Sunteți pe pagina 1din 20

Rspunsul celular la stress i la factori nocivi

Celula normal este limitata la o gama ingusta de funcii i structuri, de catre programul genetic n ce privete metabolismul, diferentierea i specializarea, dar i prin relaiile cu celulele invecinate i prin disponibilitatea substratului metabolic. Este capabila sa indeplineasca funciile normale, fiziologice, mentinand o stare constanta, numita homeostazie. Factori de stress mai severi, precum i unii stimuli patologici, pot determina o serie de modificri celulare, numite adaptari fiziologice sau morfologice, n care celula dobandeste stari constante noi, dar modificate, pastrandu-se viabilitatea celulei i modulandu-i funcia ca rspuns la acesti stimuli. Rspunsul adaptativ poate consta n creterea numrului de celule, proces numit hiperplazie, sau o cretere a dimensiunilor celulare, proces numit hipertrofie. Contrar, atrofia este un proces adaptativ caracterizat prin reducerea dimensiunilor i funciei celulare. Daca limitele rspunsului adaptativ al celulei la un stimul sunt depasite, sau n anumite instante cnd celula este expusa unui factor vatamator sau stres, are loc o serie de evenimente, care poarta denumirea de injurie celular. Injuria celular este reversibil pn la un anumit punct, dar dac agentul persista sau acioneaz sever de la inceput, celula ajunge la o stare ireversibil care evolueaz spre moarte celular. Adaptarea, injuria celular, precum i moartea celular pot fi considerate stadii ale deteriorarii structurii i funciei celulare. Diferite tipuri de stres pot induce modificri celulare sau tisulare, altele dect adaptarea, injuria sau moartea celular. Celulele expuse la factori subletali sau cronici, pot fi integre, dar prezint alterari subcelulare. Dereglarile metabolice celulare pot fi asociate cu acumularea intracelular a unor substane, cum ar fi proteine, lipide i carbohidrati. Adesea calciul se depune acolo unde exista moarte celular, rezultnd calcificarea patologica. In cele din urma, senescenta celular este de asemenea caracterizata prin modificri morfologice i funcionale.

Adaptarea celular la stress - cretere i diferentiere


Celulele raspund la nevoi energetice crescute i la stimuli externi prin procesele de hiperplazie i hipertrofie, iar la o cantitate sczut de nutrienti i factori de cretere prin atrofie. n unele cazuri, celulele se transforma dintr-un tip celular n altul printr-un proces numit metaplazie. Exista numeroase mecanisme moleculare implicate n adaptarea celular. 1. Unele adaptari sunt induse de catre stimuli proveniti chiar de la celulele efectoare, sau de la alte celule din vecinatate. 2. Altele sunt produse de activarea anumitor receptori de pe suprafa celular, prin anumite cai de conducere. 3. Adaptarea poate fi asociat cu inducerea sintezei de noi proteine n celulele int, ca de exemplu rspunsul celulelor musculare la efortul prelungit, i inducerea proliferarii celulare, cum este de exemplu rspunsul endometrului la estrogeni. 4. Adaptarea poate presupune ca unele celule sa produca alte proteine dect n mod normal,

sau proteine normale intr-o cantitate mult crescut; un exemplu este reprezentat de celulele care produc diferite tipuri de colagen i proteine ale matricii extracelulare n inflamatia cronic i fibroza. Hiperplazia Hiperplazia reprezint creterea numrului de celule proprii, ca rezultat al multiplicrii celulare, dintr-un esut sau organ, rezultnd de obicei creterea n volum a esutului sau organului respectiv. Cu toate ca hiperplazia i hipertrofia sunt dou procese distincte, frecvent apar impreuna, i pot fi declansate de acelasi stimul extern. De exemplu, creterea uterului sub influenta hormonal implica att creterea numrului de celule musculare netede i epiteliale, precum i creterea dimensiunii acestora. Hiperplazia are loc atunci cnd populatia celular este capabila sa sintetizeze ADN, permitand astfel diviziunea mitotica. n contrast, hipertrofia implica creterea celulei fr diviziune. Se poate intalni hiperplazie fiziologic sau patologica. Hiperplazia fiziologic este un fenomen frecvent ntlnit: hiperplazia glandelor uterine n estru i gestaie; hiperplazia tubilor seminiferi la coco n perioada de mperechere. Hiperplazia fiziologic Hiperplazia fiziologic poate fi divizat n: a) hiperplazia hormonal, care crete capacitatea funcionala a unui esut atunci cnd este nevoie i b) hiperplazia compensatorie, care crete masa esutului dup injurii sau rezecie. Hiperplazia hormonal este cel mai bine exemplificata prin proliferarea epiteliului glandular al glandei mamare la pubertate sau n timpul sarcinii, precum i hiperplazia uterina din timpul gestaiei. Exemplul clasic de hiperplazie compensatorie este descris n mitul lui Prometeu, lucru care demonstreaza ca grecii antici cunosteau capacitatea regenerativa a ficatului. Drept pedeapsa pentru ca a furat focul de la zei, Prometeu a fost legat n lanturi de un munte, i zilnic ficatul sau era devorat de un vultur, regenerandu-se n fiecare noapte. Modelul experimental de hepatectomie partiala a fost foarte folositor n examinarea mecanismelor care stimuleaz proliferarea hepatocitelor reziduale i implicit regenerarea hepatica. Mecanisme similare sunt implicate n situatii cnd esutul ramas creste i compenseaza pierderea partiala de esut (ex. n nefrectomia unilaterala, rinichiul ramas sufer hiperplazie compensatorie). Hiperplazia mduvei osoase ca reacie la hipoxie la altitudini mari este alt exemplu de hiperplazie compensatoare.; Mecanismele hiperplaziei In general, hiperplazia este produs sporirea productiei locale de factori de cretere, nivele crescute de receptori pentru factori de cretere la nivelul celulelor receptoare, sau activarea anumitor semnale intracelulare. In hiperplazia hormonal, insusi hormonii joaca rol de factori de cretere i declansaza transcriptia anumitor gene celulare. n hiperplazia compensatorie, sursa producerii factorilor de cretere i stimulii care contribuie la producerea lor sunt mai puin cunoscuti. Creterea masei de esut dup diferite injurii se realizeaza nu numai prin proliferarea celulelor ramase, ci i prin formarea de celule noi din celule stem. De exemplu, n ficat, celulele stem intrahepatice nu au un rol major n hiperplazia care are loc dup hepatectomie, dar participa la regenerare dup anumite forme de injurie hepatica,

cum ar fi hepatitele cronice, n care capacitatea de proliferare a hepatocitelor este compromisa. Date recent obinute din observatii clinice i din studii experimentale au demonstrat ca maduva osoasa contine celule stem care pot da nastere mai multor tipuri de celule diferentiate, specializate, inclusiv hepatocite. Aceste observatii subliniaza plasticitatea celulelor stem la adult i accentueaza potentialul repopularii esuturilor lezionate cu celule stem provenite din maduva osoasa. Hiperplazia patologic Majoritatea formelor de hiperplazie patologic sunt cauza stimulrii hormonale excesive, sau factorilor de cretere locali care acioneaz asupra unor celule int. Hiperplazia endometrului este un exemplu de hiperplazie patologic indus hormonal n sindroamele de hiperestrogenism. Hiperplazia benign a prostatei este un alt exemplu de hiperplazie patologic indus de rspunsul la unii hormoni, n acest caz hormonii fiind cei androgeni. Hiperplazia corticosuprarenalei (sindrom Cushing) consecutiv hipersecreiei de ACTH n hipofiz, hiperplazia paratiroidei n hiperfosfatemie i hiperplazia mduvei osoase n anemii cronice reprezint alte exemple de hiperplazie patologic. Cu toate ca aceste forme de hiperplazie sunt patologice, procesul rmne sub control, hiperplazia regresnd dac stimularea hormonal dispare. Acest rspuns la mecanismele reglatoare deosebete hiperplazia patologic benign de cancer, n care mecanismele care controleaza creterea devin ineficiente. Totui hiperplazia patologic constituie un sol fertil pe care poate lua natere cancerul. Astfel, pacienii cu hiperplazia endometrului prezint un risc crescut de a dezvolta cancer endometrial. Hiperplazia este, de asemenea, un rspuns important al celulelor esutului conjunctiv n procesul de vindecare a rnilor, prin proliferarea fibroblastelor i a vaselor de snge care grabesc vindecarea. n acest caz factorii de cretere sunt cei responsabili pentru hiperplazie. Stimularea proliferrii celulare cu ajutorul factorilor de cretere este implicat n hiperplazia asociat cu unele infectii virale, cum ar fi de exemplu papilomavirusurile, care formeaz papiloame cutanate i pe mucoase sub forma unor mase de esut hiperplastic. Hipertrofia Hipertrofia reprezint creterea dimensiunilor celulare, rezultnd astfel creterea dimensiunilor organului respectiv. Astfel organul hipertrofiat nu contine celule noi, ci doar celule mrite n volum. Microscopic, celulele au citoplasma i nucleul mrite n volum. Aceast cretere a celulelor se datoreaz sintezei crescute de componente structurale, i nu datorit edemului celular. Aa cum s-a mentionat anterior, celulele capabile de diviziune mitotic pot reaciona la stres att prin hiperplazie ct i prin hipertrofie, n timp ce n celulele care nu se divid (ex. fibrele miocardice) are loc doar hipertrofia. Nucleii celulelor hipertrofiate conin o cantitate mai mare de ADN dect celulele normale, probabil datorit faptului c celulele se opresc n ciclul celular fr a se mai divide. Hipertrofia poate fi fiziologic sau patologic i este cauzat de activitatea funcional crescut sau de stimularea hormonal specific. Celulele musculare striate, att cele scheletice ct i cele cardiace, au capacitate extraordinar de hipertrofie, probabil pentru c nu se pot adapta corespunztor la o cretere a metabolismului prin diviziune mitotic i astfel prin producerea de celule noi care s preia din sarcina. Principalul stimul pentru hipertrofia muscular este efortul intens.

