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Curso 2011
Biotecnologa forestal
Sandra Sharry
Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires
Sumario
Los recursos forestales - Ecosistemas forestales: bienes y servicios - Superficie y distribucin de bosques - Mercado mundial de productos forestales
Biotecnologa en forestales - Cultivo de tejidos vegetales - Marcadores moleculares - Transgnesis - Omicas Referencias
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Recursos forestales
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
2010
11
Toona
sauce
2010
17
18
2010
19
20
2010
21
22
Arboles
Plantas perennes, longevas, con largos ciclos de vida, amplia fase juvenil y crecimiento secundario.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Madera = xilema
Recursos forestales
Son los materiales heredables de valor econmico, cientfico o social que estn contenidos dentro y entre las especies forestales. Se consideran como tales: - Bosques - Tierras boscosas - rboles fuera del bosque
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Un ecosistema forestal est formado por una comunidad vegetal donde predominan los rboles
Forestacin industrial:
rea de bosque instalada por el hombre y manejada para la produccin de madera, generalmente con especies de rpido crecimiento.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Bienes y servicios forestales ms importantes: - Madera industrial - Madera para lea - Productos forestales no madereros - Conservacin de suelos y de agua - Conservacin de la diversidad biolgica - Mitigacin del cambio climtico global - Apoyo a los sistemas agrcolas - Generacin de empleo - Oportunidades recreativas - Proteccin del patrimonio natural y cultural - Recursos para educacin e investigacin
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
rea de bosque como porcentaje del rea total de la tierra por pas, 2010
28
29
Ms del 60% de los bosques se ubican en: Rusia, Brasil, Canad, Estados Unidos, China, Indonesia.
La variacin neta en el rea de bosque para el perodo de 2000-2010 se estima en 5,2 millones de hectreas por ao (una superficie de aproximadamente la dimensin de Costa Rica), inferior al nivel de 8,3 millones de hectreas por ao en el perodo de 19902000.
30
Amrica del Sur y frica siguen teniendo la prdida neta de bosque ms elevada
31
32
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
1. El cambio climtico y los bosques: Los bosques juegan un papel importante en la fijacin de carbono. Existe un aumento de la demanda de servicios ambientales. 2. Conservacin de la diversidad biolgica forestal: Se requiere desarrollar la ordenacin y el manejo adecuado de reas protegidas.
3. Conversin de bosques: Se requiere limitar la deforestacin causada por las actividades ilegales y la corrupcin en el sector forestal.
4. Consumo de productos forestales: El comercio de productos forestales crece ms rpido que la produccin.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
5.
Limitaciones de la mejora gentica tradicional en especies forestales: Se requieren perodos considerablemente prolongados.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
www.ine.gob.mx/dgicurg/cclimatico
Mediante la fotosntesis, los rboles en crecimiento despiden oxgeno y consumen agua, luz y CO2. Por ello, los bosques en expansin son calificados de sumideros: capturan carbono y lo transforman en biomasa.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Los recursos forestales, al igual que otros recursos producidos por los sistemas vivos, son renovables en la medida en que el capital biolgico permanece intacto.
3. Conversin de bosques
Variacin anual neta de la superficie forestal por regiones (1990-2000)
Pases y bosques con altas tasas de cambio neto del rea forestada (1990-2000)
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
La oferta de madera proveniente de bosques naturales estar sujeta a fuertes restricciones en el futuro inmediato
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
31.443.873 hectreas
Superficie de Otras Tierras Forestales (Otras tierras forestales) 64.975.518 hectreas
2010
41
Bosques nativos
31 millones ha
recuperar ecosistemas
productiva y de servicios
Selva misionera
Yungas
2010
Bosques nativos 33.2 millones ha Selvas subtropicales: Tucumano-Boliviana, Cedrela Paranaense Cedrela, Araucaria
Perdida de bosques
45
19/05/2012
2010
47
Forestaciones en Argentina
Bosques Cultivados
1.1 milln de ha
LEY DE INVERSIONES PARA BOSQUES CULTIVADOS Ley 25.080
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Ley N 26432 conteniendo la modificacin de la Ley 25080, de Inversiones para Bosques Cultivados. Esta Ley sustituye el Artculo 4, y prorroga por el trmino de 10 aos los plazos previstos en los artculos 17 y 25 de la Ley 25.080.
Bosques cultivados
95
Neuqun
MISIONES
ENTRE RIOS
MISIONES
8.0
1.1
nativo cultivado
1.0
nativo cultivado
Superficie
Abastecimiento industria
Conferas
54%
19/05/2012
Eucaliptos 32%
Salicceas 11%
Esp varias
3%
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Una plantacin forestal consiste en el establecimiento de rboles que conforman una masa boscosa y que tiene un diseo, tamao y especies definidas para cumplir objetivos especficos como plantacin productiva, fuente energtica, proteccin de zonas agrcolas, proteccin de espejos de agua, correccin de problemas de erosin, sistemas agrosilvopastoriles, entre otras.
