4. EVALUAREA RISCURILOR DE IRADIERE.EFECTE BIOLOGICE ALE RADIAIILOR IONIZANTE. CALCULUL ECRANELOR DE PROTECIE Expunerea. Doza absorbit.

Expunerea (X) la radiaii se exprim n funcie de amploarea fenomenelor de ionizare produse. Ea se definete prin cantitatea de sarcini electrice de acelai semn (+ sau -) produse la trecerea radiaiilor n unitatea de mas de aer uscat. Unitatea expunerii este Rntgenul (R) care se definete prin cantitatea de radiaii X sau gama care produce ntr-un kg de aer uscat(n condiii normale de temperatur i presiune 00 ,760 Torr)un numr de perechi de ioni care poart o sarcin de 2.58.10-4 C. Un R produce ntr-un cm3 de aer(0.001293g) 2,08.109 perechi de ioni(pentru o energie cheltuit de 83,7erg/g). De asemenea n sistemul CGS Rntgenul (R) corespunde crerii unei uniti electrostatice de sarcin ntr-un cm3 de aer uscat n condiii standard ( sau 0,001293 g de aer): 1 ues 1R = = 2,58 10 4 coulomb/kg de aer (4.1) 0,001293 g de aer O expunere de 1 R este echivalent cu crearea a 2,08 109 ionizrii pe cm3 de aer. tiind c fiecare ionizare corespunde unei energii medii de 34 eV, energia medie pe gram de aer este deci de 7 107 eV, sau 87 erg/g sau 0,0087 J/kg. Rntgen-ul nu are echivalent n sistemul internaional (SI). Doza absorbit (D) este definit drept cantitatea de energie cedat de o radiaie ionizant unei uniti de mas de material iradiat. n sistemul CGS are ca unitate de msur Radul ce corespunde unei energii de 100 erg/g. Raportul dintre doza absorbit (n Rad) i expunerea (n Rntgen, n aer) este proporional cu raportul coeficienilor de atenuare masic respectiv: D( rad ) ' = f = 0,87 material (4.2) X ( R) ' aer

Fig. 4.1.

Variaia raportului dintre doza absorbit (n erg) i expunerea (n R) pentru diverse medii biologice n funcie de energia fotonilor.
144

n aceast expresie se observ c factorul f este n jur de 1 pentru esuturile moi din domeniul de energie a razelor RX i curent ntlnite n radiologie (figura 4.1). Din 1977, Radul este nlocuit cu o unitate aparinnd SI (mksA), i anume Gray-ul (Gy) definit ca raportul de 1J pe kg-ul de material iradiat. Conversia ntre Rad i Gray este direct : 1Gy = 100 Rad. 4.1. Efecte biologice ale radiaiilor.Mecanisme de aciune a radiaiilor ionizante Interaciunea radiaiilor cu materia nu se realizeaz dup aceleeai procese ca i cele evocate n capitolul precedent pentru orice material (innd cont de faptul c esuturile biologice, construite n principal din carbon, azot, oxigen i hidrogen sunt caracterizate de un Z mediu sczut, n jurul lui 7,5). Au loc deci reacii de ionizare i excitri ale atomilor i moleculelor aflate de-a lungul traiectoriei razelor. Totui, efectele biologice rezultnd dintr-o iradiere apar disproporionate n ceea ce privete energia pus n joc : o doz de radiaii RX de 7 Gy letal pentru majoritatea mamiferelor i care provoac mortalitatea cvasi-total a celulelor nu corespunde dect unei absorii de energie de 7 J/kg, producnd o cretere de temperatur de 1,7 10-3 0C. Mai departe, densitatea ionizrii indus de absoria unei asemenea doze este n jurul a 1,1 1015 ionizri pentru 1 gram de esut moale sau pentru celul n jurul a 1,1 106 ionizri. Considernd o prim aproximare c aceast celul (75% H2O) conine 2,5 1013 molecule de H2O i de ordinul a 108 macromolecule organice, proporia de molecule care sufer o ionizare este foarte sczut ; ea ajunge totui s provoace leziuni letale. Efectul biologic final, la nivelul celulelor, rezult de fapt n urma unui lant de reacii fizicochimice declanate de aceste ionizri iniiale care vor ajunge s deterioreze (distrug) macromoleculele indispensabile vieii unei celule. La nivelul organismului, aceste efecte observate nu sunt numai suma deteriorrilor provocate n fiecare celul individual sau esut, ci rezultanta unor interacii diverse i complexe ntre celul i esuturi. Mecanismul de aciune al radiaiilor ionizante la nivelul celulelor vii se desfoar n patru etape succesive : 1. Faza fizic nc numit faza primar : de o durat inferioar a 10-13s ntre emisia primului electron i absoria ultimului electron secundar, ea const n absoria energiei radiate cu ionizri i excitri produse la ntmplare. 2. Faza fizico-chimic cu o durat ntre 10-9 i 10-6s, ea este caracterizat de apariia radicalilor liberi extrem de reacionali. (reacional = care poate declana cu uurin o reacie) 3. Faza chimic durata ei este ntre o fraciune de secund pn la cteva sptmni i const n lanuri de reacii iniiate de aciunea radicalilor liberi. Faza a 2a i a 3a sunt denumite "efecte secundare sau intermediare". Faza histopatologic sau de apariie a leziunilor, numit "efecte perceptibile". Aceste leziuni pot fi reversibile sau ireversibile, pot afecta celule somatice sau celule sexuale i, n acest ultim caz s afecteze descendenii persoanei vii iradiate. Aceast faz se poate studia pe mai muli ani. 4.1.1. Faza fizic Fenomenele fizice provocate de trecerea razelor ionizante, ionizri i excitri au fost amplu descrise n capitolele precedente. 4.1.2. Faza fizico-chimic Celula poate fi comparat cu o soluie apoas de molecule organice. Radiaia poate provoca deteriorarea moleculelor din soluii (moleculelor organice), interacionnd fie direct cu ele, fie indirect prin aciunea radicalilor liberi formai prin radioliza solventului (apa celular) (figura 4.2).
145

Fig. 4.2.