De exemplu, musculatura culturitilor este rezultatul creterii dimensiunilor fibrelor musculare individuale ca rspuns la efort. Celula muscular hipertrofiat dobndete un nou echilibru, care i permite s funcioneze la un nivel mai ridicat de activitate. La nivel cardiac, stimulul pentru hipertrofie este de obicei suprasarcina hemodinamic cronic, ce apare fie din cauza hipertensiunii, fie a insuficienei valvulare. Are loc o sintez crescut de proteine i filamente, crendu-se un echilibru ntre cerere i capacitatea funcional a celulei. Numrul crescut de miofilamente din celul permite efectuarea unui volum de lucru mai mare, cu un nivel de activitate metabolic per unitate de volum celular identic cu cel al unei celule normale. Dezvoltarea masiv, fiziologic, a uterului n timpul sarcinii este un exemplu bun de cretere n dimensiuni, indus hormonal, a unui organ, att prin hiperplazie, ct i prin hipertrofie. Hipertrofia celular este stimulat de hormonii estrogeni, care acioneaz asupra receptorilor estrogenici ai celulelor musculaturii netede, rezultnd o cretere a sintezei de proteine musculare i implicit a celulei. Un efect similar au prolactina i estrogenii asupra glandei mamare n timpul lactaiei. Acestea sunt exemple de hipertrofie fiziologic indus de stimuli hormonali. Dei cunotinele despre fibrele musculare cardiace i scheletice sugereaz c aceste esuturi sunt incapabile de proliferare i de aceea creterea lor se face n totalitate pe baza procesului de hipertrofie, date recente sugereaz c aceste tipuri celulare sunt capabile de proliferare limitat, precum i de repopulare cu ajutorul precursorilor. Aceast descoperire accentueaz conceptul conform caruia hiperplazia i hipertrofia apar adesea concomitent n timpul rspunsului tisular la stres i la pierderi celulare. Exemple de hipertrofie patologic: - hipertrofia arterial (celule musculare netede din medie) n hipertensiune; - hipertrofie miocardic n cazul stenozelor valvulare, arteriale, hipertensiunii; - hipertrofia musculaturii netede a vezicii urinare n stenozele tractului urinar inferior; - hipertrofia glandelor endocrine pereche, a rinichiului dup excizia unilateral (hipertrofie vicariant sau compensatorie). Atrofia Micorarea dimensiunilor celulare n urma pierderii de substan celular poart denumirea de atrofie (a negaie; gr. trophos nutriie). Atrofia reprezint o form de adaptare celular i poate evolua spre moartea celular. Cnd este cuprins un numr suficient de celule, ntregul esut sau organ scade n dimensiuni, devenind atrofic. Atrofia reprezint reducerea dimensiunilor i funciei unui esut pe baza reducerii volumului i funciei celulelor sau chiar pe baza reducerii numrului de celule. Atrofia poate fi fiziologic sau patologic. Atrofia fiziologic se ntlnete n stadiile timpurii ale dezvoltrii. Unele structuri embrionare, cum ar fi notocordul sau ductul tiroglosal, sufer atrofie n timpul dezvoltrii fetale. Uterul involueaz la scurt timp dup parturitie, fiind de asemenea o form de atrofie fiziologic. Atrofia patologic este dependent de cauz i poate fi local sau generalizat. Principalele cauze care duc la atrofie sunt: a. Volum de lucru sczut (atrofia de repaus sau inactivitate). Cnd un membru fracturat este imobilizat n gips sau cnd un pacient este imobilizat la pat, se instaleaza cu repeziciune atrofia muschilor scheletici. Scderea, iniial rapid, n dimensiune a celulei este reversibil odat cu reluarea activitii musculare. Odat cu repausul prelungit, fibrele musculare scad att n dimensiune, ct i numeric, aceast atrofie fiind nsoit de resorbie osoas intens, ceea ce duce la osteoporoz de repaus.

Atrofia stomacului muscular la pasre n cazul hrnirii cu furaj mcinat fin i n lipsa de pietricele, atrofia osoas i muscular n condiii de hipo- sau inponderabilitate sunt exemple de atrofie de inactivitate. b. Pierderea inervaiei (atrofia de denervare). Funcionarea normal a musculaturii scheletice este dependent de componenta nervoas. Leziuni ale nevilor duc la atrofia rapid a musculaturii deservite de nervul respectiv. c. Diminuarea fluxului sanguin. O scdere a fluxului sanguin (ischemia), ca rezultat al unei boli ocluzive arteriale, duce la atrofia rapid a esutului respectiv datorit morii celulare. La adulii n vrst, creierul sufer atrofie progresiv, probabil i datorit aterosclerozei care ingusteaz vasele de snge ale creierului. d. Nutriia inadecvat. Malnutriia proteino-caloric (marasmul) se asociaz cu utilizarea muchiului scheletic ca surs de energie, cnd celelalte rezerve cum este esutul adipos au fost epuizate. Aceasta se soldeaz cu slbire muscular avansat (cahexie). Cahexia poate fi observat i la pacienii cu boli inflamatorii cronice sau cancer. n prima boal, producerea excesiv de citokine inflamatorii cum este factorul de necroz tumoral (TNF) este incriminat n supresia apetitului i atrofie muscular. e. Pierderea stimulrii endocrine. Multe glande endocrine, glanda mamar i organele genitale sunt dependente de stimularea hormonal pentru funcionarea normal. Pierderea stimulrii estrogenice dup menopauz duce la atrofia fiziologic a endometrului, a epiteliul vaginal i a glandei mamare. Hipopituitarismul duce la atrofia glandelor endocrine (tiroid, corticosuprarenal, gonade). Atrofia hormonal apare i n cazul lipsei factorilor de cretere locali, tisulari. Ex.: atrofia mediei arteriale n cazul secreiei reduse de factori vasoconstrictori (endoteline). f. Senescena (atrofia de senilitate). Procesul de mbtrnire este asociat cu pierdere celular, observat de obicei n esuturile ce conin celule permanente, cum este creierul sau cordul. g. Compresiunea. Compresiunea esuturilor pentru un anumit timp poate duce la atrofie. De exemplu o tumor benign sau un granulom n cretere pot produce atrofia de compresiune a esuturilor invecinate. Atrofia n acest caz este probabil datorat modificrilor ischemice cauzate de masa tumorala n dezvoltare. Acumularea de urin n bazinet (hidronefroz) se asociaz cu atrofia parenchimului renal; staza lichidului cefalorahidian induce dilatarea ventriculilor cerebrali i atrofia substanei nervoase (hidrocefalie intern). Modificrile celulare fundamentale asociate cu atrofia sunt identice n toate aceste circumstante, reprezentand o reducere n dimensiuni a celulelor pentru a asigura supravieuirea. Atrofia este rezultatul reducerii componentelor structurale ale celulei. n muchiul atrofic, celulele conin mai puine mitocondrii, miofilamente i o cantitate mai sczut de reticul endoplasmic rugos. Se stabileste astfel un nou echilibru ntre volumul celular, funcia celulei, fluxului sanguin, a nutritiei celulei i stimularea trofic. Dei celulele atrofice au o activitate sczut, ele nu sunt moarte. Totui, atrofia poate progresa pn la punctul n care celulele sunt lezate i mor. n esuturile ischemiate grav, volumul patului sanguin este insuficient chiar pentru a menine n via celulele atrofice, survenind astfel injuria i moartea celular. Mai mult, apoptoza poate fi indus de aceleai semnale care induc atrofierea, contribuind astfel la pierderea volumului organului respectiv. De exemplu, apoptoza contribuie la regresia organelor dependente hormonal dup oprirea secreiei hormonale. Mecanismele atrofiei. Mecanismele biochimice ale procesului de atrofie sunt nc incomplet cunoscute, dar probabil este afectat echilibrul dintre sinteza i degradarea proteinelor. Intensificarea procesului de degradare a proteinelor joac probabil un rol esenial n atrofie.