2000-futuro
8%
11 % 21 %
20 m3-ha ao. costo econmico de formacin de madera 35 US$/m3. 25 m3/ha/ao - el costo de formacin se reduce a 23 US$/m3. (comparado con 90 US$/m3 de USA).
Prospectiva Forestal
Productos
Esencia de rboles nativos que son anticancergenos o antioxidantes celulosa blanqueada por medios orgnicos
Prospectiva Forestal
Productos
Celulosa fibra larga taninos madera en trozos sin tratamientos qumicos resinas biocombustibles compost de madera
madera y productos terminados de sequoia celulosa fibra corta papel de alta resistencia
Herramientas 1. Micropropagacin y multiplicacin 2. Marcadores (bioqumicos y moleculares) 3. Genmica (funcional, estructural, comparativa,asociativa, estadsitica) 4. Modificacin gentica Aplicaciones: Caracterizacin de la diversidad (estudios de estructura, flujo de genes, impactos antrpicos, genetica de poblaciones y estudios de diversidad) Aspectos funcionales y aplicados de la investigacion gentica: mapeo,MAS, y genmica) Investigacin y aplicacin de propagacin vegetativa Alteracin del genoma por insercin de genes
Las aplicaciones biotecnolgicas en forestales se basan en tres grandes reas frecuentemente interconectadas
1. Biotecnologa basada en el cultivo de tejidos vegetales 2. Biotecnologa basada en marcadores moleculares 3. Biotecnologa basada en tcnicas de ADN recombinante
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
4.Omicas
El cultivo de tejidos aplicado a la mejora y conservacin de especies leosas abarca las siguientes tcnicas:
1. Propagacin in vitro:
- Cultivo de callos seguido de organognesis o embriognesis somtica - Proliferacin de las yemas axilares y /o brotes adventicios - Microestacas obtenidas de brotes axilares, pices o microinjertos
2. Seleccin in vitro y variacin somaclonal. 3. Fusin de protoplastos, cultivo de haploides y rescate de embriones. 4. Cultivo de clulas en suspensin y produccin in vitro de productos naturales.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
La micropropagacin permite clonar individuos elite garantizando el mantenimiento de las cualidades seleccionadas
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
La micropropagacin facilita el establecimiento de plantaciones clonales industriales. El mercado principal para estas plantaciones operacionales es la industria de la celulosa para la produccin de pulpa y papel y la venta de bonos de carbono.
Silvicultura de hoy.
El hecho de clonar individuos hace posible: -Estudiar el comportamiento de un genotipo en varias condiciones al mismo tiempo - Movilizar genotipos a zonas de inters -Instalar huertos semilleros formados solo por individuos selectos -Conservar germoplasmas por un perodo indefinido de tiempo - Aplicar tcnicas de ingeniera gentica.
Las tcnicas de cultivo in vitro como la organognesis y la micropropagacin se emplean actualmente para la produccin de plantas madres, que son utilizadas para la produccin de las estacas a enraizar.
Figura 1. A Callo obtenido a partir de raquis de Toona ciliata. B Brote diferenciado del callo. C Formacin de nuevas yemas a partir de la base del brote diferenciado
Los sistemas de inmersin temporaria ha dado muy buenos resultados en la micropropagacin de leosas Ventajas:
Aumento de la tasa de multiplicacin Automatizacin. Disminucin del costo de mano de obra
Ventajas - La habilidad de capturar rpidamente una mayor proporcin de la variacin gentica (aditiva y no aditiva ) de la que puede obtenerse por cruzamiento. - La produccin masiva de individuos superlativos que renen caractersticas nicas. - La capacidad de utilizar la especificidad de un clon para potenciar la expresin en sitios especficos o bien utilizar clones de amplia adaptacin a diversos sitios. - La posibilidad de mejorar sustancialmente la inversin forestal por una mayor productividad, mejor calidad y uniformidad del producto final y reduccin de los turnos de corta.
Microinjertos: consiste en el injerto de pices caulinares en pies (plntulas) bajo condiciones in vitro. Se utiliza para regenerar especies recalcitrantes.
Subdivisin de microestacas
Microestacas: son pequeos esquejes que se multiplican in vitro. Aumentan las posibilidades de enraizamiento y reducen el tiempo de obtencin de plntulas por juvenilizacin.