Aciunea direct i indirect a radiaiilor.

ACIUNEA DIRECT: moleculele (disolvate) de solvit direct lovite de radiaii, absorb ele nsele o fraciune din energia radiaiei i se vor regsi ntr-o stare instabil cu un exces de energie care trebuie s fie expulzat. Acest lucru se poate face prin emisia de fotoni (fluorescen) cu revenirea la starea iniial. Dar excesul de energie responsabil de instabilitatea moleculei poate fi disipat n mod egal prin ruptura unei legturi covalente i scindarea moleculei n doi radicali liberi R i R ' , fiecare plecnd cu electronii legturii rupte. Aceast scindare este mai probabil dup ionizare dect dup excitare, dat fiind faptul c respectiva cantitate de energie transferat e superioar n primul caz. Scindarea se poate produce ntr-o alt legtur dect cea care a suferit destabilizarea iniial (transfer de energie prin rezonan intra-molecular) sau chiar s afecteze o alt molecul dect cea atins iniial (transfer de energie prin rezonan inter-molecular). Radicalii liberi posed un electron nemperecheat sau celibatar responsabil de reactivitatea lor foarte mare; durata lor de via este foarte scurt, ntre 1 ns i 1s. Ei reacioneaz ntre ei sau cu alte molecule, dnd reacii de adiie: R + R' ' R R ' ' ACIUNEA INDIRECT: moleculele de solvent sufer n mod egal excitri i ionizri, consecin a interaciilor cu radiaiile ionizante, i se regsesc n stri iniiale care pot duce ntr-o prim etap la producerea de radicali liberi H i OH i de ioni H2O+ i e-. Aceste prime specii produse pot s disocieze sau s se recombine ntre ele, pentru ca n final s dea natere unei ntregi serii de compui printre care : H , e- , OH , H3O+, H2, OH-, OH 2 , O2, O2- , HO - i H2O2. apa 2 Probabilitatea de recombinare este slab dac ionizrile sunt relativ distante sau, din contr, crescute n cazul ionizrilor n lan. n timp, aceti radicali liberi difuzeaz din locul unde au fost produi, reducnd prin acest lucru probabilitatea de recombinare, i termin prin a reaciona cu moleculele de solveni. Se pot observa diferite tipuri de reacii: dehidrogenri: R -H+H R + H
2

R - H + OH R + H 2 O hidroxilri: disocieri: R + OH R OH
+ R - NH 3 + e apa R + NH 3

R - NH 2 + H R + NH 3 adiii: R - CH = CH R'+OH RCHOH CH -R'

Diferite teste permit s se diferenieze aceste tipuri de aciune: Testul diluiei: dac se consider o soluie apoas de enzime, pentru aceeai doz de iradiere, numrul de molecule enzimatice afectate prin aciune direct crete proporional cu concentraia din soluie (procentajul de molecule enzimatice intacte rmne deci constant). Din contr,dac inactivarea enzimelor rezult printr-o aciune indirect, efectul iniial duce la producerea de radicali liberi provenind din apa care este constant pentru o expunere dat i ntr-o mare msur, independent de concentraia de substan dizolvat;
146

de aici numrul de enzime neafectate de radicalii generai este i el constant chiar dac proporia enzimelor afectate descrete cu creterea concentraiei de solveni. Testul proteciei chimice: adiia de substane strine nu afecteaz deloc efectul unei expuneri la o radiaie ionizant dac mecanismul principal de aciune este direct. Din contr, anumite substane au proprietatea de a diminua aciunea indirect a unei radiaii ionizante capturnd radicalii liberi formai din ap; aceste substane radioprotectoare (radioprotectori sau scavengers) conin n general grupri SH sau NH2 (de exemplu cristamina, glutation) care capteaz radicalii OH sau pot n mod egal s reacioneze cu moleculele organice deja ionizate dup reaciile: R - SH + OH R S + H 2 O R SH + R' R S + R' H Radicalii R S formai sunt puin reacionali. Efectul oxigenului : oxigenul are o influen slab pe efectul direct (reaciile de peroxidare R +O 2 ROO ) dar stimuleaz mecanismele de aciune indirect prin formarea radicalilor oxidani OH 2 i H2O2 n solventul apos.

Testul de congelare: aceasta este o metod eficace pentru cele dou tipuri de aciune
deoarece limiteaz ntr-un mod important difuzia radicalilor liberi. De aici, o scdere a radiosensibilitii prin congelare va indica o preponderen a efectului indirect. 4.1.3. Faza chimic Este vorba de un efect ntrziat sau amnat al radiaiilor care se poate prelungi pe o perioad de cteva secunde pn la cteva sptmni. Acest efect este dependent de temperatur i se manifest dect n prezena oxigenului. El poate fi blocat prin administrarea de radionuclizi dup iradiere, dar acest blocaj nu elimin dect 10% din efectele totale ale expunerii. 4.1.4. Faza histopatologic Leziuniile provocate n urma iradierii sunt n aceast faz efecte perceptibile. Se pot distinge leziuni celulare, esulare i ale organismelor iradiate per total. 4.2. Efecte celulare n organismele vii unicelulare, care au structuri intracelulare complexe, mai multe tipuri de experiene (iradieri cu microfascicule, experiene suicid cu emitori interni) au demonstrat c iradierea mediului este mai eficace pentru a produce alterare. Totui este cert faptul c iradierea nu scutete nici o parte a celulei i c leziunile induse la nivelul citoplasmei joac un rol important n apariia i evoluia leziunilor radioinduse. 4.2.1. Tipuri de celule iradiate Unul din efecte, cel mai caracteristic produs de radiaiile ionizante asupra celulelor vii este blocajul, pe un termen mai lung sau mai scurt, activitii lor mitotice. Aciunea animitotic a radiaiilor a fost pus n eviden din 1906, epoc n care Bergoni i Tribondeau au stabilit o relaie direct ntre radiosensibilitatea unui esut i viteza sa de cretere i o relatie univoc ntre radiosensibilitatea celulelor i gradul lor de difereniere. n funcie de doza eliberat dar i de o serie de ali parametri care vor fi luai n discuie mai departe, iradierea unei celule vii poate fie s conduc la moartea ei, fie la o supravieuire cel puin temporar, eventual cu anumite anomalii de dezvoltare. MOARTEA CELULAR: Dup expunerea la doze ridicate (de ordinul a cteva sute de Gray) se poate observa pierderea activitii metabolice n totalitate cu alte cuvinte moartea imediat a celulei. Pentru doze mai sczute (civa Gray), celula conserv o oarecare activitate metabolic dar nceteaz de a se mai divide dup una sau mai multe mitoze i pierde capacitatea de profilare
147