Celulele mamiferelor conin multiple sisteme proteolitice, care au diferite funcii. Lizozomii conin hidrolaze acide (ex. catepsine) i alte enzime care descompun proteinele obinute prin endocitoz din mediul extracelular, suprafaa celular, precum i unele componente celulare. Calea ubiquitina-proteozom este responsabil de degradarea a numeroase proteine nucleare i din citosol. Proteinele degradate prin aceast cale sunt mai nti conjugate cu ubiquitina i apoi descompuse ntr-un organit celular proteolitic numit proteozom. Se pare c aceasta cale este responsabil de proteoliza intens observat ntr-o serie de afeciuni asociate cu catabolism accentuat, cum ar fi cahexia din cancer. Hormonii, n special glucocorticoizii i hormonii tiroidieni, stimuleaz degradarea proteinelor pe calea mediat de proteozomi; insulina este inhibitor al acestei ci, fiind un factor de cretere. Citokinele, printre care factorul de necroz tumoral (TNF), sunt capabile s induc proteoliza muscular prin acest tip de mecanism. n multe situaii atrofia este nsoit de creterea numrului de vacuole de autofagie. Acestea sunt vacuole nconjurate de o membran, n interiorul celulei, care conin fragmente din componentele celulare (ex. mitocondrii, reticul endoplasmic), care sunt destinate degradrii i n interiorul crora lizozomii ii descarc enzimele, digernd astfel componentele celulare. Unele resturi celulare din interiorul vacuolelor de autofagie rezist procesului de digestie i rmn n interiorul celulei, n citoplasm, sub forma corpilor reziduali nconjurai de o membran. Un exemplu de astfel de corpi reziduali sunt granulele de lipofuscin. cnd sunt prezente n cantiti suficiente, aceste granule imprima esutului o culoare bruna (atrofia bruna). Morfologia atrofiei n general, organele cu atrofie sunt, macroscopic, mai mici, cu margini ascuite, mai nchise la culoare, pe seciune predomin stroma conjunctiv. Microscopic, celulele sunt mai puine i mai mici, cu nuclei mici, hipercromi, cu puin citoplasm. n citoplasm, perinuclear pot aprea granule de lipofuscin. Stroma conjunctiv este condensat. Macroscopic i microscopic, atrofia trebuie difereniat de fibroz. Fibroza este un proces de proliferare a stromei conjunctive, fiind rezultatul unei inflamaii cronice, respectiv unui proces reparator atipic dup distrucii celulare. De altfel, cele dou procese, fibroza i atrofia, pot coexista. n tabelul urmtor sunt prezentate principalele caractere comune i diferene ale atrofiei i fibrozei.
Tabelul Caractere de difereniere a atrofiei de fibroz.

Macr oscopic

Atrofia esut redus volum

n volum

Fibroza esut redus, nemodificat sau crescut n Form modificat Suprafa boselat, retracii Aspect neomogen pe seciune Consisten crescut Arhitectur modificat esut conjunctiv proliferat

Micro scopic

Form pstrat Suprafa ratatinat Aspect omogen pe seciune Consisten crescut Pstrarea arhitecturii esut conjunctiv condensat

Metaplazia Metaplazia este un proces reversibil, n care ntr-un esut un tip de celul adult (epitelial sau mezenchimal) este nlocuit de un alt tip de celul. Aceast substituie reprezint un proces adaptativ, celulele mai sensibile la anumii factori de stres fiind inlocuite cu celule capabile s reziste la modificarile survenite. Cea mai reprezentativ metaplazie epitelial este transformarea esutului de tip columnar n esut de tip scuamos, proces intlnit la nivelul aparatului respirator ca rspuns la o iritaie cronic. La fumtori, epiteliul pseudostratificat prismatic ciliat al traheei i bronhiilor este nlocuit, pe alocuri sau difuz, cu epiteliu stratificat scuamos. Metaplazia scvamoas epiteliul respirator al bronhiilor se complic cu carcinom scvamos. Calculii de la nivelul canalelor excretoare ale glandelor salivare, pancreas sau canalicule biliare, pot cauza transformarea epiteliului secretor columnar n epiteliu nonfuncional, de tip stratificat scvamos. Infeciile cornice cu specii de Helicobacter la om i animale se complic cu atrofia i metaplazia intestinal a mucoasei gastrice, apoi cu adenocarcinom gastric. Carena de vitamin A (acid retinoic) induce metaplazie scvamoas n epiteliul tractului respirator, iar excesul de vitamina A inhib keratinizarea. n toate aceste cazuri, epiteliul stratificat scuamos, mai puin sensibil, este capabil sa supravieuiasc n condiii n care epiteliul specializat de tip prismatic, mai sensibil, cel mai probabil ar fi sucombat. Cu toate c celulele epiteliului scuamos din aparatul respirator sunt capabile s supravieuiasca, este pierdut un mecanism important de aprare, i anume producerea de mucus. De aceea se poate spune c metaplazia este o sabie cu dou tiuri, i n cele mai multe cazuri este de nedorit. Mai mult, dac factorii care au indus metaplazia persist, pot aprea transformri maligne ale celulelor metaplazice. Astfel, cea mai frecvent form de cancer al aparatului respirator conine celule scuamoase, care apar n zonele de metaplazie ale epiteliului prismatic normal n epiteliu scuamos. Exist de asemenea i metaplazia epiteliului scuamos n epiteliu prismatic, aa cum se ntmpl n esofagul tip Barrett, n care epiteliul scuamos esofagian este nlocuit de epiteliu prismatic intestinal, sub influenta refluxului de acid gastric. n aceste zone poate aprea cancerul, fiind vorba n general de adenocarcinoame. Metaplazia esutului conjunctiv reprezint formarea de esut cartilaginos, osos sau adipos (esuturi mezenchimale) n esuturi care nu conin n mod normal aceste elemente Metaplazie fiziologic: metaplazia osoas a meningelui la cine, a inelelor traheale la pasre sau a calusului fibros de la nivelul fracturilor. Metaplazie patologic: metaplazia osoas a intimei i mediei arteriale (formare de os spongios, uneori cu mduv hematogen), metaplazia mduvei osoase grase n mduv hematogen (anemii regenerative cronice). Mecanismele metaplaziei. Metaplazia nu apare datorit modificrilor fenotipice ale celulelor diferentiate, ci datorit reprogramarii celulelor stem existente n esuturi, sau a celulelor mezenchimale nediferentiate prezente n esutul conjunctiv. n procesul de metaplazie, celulele precursoare se difereniaz urmnd o alt cale. Diferenierea celulelor stem ntr-o anumit linie celular este mediat de anumite semnale generate de citokine, factori de cretere i componente ale matricei extracelulare. n acest proces sunt de asemenea implicate gene tisulare i de diferentiere specifice, fiind identificat un numr mare de astfel de gene. De exemplu, proteinele morfogenice osoase, membre ale familiei TGF-b, induc exprimarea condrogenica sau osteogenica a celulelor stem, suprimand astfel diferenierea pe linie muscular sau adipocitar.

Modularea fenotipic Modularea fenotipic este o modificare morfofuncional a celulelor cu funcii multiple n esut ca urmare a orientrii predominante a activitii i morfologiei spre una din funcii. De exemplu, celulele musculare netede din peretele arterial au, n mod normal, o funcie contractil, principal, iar funcia sintetic (fibre elastice, de colagen) este secundar. n cursul aterosclerozei i mbtrnirii, celulele musculare netede intimale i pierd treptat fenotipul contractil (nucleu bacilar, citoplasm eozinofilic abundent) i dobndesc un fenotip secretor, asemntor fibroblastelorfibrocitelor (nucleu fusiform, citoplasm srac), n paralel cu colagenizarea peretelui arterial. Displazia Este o leziune caracterizat prin grade diferite de hiperplazie, neuniformitate morfologic i tinctorial (pleiomorfism) a celulelor i nucleilor, activitate mitotic crescut i aezare atipic a celulelor n esut (modificarea structurii tisulare). Astfel de leziuni sunt ntlnite n esuturi supuse unor iritaii cronice, infecii virale cronice i sunt, frecvent, leziuni preneoplazice.

