del sistema enzimático productor de H2S

en el microorganismo a estudiar.
MEDIOS DE
CULTIVO
EMPLEADOS
Medios de cultivo detectores de H2S usados con
mayor frecuencia
Medio Propósito Fuente(s) de azufre Indicador(es) de
H2S

Tiras de acetato de Bacterias que exhiben Tiosulfato de sodio Acetato de plomo

plomo (PbAc) pequeñas cantidades de
H2S

Agar con lisina y hierro Ayuda a la identificación de Tiosulfato de sodio Citrato de amonio
(LIA) microorganismos entéricos férrico
gramnegativos

Agar Salmonella- Aislamiento selectivo de Tiosulfato de sodio Citrato férrico

Shigella (SS) Salmonella/Shigella

Agar con azúcar triple y Ayuda a la identificación de Tiosulfato de sodio Sulfato ferroso,
hierro (TSI) microorganismos entéricos sulfato de amonio
gramnegativos ferroso
 Agar con azúcar triple y hierro
(TSI)
Ingredientes. pH 7.4±0.2
Extracto de carne......................3g
Extracto de Levadura................3g
Peptona....................................15g
Peptona Proteosa, Difco...........5g
Dextrosa.....................................1g
Lactosa.....................................10g
Sacarosa...................................10g
Sulfato Ferroso.......................0.2g
Cloruro de Sodio.......................5g
Tiosulfato de Sodio................0.3g
Agar..........................................12g
Rojo de Fenol.....................0.024g
Agua desionizada…..……..1000mL
 Agar con lisina y hierro (LIA)
Ingredientes. pH 6.7±0.2
Peptona de gelatina……....………
5g
Extracto de levadura………….....3g
Glucosa (dextrosa)………..……….
1g
L-Lisina·HCL………………………..
10g
Citrato de amonio férrico………0g
Tiosulfato de sodio..............0.04g
Púrpura de bromocresol.....0.02g
Agar…………....……………………
….15g
Agua desionizada…..……..1000mL
 Agar Salmonella-Shigella (SS)
Ingredientes. pH 7±0.2
Peptona de caseína/carne........5g
Extracto de carne…………….……
5g
Lactosa…………....………………
….10g
Citrato de sodio..….................8.5g
Mezcla de sales biliares……….8.5g
Tiosulfato de sodio...........…..8.5g
Citrato férico......................…….1g
Rojo neutro………....………...
0.025g
Verde brillante………...….0.00033g
Agua desionizada……...….1000mL
 Prueba con tiras de PbAc

Principalmente para la detección de H2S

por bacterias que no sean de la familia
Enterobacteriaceae; microorganismos
pequeños que puedan producir
cantidades pequeñas de H2S.