moartea ntrziat. Pentru anumite tipuri de celule care nu prezint activitate metotic, precum limfocitele, moartea imediat este singura posibilitate. Relaiile ntre rata mortalitii (sau mai degrab complementul ei rata de supravieuire) i doza eliberat pot fi stabilite experimental prin teste n vitro (tehnici de clonaj) sau n vivo pe animale de laborator. Mai multe tipuri de rspuns pot fi observate: Curba de supravieuire exponenial: ea se reprezint printr-o dreapt de coordonate semi-logaritmice i se exprim prin formula . Constanta D0 definete S =e radiorezistena celular. Acest tip de rspuns (figura 4.3) este cel mai frecvent ntlnit n populaiile virale i bacteriene. El poate fi reprezentat prin modelul celular al intei care consider c fiecare celul conine o structur sensibil sau int, a crei lovire aleatoare de ctre raz provoac moartea imediat a celulei. Curba cu susinere sau curba sigmoid: marea majoritate a rezultatelor experimentale obinute pentru celulele de mamifere furnizeaz, n coordonate lineare, o curb de supravieuire de tip sigmoid, care se traduce n grafic semilogaritmic printr-o parte iniial curb (de susinere) urmat de o parte rectilinie (exponenial). Curba de rspuns este caracterizat de un D0 ca i n cazul precedent (figura 4.4) i importana acestei poriuni de susinere, prin valoarea de extrapolare (n) obinut pe axa procentajului de supravieuire prelungind poriunea rectilinie. Curba de supravieuire sigmoid a condus la dezvoltarea modelului cu n inte subletale. Dup acest model, fiecare celul posed n inte a cror totalitate trebuie luat pentru a antrena moartea; o celul luat numai ntr-o fraciune din cele n inte, este apt s supravieuiasc. Probabilitatea de lovire este presupus a fi identic pentru cele n inte (egal cu 1/D0). Probabilitatea pentru o int de a fi intact este
deci D0 i cea de a fi lovit este . Probabilitatea de a lovi n inte din aceeai e 1 e D0 D D0 ; ea reprezint de asemenea proporia de celule celul este, deci, egal cu 1 e iniiale care sunt omorte i rata de supravieuire celular corespunde urmtoarei ecuaii: D S = 1 1 e D 0 n D D D D0

(4.3)

Fig.4.3 Model de supravieuire exponenial (a) n coordonate linieire i semilogaritmice(b)

148

Fig. 4.4.

Modelul de supravieuire (sigmoid) n coordonate liniare (a) i semilogaritmice (b).

Alte tipuri de rspuns: cea mai mare parte a curbelor experimentale de supravieuire

corespund celor 2 tipuri precedente, dar se pot de asemenea ntlni curbe sparte (frnte), care corespund cel mai adesea unui amestec de dou populaii celulare de radiosensibilitate diferit sau curbe fr poriune rectilinie pentru care se pot determina parametrii caracteristici D0 i n. SUPRAVIEUIREA DUP IRADIERE: Cnd o celul iradiat supravieuiete dup o expunere la radiaii ionizante, ea poate prezenta n consecin, anumite anomalii funcionale. ntrzierea n mitoz: dup iradierea unei culturi de celule, se observ o scdere a indicelui mitotic (proporia de celule aflate n diviziune) legat de blocajul celulelor n faza G21. Celulele care ajung n G2 se acumuleaz i nu mai pot s se divid timp de o perioad a crei lungime depinde de doza de radiaii i de celulele considerate. La sfritul blocajului, celulele blocate n G2 se divid simultan provocnd o sincronizare parial a populaiei celulare. Durata ciclului mitotic poate fi n plus mrit printr-o ncetinire a sintezei de ADN (alungirea fazei S sau a fazei G1). Ciclul celular, ntre 2 mitoze, se descompune n patru faze. Faza G1 a crei durat este cea mai variat, urmeaz imediat dup mitoz. Vine apoi faza de sintez a ADN-ului numit faza S n timpul creia celulele i dubleaz materialul cromozomial. Urmeaz faza G2 i n final mitoza n care duce la divizarea celulei n celule fiic. Dup o mitoz, anumite celule pot intra ntr-o faz de repaus mitotic G0 i temporar s nu mai urmeze ciclul (este cazul limfocitelor).
1

Ciclul mitotic i evoluia cantitii de ADN celular

149

 Formarea celulelor gigant: continuarea sintezei de acizi nucleici i de proteine, chiar la vitez redus, n celule n care activitatea mitotic a fost blocat prin iradiere, conduce la formarea celulelor gigant plecnd de la o fraciune de celule iradiate. Aceste celule gigant mor dup o anumit perioad de timp. Fenomene genetice sau mutaii: molecula de ADN este format din dou lanuri antiparalele de dezoxiribonucleotide (baze purinice sau pirimidinice +dezoxiriboz) rsucite n dublu helix (figura 4.5). Nucleotidele sunt legate ntre ele prin legturi fosfodiesterice. Informaia genetic este reprezentat prin secvenele de nucleotide. Replicarea sau sinteza de ADN, implic separarea celor dou lanuri ale helixului i intervenia unei polimeraze, enzim care, lund fiecare din cele dou lanuri ca matrice va sintetiza pe fiecare un nou lan complementar. ADN-ul determin nu numai structura proteinelor, dar controleaz n mod egal i sinteza lor. O leziune a ADN-ului este deci susceptibil de a se repercuta pe structura (deci funcia i activitatea) urmtoarelor copii ale proteinei codate prin gena lezat.