Generaliti privind injuria i moartea celular


Asa cum s-a menionat la nceputul capitolului, injuria celular rezult atunci cnd celulele sunt stresate att de sever nct nu se mai pot adapta sau cnd sunt expuse n mod inerent la ageni nocivi. Injuria celular poate fi reversibil sau poate culmina cu moartea clulelor. Injuria celular poate fi divizata n doua stadii, i anume: a. Injurie celular reversibil. Iniial, injuria se manifest prin modificri morfologice i funcionale care sunt reversibile dac agentul cauzal este ndeprtat. Indicii injuriei reversibile sunt reducerea fosforilrii oxidative, depleia adenozin-trifosfatului (ATP) i edemul celular cauzat de modificarea concentraiei ionilor i a influxului apei. b. Injurie ireversibil i moarte celular. Dac agentul cauzal persist, injuria devine ireversibil, celula nemaiputandu-se adapta. Exist un eveniment biochimic critic (lovitur letal) responsabil pentru acest fapt? Nu se tie exact. Totui, n esuturile ischemiate, cum este miocardul, anumite modificri structurale (ex. densificri amorfe ale mitocondriilor, indicatori ai leziunilor ireversibile mitocondriale) sau funcionale (ex. pierderea permeabilitii selective membranare) indic faptul c celulele au suferit leziuni ireversibile. Celulele lezionate ireversibil sufer fr excepie modificri morfologice care sugereaz moartea celular. Exista dou tipuri de moarte celular, necroza i apoptoza, care difer prin mecanismul de producere, morfologie i rol. Atunci cnd membranele sunt sever afectate, enzimele lizozomale patrund n citoplasma i digera celula, rezultnd procesul de necroza. Unii ageni nocivi, mai ales cei care induc leziuni ale ADN-ului, produc un alt tip de moarte celular, apoptoza, caracterizata prin descompunerea nucleului fr afectarea complet a integritii membranei. n timp ce necroza este ntotdeauna un proces patologic, apoptoza reprezint i un proces fiziologic i nu este neaprat asociat cu injuria celular!!! Cu toate c cele dou procese sunt diferite, exist unele mecanisme comune. n plus unii ageni nocivi pot induce ambele procese, n funcie de intensitatea i durata de aciune asupra celulelor, rapiditatea procesului i modificrile biochimice survenite n celula lezionat.

Cauze ale injuriei celulare


Cauzele injuriei celulare variaz de la leziuni macroscopice cauzate de un accident rutier pn la cauze endogene microscopice, cum ar fi mutaiile genetice cauzatoare de insuficiene ale

unor enzime indispensabile metabolismului normal. Majoritatea agenilor nocivi pot fi grupati n categoriile de mai jos. Deprivarea de oxigen. Hipoxia reprezint deficiena de oxigen, cauznd injurii celulare prin reducerea respiraiei oxidative aerobe. Hipoxia este o cauza frecvent i important a injuriei i morii celulare. Hipoxia nu trebuie confundat cu ischemia, care reprezint scderea cantitii de snge datorit obstrurii arteriale sau drenajului venos redus dintr-un esut. Ischemia compromite nu doar aprovizionarea cu oxigen a esuturilor, ci i a substratului metabolic, inclusiv a glucozei (care ajunge la esuturi prin fluxul sanguin). Astfel esuturile ischemice sunt lezate mult mai rapid i mai sever dect cele hipoxice. Una din cauzele hipoxiei este oxigenarea inadecvat a sngelui datorit insuficienei cardiorespiratorii. Pierderea capacitaii sngelui de a transporta oxigen, aa cum se ntmpl n anemii sau n intoxicaia cu monoxid de carbon (care produce un compus stabil, monoxihemoglobina, blocnd astfel capacitatea de transportor de oxigen a sngelui), este o cauz a insuficienei de oxigen mai puin frecvent, dar care are drept rezultat injurii celulare severe. n funcie de severitatea strii de hipoxie, celulele se pot adapta, pot suferi injurii sau pot muri. De exemplu, n obstrucia parial a arterei femurale, celulele musculare ale membrului sufer fenomenul de atrofie, stabilind astfel un echilibru ntre nevoile metabolice i rezerva de oxigen disponibil. Hipoxia sever induce injurii i moarte celular. Ageni fizici. Agenii fizici capabili sa provoace injurii celulare sunt trauma mecanic, temperatura (arsuri sau degerturi), schimbrile brute de presiune atmosferic, radiaiile i ocul electric. Ageni chimici. Lista agenilor chimici care pot provoca injurii celulare este vast. Substane banale cum este glucoza sau soluia salin n concentraii hipertonice pot provoca injurii celulare n mod direct sau prin perturbarea homeostaziei hidroelectrolitice. Oxigenul, n concentraii crescute, este foarte toxic. Unele substane toxice (otrvuri) cum este arsenicul, cianura sau srurile de mercur pot distruge, n cteva minute sau ore, un numr suficient de celule nct s provoace moartea. Toxinele bacteriene sau micotice (micotoxine) sunt factori citotoxici puternici. Alte substane sunt ntlnite zilnic: poluanii din aer, insecticide, ierbicide; substane industriale cum sunt azbestul sau monoxidul de carbon; alcoolul, tutunul, substane active din medicamente etc. Ageni infectioi. Agenii infectiosi cuprind organisme pornind de la virusuri pn la tenii. ntre acestea se incadreaz riketsiile, bacteriile, miceii i alte forme de paraziti. Cile de producere a injuriilor celulare de aceti ageni sunt diverse. Reacii imunologice. Cu toate c sistemul imun are un rol important n apararea organismului impotriva agenilor infectiosi, reactiile imune pot cauza injurii celulare. Reactia anafilactica la o proteina non-self este un exemplu, iar reactiile la componente endogene, self, sunt responsabile pentru o serie de boli autoimune. Defecte genetice. Defectele genetice cauzatoare de injurii celulare sunt un subiect de mare interes pentru cercettorii din prezent. Injuria din cauze genetice cauza unei malformaii congenitale severe, cum este cazul sindromului Down, cauzat de o anomalie cromozomial, sau cauza unei boli mai subtile cum ar fi scderea duratei de viata a hematiilor cauzat de substituia unui singur aminoacid n hemoglobina din anemia cu hematii n forma de secer. Multe tulburri ale metabolismului aprute din cauza unor defecte enzimatice, mai precis insuficiene enzimatice, sunt exemple ale injuriilor celulare cauzate de alterari subtile ale ADN-ului. Variaiile genotipului pot s influeneze susceptibilitatea celulelor la injurii provocate de ageni nocivi.

Dezechilibre nutritionale. Dezechilibrele nutriionale continu s fie o cauza major a injuriilor celulare. Deficitele protein-calorice produc un numr mare de decese, n special n cadrul populatiilor srace. Carenele vitaminice se ntlnesc pe tot globul. Problemele nutriionale pot fi autoimpuse, cum este anorexia nervoasa sau nfometarea. Ironic, excesele nutriionale au devenit de asemenea cauze ale injuriei celulare. Excesele lipidice predispun la ateroscleroz, iar obezitatea reprezint manifestarea acumularii de lipide n celulele organismului. Se poate spune c ateroscleroza este endemic n toate rile dezvoltate, la fel i obezitatea. n plus, fa de problemele de subnutriie i exces nutriional, compoziia dietei influeneaz, de asemenea, susceptibilitatea la anumite afeciuni. Bolile de metabolism, cum este diabetul, produc de asemenea injurii celulare severe.

Mecanismele injuriei celulare


Mecanismele biochimice responsabile pentru injuria celular sunt complexe. Cu toate acestea, exista un numr de principii general valabile n toate formele de injurie celular. Rspunsul celular la agenii nocivi depinde de tipul injuriei, durata i severitatea cu care acioneaz agenii. Astfel, doze mici de toxice sau ischemia de scurt durat pot induce injurii reversibile, n timp ce doze mari din aceleai toxice sau ischemia grav, de durat, se soldeaz fie cu moarte celular instantanee fie cu leziuni celulare ireversibile care duc n timp la moarte celular. Consecinele injuriei celulare depind de tipul, starea i adaptabilitatea celulei lezionate. Statusul hormonal i nutritional al celulei sunt foarte importante n rspunsul la injurie. Celulele musculare striate pot fi inactivate total cnd fluxul sanguin este oprit; nu la fel se ntmpl n cazul celulelor musculare cardiace. Expunerea a doi indivizi la concentratii identice ale aceleai toxine, cum este de exemplu tetraclorura de carbon, poate s nu produc niciun efect la un individ i moarte celular la celalalt, aceasta deoarece exista variaii genetice care afecteaz capacitatea enzimelor hepatice ale individului de a transforma tetraclorura de carbon n bioprodui toxici. Injuria celular este rezultatul anomaliilor biochimice i funcionale ale uneia sau mai multor componente celulare. Mecanismele asupra caror acioneaz agenii nocivi sunt: (1) respiraia aerob implicnd fosforilarea oxidativ mitocondrial i producia de ATP; (2) integritatea membranelor celulare, de care depinde homeostazia osmotic i ionic a celulei i a componentelor acesteia; (3) sinteza proteic; (4) citoscheletul i (5) integritatea aparatului genetic al celulei. Trebuie menionat c majoritatea agenilor acioneaz asupra celulei prin mecanisme multiple, iar n cazul n care acioneaz mai multi ageni, locusul biochimic al injuriei rmne necunoscut. Depletia ATP-ului Depleia i insuficienta sintez a ATP-ului sunt frecvent asociate cu injurii hipoxice i toxice (chimice). Fosfatul sub form de ATP este indispensabil proceselor de sintez i degradare care au loc n interiorul celulei. Aceste procese includ transportul membranar, sinteza proteic, lipogeneza i reaciile de acilare-reacilare necesare turnoverului fosfolipidelor. ATP-ul este produs prin dou ci. Principala cale n celulele mamiferelor este fosforilarea oxidativ a adenozin-difosfatului printr-o reacie consumatoare de oxigen prin activarea sistemului de transfer mitocondrial de electroni. A doua cale este calea glicolitic, prin care se produce ATP n absena oxigenului folosind glucoza provenit fie din fluidele organismului fie din hidroliza glicogenului. Astfel esuturile cu capacitate glicolitic mare, cum este cazul ficatului, au nu avantaj atunci cnd cantitatea de ATP scade datorit inhibrii metabolismului oxidativ. 10