La puesta a punto de la embriognesis somtica en especies leosas se logra bajo condiciones muy variables
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Angiospermas
Gimnospermas
La embriognesis somtica est ampliamente considerada como la mejor va de regeneracin que utiliza las tcnicas de cultivo de tejidos vegetales en biotecnologa forestal.
ENCAPSULADO DE YEMAS
se elimina la fase de enraizamiento, aumenta el nmero de material de siembra, principalmente en aquellos cultivos donde la disponibilidad de semillas es limitada y especies en las que la produccin de semillas botnicas es difcil, se mecaniza la fase de siembra, permite la incorporacin de hormonas a la cpsula, productos fitosanitarios y microorganismos estimuladores del crecimiento, permite el almacenamiento, la conservacin, la manipulacin y transporte del material, favorece el intercambio de germoplasma,
Desarrollos
Seed coat for manufactured seeds United States Patent 7168205
Encapsulado de Embriones Somticos y Embriones Cigticos para Obtencin de Semillas Artificiales de Raul (Nothofagus alpina (Poepp. & Endl.) Oerst.)
Ventajas
Una generacin de rboles generados por ES muestra un 30-50% de incremento del crecimiento comparado con rboles no mejorados y un 22-40% respecto a plantaciones de huertos semilleros con un ganacia de produccin del 8%
La biotecnologa vegetal contribuye a frenar el cambio climtico a travs de generar las condiciones para utilizacin de especies como el nogal, que absorbern CO2 (un lote de nogal fijar durante su desarrollo 63.5 Toneladas de CO2 de la atmsfera) y entregan retornos econmicos muy competitivos y amigables con el ambiente.
Utiliza plantas de nogal de extraordinario vigor. Gracias a tcnicas de microprogacin se obtiene un material enfocado solo a producir madera de alto valor comercial
En el rea de la productividad forestal hay ejemplos como el de Aracruz, 1984, dnde los rendimientos iniciales medios se encontraban en 33m3 ha/ ao, y con la utilizacin de clones hbridos se lleg a 70m3ha/ao. En la misma Empresa, utilizando clones, se consiguieron aumentos en la densidad bsica de la madera del orden del 25%; y en relacin al incremento del contenido de celulosa , en un 6%.
Desarrollo de variedades embriognicas de cruces controlados Criopreservacin y mantenimiento de variedades embriognicas Produccin de rboles derivados de ES y largos test de campo Produccin de una mezcla de multivariedades para establecer a campo.
Los programas de propagacin clonal de pinos se basan en la produccin de plantas clonales a partir de material seminal selecto, producto de ensayos de progenies o cruzamientos controlados. Los pinos clonados muestran mejores caractersticas que los plantados por sistemas tradicionales Las especies de pinos que se han clonado son: oaxacana, pseudostrobus, patula y jaliscana
BIOFOREST S.A.
Mediante seleccin in vitro se pudo obtener resistencia a enfermedades, tolerancia a herbicidas y tolerancia a estreses ambientales.
Los resultados del mejoramiento mediante variacin somaclonal son difciles de preveer. Se han obtenido rboles tolerantes a metales pesados y a bajas temperaturas.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
El cultivo de protoplastos y el rescate de embriones son tcnicas que parecen tener poca aplicacin en las especies forestales
Cultivo de protoplastos
- Existen problemas para regenerar rboles completos a partir de protoplastos, por lo que esta tcnica tiene poca aplicacin en especies forestales. - Se utiliza en casos aislados: Populus, Alnus, Ulmus.
Alamo haploide
Rescate de embriones
- Rescate de embriones abortivos derivados de hibridacin interespecfica o intergenrica.
- Rescate de material de propagacin con semillas de baja viabilidad. - Disminucin de perodo de latencia de semillas debida a inhibidores del desarrollo del embrin.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Embriones de Picea sp
- Permite acortar el perodo desde la siembra a la floracin. - Se utiliza particularmente en frutales. - Tendr ms aplicacin cuando avancen los programas de hibridacin de rboles.
El uso de cultivos celulares para producir metabolitos podra atenuar la presin sobre los bosques naturales
- Crioalmacenamiento de germoplasma
- Sistemas de aislamiento de lneas mutantes - Seleccin de fenotipos resistentes a estrs - Transformacin gentica - Produccin a gran escala de embriones somticos
Obtencin de metabolitos secundarios Se ha logrado un xito considerable en la produccin de taxol in vitro (extrado de Taxus brevifolia). - Existen muchas otras sustancias de inters.
Taxus brevifolia
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
La conservacin in vitro se utiliza para almacenar germoplasma amenazado de cultivos agrcolas, pero tiene poco uso en especies forestales
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Sin embargo, la diversidad gentica de rboles est seriamente amenazada, sobre todo de angiospermas tropicales y especies no industriales.