Fig. 4.5. Structura ADN-ului. Radiaiile ionizante provoac, pe de o parte ruptura legturilor fosfodiesterice, pe de alt parte leziunea de baze i zaharuri. 1. Ruptura lanurilor: n acest proces, efectul indirect i n principal radicalii H joac un rol preponderent. Molecula de ADN poate fi rupt pe unul din cele dou lanuri (ruptur simpl). De o parte i de alta a rupturii, extremitile devenite libere se deprteaz rupnd legturile de hidrogen care le reveneau cu cellalt lan. Acest lucru se ntmpl pe o distan de 3 sau 4 nucleotide de o parte i de alta a punctului de ruptur (figura 4.6). Ruptura poate s afecteze ambele lanuri (ruptur dubl): n acest caz aceeai radiaie produce ruptura pe cel puin 3 4 nucleotide distan i conduce la fragmentarea moleculei de ADN. Frecvena rupturilor duble este n jur de 10 ori mai mic ca la cele simple.

Fig. 4.6. Ruptura simpl (a) i dubl (b) a ADN-ului.

150

Leziunea bazelor: bazele pot fi parial distruse sau modificate chimic. Ele sufer n special hidroxilri (sub aciunea radicalilor OH ) cu formarea hidroxiperoxizilor n prezena oxigenului. Bazele pirimidinice sunt mai sensibile ca bazele purinice. Se poate n mod egal asista la formarea unui ciclu ciclobutan ntre dou baze adiacente ale aceluiai lan, dnd natere unui dimer (figura 4.7).
2.

Fig. 4.7. Formarea unui dimer ntre dou timine. 3. Leziuni de zaharuri: mai puin cunoscute, ele rezult prin oxidarea urmat de hidroliz cu eliberarea bazei, nsoindu-se sau nu de ruptura legturii fosfodiesterice. 4.2.2. Factori care influeneaz radiosensibilitatea celular Radiosensibilitatea celulelor vii este condiionat de factori intrinseci (caracteristici celulei considerate) i extrinseci (independeni de celul). FACTORI INTRINSECI: Ciclul celular: radiosensibilitatea celulelor variaz n funcie de faza ciclului celular la care se gsesc n momentul expunerii.Acest lucru se evideniaz fie prin supravieuirea celulelor,fie prin msurarea ntrzierii n diviziune. Pentru supravieuire, fazele G2 i M sunt cele mai radiosensibile, iar faza S cea mai radiorezistent (fig.4.8)

Fig. 4.8. Curba supravieuirii celulelor de hamster n relaie cu doza i stadiul ciclului mitotic.

Cantitatea de ADN Ploidia: pentru un tip celular anumit (virus, bacterie, celul de

mamifer, ) radiosensibilitatea crete cu cantitatea de ADN din celul (proporia de cromozomi). Se iau n considerare nu numai numrul cromozomilor, dar i volumul cromozomial i volumul nuclear. Se observ astfel la plante, c n general DL50 2 depinde de rata de ADN per celul.
2

DL50 sau doza letal 50% este doza care provoac moartea a 50% din indivizii unei populaii n limitele unei perioade date dup expunere (30 zile pentru mamifere).
151

Complexitatea organizrii ADN-ului n celul i n particular ploidia, este un factor care trebuie luat n consideraie. Astfel levurile hagloide (care au un set de cromozomi) sunt mai sensibile ca levurile diploide (care au un set dublu de cromozomi) figura 4.9.

Fig. 4.9. Curba supravieuirii levurilor haploide i diploide.

Compoziia chimic a celulei: prezena substanelor radioprotectoare naturale precum

aminoacizii i aminele ce conin gruparea SH libere sau legate (glutaii) are efect protector mai ales asupra ADN. Ele acioneaz prin capturarea radicalilor liberi generai din ap. Radiorezistena dobndit: mutaiile induse de radiaii i mutaiile spontane sunt mai radiorezistente. Creterea radiorezistenei a putut fi produs prin iradieri repetate ale celulelor tumorale cultivate n vitro. Aceast radiorezisten indus persist dup transplantare. FACTORI EXTRINSECI: Natura i energia razelor: cantitatea de energie depozitat sau cantitatea de ionizri produse ntr-o celul (esut) depinde de energia radiaiei, dar mai ales de densitatea ionizrilor din lungul traiectoriei radiaiilor (radiaii cu TLE-transferul liniar de energie sczut sau ridicat). O radiaie cu TLE (LET-linear energy transfer) crescut (, neutroni) este mai eficace n aciunea sa vtmtoare dect o radiaie cu TLE sczut (RX sau ). Aceast eficacitate biologic a unei radiaii (EBR), figura 4.10, se definete drept raportul dintre doza de 60Co sau RX de 200 keV luat n general ca referin, (care trebuie eliberat pentru a produce acelai efect; rata de supravieuire, de exemplu) ca o doz a unei radiaii date i doza radiaiei date care a produs acest efect: D EBR x = ref (4.4) Dx

152

Fig. 4.10. Determinarea EBR-ului n funcie de curbele de supravieuire. EBR-ul(RBE-relative biological effectiveness) este funcie de TLE-ul radiaiilor (figura 4.11); ea crete progresiv cu creterea TLE(LET-linear energy transfer), trecnd printr-un maxim, apoi descrete. Aceast diminuare pentru TLE-uri foarte ridicate este interpretat ca un fel de risip de energie (overkill effect) care ar produce n celul mai multe anomalii dect este necesar pentru a le omor.