Depletia ATP-ului pn la 5-10% are numeroase efecte asupra activitii celulare: - scderea activitatea pompei de sodiu. Reducerea activitii acestui sistem de transport, din cauza cantitii sczute de ATP i a activitii crescute a ATP-azei, duce la acumularea intracelular a sodiului i pierderea potasiului, rezultnd astfel edemul celular i dilatarea reticulului endoplasmic; - alterarea metabolismul celular. Dac rezerva de oxigen a celulelor este redus, aa cum se ntmpl n ischemie, are loc blocarea fosforilarii oxidative, celulele bazndu-se pe glicoliz pentru producerea energiei. n consecin se epuizeaz rezervele de glicogen. Prin procesul de glicoliz se acumuleaz acid lactic i fosfai anorganici prin hidroliza esterilor fosfai. Acest proces reduce pH-ul celular, rezultnd scderea activitii majoritatii enzimelor celulare; - oprirea pompei de Ca 2+, ceea ce duce la influxul de Ca n celul, cu efecte devastatoare asupra multor elemente celulare; - distrugerea aparatului sintetizator de proteine, manifestat prin desprinderea ribozomilor de pe reticulul endoplasmic rugos i disocierea polizomilor n monozomi, consecina fiind reducerea sau oprirea sintezei de proteine; - leziuni ireversibile ale membranelor lizozomale i mitocondriale, i celula sufer procesul de necroz. Leziuni mitocondriale Mitocondriile sunt inte importante pentru majoritatea agenilor nocivi, inclusiv hipoxia i toxicele. Injuria celular este adesea nsoit de modificri morfologice ale mitocondriilor. Mitocondriile pot fi lezionate de muli factori, precum este creterea Ca2+ n citosol, stresul oxidativ, descompunerea fosfolipidelor pe calea fosfolipazei A2 i a sfingomielinei sau produii de descompunere ai lipidelor, cum sunt acizii grai liberi i ceramidele. Leziunile mitocondriale se soldeaz adesea cu formarea unui orificiu de conductibilitate, numit orificiu de permeabilitate mitocondrial, ce se formeaz n membrana intern mitocondrial. Cu toate c n stadiile iniiale este reversibil, acest por nonselectiv devine permanent dac agentul lezional persist, impiedicnd astfel meninerea potenialului de membran al mitocondriei. Deorece meninerea potenialului de membran al mitocondriei este esenial pentru fosforilarea oxidativ, pierderea acestei caracteristici se soldeaz cu moartea celulei. Leziunile mitocondriale pot fi asociate cu ptrunderea citocromului c n citosol. Deoarece citocromul c este o component integral a lanului transportor de electroni i poate activa apoptoza celular, acest eveniment este un element cheie n procesul de moarte celular. Influxul intracelular al Ca2+ i dereglarea homeostaziei calciului Ionii de calciu sunt mediatori importanti ai injuriei celulare. Calciul liber intracelular este meninut la nivele foarte sczute (<0,1mol), fa de nivelul extracelular de 1,3 mmol, majoritatea calciului intracelular fiind sechestrat n mitocondrii i reticulul endoplasmic rugos. Aceste concentraii sunt modulate de ATP-aze Ca2+ Mg2+, legate de membrane. Ischemia, precum i unele toxice pot produce creterea cantitii intracelulare de calciu, datorit influxului ionilor de calciu prin membrana citoplasmatic i eliberarea calciului din mitocondrii i reticulul endoplasmic rugos. Concentraii mari de calciu intracelular pot aprea n cazul creterii nespecifice a permeabilitii membranare. Cantiti mari de calciu intracelular activeaz o serie de enzime cu potenial lezional asupra celulei. Dintre enzimele activate de ionii de calciu amintim ATP-azele (grbind astfel depleia de ATP), fosfolipazele (lezeaz membrana celular), proteazele (care descompun proteinele att membranare ct i ale citoscheletului), i endonucleazele (care sunt responsabile de fragmentarea ADN-ului i a cromatinei). Cantitatea crescut a calciului intracelular este de asemenea responsabil pentru creterea permeabilitii membranei mitocondriale i inducerea apoptozei. Cu toate c nivelul 11

crescut al calciului intracelular produce injurii celulare i mediaz o serie de efecte nocive, inclusiv moarte celular, pierderea homeostaziei calciului nu este ntotdeauna primul eveniment n injuria celular ireversibil. Acumularea radicalilor liberi de oxigen (stresul oxidativ) Celulele genereaz energie prin transformarea (reducerea) oxigenului molecular n ap. n acest proces, sunt produse cantiti mici de forme reactive de oxigen, parial reduse, fiind un produs inevitabil al respiraiei mitocondriale. Unele din aceste forme de radicali pot leziona lipidele, proteinele sau acizii nucleici, fiind numite specii reactive de oxigen. Celulele au sisteme proprii defensive mpotriva acestor compui. Un dezechilibru ntre producerea i eliminarea speciilor reactive de oxigen are drept rezultat apariia stresului oxidativ, condiie asociat cu injurii celulare observate n multe stri patologice. Leziunile mediate de radicalii liberi sunt parte a proceselor de injurie celular chimic, prin radiaii, injuria celular din ischemia de reperfuzie (indus de restabilirea fluxului sanguin n esuturile ischemice), senescena celular i fagocitarea microorganismelor. Radicalii liberi sunt substane chimice care au un singur electron pe ultimul strat. Energia creat de aceast configuraie instabil este eliberat prin reaciile cu moleculele adiacente, substane anorganice sau organice proteine, lipide, carbohidrai n special cu molecule cheie din membran sau acizii nucleici. Mai mult dect att, radicalii liberi iniiaz reaciile autocatalitice, iar moleculele cu care interacioneaz sunt transformate ele nsele n radicali liberi, propagnd astfel leziunile. Radicalii liberi se formeaz n celule prin mai multe ci: a. Absorbia energiei radiante (ex. radiatii ultraviolete, raze x). Radiaiile ionizante pot hidroliza apa n radicali liberi: hidroxil (OH) i hidrogen (H). b. Metabolismul enzimatic al unor substane chimice exogene (ex. tetraclorura de carbon -CCl4 poate forma CCl3). c. Reactiile de tip redox (reducere-oxidare) care decurg n timpul proceselor metabolice normale. n procesul de respiraie, oxigenul este redus secvenial prin adugarea a patru electroni, formand apa. Aceasta reacie este catalizat de enzime oxidative provenite din reticulul endoplasmic rugos, mitocondrii, citosol, peroxizomi i lizozomi. n urma acestui proces sunt produse cantiti mici de intermediari toxici, cum este radicalul anionic superoxid (O2-), peroxid de hidrogen (H2O2), i ioni hidroxil (OH-). Puseuri de radicali se produc n leucocitele polimorfonucleare i macrofagele din inflamaie. Aceasta reacie precis are loc n complexul proteic membranar care folosete NADPHoxidaza pentru reacia redox. n plus, anumite oxidaze intracelulare (cum este xantin oxidaza) produc n urma activitii cantiti de radicali superoxid. d. Metalele tranziionale, cum este fierul sau cuprul, doneaz sau accept electroni liberi n urma reaciilor intracelulare i catalizeaz formarea radicalilor liberi, un exemplu fiind reacia Fenton (H2O2 + Fe 2+ = Fe3+ +OH + OH-). Deoarece majoritatea fierului liber intracelular este sub forma feric[ (Fe 3+), trebuie redus la forma feroas (Fe 2+) pentru a participa la reacia Fenton. Aceasta reacie este intensificat de superoxizi, fiind necesare surse de fier i superoxid, pentru a produce leziuni celulare oxidative. e. Oxidul nitric (NO), un mediator chimic important, produs de celule endoteliale, macrofage, neuroni i alte tipuri celulare, poate funciona ca un radical liber sau poate fi convertit

la anionul peroxinitrit (ONOO-), precum i NO2 i NO3. Speciile reactive de oxigen au o gama larg de efecte asupra celulei, dar trei dintre acestea sunt cele mai relevante pentru injuria celular: 12