La propagacin vegetativa de rboles adultos requiere de material fisiolgicamente juvenil o rejuvenecido que tenga la capacidad de enraizar
En general, pierden su capacidad morfognica a medida que aumenta su edad, lo que dificulta su propagacin.
El control del estado de madurez incluye tratamientos in vivo e in vitro, tales como:
- Mantenimiento de la fase juvenil por aplicacin de fitohormonas y podas - Induccin de floracin temprana (in vitro) - Rejuvenilizacin (reversin del estado de madurez) y revigorizacin (reversin de la edad) mediante estaquillado, induccin de brotacin, aplicacin de hormonas,etc.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Aplicaciones
- Cuantificacin y caracterizacin de la diversidad gentica - Verificacin de genotipos - Seleccin asistida por marcadores - Mapas genticos
- Bsqueda de genes
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
- Otros
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Obtencin de material mejorado para plantaciones clonales que reducen la variabilidad gentica
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
- Mtodos de mejoramiento que implican cambios graduales en frecuencias allicas va seleccin recurrente
Los mapas genticos permiten seleccionar marcadores genticos distribuidos a lo largo del genoma
13.6 9.1 2.2 1.1 5.8 11.8 11.4 6.2 8.8 7.0 11.7 9.1 4.1 4.5 4.6 19.5 14.0 3.3 6.6 10.9 4.1 6.0
4. Mapas genticos
Facilitan un mejor muestreo de todas las regiones del genoma en los anlisis de germoplasma. Por qu construir un mapa gentico? Son esenciales para el estudio gentico de cualquier especie en relacin a:
- Localizacin cromosmica - Agrupamiento de genes - Estudios evolutivos - Aislamiento de genes
L16_285 P10_1250 I4_340 24.2
EMBRA11 (5.2)
49.9
EMBRA40 (6.9)
35.3
EMBRA40 (5.8)
3.3 30.9
EMBRA36 2.2 (21.6) EMBRA44 (3.6) 38.5 U19_800 R20_1080 14.6 R20_2700 9.1 4.9 1.6 X1_720 3.9 K19_1495 11.9 F4_377 22.2 K9_884 0.0 EMBRA4 5.8 (21.0) I4_915 2.6 EMBRA19 (13.8) 13.2 Y13_750 2.6 N15_629 2.6 2.6
24.7
J7_808 W20_530
13.3
EMBRA38 (8.3)
18.8
EMBRA21 (5.1)
27.2 N12_207
B6_1581
EMBRA13 (10.3)
K9_941 P8_970 R20_370 K9_1500
12.1
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
EMBRA70 (16.7)
U15_210
EMBRA61 11.9 (13.8) 3.3 EMBRA23 5.2 (12.2) EMBRA10 9.7 (12.2)
8.3 3.3 EMBRA33 6.3 (13.0) 2.7 R9_1300 1.2 J17_815 18.3 11.8 11.1 14.3
EMBRA12 (19.1)
X15_1600
EMBRA12 (19.6)
Z3_830 V7_450 R13_480 K8_2000
R15_480 9.2 X17_800 21.0 Z6_520 W11_820 24.6 U13_450 K3_290 12.1 EMBRA66 (26.4) EMBRA35 14.3 (26.4) EMBRA4 16.1 (14.0) N15_485 U20_450 7.2 EMBRA19 10.4 (21.4) 6.6 V2_1300 4.2 N8_412
EMBRA17 (11.4)
U7_1100
10.9 1.5
EMBRA58 (16.4)
X15_700 M4_1228
Caracterizacin clonal en Populus spp. Utilizando diferentes marcadores moleculares (AFLPSs, nSSRs) ha sido posible identificar cada uno de los clones existentes
CT V
MM
Arabidopsis
Humano
Pino martimo: 2.000 cM (51,5 pg/2C) Arabidopsis thaliana: 675 cM (0,3 pg/2C)
PROTEMICA forestal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
PROTEMICA forestal
1.Regulacin da xilogenesis (formacin de madera) 2.Regulacin da expresin gnica de las races de E. grandis en respuesta al estrs hdrico 3.Formacin de madera de tensin 4. Diferencias entre los proteomas de madera juvenil y adulta
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Transcritoma SAGE
Proteoma 2DE
Plantas de 6 meses
rboles de 3 aos
rboles de 6 aos
Celedon et al. Proteomics (2007) 7: 2258-2274
6 aos
22 aos
Control
7 das de estres
Otros
Distribucin de actividades reportadas de biotecnologa forestal, excluyendo la modificacin gentica, clasificadas por categoras y aplicaciones (estudios de laboratorio, ensayos de campo y liberaciones comerciales)
La transformacin gentica es una herramienta con gran potencial en la mejora de especies leosas, si bien debe ser complementaria de las lneas de mejora clsica.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
La ingeniera gentica ofrece un amplio espectro de aplicaciones para el mejoramiento de especies forestales
- Fitorremediacin
Adaptabilidad
Tolerancia a sequa Tolerancia a baja temperatura Resistencia a hongos Resistencia a insectos
Calidad de madera
Densidad de madera Reduccin de lignina Extraccin de lignina Fibras Ramificacin
Se transformaron varias especies forestales con genes que participan en la sntesis de hormonas, tales como:
- Genes de Agrobacterium tumefaciens: iaaM iaaH (sntesis de auxinas); isopenteniltransferase (ipt) (sntesis de citoquininas). - Genes de Agrobacterium rhizogenes: rol A, B, C, D, aux1 y aux2 (sntesis de auxinas y citoquininas). - Gen de la GA 2-oxidasa (GA2ox), involucrado en la sntesis del cido giberlico.