Fig. 4.11. Variaia EBR n funcie de TLE a radiaiilor. Curbele 1, 2 i 3 corespund respectrii unor rate de supravieuire de 80, 10 i 1%.
153

 Oxigenul: n prezena oxigenului, sensibilitatea celulelor este de 2 3 ori mai ridicat

dect n anoxie (figura 4.12); intensitatea maxim este atins pentru concentraii extreme de O2 corespunznd celei a aerului (20%). Acest efect sensibilizant al oxigenului se exprim n general prin OER (Oxigen Enhancement Ratio Raportul de amplificare a oxigenului). OER se definete ca raportul dintre doza eliberat n anoxie pentru un anume efect i doza eliberat n prezena oxigenului pentru a obine acelai efect: D N2 OER = (4.5) D O2

Fig. 4.12. Curba de supravieuire n condiiile prezenei oxigenului sau n anoxie.

Debitul sau etalarea dozei: cnd celulele iradiate prezint o activitate de reparaie a

leziunilor induse de radiaii, conteaz dac doza este eliberat ntr-un timp foarte scurt sau este etalat pe o perioad mai lung cu o medie de iradiere n timp (cu o medie de debit) mai sczut. Astfel mortalitatea oarecilor iradiai este cu 38% superioar cnd debitul dozei este de 300 mGy/min fa de un debit de 30 mGy/min. Din contr la iradierea esuturilor al cror ritm de cretere este foarte ridicat (de exemplu mduva osoas) etalarea dozei (n msura n care debitul rmne superior pragului capabil s produc o leziune) mrete importana leziunilor pentru c probabilitatea de a atinge celulele ntr-un moment cu radiosensibilitatea efectiv (profaz 3) este mai mare. Fracionarea dozei: fracionarea dozei are acelai efect ca i etalonarea i tinde s reduc efectele unei doze de iradiere permind mecanismelor de reparaie s restaureze, cel puin parial, stricciunile ntre dou iradieri (figura 4.13). O fracionare important (considerabil) poate induce o anumit radiorezisten. Condiiile metabolice: numeroase lucrri au fost consacrate influenei metabolismului asupra radiosensibilitii: de exemplu supravieuirea celulelor iradiate este mai bun dac acestea sunt plasate n condiii care nu favorizeaz creterea (mediu nutritiv srac). Substane sensibilizatoare: administrarea anumitor substane poate mri radiosensibilitatea celulelor; aa se ntmpl n cazul Synkavitului (un derivat al vitaminei K) sau al BUdr (analog al bazelor pirmidinice) care ar aciona ca inhibator al separrii radioleziunilor.
3

Profaza este prima faz a mitozei n timpul creia cromatina se condenseaz pentru a individualiza cromozomii.
154

 Substane radioprotectoare: aceste substane, deja amintite mai sus, nu pot s acioneze
dect dac sunt prezente n momentul iradierii sau n minutele ce urmeaz. Ele trebuie s fie administrate, dac este posibil, nainte de iradiere; o ntrziere sau o amnare prea lung dup expunere le reduce din eficacitate.

Fig. 4.13. Efectul fracionrii dozei. 4.2.3. Doza absorbit i factorul de calitate Din paragrafele precedente reiese faptul c pentru aceeai doz absorbit (un anumit numr de Gy), efectele observate sunt n funcie de natura radiaiei i de condiiile n care este eliberat. Cu alte cuvinte, se poate ca pentru aceeai doz absorbit s se obin efecte mai mult sau mai puin importante. Acesta este motivul pentru care s-a introdus, n radioprotecie, noiunea de doz echivalent (H),care corecteaz doza absorbit printr-un factor de calitate al radiaiei (Q) i un factor de distribuie (N): H=D*Q* N (4.6) Factorul de calitate este practic legat de EBR utilizat n radiobiologie. Acest factor de calitate are valoarea egal cu 1 pentru razele X, i particulele , o valoare de 3 pentru neutroni cu energie inferioar de 10 keV, de 10 pentru neutroni cu energie superioar de 10 keV i variaz ntre 1 i 20 pentru particulele n funcie de energia lor. Unitatea pentru doza echivalent este Sievert (Sv) atunci cnd doza absorbit este exprimat n Gray. n vechiul sistem, ea se exprima n rem (Rntgen Equivalent for Man) atunci cnd doza absorbit era dat n rad. Conversia ntre rem i Sievert iese imediat 1Sv = 100 rem. 4.2.4. Mecanisme de reparaie Pentru o doz dat de radiaii (UV, RX sau )numrul de leziuni provocate iniial asupra ADN-ului bacterian al suelor cu sensibilitate diferit este acelai. De aici se deduce c diferenele de radiosensibilitate sunt legate de capacitatea mai mare sau mai mic de a repara anumite stricciuni. Anumite leziuni ale ADN-ului pot fi reparate prin mecanisme enzimatice. Acest proces se deruleaz n minutele care urmeaz iradierii i n msura n care rmne intact poriunea lanului
155

complementar celui lezat (rupturile duble sunt deci cel mai adesea ireparabile). Se disting mai multe mecanisme de reparaie: Reparaiile dimerilor i a rupturilor simple: dezoxiribonucleotidele deteriorate (dimerii) aflate pe un lan care nu este rupt sunt excizate sub aciunea unei endonucleoze. La marginile breei nucleotidele lezate sunt eliminate apoi prin aciunea hidrolitic a exonucleozelor lezate (fig 4.14). Lanul este apoi reconstruit prin polimeroze care reasambleaz nucleotidele bazndu-se pe secvena de pe lanul complementar. n final, cnd i ultima nucleotid a fost reaezat la locul ei, cele dou extremiti ale lanului sunt sudate de ctre o ligaz.

Fig. 4.14. Mecanismul de reparare enzimatic a dimerilor i rupturilor simple.