1. Peroxidarea lipidelor membranare. Radicalii liberi pot produce peroxidarea lipidelor plasmatice i membranare. Leziunile oxidative sunt iniiate atunci cnd legaturile duble ale acizilor grai nesaturai din lipidele membranare sunt ocupate de radicali liberi, n special de gruparea OH-. Interaciunea lipide-radicali liberi produce peroxizi, ei inii instabili i reactivi, rezultnd o reacie autocatalitic (numit propagare), rezultnd leziuni extinse ale membranei, organitelor i implicit ale celulei. O variant favorabil este captarea radicalilor liberi de catre un antioxidant, cum este vitamina E, din membrana celular. 2. Modificri oxidative ale proteinelor. Radicalii liberi oxideaz captul amino-terminal, formnd legaturi protein-protein (ex. legturi disulfidice), i oxidarea proteinelor, rezultnd fragmentarea acestora. Modificrile oxidative intensific degradarea proteinelor prin complexul multicatalitic proteozomic, provocnd leziuni celulare. 3. Leziuni ale ADN-ului. Reactiile timinei din ADN-ul nuclear i mitocondrial produc leziuni ale acestuia. Aceste leziuni sunt implicate n procesul de senescen celular i chiar n transformarea malign a celulelor. Celulele au dezvoltat mecanisme multiple pentru a ndeprta radicalii liberi, reducand astfel riscul de injurie celular. Radicalii liberi sunt compui instabili i n general se descompun spontan. Superoxidul, spre exemplu, este un compus instabil i se descompune spontan n oxigen i peroxid de hidrogen, n prezena apei. Exist totusi o serie de sisteme enzimatice i non-enzimatice antioxidante. Acestea includ: - Antioxidanii care blocheaz iniierea formrii radicalilor sau inactiveaz radicalii formai, mpiedicnd astfel injuria celular. Exemple de antioxidani: vitaminele liposolubile E i A, acidul ascorbic i glutationul din citosol. - Asa cum s-a mentionat, fierul i cuprul pot cataliza reactiile de formare a speciilor reactive de oxigen. Nivelele acestor forme reactive pot fi inute sub control prin legarea acestor ioni de proteine transportoare i de stocare (ex. transferitina, feritina, lactoferina i ceruloplasmina), limitand astfel formarea de ioni OH-. - o serie de enzime antioxidante acioneaz asupra radicalilor liberi, descompunnd peroxidul de hidrogen i ionul superoxid. Aceste enzime se localizeaz n vecinatatea locurilor de formare a radicalilor liberi, fiind vorba despre catalaz, superoxid-dismutaz i glutation-peroxidaz. n majoritatea proceselor patologice, efectele produse de radicalii liberi depind de echilibrul dintre formarea i descompunerea acestor radicali. Defecte ale permeabilitatii membranare Pierderea permeabilitatii selective a membranei este o caracteristic a majoritii formelor de injurie celular. Leziunile membranare pot afecta mitocondriile, membrana plasmatic sau membranele altor organite celulare. n celulele ischemice, defectele membranei pot fi rezultatul unor serii de evenimente care includ depleia de ATP i activarea fosfolipazelor, proces mediat de ionii de calciu. Membrana plasmatic poate fi de asemenea lezionat direct de anumite toxine bacteriene, proteine virale, componente litice ale complementului, precum i o varietate de ageni fizici i chimici.

n procesul de lezionare a membranei intervin mai multe mecanisme biochimice: a. Alterarea funciei mitocondriilor. Alterarea funciei mitocondriale se soldeaz cu sinteza sczut de fosfolipide, care afecteaza membranele celulare, inclusiv mitocondriile.

13

b. Pierderea fosfolipidelor membranare. Injuriile celulare severe sunt asociate cu o scdere drastic a fosfolipidelor membranare, datorit nivelelor crescute ale calciului n citosol, care activeaz fosfolipazele endogene. c. Anomalii ale citoscheletului. Filamentele citoscheletului au rol structural, ancornd membrana la interiorul celulei. Activarea proteazelor de ctre nivelul crescut al calciului n citosol produce leziuni ale citoscheletului. n prezenta edemului celular, aceste leziuni se soldeaz cu detaarea membranei celulare de citoschelet, devenind astfel susceptibil la ruperi i ntinderi. d. Speciile reactive de oxigen. Radicalii liberi de oxigen provoac leziuni ale membranei celulare prin mecanisme care au fost discutate anterior. e. Produii de descompunere ai lipidelor. Acetia includ acizi grai liberi neesterificai, acilcarnitina i lizofosfolipide, produi de catabolism care se acumuleaz n celulele lezionate ca rezultat al degradrii fosfolipidelor. Asupra membranelor au un efect de detergent. De asemenea se pot insera ntre cele dou straturi lipidice ale membranei sau substituie fosfolipidele membranare, producnd modificri ale permeabilitii. Leziunile mitocondriilor au fost discutate anterior. Leziunile membranei plasmatice au ca rezultat pierderea echilibrului osmotic i influxul de ioni i fluide, precum i pierderea proteinelor, enzimelor, coenzimelor i acizilor ribonucleici. Leziunile membranelor lizozomale se soldeaz cu ptrunderea i activarea enzimelor acestora n citoplasm. Lizozomii conin ADN-aze, ARN-aze, proteaze, fosfataze, glucozidaze i catepsine. Activarea acestor enzime duce la digestia componentelor celulare, cu pierderea ribonucleoproteinelor, deoxiribonucleoproteinelor i glicogenului, n final soldndu-se cu necroza celulei. Injurii celulare reversibile si ireversibile Asa cum s-a mentionat anterior, primele modificari ce au loc in diferitele forme de injurie celular sunt scderea sintezei de ATP, pierderea integritatii celulare, defecte in sinteza proteinelor, leziuni ale citoscheletului si ale ADN-ului. Celula poate compensa aceste fenomene, n anumite limite, si daca agentul cauzal este indepartat, va reveni la normal. Injuriile celulare persistente sau severe duc la trecerea granitei inspre leziuni celulare ireversibile. Acestea sunt asociate cu leziuni extinse ale tuturor membranelor, edem lizozomal si vacuolizarea mitocondriilor, cu pierderea capacitatii de a sintetiza ATP. Calciul extracelular patrunde in celula, iar cel intracelular se elibereaza in citoplasma, rezultand activarea enzimelor ce pot cataboliza membrana, proteinele, ATP-ul si acizii nucleici. Astfel se continua pierderea de proteine, coenzime esentiale si acizi nucleici pe la nivelul membranei hiperpermeabile, celula pierzand metaboliti indispensabili pentru sinteza ATP-ului si epuizand astfel rezerva de fosfati. Ireversibilitatea injuriei este caracterizata de doua fenomene. Primul este inabilitatea de a compensa leziunile mitocondriale (lipsa fosforilarii oxidative si astfel a generarii de ATP), chiar si dupa rezolutia injuriei initiale. Al doilea este reprezentat de alterari ale functionarii membranei. Asa cum s-a mentionat anterior, leziuni ale membranelor lizozomale se soldeaza cu scurgerea enzimelor in citoplasma; are loc activarea hidrolazelor acide in spatiul intracelular, care are un pH acid datorita ischemiei celulare, degradand componentele citoplasmatice si nucleare. Disolutia celulei lezionate este caracteristica necrozei celulare, unul din mecanismele recunoscute ale mortii celulare.

Faptul ca iesirea proteinelor pe la nivelul membranei celulare lezionate si patrunderea acestora in circulatia periferica, putand fi astfel descoperite injurii celulare specifice unui anumit tesut prin procesarea probelor de ser sanguin, are o valoare clinica important. Spre exemplu, muschiul cardiac contine o izoforma specifica a enzimei creatinin-kinaza si a proteinei contractile 14