Resultados:
- Modifican el fenotipo, las caractersticas de la madera y el crecimiento.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Aplicaciones:
- Modificacin de la produccin de frutos, rboles enanos para manejo de riesgo, cambio de las fibras para industria del papel, manejo de huertos semilleros y produccin de ornamentales.
D
Lneas silvestres y transgnicas Fenotipos de lamo silvestre (izquierda) y transgnico (derecha)
Hibridacin in situ del gen iaaM en seccin transversal de la base del tallo.
En las lneas transformadas con el gen iaaM se observaron diferencias en la proliferacin de yemas axilares y la disposicin de las hojas
- Los genes rolC y rolD originan plantas ms bajas, con hojas pequeas y hbito arbustivo. - Las plantas con genes rol producen menos xilema y rompen sus yemas ms tarde que las plantas control. - Las fibras de xilema son ms cortas y tienen menor concentracin de carbohidratos solubles. - Los genes rolC y rolD inducen el fenotipo rol, el que se acenta por los genes rolA y rolB y se atena por los genes aux1 y aux2.
Control
Lnea 11
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Lneas transgnicas de lamo (Lnea 11), mostrando mayor altura y crecimiento en dimetro que el fenotipo salvaje.
Plantas wild type y mutantes stumpy crecidas bajo las mismas condiciones. La planta stumpy se muestra del lado izquierdo y la wild type a la derecha.
Cisgenia
Es un tipo de ingeniera gentica que es conceptualmente similar al mejoramiento tradicional. Usa genes de la misma especie o de especies relacionadas que son sexualmente compatibles. Ej. Sobre expresin y supresin de genes de giberelinas de lamo.
Comparison of GA20ox7 transformed plants (left group) to the empty vector controls (right group) after six w. The transgenic plants had an average stem volume that was increased by 40% compared with the controls. Oregon State University
Gou, J., S.H. Strauss, C.J. Tsai, F. Kai, Y. Chen, X. Jiang and V.B. Busov. 2010. Gibberellins regulate lateral root formation in Populus through interactions with auxin and other hormones. Plant Cell 22:623-639.
Alamo
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Tomado de: www.salk.edu/LABS/ pbio-w/gallery.html Tomado de: bioenergy.ornl.gov/ gallery/terc/terc2.html
La expresin del gen APETALA1 de Arabidopsis en plantas de citrus reduce el tiempo generacional
La expresin del gen LEAFY de Arabidopsis en plantas de lamo reduce el tiempo generacional
Alamo modificado con el gen LEAFY de Arabidopsis. Los brotes se transforman en flores.
Floracin temprana
Construccin: gen BpMADS4 de abeto, el gen Leafy de Arabidopsis, rolD de Agrobacteirum y un gen, XX. La promocin de la habilidad de floracin por el gen rolC fue significativamente mejorada con el uso del gen Leafy y un gen XX (conf). Los lamos transgnicos florecieron luego dos a doce meses, demostrando la estimulacin de la floracin comparados con los tres a cuatros aos que toman los lamos transformados solo con el gen rolC y los 8 aos que toman los lamos no transformados.
Flor masculina en un lamo con floracin temprana modificado genticamente con el gen Leafy
Induccin de esterilidad.
La introduccin de genes de esterilidad BpMADS1::Barnase y 35S::Leafy permiti la obtencin de plantas femeninas (2002). Se obtuvieron plantas con androesterilidad y floracin temprana. Muchas de estas lineas GM han florecido in vitro.