Recombinarea: n timpul replicrii ADN-ului prealabil unei mitoze, copia lanului mam pe care

se menin unul sau mai muli dimeri nou-excitai, este ntrerupt. Astfel n lanurile fiic vor aprea una sau mai multe bree. Aceste bree pot fi n continuare astupate, atunci cnd schimburile de ADN ntre dou lanuri ajung s resitueze n faa lacunelor o secven ntreag.

4.3. Efecte la nivelul esuturilor i organelor Un esut este construit din celule de natur i activitate fiziologic diferit. Radiosensibilitatea lui va depinde de radiosensibilitatea relativ a celulelor care l formeaz. De exemplu, la nivelul pielii, gradele radiosensibilitii dermei i a straturilor succesive ale epidermei sunt foarte diferite : pentru epiderm, celulele bazale sunt radiosensibile, dar celulele straturilor externe nu sunt. Acestea din urm ar putea ns s dispar n urma iradierii, nemaifiind renoite prin mulirea celulelor bazale. Ct despre derm, ea apare ca radiorezisten. Pentru mduva osoas, radiosensibilitatea variaz n funcie de linia considerat : eritoblastele (linia roie) sunt cele mai radiosensibile i megacariacitele (plachetele) sunt cele mai radiorezistente ; mieloblastele (linia alb) au o sensibilitate intermediar. Aceste celule sue sunt n orice caz mai sensibile la radiaii dect celulele fiic din sngele circulant ; totui, n caz de expunere important la radiaii, acestea din urm pot fi conduse (aduse) la dispariie prin lipsa rennoirii. Ca regul general, cu ct un esut (sau celulele care-l constituie) este activ (diviziuni intense, activitatea secretorie important) cu att este mai radiosensibil. n ordinea descresctoare a radiosensibilitii avem : esutul hematopoetic, timus, glande sexuale, bulbul pilos, mucoasa digestiv i glandele ei, glandele sebacee, epiderma, faringele, buze i gur, plmni, glandele sudoripare, esofagul, rinichii, traheea, branhiile, suprarenalele, ficat, pancreas, tiroid, esutul conjuctiv i vasele sanguine, muchi, esut osos i pe ultimul loc esutul nervos. Dup importana dozei eliberate, dup ct de intens este iradierea (pe o poriune limitat sau asupra ntregului organism) i dup radiosensibilitatea celulelor afectate, la nivelul esuturilor, anumite efecte se vor exprima rapid dup expunere, n timp ce altele nu vor fi vizibile dect dup o perioad de laten, mai mult sau mai puin lung. Efectele tardive se mpart n trei categorii : efecte tardive pe esuturi iradiate precum : diminuarea fertilitii, sterilitate cataract ocular sau limitarea creterii ; la doze suficient de ridicate (de la mai mult de
156

civa Sv pn la cteva zeci de Sv) aceste efecte se observ la toi subiecii iradiai, iar amploarea efectelor crete cu doza ; efecte cancerigene : se observ creterea frecvenei cancerelor la subiecii expui la doze de radiaii ridicate ; aceste cancere sunt identice celor care survin n mod natural i nu pot fi distinse de ele ; efecte genetice : radiaiile provoac mutaii la nivelul cromozonal. Observaiile genetice arat c qvasitotalitatea mutaiilor sunt vtmtoare sau neutre n cel mai bun caz. O parte din aceste mutaii sunt rapid eliminate, cci cel mai adesea ele nu permit dezvoltarea la termen a celulelor sue sau a zgomotului ; anumite mutaii ns pot fi transmise la descedeni. Ca i carcinogeneza, mutaia este un efect probabilistic, numit efect stochastic ; n general se admite absena unui prag la care s nu existe efect. 4.4. Efecte la nivelul organismului

Fig. 4.15. Gama aproximativ a dozelor letale pentru diferite grupe taxonomice. Una din caracteristicile remarcabile a radiaiilor ionizante este diferena de sensibilitate a organismelor vii (figura 4.15). Sensibilitatea este variabil pentru organismele uni-, pauci- sau pluricelulare ; la cele pluricelulare ea variaz i n funcie de specie i de ras. Radiosensibilitatea se traduce prin DL50 sau DL100 4. Criteriul mortalitii nu este singurul care se ia n consideraie, dar rmne totui cel mai uor de studiat. Dac se ia drept criteriu moartea, se constat c DL50 variaz de la 2 Gy pentru mamifere la 3 kGy pentru o serie de organisme unicelulare(tabelul 4.1).Insectele par a fi mai rezistente,mai puin totui dect unicelularele i se poate admite c ,n medie, doza necesar pentru a omor o insect este de o sut de ori mai mare dect cea care provoac moartea unui mamifer. Radiorezistena insectelor este mai sigur legat de faptul c ciclurile lor de diviziune celular sunt limitate de o serie de stadii ale dezvoltrii lor.Multiplicarea celular i diferenierea esuturilor se produce n timpul fazei embrionare ,n modul c n timpul stadiului larvar , creterea rezult n principal dintr-o cretere a volumului celular,fr mrirea numrului lor.Cteva salturi brute ale activitii mitotice se produc nc din timpul metamorfozei ,mai ales la sfritul stadiului crisalid la insectele cu metamorfoza complect.ntr-adevr celulele n diviziune sunt la fel de radiosensibile la insecte ca i la vertebrate iar celulele reproductoare care conserv o activitate mitotic la insecta adult rmn foarte radiosensibile.Sterilizarea prin iradiere a insectelor de sex masculin este o tehnic utilizat pentru eradicarea a o serie de boli parazitare vehiculate de insecte . Un numr limitat de studii de radiosensibilitate au fost fcute pe diverse specii de vertebrate (peti,amfibii i reptile,psri i mai ales mamifere mici) pentru a stabili dozele letale sau sensibilitatea unor funcii,mai ales funcia de reproducere.
157