troponina; ficatul (in special epiteliul canaliculelor biliare) contine o izoforma termorezistenta, specifica, a enzimei fosfataza alcalina; hepatocitele contin transaminaze. Leziuni ireversibile si moartea acestor tesuturi se soldeaza inevitabil cu cresterea cantitatii proteinelor specifice in sange. Morfologia injuriei celulare In timpul injuriei, celulele sufera modificari biochimice si morfologice, ulterior murind pron necroza. Exista un interval de timp intre actiunea factorilor nocivi si leziunile morfologice aparute in celula sau moartea celulei; durata acestui interval variaza in functie de sensibilitatea metodelor folosite pentru a detecta aceste modificari. Prin tehnici histochimice sau ultrastructurale, modificarile pot fi observate in cateva minute sau ore de la producerea injuriei ischemice; totusi pot trece cateva ore sau zile pana cand leziunile pot fi observate la microscop sau cu ochiul liber. In muschiul cardiac, leziuni ale mortii celulare pot fi observate intre 4 si 12 ore de la producerea ischemiei totale, dar aceste leziuni ireversibile apar dupa 20-60 minute de la producerea ischemiei. Leziunile celulare reversibile Exista doua leziuni specifice injuriei celulare reversibile, si anume edemul celular si steatoza. Edemul celular apare atunci cand celula este incaspabila sa mentina echilibrul ionilor si a fluidelor, fiind rezultatul functionarii defectuase a membranelor si a pompelor ionice. Steatoza celulara apare in leziuni hipoxice, leziuni produse de toxine sau metabolism. Se manifesta prin aparitia in celula a vacuolelor lipidice mai mari sau mai mici. Se intalneste in principal in celulele implicate in metabolismul lipitelor, cum sunt hepatocitele si celulele miocardice. Leziunile celulare ireversibile APOPTOZA Definiie. Termenul apoptosis, n limba greac, arat cderea frunzelor sau a petalelor, n biologie sugereaz ncetarea funciilor vitale i n consecin moartea celulelor fr intervenia factorilor externi. Apoptoza sau moartea programat geneticeste moartea unei celule individuale sau a unui grup restrns de celule ca urmare a activrii unor gene specifice. Mecanismele intracelulare sunt cele care duc la moartea celulei, apoptoza fiind de fapt un suicid celular. n apoptoz, prin mecanismele puse n joc, celula particip activ la propria moarte. Apoptoza este o form activ de moarte celular caracterizat prin procese biochimice i morfologice, materializate n fragmentarea ADN-ului polinucleozomal i fragmentarea celulei n corpi apoptotici, procesul fiind declanat prin activarea programelor genetice de autodistrugere nscrise n genomul tuturor celulelor. Apoptoza se poate produce ca un fenomen fiziologic, fr intervenia unor factori externi, dar i n stri patologice, cnd stimuli extracelulari pot induce declanarea i desfurarea morii celulare prin apoptoz.

Prin apoptoz sunt eliminate selectiv anumite celule sub influena unor stimuli fiziologici sau patologici. Termenul de moarte celular programat genetic se folosete pentru moartea unor celule n cursul formrii embrionare, fetale, dezvoltrii extrauterine i meninerii homeostaziei organismului. 15

Termenul apoptoz se folosete pentru definirea acestui tip de moarte celular dar cuprinde i moartea celular care apare n situaii patologice. Apoptoza n situaii fiziologice Moartea prin apoptoz este un fenomen normal prin care sunt eliminate celulele nedorite sau uzate sau mbtrnite. Apoptoza este implicat n numeroase procese fiziologice: a. Moartea programat a celulelor n timpul embriogenezei implantare, organogenez. b. Moartea programat a celulelor pentru meninerea la un nivel stabil a populaiilor celulare din organism. c. Involuia dependent hormonal a unor esuturi: ex. Involuia endometrului n timpul ciclului estral sau dup parturiie; atrezia foliculilor ovarieni dup menopauz. d. Moartea celulelor dup ndeplinirea rolului i a celor mbtrnite. e. Eliminarea limfocitelor autoreactive: f. Eliminarea cu ajutorul limfocitelor citotoxice a celulelor infectate cu virusuri i a celulelor neoplazice. Acelai mecanism este ntlnit n rejetul de gref. g. Eliminarea celulelor n diviziune cu anomalii cromozomiale. ntre 50 i 70 de miliarde de celule mor zilnic prin apoptoz ntr-un organism uman adult. Masa de celule pierdute prin apoptoz pe parcursul unui an este egal cu masa corporal a individului. Apoptoza n situaii patologice Apoptoza este responsabil de pierdere celular ntr-o serie de situaii patologice, cum ar fi: a. n urma alterrilor ADN-ului, produse de radiaii, radicali liberi ai oxigenului, substane chimice, virusuri, etc. , nereparate prin mecanismele specifice, celula declaneaz apoptoza; b. acumularea de proteine greit asamblate; c. injurii celulare induse de virusuri; d. atrofia patologic a organelor parenchimatoase dup obstrucia ductelor de drenare; e. moartea celulelor tumorale, att a celor din tumori n cretere ct i a celor n involuie. f. lipsa factorilor de cretere; g. aciunea TNF factorul de necroz al tumorilor, n alte esuturi dect cele tumorale. h. aciunea limfocitelor T citotoxice. Dereglarea apoptozei explic patogeneza multor boli. a. Boli associate cu inhibarea apotozei i creterea duratei de via a celulelor: - cancerul ex. mutaii ale genei p53 care este o gen supresoare a tumorilor; tumori hormonodependente (mamare, prostat, ovar, hepatoide); - boli autoimune neeliminarea limfocitelor autorective b. Boli associate cu exacerbarea apotozei i pierdere celular excesiv: - boli neurodegenerative; - injuria ischemic; - moartea celulelor infectate cu virusuri;

Caracteristicile biochimice ale apoptozei

16

Hidroliza proteinelor se realizeaz sub influena enzimelor caspaze. Aceste proteaze sunt prezente n celulele normale sub form de pro-enzime iar activarea lor induce apoptoza. Caspazele denatureaz multe proteine celulare i activeaz ADN-aze care scindeaz ADN-ul Scindarea ADN-ului. Endonucleazele scindeaz lanul de ADN n segmente de 180 - 200 perechi de baze i multiplu al acestora. Aceste segmente migreaz sub form de scar la electroforeza n gel de agar. Migrarea neregulat a ADN-ului este o caracteristic a necrozei. Expresia membranar de proteine care favorizeaz fagocitarea celulelor apoptotice corpilor apoptotici. Activarea mecanismelor apoptozei 1. Calea extrinsec este legat de exprimarea receptorilor de suprafa ai morii celulare ex. receptorul TNF 1. 2. Calea extrinsec (mitocondrial); sub influena factorilor proapoptotici creterea permeabilitii membranei mitocondriale duce la trecerea citocromului c n citoplasm i la activarea caspazelor. Procesul de apoptoz poate fi mprit n mai dou faze: - iniiere caspazele devin active; - execuie caspazele i endonucleazele degradeaz structurile i produc moartea propriuzis. Morfologie: a. condensarea celulei rotunjire i reducere a volumului ca urmare a distrugerii citoscheletului de ctre caspaze; b. citoplasma devine dens iar organitele se compacteaz; c. nucleul se condenseaz - picnoz; d. fragmentarea membranei nucleare i a cromatinei (kariorex) i formarea corpilor cromatinieni; e. membrana citoplasmatic formeaz muguri protuzii citoplasmatice; f. celula se fragmenteaz n mai muli corpi apoptotici vezicule delimitate de membran nuclear i care conin citoplasm condensat, organite i fragmente de nucleu. g. corpi apoptotici sunt liberi n spaiile interstiiale iar apoi sunt fagocitai. Datorit faptului c organitele celulare sunt sechestrate n corpii apoptotici efect de cuc proteinele citoplasmatice i enzimele lizozomale nu ajung n spaiile interstiiale i nu apare inflamaia. Chiar dac inflamaia nu este tipic, celulele mononucleare pot fi prezente n esutul cu apoptoz. 2. 4. 1. NECROZA CELULAR Este o moarte brutal, siderant, cnd aciunea factorului sau factorilor patogeni este deosebit de intens, fr a da rgaz celulelor afectate s reacioneze sau s se adapteze. Termenul de necroz se refer la moartea unor celule sau chiar a unor esuturi, ntr-un organism viu, care poate limita sau opri extinderea morii celulelor prin reacie vasculocelular periferic (congestie, aflux leucocitar, etc.). n urma reaciei locale la nceput, apoi a ntregului organism, celulele i esuturile necrozate sunt nlturate prin resorbie, fagocitoz i alte mijloace de aprare, iar n final se realizeaz cicatrizarea, fibroza.

Necroza, n diferite esuturi, are caracteristici morfologice care permit clasificarea n: necroz de coagulare, necroz de lichefiere i necroza enzimatic sau citosteatonecroza, la care se 17