Flor femenina en un lamo transgnico modificado con el gen Leafy
Transgnico
NO Transgnico
Lignina
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Transformacin de lamos con genes antisentido de la cinamil alcohol dehidrogenasa y cafeato O-metiltransferasa
- Se inhibi la expresin de las enzimas CAD y COMT mediante construcciones antisentido dirigidas por un promotor constitutivo. Se transformaron lamos con estas construcciones. Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
- Los niveles de lignina no fueron alterados por el gen anti-COMT pero fueron levemente reducidos por el gen anti-CAD. - Los lneas COMT nuestran considerables alteraciones de la estructura de la lignina, dificultando el proceso de pulpado Kraft. - La alteracin producida por CAD permite que la lignina sea ms fcil de extraer en el proceso de pulpado Kraft.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
D
Tomado de: Pilate et al., Nature Biotechnology, 2002.
A: Ensayo en Ardon, Francia. B: Fotografa area del ensayo en Jealott's Hill, Reino Unido. C: Troncos descortezados del tipo silvestre cosechados a los 4 aos. D: Troncos descortezados del lamo transgnico ASCAD21
Plantaciones bioenergticas
The production of biomass as an energy crop can be optimized through breeding and genetic modification
Hacia la produccion de lignina ms degradable. August 2008 - August 2011 , Wout Boerjan, Department of Plant Systems Biology, Flanders Institute for Biotechnology (VIB), Ghent University
Alamos transgnicos para bioenerga Arboles que producen menos lignina producen ms celulosa , para producir etanol
Glifosato 1 mg/L
Tomado de: www.fsl.orst.edu/tgerc/glyproj.htm
Los rboles transgnicos son primero ensayados por su tolerancia a glifosato en condiciones de laboratorio y luego se prueban en plantaciones a campo.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Resistencia a hongos
El desarrollo de rboles resistentes a enfenrmedades fngicas puede ser alcanzado a travs de la incorporacin de genes que codifican productos con actividad antifngica. Inconvenientes:
La resistencia a hongos es un carcter determinado por mltiples genes. Se necesitan un gran nmero de genes para transferir y que se expresen coordinadamente. Muchas especies de hongos rpidamente desarrollan sistemas de detoxificacin contra los componentes antifngicos que sintetiza la planta.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Avances: Expresin de enzimas hidrolticas (quitinasas y B-1,3glucanasas). Degradan los polisacaridos de la pared. Populus resistente a Septoria musiva (Dixon, 2001). Expresan la enzima Oxalato oxidasa (Oox) de trigo. No se alcanz la resistencia completa, pero los sntomas de la enfermedad se reducen.
- Tolerancia a ozono: se transformaron lamos que sobrexpresan el gen de la enzima glutation sintetasa, Las plantas transgnicas resultaron menos sensibles altos niveles de ozono que las plantas control. Tolerancia a sal: se introdujo el gen de colina oxidasa de Arthrobacter globiformis((codA) en Eucalyptus camaldulensis. Las plantas transgnicas fueron ms tolerantes a estrs salino que las testigo.(Japn. Akira KIKUCHI -Tolerancia a sequa: se utiliz el gen que codifica el factor de transcripcin DREB1A que acta en mecanismos de respuesta a estrs para transformar eucaliptus. Las plantas transgnicas mostraron mayor nivel de tolerancia a sequa. - Tolerancia a fro: eucalyptus con factor de transcripcin.
Liriodendron tulipifera
- Las plntas transgnicas crecen vigorosamente en medios que contienen niveles txicos de Hg2+. - Las plantas transgnicas absorben 10 veces ms Hg2+ que las plantas no transformadas.
Populus deltoides
- Las plantas transgnicas cultivadas en un medio con 25 M Cl2Hg muestran un crecimiento normal, mientras las plantas control mueren.
Tomado de: www.forestry.UGA.edu//merkle/merklecont.html
Fitorremediacin mediante rboles transgnicos ALAMO TRANSGENICO QUE REMUEVE BENCENO DEL AIRE Y TRICLOROETILENO DEL AGUA. UNIVERSITY OF WASHINGTON
ScienceDaily (Jan. 15, 2008) Purdue University en colaboracin con Chrysler LLC
Se introdujo el citocromo P450 2E1, una enzima que degrada varios contaminantes en el higado humano y de otros mamferos. Las estacas de rboles modificados, colocadas en agua con TCE absorbieron el contaminante 53 veces ms rpido que los wild type y removieron 51 a 91% del mismo. Los lamos GM degradan el TCE 121 veces mejor que los lamos control.
1988: Primera prueba a campo oficial con lamos transgnicos en Blgica. China es el primer pas en reportar plantaciones comerciales de lamos transgnicos resistentes a insectos.