DL100 sau doza letal 100 este doza care provoac moartea a 100% din indivizii unei populaii pe o perioad dat dup expunere (30 zile pentru mamifere). Tabelul 4.1 Doza letal 50 pentru diferite organisme vii Specia Bacil mezenteric Paramoecium Amib Ferment(drojdie) Melc Sarpe Broasc estoas Canar DL50(Gy) 1500 2 - 3000 1000 300 120 3-4 10 5-9 Specia obolan Cobai Cine Porc Maimu Om DL50(Gy) 4,5-5,5 2,5 3,0 4,0 4,0 4,0 DL100(Gy) 6,0-8,0 4,0 4,0-5,0 6,0 6,0 6,0

Studiul la om al efectelor generale ale radiaiilor ionizante se face cu ajutorul observaiilor constatate la : bolnavii de cancer iradiai local victimele exploziilor atomice de le Hiroshima i Nagasaki accidentele profesionale (iradieri cronice sau acute). n ultimul caz (accidentele de la Vinca i Los Alamos) s-au putut estima valorile dozelor letale la om. Simptologia dup o expunere la o doz acut la om este urmtoarea : moarte molecular : corespunde morii imediate i este legat de oprirea funciilor metabolice. Se produce prin doze foarte ridicate, superioare de 1 kGy. sindromul nervos : provoac moartea n minutele sau orele care urmeaz unei expuneri la o doz de 100 Gy sau mai mult prin prbuirea sistemului nervos central (SNC) i cardiovascular. Mecanismele implicate nu sunt nc bine (pe deplin) explicate i se atribuie moartea unor leziuni ale SNC. Se admite drept cauz imediat a morii un edem cerebral care antreneaz hipertensiunea intracranian. sindromul gastro-intestinal : pentru doze intermediare (5 12 Gy), moartea survine dup cteva zile (3 10 zile) iar simptomologia este dominat de o diaree profuz i hemoragic, consecina distrugerii mucoasei intestinale. sindromul medular : pentru doze mai slabe (2,5 5 Gy), moartea survine dup mai multe sptmni (2 8 sptmni, cu un maxim n jurul celei de-a 30a zile) de la iradiere, ca urmare a leziunilor provocate la nivelul organelor hematopoetice cu dispariia progresiv n consecin a elementelor figurate ale sngelui cu anemie, infecie, hemoragie. La vegetale expunerea la aceleai doze poate induce modificri morfologice, citologice, fiziologice i genetice n celule i esuturi. Aceste modificri pot fi eventual responsabile de efectele asupra creterii i dezvoltrii organelor plantelor. Un inventar al acestor efecte morfologice ale iradierii pe plante a artat c toate prile vegetale pot fi afectate i c anomaliile sunt foarte diverse. Mai mult, efectele de cretere observate se ntind de la inhibarea total pn la efecte ocazionale de stimulare. Ca regul general, fie c expunerea este cronic sau acut, creterea este invers proporional cu doza primit peste pragul care variaz mult n funcie de specii. Cercetrile realizate la Laboratorul Naional din Brookhaven s-au sprijinit pe studiul radiosensibilitii a 110 specii diferite de plante reprezentnd 35 de familii supuse unei iradieri cronice ( din 60Co) sau acut ( sau RX). n cazul unei expuneri acute, doza zilnic care va produce un efect sever este n intervalul de la minim 0,3 0,4 Gy pe zi pentru plante precum Lilium i Tradescantia pn la o toleran maximal de 60 80 Gy/zi pentru Gladiolus. Factorii care determin radiosensibilitatea vegetalelor sunt numeroi i compleci : Pentru plante superioare, sensibilitatea la radiaiile ionizante este direct proporional cu talia nucleului sau mai precis cu volumul cromozomilor, coninutul n ADN (figura 4.16). Plantele care au un volum cromozonial important sunt omorte de
158

doze acute inferioare a 10 Gy, n timp ce speciile care au cromozomi de talie mic sau puin numeroi pot supravieui la doze de 500 Gy i chiar mai mult. Astfel pinul are o sensibilitate mai mare dect stejarul. Mai mult dect att, pinul este incapabil s dea natere la noi muguri dac mugurii terminali sunt ucii. Poliploidia, deja menionat anterior este un factor care crete tolerana fa de radiaii. Speciile erbacee sunt de aproximativ dou ori mai radiorezistente dect speciile lemnoase ; printre cele lemnoase, coniferele sunt cele mai radiosensibile ; sensibilitatea lor este de acelai ordin ca a mamiferelor. Plantele inferioare (muchi, licheni, specii minicelulare) caracterizate prin cromozomi de talie mic, centromer difuz, reproducere asexuat sunt relativ radiorezistente.

Fig. 4.16. Relaia ntre volumul cromozomilor n interfaz pentru diferite fanerogame (spermatofil) i doza letal n expunere acut (1 kR sau 1 kiloRntgen = 10 Gy). Speciile sunt urmtoarele : (1) Trillium grandiflorum, (2) Podophllum peltatum, (3) Hyacinthus h. var. Innocence, (4) Lilium longiflorum, (5) Chlorophytum elatum, (6) Zea mays, (7) Aphanostephus skirrobasis, (8) Crepis capillaris, (9) Sedum ternatum, (10) Lycopersicum esculentum, (11) Gladiolus h. var. Amitie, (12) Mentha spicata, (13) Sedum oryzifolium, (14) Sedum tricarpum, (15) Sedum alfredi var. nagasakianum, (16) Sedum rupifragum. 4.5. Efecte la nivelul ecosistemelor Aceste efecte, care pot aprea la nivelul ecosistemelor ca urmare a unei expuneri la radiaii ionizante rezult pe de o parte din creterea frecvenei mutaiilor i pe de alt parte din modificarea vigorii organismelor iradiate. n cel de-al doile caz, eliminarea selectiv sau inhibarea organismelor cele mai radiosensibile va antrena o diminuare a diversitii speciilor n ecosistem i o ruptur a echilibrului ceea ce va permite o cretere rapid a speciilor supravieuitoare vegetale i animale, dotate cu o mare capacitate de cretere i/sau reproducere. Insectele, prin faptul c au o radiorezisten relativ, o talie mic, reproducere rapid, diversitate genetic i mobilitate sunt bine plasate drept candidai ai recolonizrii. Simultan cu expansiunea anumitor populaii locale mai puin afectate, se poate observa o invazie ce pleac din zonele sau teritoriile neatinse. Progresiv, ecosistemul i va gsi echilibrul i va evolua spre nou. Datele privind efectele asupra ecosistemelor sunt limitate la cteva studii pe :
159