adaug diferite forme de gangren, precum i unele particulariti morfologice n funcie de esutul afectat i de agentul patogen. Necrozele pot s se produc n esuturi profunde, n parenchimuri i superficial, n tegument i n mucoase. Necroza de coagulare se produce n urma aciunii brutale a agentului patogen, asociat cu oprirea circulaiei locale. Principalele cauze care determin necroz de coagulare sunt: ischemiile (infarct renal, miocardic); infecii bacteriene (necrobacili, micobacterii); infecii virale i intoxicaii. Macroscopic focarele de necroz de coagulare sunt bine delimitate, avnd o culoare galben, mrginite de un inel rou, congestiv-hemoragic, att pe suprafaa esutului ct i pe seciune. n cazul infarctelor ischemice, infarcte albe, aprute n organele cu circulaie de tip terminal (rinichi) necroza, pe seciune, are form triunghiular, cu vrful pe arteriola obliterant. Zona necrozat este seac pe seciune, cu aspect friabil uor unsuros, avnd consisten ferm. Mrimea focarelor de necroz este variabil, putnd fi ct o gmlie de ac, ca de exemplu, n hepatita necrotic miliar din holera aviar, pn la focare de 1-2 cm diametru, n hepatita necrobacilar a vieilor, purceilor i mieilor. Microscopic se vd forme de dezagregare celular i a structurilor interstiiale. Poriunea central a necrozei are aspect de liz, pstrnd schiat unele resturi celulare sau tisulare. Spre periferie apar celule cu aspect de cariorex, plasmorex i fibre de colagen modificate tinctorial i structural. Substana fundamental este puternic modificat, cu aspect fibrilar, apoi hialin, pentru ca n final s devin o mas granular, amfofil. Periferia zonei de necroz este delimitat de o zon congestivo-hemoragic i discret infiltraie limfogranulocitar. Aspecte particulare ale necrozei de coagulare sunt considerate necroza de cazeificare i necroza Zenker sau hialin a fibrelor musculare. Necroza de cazeificare se ntlnete n granuloamele tuberculoase i n focare vechi parazitare (chisturi hidatice cronice). Masa necrotic de culoare glbuie este uor unsuroas, datorit coninutului n lipide, care i confer o consisten asemntoare brnzeturilor moi, de unde i denumirea de cazeum. Focarul este mrginit de esut specific, fibrocelular, formnd o capsul anfractoas, n granuloamele tuberculoase i neted n chisturile hidatice. Necroza Zenker este o necroz de coagulare a fibrelor musculare striate, ntlnit n boala muchilor albi la viel, miel, porc i pui de gin, ca o miopatie necrozant nutriional, n urma hipovitaminozei E i hiposelenozei. Leziuni similare se ntlnesc i n miocardita parenchimatoas din febra aftoas, forma malign. Macroscopic muchii sau grupele de muchi afectai au o culoare mai deschis, de nuan glbuie i aspect striat, sub form de benzi (ex. cordul ,,tigrat). Microscopic, la debutul leziunii fibra muscular se omogenizeaz, dispar striaiunile, fibra devine decalibrat, cu umflturi i strangulri, apoi se fragmenteaz, se produce coagularea proteinelor miofibrilare citoplasmatice, nucleii devin hipercromatici, apoi n cariorex i carioliz. Proteinele miofibrilare sufer o degenerare hialin, pn la necroz. Necroza de lichefiere sau de colicvaie se ntlnete n substana nervoas, n cartilaje i n epiderm. Cauzele pot fi de ordin vascular (obliterrile vaselor de tip terminal n sistemul nervos

central), traumatisme sau leziuni metabolice n cartilaje; aciunea virusului febrei aftoase n celulele malpighiene din epiderm.

18

Macroscopic necroza de lichefiere se relev ca un proces de topire i transformare fluid a esuturilor, care au aspect moale, gelatinos. Aceste focare sunt bine delimitate, mai cu seam n substana nervoas, printr-o zon hemoragiconecrotic. Se produce o hidrofilie a coloizilor citoplasmatici, n aa fel nct lichidul acumulat (ap, plasm, substane albuminoide n soluii coloide fluide) transform celulele i substana fundamental n conglomerate care distrug structura celular. Macroscopic necroza este total, cu resturi celulare care nu pot fi identificate ca structur. La periferie reacia vascular poate fi acompaniat de discret reacie limfogranulocitar, mai cu seam n leziunile subacute. n unele stri patologice necroza de colicvaie poate fi urmarea modificrilor produse n esuturile cu necroz de coagulare sau cu necroz de cazeificare. Necroza enzimatic sau citosteatonecroza apare ca urmare a degradrii trigliceridelor din adipocite, n urma traumatismelor produse asupra esutului gras subcutanat i frecvent n urma eliberrii enzimelor pancreatice (pancreatite necrozante) sau enzime de origine bacterian. Macroscopic leziunile de necroz enzimatic pot fi localizate n esutul gras de pe mezenter, subcutanat sau n interstiiul lipidic al pancreasului. Leziunile apar ca focare alb-cretacee, de mrimi variabile, cu diametrul de 2-5 mm pn la plci de civa cm. Microscopic, ntr-o mas amorf de necroz sunt prezente adipocite slab colorate, granulare, uor eozinofile, cu nucleu aezat excentric, mic, picnotic sau absent. n masa de necroz lipidic (spunuri i acizi grai) apar cristale de acizi grai i de colesterol. Depozite calcare i o reacie de corp strin, evideniat prin prezena de macrofage i celule gigante. Necroza fibrinoid este o forma de necroza sau moarte tisulara in care se acumuleaza un material amorf, bazofilic, proteinaceu care seamana cu fibrina. Materialul fibrinoid nu contine fibrina si tinde spre eozinofilie (se coloreaza in rosu cu eozina). Necroza fibrinoida se asociaza cu bolile mediate de complexe imune, cum este sinovita sau nodulii din artrita reumatoidasi diferitele forme de vasculita si glomerulita autoimuna. Poate fi asociata cu depunerea complexelor imune sau a componentelor complementului in intima vaselor de sange. Necroza fibrinoida implica depunerea complexelor imune in zone cum sunt glomerulii sau capilarele. Complexele imune nu cauzeaza leziunile, ci activeaza calea alternativa a complementului, in special C5a, care atrage neutrofilele. Neutrofilele sunt apoi responsabile de necroza fibrinoida. Necroza fibrinoid[ se intalneste, de asemenea, in peretii arteriolelor in cazul hipertensiunii maligne (presiune sanguina mai mare de 200/130 mm Hg). Necroza fibrinoida se deosebeste de depozitele de hialin, care au un aspect mai omogen, sticlos, si de necroza de coagulare, de obicei asociata cu tuberculoza. Prezenta fibrinei indica faptul ca vasele de sange din vecinatate sunt intens permeabile si frecvent distruse de vasculita. Gangrenele sunt de asemenea forme de necroz, de moarte siderant a esuturilor, produse de factori care acioneaz brutal, putnd fi de natur mecanic, fizic, chimic i biologic. Aceti factori au aciune destructiv asupra esutului, vaselor i nervilor (ntreruperea total a circulaiei sanguine i limfatice, suprimarea total a influxului nervos). Morfologic se pot defini gangrene uscate, umede i emfizematoase. Gangrena uscat se produce printr-o puternic ischemie i deshidratare, esutul apare zbrcit, nchis la culoare, avnd o nuan brun-negricioas, cu aspect de mumifiere. Gangrena uscat apare mai cu seam n esuturile extremitilor, n urma ntreruperii totale a circulaiei

(aplicarea de ligaturi; administrarea de medicamente vasoconstrictoare; toxici vasoactivi din furajele poluate cu micotoxine, etc.). 19

Gangrena umed este o mortificare pe ntinderi mari, cu fluidifierea proteolitic a esuturilor, mbibarea cu lichide datorit tulburrilor de circulaie combinat cu aciunea germenilor i a fermenilor proteolitici. Regiunea este mrit n volum, esuturile au o consisten sczut, sunt friabile, pe seciune se scurge un lichid cenuiu, brun-verzui, grunjos, cu poriuni de esut, avnd miros respingtor, ihoros. Germenii care se asociaz sunt puternic fermentativi i proteolitici, mai cu seam n organele bine vascularizate, ca musculatur, pulmon, uter, placent, fetui, etc. Gangrena gazoas poate fi urmarea gangrenei umede, este un proces de mortificare la care se adaug dezvoltarea de gaze prin activitatea unor bacterii, de regul anaerobe, i cu profunde transformri ale protidoglucidelor din esuturi. Acest tip de gangren se dezvolt n profunzimea unor esuturi (muscular), n caviti naturale puin aerate, unde mediul anaerob favorizeaz dezvoltarea unor bacterii ale gangrenei i ale putrefaciei, alturi de procesele proteolitice ale necrozei. Datorit gazelor formate au loc distrugeri masive tisulare i dilacerri. Ca exemplu poate fi gangrena gazoas la taurine, boal denumit crbune emfizematos, produs de germeni anaerobi din genul Clostridium. Comparaia morfologic ntre apoptoz i necroz (dup WYLLIE i DUVAL, 1998)
APOPTOZ Histologie Citologie Teste de excludere prin colorani Ultrastructura citoplasmei Nucleu Circumstane Efecte tisulare Celule izolate afectate n esuturi sntoase Nuclei picnotici, citoplasm condensat, fragmente rotunde celulare Coloranii nu ptrund n celul Membrana celular nu este permeabil pentru colorani Organite intacte, compacte Dilatarea ergastoplasmei Membrana citoplasmatic intact Condensarea cromatinei sub form capsular i toroidal Adesea n ,,moarte programat Atrofie Moarte celular mediat imun Neinflamator Fagocitoz produs de celulele adiacente Involuie rapid fr colaps general al esutului NECROZ Plaje de celule care mor mpreun, cu dezmembrarea structurilor Edem celular Nuclei intaci, dar slab colorai Coloranii ptrund n celul Membrana celular este permeabil pentru colorani Mitocondrii mult mrite, tumefiate i densificarea matricei Conturul organitelor dilatat Ruptura membranelor plasmatic i intern Modelul cromatinei primare se menine n distribuie normal Niciodat fiziologic Hipoxie Toxine (doze mari) Inflamator acut Cicatrizare ulterioar

20