Bt CrylA gene (Bacillus thuringiensis) transgenic poplar (Populus nigra L.) and CpTI (Cowpea trypsin inhibitor) transgenic poplar ((P. tomentosaP. bolleana)P. Tomentosa)
Test planting with Bt poplars and conventional poplars in mixed cultivation, China
Deliberate release of genetically modified treesin the USA. (Feb 2010) Source: ISB Information systems for biotechnology
Poplar
190
Pine
Eucalyptus Apple
150
71 57
ArborGen vende unas 250 millones de plntulas micropropagadas al ao. Es la primera y nica empresa con rboles GM en proceso de desregulacin en USA. Eucalyptus GM
Tolerante a fro factor de transcripcin CBF (C-Repeat Binding Factor) que regula la expresin de varios genes que confieren resistencia al fro. Un promotor inducible por estrs. Andro esterilidad en una sp modelo de floracin temprana ( E. occidentalis ), barnase gene 100 % de eficacia en prevenir la formacin de polen. Alteracin del contenido de lignina: los genes CBF y barnase fueron introducidos junto a un gen que altera la sintesis de lignina.
USDA Approves Field Testing of ArborGen Freeze Tolerant Eucalyptus Today, the U.S. Department of Agriculture's Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS) announced the approval of two ArborGen permit applications for planting and growing genetically engineered (GE) eucalyptus trees. cold tolerance. http://www.aphis.usda.gov/biotechnology/fr_notices.shtml.
Prospectiva Forestal
Productos Transgnicos
Pino radiata resistente a insectos u hongos eucaliptus globulus resistente al frio rboles con mayor capacidad de captura de CO2 eucalipto con menor contenido de lignina eucalipto resistente a la sequa eucalipto de zonas ridas con mayor potencial de celulosa eucalipto globulus resistentes a herbicidas alerce de rpido crecimiento pino radiata con lignina tipo siringil pino tolerante al frio rboles estriles
Prospectiva Forestal
Productos Trangnicos
Cerezo resistente a plagas y enfermedades pino tolerante a sequa pino y eucalipto tolerante a la salinidad pino radiata resistente al Silex noctilio
Riesgos
- Impacto en la biodiversidad. Flujo gnico. - Largo perodo de adaptacin. - Herencia y estabilidad del transgn.
Anlisis de riesgos
- Controlar el flujo gnico tanto en poblaciones naturales como en plantaciones hbridas, para predecir las consecuencias de un posible traspaso de genes desde las plantaciones genticamente modificadas. - Evaluar si la introduccin de esterilidad por ingeniera gentica es importante para la liberacin de rboles transgnicos. - Establecer hacia qu tipo de ambientes y qu tipo de rboles transgnicos habra que dirigir los esfuerzos para reducir el flujo gentico.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Caracterizacin de recursos genticos para domesticacin y conservacin mediante marcadores moleculares Manejo asistido de poblaciones de mejoramiento Mapeo gentico, caracterizacin QTL Variabilidad genes candidatos (estrs abitico, calidad madera: densidad, lignina)
INTA
Transformacin gentica
INTA, UNLP
Priorizaciones:
Estrs abitico, situacin
Argentina 2.8 millones de km2 El 75% semirido
Aproximadamente 60 millones de hectreas estn sometidas a procesos erosivos en la Argentina Cada ao se suman unas 650.000 hectreas a los procesos de erosin
TEMAS
TEMAS Priorizaciones
Estrs abitico (sequa, salinidad, temperaturas extremas)
Sequa Salinidad Fro influyen crecimiento y desarrollo Limitan la productividad en reas cultivadas Dao celular por deshidratacin Objetivos a largo plazo: Contar con rboles con caractersticas mejoradas y resistentes a estrs abitico. En el caso de especies cultivadas, extender las regiones productivas a zonas marginales Combatir la desertificacin recuperando suelos degradados, reduciendo la salinidad y mejorando la fertilidad Proteger la biodiversidad utilizando especies nativas
Estrs abitico
Objetivos inmediatos:
Identificar genes/mutaciones relevantes en la adaptacin (anlisis de la diversidad adaptativa en nativas y cultivadas, deteccin mutantes/biotipos)
Estudiar mecanismos de adaptacin de las especies nativas a los distintos requerimientos ambientales de estrs.
Estudiar factores genticos involucrados en los procesos de tolerancia a sequa y monitorear la variabilidad presente en los genes candidatos para estrs hdrico/salino.
Posibilitan la restauracin de ecosistemas degradados por la explotacin forestal extractiva brindando alternativa productiva combinados con la actividad agrcola o ganadera.