1. ecosisteme cu fond ridicat de radiaii naturale : Morro do Ferro (Brazilia), Kerala (India), Massif Central (Frana), 2. ecosisteme puternic contaminate de activitile umane legate de ciclul combustibilului nuclear : marea Irlandei, rul Columbia (Hanford), lacul White Oak (Oak Ridge), 3. locurile testelor nucleare : Nevada, Bikini, Mururoa, 4. ecosisteme iradiate artificial : ecosistemul forestier din Brookhaven (surs de 350 TBq 137Cs) o zon de 150 ha din jurul reactorului Lockheed din Georgia de Nord fitocenoza unui ecosistem mediteranean la Cadarache (45 TBq 137Cs) Printre studiile realizate n locurile cu fond ridicat de radiaii naturale cele mai multe au putut arta efectele negative ale expunerii cronice la debite de doze relativ sczute. Unele au sugerat chiar o cretere, n raport cu grupele controlate, a rezistenei la stres a organismelor supuse acestor doze sczute de radiaii. Altele, totui, au pus n eviden la roztoare, modificri caracteristice ale sngelui i constituienilor si sau leziuni ale testiculelor. S-au raportat de asemenea efecte la vegetale. De exemplu, dezvoltarea sexual a unei hepatice (Marchantia polymorpha) este inhibat la doze de 66 80 Gy/an ; creterea ei vegetal este, din contr, stimulat n asemenea msur c ea reuete s elimine alte specii biologice (bryophytes) care, la doze de cinci ori mai mici, suportau concurena. Studii similare au fost fcute la locul eliminrii deeurilor radioactive. Blaylock, lucrnd n regiunea lacului White Oak, a pus n eviden la gambuze (Gambusia affnis) expuse la doze de 0,1 Gy/zi (ulterior estimate la 3,5 Gy/zi) o cretere semnificativ a fecunditii, o mrire a numrului de mori embrionare i anomalii morfologice. La larva de chironom (Chironomus tentans), se observ o cretere a frecvenei aberaiilor cromozomiale ; aceste aberaii sunt totui rapid eliminate prin mecanismele de selecie. Efecte directe ale radiaiilor rezultate din exploziile nucleare sunt greu de evaluat din cauza efectelor suflului i a cldurii ce nsoesc explozia i ale cror efecte sunt mai severe dect cele ale radiaiilor. Iradierea subsecvent (ulterioar) a acestor ecosisteme puternic perturbate, prin dezintegrarea radionuclizilor depozitai n aceast zon, produce efecte minore fa de cele citate anterior. Cu timpul se produce o restaurare natural observat n numeroase locuri unde au avut loc teste nucleare (Bikini, ). Iradierea artificial cu ajutorul surselor nchise ermetic de 60Co sau de 137Cs a furnizat date foarte importante privind rspunsul relativ al vegetalelor prezente n mediul natural ce a fost cadru al acestor experiene. Din cauza mobilitii lor, populaiile animale se studiaz mai greu. La Brookhaven, a fost plasat mai multe luni o surs de 350 TBq de 137Cs, n mijlocul unei pduri mixte de pini i stejari. Prin gradarea daunelor n funcie de distana fa de surs s-a observat c radiosensibilitatea plantelor era puternic influeat de fizionomia lor : plante cu nlime mare (arbori) sunt mai sensibile la radiaii dect arbutii, i dect, bineneles plantele erbacee. Tolofitele sunt mpreun cu microflora cele mai radiorezistente. n funcie de deprtarea fa de surs, gsim n ordine succesiv : o zon lipsit de orice plant superioar i unde supravieuiesc numai lichenii, o zon cu rogoz, o zon unde domin buruieni, o zon unde supravieuiesc stejarii, dar nu fr semne de boal i aberaii, prezentnd ca urmare a fragilitii mrite, un grad superior de parazitare cu insecte, o zon unde supravieuiesc pinii i unde stadiul medical al stejarului este mai satisfctor, o zon unde nu se mai remarc inhibarea creterii vegetalelor. Relaia dintre radiosensibilitate i fizionomie se regsete i la licheni unde formele crustacee sunt mai radiorezistente dect formele foliacee i fruticuloase ; acest lucru este adevrat i n ceea ce privete tolerana fa de ageni poluani n general. Printre efectele macroscopice ale radiaiilor ionizante asupra ecosistemelor, se poate meniona reducerea productivitii i srcirea speciilor. Aceste efecte nu sunt specifice radiaiilor i se observ n cea mai mare parte a situaiilor de stres, fie c sunt climatice sau cauzate de accidente de poluare. Anumite modificri ale unui ecosistem afectat de o contaminare radioactiv pot de altfel s nu fie
160

influenate dect n mod indirect de fenomenul de radiocontaminare. Astfel, n zona de evacuare de 30 km din jurul Cernobl, se observ o cretere a numrului de diverse insecte mai mult probabil legat de stoparea aplicrii pesticidelor agricole n acea regiune. De asemenea, interzicerea vnatului a permis populaiilor formate din animale de vnat s sporeasc, antrennd o cretere a numrului de prdtoare (vulpi, lupi). Politica de deschidere i colaborare a fostei URSS va aduce informaii mai ample despre comportamentul ecosistemelor contaminate pe scar larg precum Ucraina (Cernobl), Urali (Kyshtym), i poate i n alte regiuni (Tomsk), unde exist locuri ce au putut fi folosite pentru eliminarea deeurilor radioactive.

161