Diseo, exploracin de Ensayos para deteccin genotipos con tolerancia al estrs cultivadas (cmaras, sitios, etc)
Priorizaciones
Caracterizacin, genotipificacin y estudios de diversidad La diversidad gentica constituye la base de la potencialidad evolutiva y del mejoramiento gentico de las especies. Cambio climtico implica acciones de monitoreo, ordenacin y rescate. Objetivos: Desarrollo y ajuste, definicin de grupos de marcadores neutros para genotipificacin/diversidad (cultivadas y nativas) Conocer la variabilidad de poblaciones de mejoramiento introducidas y nativas de inters para Manejo asistido de la diversidad. (Variabilidad neutra y/o funcional). Determinar unidades de conservacin en el ordenamiento territorial
Definir poblaciones y ensayos para estudiar diversidad (cultivadas, nativas) y estudios ecofisiolgicos
Explotar la variabilidad gentica que hay en los genomas
Priorizaciones
Calidad de madera (densidad, lignina, etc) Es necesario incorporar estas propiedades en los actuales programas de mejoramiento Objetivo: Detectar genes/variantes allicas que participen en la calidad de madera. Mapeo de asociacin, QTL, genmica funcional, etc.
Calidad de madera
Objetivos:
Definir genes y ESTs para evaluar variabilidad Definir y evaluar caractersticas de madera en poblaciones selectas para mapeo de asociacin y/o generar poblaciones controladas para mapeo de QTLs
Propuesta
Variabilidad funcional para estrs y calidad de madera desarrollando metodologas de multiplicacin in vitro para rplicas de ensayos biolgicos (Ensayo de genes candidatos/mapeo de asociacin)
CONCLUSIONES La biotecnologa puede contribuir a resolver varios de los problemas que se presentan en el sector forestal
El desarrollo de los mtodos de cultivo de tejidos y de ingeniera gentica, y el conocimiento de las rutas metablicas incrementan las posibilidades de mejorar rboles. Los mtodos de micropropagacin favorecen el desarrollo de la silvicultura clonal, lo que contribuye al incremento de la superficie forestada y a la mitigacin del efecto invernadero. La combinacin de las tcnicas moleculares y de gentica clsica permiten acortar los tiempos de los programas de mejoramiento. Los marcadores moleculares y el cultivo de tejidos son herramientas fundamentales en los programas de conservacin y caracterizacin de germoplasma forestal. Proporciona las bases para el establecimiento de bancos de germoplasma, los cuales constituyen un excelente recurso para concretar la idea de un desarrollo sustentable, donde se plantea mantener la estabilidad de las condiciones fsicas de un rea, reservar la biodiversidad, reducir la degradacin ambiental y mantener la productividad agrcola. Limitaciones:
- Poco conocimiento del control gentico de muchos caracteres - Aspectos de bioseguridad e impacto ambiental - Costos relativos (financieros, sociales, polticos o ambientales) - Necesidad de largos perodos de tiempo
C.E.Pro.Ve
Banco
de Germoplasma de Especies Forestales Nativas de la Prov. de Buenos Aires. UNLP - Sec. de Poltica Ambiental
Propagacin
vegetativa de especies forestales, frutales, aromticas y medicinales. UNLP - Ministerio de Educacin de la Nacin
Incremento
Transforamcin
Sistemas de propagacin
Semillas
Macropropagacin
Micropropagacin
Organognesis adventicia
Acacia caven (Mol.) Mol. (espinillo) Erythrina crista-galli L. (seibo) Parkinsonia aculeata L. (cina-cina) Celtis tala Gill. ex Planch. (tala) Scutia buxifolia Reiss. (coronillo) Jodinia rombifolia (sombra de toro) Sesbania punicea (Cav) Benth. Ceasalpinia gilliesii Gleditsia amorphoides. Taubert. Tessaria sp. Terminalia sp.
Captulo 5: Aplicacin de la biotecnologa en la mejora y conservacin de especies forestales. Susana Marcucci Poltri, Leonardo Gallo, Noga Zelener, Susana Torales, Sandra Sharry
http://intainforma.inta.gov.ar/?cat=346
Referencias
1.
Campbell, M., Brunner, A., Jones, H. and Strauss, S. Forestrys fertile crescent: the application of biotechnology to forest trees. Plant Biotechnology Journal, 1:141-154, 2003 Giri, C., Shyamkumar, B. and Anjaneyulu, C. Progress in tissue culture, genetic transformation and applications of biotechnology to trees: an overview. Trees Structure and Function, 18:115-135, 2004. Glaubitz, J.C. and Moran, G.F. Genetic tools: the use of biochemical and molecular markers. In: Forest Conservation Genetics: Principles and Practice Young, A., Boshier, D. and Boyle, T. (eds.). pp 39-59. CSIRO Publishing, 2000. Pea L. and Seguin A. Recent advances in the genetic transformation of trees. Trends in Biotechnology,19:500-506, 2001. Tzfira, T., Zuker, A. and Altman, A. Forest tree biotechnology: genetic transformation and application to future forests. Trends in Biotechnology, 16:439-446, 1998.
www.forestbiotech.org
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Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal