Universit de Provence - Marseille L1 Mention Sciences de la Vie UE 4TV1BC14 (Biologie Cellulaire 1) L.

De Jong-Moreau UMR CNRS 6116 IMEP e-mail: laetitia.moreau@univ-provence.fr

Equipe "Biomarqueurs & Bioindicateurs Environnementaux"

LE SYSTEME ENDOMEMBRANAIRE DES CELLULES EUCARYOTES

1. Rticulum endoplasmique (RE)........................................................................................... 2 1.1. Structure du RE................................................................................................................2 1.2. Organisation molculaire du RE ......................................................................................3 1.3. Fonctions du REG............................................................................................................3 1.3.1. Synthses protiques ................................................................................................ 3 1.3.2. Assemblage des phospholipides............................................................................... 4 1.4. Fonctions du REL ............................................................................................................4 1.4.1. Synthses lipidiques................................................................................................. 4 1.4.2. Rle dans le mtabolisme des glucides.................................................................... 4 1.4.3. Rle dans la dtoxication ......................................................................................... 5 1.4.4. Stockage et libration du calcium ............................................................................ 5 Appareil de Golgi .................................................................................................................. 5 2.1. Structure ...........................................................................................................................6 2.1.1. Face cis..................................................................................................................... 6 2.1.2. Saccules intermdiaires............................................................................................ 6 2.1.3. Face trans ................................................................................................................. 6 2.2. Fonctions..........................................................................................................................6 Lysosomes .............................................................................................................................. 7 3.1. Structure et fonctions .......................................................................................................7 3.2. Identification des lysosomes dans la cellule ....................................................................9

2.

3.

LE SYSTEME ENDOMEMBRANAIRE DES CELLULES EUCARYOTES

INTRODUCTION Le systme endomembranaire est prsent uniquement dans les cellules eucaryotes. Il correspond l'ensemble des compartiments intracellulaires limits par une membrane (cytomembrane) et communiquant entre eux et avec le milieu extrieur par des changes de vsicules. Les compartiments du systme endomembranaire comportent des caractristiques morphologiques et fonctionnelles qui permettent de les subdiviser en groupes distincts: Le rticulum endoplasmique (RE) L'appareil de Golgi Les lysosomes Les endosomes (dj tudis dans la partie membrane et cytosquelette du cours de biologie cellulaire de l'UE 14BC4).

1.

Rticulum endoplasmique (RE)

1.1.
Fig. 1. RE. Le terme "rticulum" signifie rseau et le terme "endoplasmique" signifie l'intrieur du

Structure du RE

cytoplasme. Il s'agit d'un ensemble de tubules et de saccules (ou citernes) formant un vaste labyrinthe membraneux. Dans certaines cellules (), le RE peut-tre trs dvelopp. C'est le cas des exocrines du pancras, o il reprsente plus de la moiti des membranes aires (cf. TD micrographies srie RG9). Les cytomembranes du RE forment un feuillet continu et dlimitent un compartiment interne: la lumire du RE. Le contenu luminal est donc isol du cytosol. Les cytomembranes du RE sont en continuit avec lenveloppe nuclaire. L'enveloppe nuclaire n'est en fait qu'une portion diffrencie du RE dote de pores. L'enveloppe nuclaire est toujours lisse intrieurement (vers le noyau) et porte gnralement des ribosomes sur sa face externe. Il existe deux types de RE: - Granulaire ou rugueux (REG): Recouvert de ribosomes sur la face cytosolique (d'o son nom). Il forme un rseau serr de citernes aplaties et parallles. - Agranulaire ou Lisse (REL): Dpourvu de ribosomes. Il est gnralement tubulaire. Les deux types de RE peuvent exister dans la mme cellule et sont bien sr en communication. Remarque: Le REG peut-tre partiellement dgranul. Cet tat est transitoire et l'on parle de RE de transition. Ex: des hpatiques en cas de jene prolong (cf. TD). 2

Nous verrons que la diversit morphologique du RE est en rapport avec ses multiples fonctions.

1.2.

Organisation molculaire du RE

Les cytomembranes du RE possdent moins de lipides (30%) que la membrane plasmique (60%). Elles prsentent galement moins de cholestrol. De plus, les chanes d'acides gras des phospholipides sont moins longues, ce qui confre ces cytomembranes une paisseur moindre que celle de la membrane plasmique. Les cytomembranes du RE sont riches en protines (70%). Parmi les protines des cytomembranes du RE on trouve:

Les protines de la MP, mais en proportion plus faible et souvent sous forme inacheves Des protines spcifiques du RE: en rapport avec ses diverses fonctions. Parmi ces protines spcifiques on trouve des enzymes: - du mtabolisme des acides gras - de la synthse des phospholipides et des strodes - de la synthse des glycolipides et des glycoprotines

Les cavits du RE sont comparables une solution aqueuse de protines de composition variable en fonction du type cellulaire. Exemples: - Zymogne dans les acineuses du pancras exocrine - Procollagne dans les fibroblastes - Immunoglobulines dans les plasmocytes

1.3.

Fonctions du REG

Le REG intervient dans les synthses protiques (d'o la prsence de ribosomes sur sa face cytosolique) et dans l'assemblage des phospholipides (grce trois enzymes affleurant sur sa face cytosolique).

1.3.1.

Synthses protiques

L'laboration des protines dbute dans le cytosol (traduction). Certaines protines restent dans le cytosol (ex: enzymes de la glycolyse), mais d'autres sont internalises pendant l'longation dans le RE. Parmi les protines internalises on distingue des protines hydrophiles (qui se retrouvent dans la lumire du RE) et des protines transmembranaires amphiphiles (qui seront enchsses dans les cytomembranes du RE). Les mcanismes qui assurent l'internalisation des protines dans le RE ainsi que les modalits de l'internalisation ne seront pas abords dans ce cours, ils sont au programme de la deuxime anne de licence (L2).

1.3.2.
Fig. 2. RE.

Assemblage des phospholipides

Le REG synthtise des cytomembranes: il assemble les phospholipides partir de composants cytosoliques. L'assemblage est ralis par 3 enzymes qui affleurent sur sa face cytosolique. L'assemblage se fait donc en 3 tapes successives. Etape 1: Une Acyl-transfrase synthtise dans la monocouche externe un diacyl glycrol-P partir de 2 acyl-CoA (longue chane carbone associe avec un coenzyme A) et d'un glycrol-P. Etape 2: Le diacyl glycrol-P est dphosphoryl par une phosphatase. Etape 3: Une choline transfrase permet l'amarrage d'une choline-P (libre d'un nucloside diphosphate). Dans cet exemple, le phospholipide ainsi assembl (une phosphatidyl-choline) a trois destinations possibles: - il reste dans la monocouche externe, o il se dplace par diffusion. - il bascule dans la monocouche interne. Cette translocation fait intervenir une translocase (flippase). - il est prlev par des protines cytosoliques, qui le transportent dans une poche hydrophobe jusqu'aux membranes prsentant un dficit de ce phospholipide. Les membranes prsentant un dficit sont gnralement celles qui ne sont pas directement alimentes par les membranes des vsicules membranaires ( savoir: mitochondries et chloroplastes).

1.4.
1.4.1.

Fonctions du REL
Synthses lipidiques

Les enzymes du RE jouent un rle important dans la synthse des lipides (Ex: Strodes). Les qui synthtisent et scrtent les hormones strodes (folliculine dans les ovaires; testostrone dans les testicules) sont riches en REL: cette caractristique structurale est conforme leur fonction.

1.4.2.

Rle dans le mtabolisme des glucides

Les hpatiques stockent les glucides sous forme de glycogne (polysaccharide). Pour tre utilis par la , le glycogne est hydrolys en glucose-6- phosphate. Or, le glucose-6- phosphate est une forme ionique (donc hydrate) ne pouvant sortir de la pour entrer dans le sang. C'est une enzyme des cytomembranes du REL qui va transformer le glucose-6- phosphate en glucose et permettre ainsi son exportation vers le sang. Dans les hpatiques, les cytomembranes du REL jouent donc un rle important dans la rgulation de la glycmie.

1.4.3.

Rle dans la dtoxication

Le REL assure la dtoxication de substances exognes toxiques telles que les pesticides, les mdicaments, les hydrocarbures aromatiques issus notamment de la combustion des cigarettes, les additifs alimentaires tels que les colorants et les conservateurs Cette dtoxication est ralise par des complexes multienzymatiques, comprenant notamment les enzymes des cytochromes P450, insrs dans la membrane du REL (cas des hpatocytes). Ces enzymes sont capables de transformer des milliers de substrats hydrophobes en drivs plus hydrophiles qui seront plus facilement excrts hors de la cellule. Ces enzymes peuvent galement rendre actif un mdicament (aprs mtabolisation). Ce systme de dtoxication a des limites et peut mme prsenter un danger, puisque dans certains cas la mtabolisation d'un compos inactif peut aboutir des drivs trs toxiques.

1.4.4.
Fig. 3. RE.

Stockage et libration du calcium

Toutes les renferment des vsicules ou des citernes spcialises du REL servant au stockage du calcium. Le RE peut prsenter une concentration en calcium 10 100 fois plus leve que dans le cytosol. Le stockage et la libration du calcium font intervenir 3 types de molcules: une pompe calcium qui est une ATPase calcium dpendante. Elle transporte le calcium du cytosol vers la lumire du REL. L'nergie du transport provient de l'hydrolyse de l'ATP en ADP+P. des protines contenues dans la lumire du RE et spcialises dans la fixation du calcium (ex: la calsquestrine que l'on trouve dans le rticulum sarcoplasmique et qui joue donc un rle important lors de la contraction musculaire). un canal de libration du calcium situ dans la membrane du RE.

En contrlant la concentration cytosolique en calcium (par capture et libration), le RE participe de trs nombreuses fonctions cellulaires telles que: la contraction musculaire, la division cellulaire, la scrtion, l'endocytose, la transmission synaptique Le calcium est alors utilis comme un vritable messager intracellulaire.

2.

Appareil de Golgi
Ce composant du systme endomembranaire fut dcouvert en 1898 par Camillo Golgi dans les

neurones de vertbrs. A la sortie du rticulum endoplasmique beaucoup de vsicules de transition se dirigent vers l'appareil de Golgi. Dans l'appareil de Golgi, le matriel en provenance du RE est modifi puis export vers d'autres compartiments. 5

Dans la cellule animale, l'appareil de Golgi est localis proximit du noyau prs du centrosome.

2.1.
Fig. 1G.

Structure

L'appareil de Golgi est form par un ensemble de dictyosomes. Le dictyosome est un empilement de saccules membraneux discodaux et aplatis. Chaque dictyosome est entour de nombreuses vsicules. Chaque dictyosome peut-tre subdivis en 3 compartiments: face cis, saccules intermdiaires et face trans.

2.1.1.

Face cis

La face cis est habituellement convexe. Elle est situe prs du RE puisqu'elle reoit les vsicules de transition issues du RE. La lame de REG do sont issues les vsicules de transition est dgranule. Les vsicules de transition contiennent le matriel protique labor dans le REG. Les vsicules de transition fusionnent avec la cytomembrane du saccule cis golgien et dchargent leur contenu dans la lumire du saccule.

2.1.2.

Saccules intermdiaires

Le matriel luminal transite de saccule en saccule par lintermdiaire des vsicules latrales. Chaque saccule possde des enzymes particulires qui modifient lgrement la protine issue du RE (en ajoutant gnralement des oligosaccharides). Lappareil de Golgi affine les protines par tapes: - chaque saccule intermdiaire correspond une tape - chaque tape est importante et les tapes doivent se succder dans lordre.

2.1.3.

Face trans

La face trans est gnralement concave. Elle donne naissance des vsicules de scrtions qui sacheminent vers dautres sites. Ces jeunes grains de scrtion sont appels vacuoles de condensation.

2.2.

Fonctions

On peut comparer l'appareil de Golgi un centre d'affinage, de triage, d'entreposage et d'expdition. En d'autres termes on parle d'adressage, de tri, de concentration et exportation des molcules. L'adressage est une sorte d'tiquetage des molcules. Au niveau de chaque saccule les protines se voient ajouter des sucres. Le motif sucr final constitue l'tiquette de la protine. En fonction de leur destine les protines sont tiquetes diffremment. L'tiquetage permet donc de trier les molcules. Au niveau de la face trans, les molcules sont concentres et exportes vers d'autres compartiments cellulaires. Pour l'exportation, on distingue 3 voies principales: celle des 6

scrtions contrles (rgules), celle des lysosomes et celle des scrtions constitutives (ex: matrices extracellulaires) (Fig. 2G.). Le revtement protique (clathrine, coatomre) des vsicules scrtoires est d'ailleurs diffrent en fonction du type de scrtion. Ces mcanismes seront traits en dtail en deuxime anne de licence (L2).

3.

Lysosomes
3.1. Structure et fonctions
Les lysosomes sont des organites en forme de sacs globuleux limits par une cytomembrane et

contenant de trs nombreuses hydrolases acides. Les lysosomes rsultent de la fusion entre les prolysosomes (=prlysosomes) porteurs d'hydrolases et diffrentes vacuoles prdigestives contenant le substrat hydrolyser.
prolysosomes (= prlysosomes)
Substrats Hydrolases

Hydrolases acides

= Enzymes hydrolytiques dcomposant pH5 un type de molcule

FUSION

R1-R2 + H2O
Lysosome

Hydrolase

R1-OH + R2-H

Les lysosomes sont le site de la digestion intracellulaire. On dnombre une quarantaine d'hydrolases diffrentes qui assurent l'hydrolyse de toutes les grandes familles de molcules. On trouve ainsi: - phosphatase acide - des protases, - des nuclases, - des glycosidases, - des lipases, - des sulfatases. Toutes ces enzymes ne coexistent pas dans la mme cellule: le nombre et la nature des hydrolases varient avec le type cellulaire. Cependant, pratiquement tous les lysosomes contiennent de la phosphatase acide. C'est grce cette enzyme que l'on pourra identifier les lysosomes dans une cellule. La membrane des lysosomes prsente 3 catgories importantes de protines trs adaptes la fonction de l'organite (Fig. 1.L.): des glycoprotines qui la protgent des hydrolases. Les oligosaccharides constituent un cran de protection.
Les scrtions contrles sont principalement des scrtions produites par des cellules glandulaires et exocytes en rponse un signal exogne, souvent hormonal comme par exemple dans le cas des cellules acineuses du pancras.

des ATPases H+ dpendantes, qui maintiennent le pH du lysosome 5 des permases qui facilitent la diffusion des produits d'hydrolyse dans le cytosol. On trouve ainsi des permases spcifiques pour acides amins, oses, nuclosides

Fig. 2. L. Les Lysososmes (cellule animale/cellule vgtale) Dans la cellule animale, les lysosomes sont reprsents par les endolysosomes, les phagolysosomes et les autophagolysosomes. Dans la cellule vgtale, les lysosomes sont reprsents par les endolysosomes, les autophagolysosomes et par une vacuole (= vacuome) comparable un lysosome gant.

Les endolysosmes rsultent de la fusion entre endosomes (phnomne de pinocytose) et Les phagolysosomes rsultent de la fusion entre phagosomes (phnomne de phagocytose) et

prolysosomes.

prolysosomes. Les macrophages et les granulocytes sont des globules blancs spcialiss dans la phagocytose. Grce aux phagolysosomes, ils assurent la dfense et le nettoyage de l'organisme. Remarque: les endosomes et les phagolysosomes sont des vacuoles htrophagiques (c'est--dire substrat exogne). Ce type de nutrition est essentiel chez de nombreux protozoaires (ex: chez les cilis; ex: paramcie). Chez les crustacs, certaines cellules digestives (intestin, hpatopancrs) prsentent une immense vacuole qui correspond un endolysosome gant dans lequel est lys et accumul le substrat intestinal avant que la cellule n'clate et ne libre le lysat dans la lumire (Fig. 3. L.).

Les autophagolysosomes rsultent de la fusion entre autophagosomes et prolysosomes. Un

autophagosome est une vacuole autophagique (substrat endogne). C'est--dire une vacuole qui squestre un territoire cytoplasmique et/ou un organite. La vacuole autophagique se forme partir d'une lame de REL. Cette lame de REL entoure et isole une plage cytoplasmique snile qui sera ensuite dcompose dans l'autophagolysosome. Remarque: L'autophagie assure aussi la digestion programme des cellules d'organes entiers lors des mtamorphoses notamment chez les insectes et les batraciens. Les cellules de tissus ou d'organes entiers (ex: tube digestif des ttards) sont alors envahis d'autophagolysosomes gants qui produisent ainsi la matire premire ncessaire aux nouveaux organes. De mme, en priode de jene prolong, une histolyse partielle de certains tissus (musculaire surtout) pourvoit au plus press chez beaucoup d'organismes. Enfin, l'autophagie peut aussi liminer les constituants excdentaires. C'est le cas de grains de scrtions non exocyts. On parle alors de crinophagie. La crinophagie est particulirement intense dans les glandes mammaires la suite d'un sevrage (arrt de l'allaitement chez les mammifres). Aprs diffusion des produits de la digestion dans le cytosol, les lysosomes accumulent des dchets (corps rsiduels). Ces corps rsiduels sont essentiellement des pigments ( cause d'une absence d'hydrolases spcifiques) et des membranes ( cause d'une insuffisance des phospholipases). Dans quelques cas, les corps rsiduels peuvent tre exocyts (ex: macrophage). 8

Mais le plus souvent, ils s'accumulent dans les cellules et leur abondance est le signe d'une snescence cellulaire. Le dysfonctionnement lysosomal cause des pathologies svres. Exemples: (1) Dans les macrophages, des aiguilles de silice (cas de la silicose), des cristaux d'acide urique (cas de la goutte) et des fibres d'amiante (cas de l'asbestose) sont l'origine de la perforation des membranes des phagolysosomes. Le cytoplasme des macrophages est alors lys. Les cristaux sont rabsorbs par de nouveaux macrophages et ainsi de suite produisant des destructions importantes (ex: destruction des zones priarticulaires dans le cas de la goutte ou des alvoles pulmonaires dans le cas de la silicose). (2) Il existe des maladies rsultant d'une surcharge lysosomale. En d'autres termes par une accumulation dans le lysosome de substrat non lys. Ce sont des maladies gntiques. Le problme provient gnralement d'un dfaut d'tiquetage des hydrolases qui ne sont donc pas diriges vers le lysosome (ex: mucolipidose).

Le vacuome accumule des dchets. Dans les cellules vgtales, l'exocytose est limite aux

scrtions de petits polysaccharides et de glycoprotines destins la paroi: le stockage des dchets est donc obligatoire. Cependant, le vacuome stocke aussi des substances de rserve et surtout de l'eau et des ions, permettant la turgescence cellulaire. La turgescence donne aux vgtaux leur port arien qui panouit les fleurs et tend les feuilles pour mieux les exposer au soleil. Elle aide les cellules et toute la plante dans leurs croissances pour contrebalancer la forte rsistance de la paroi. Enfin, elle permet la circulation de la sve brute qui doit remonter des racines. Dans les graines, les vacuoles peuvent se dshydrater et stocker des substances, principalement des protines, qui seront dcomposes lors de la germination aprs rhydratation et ractivation des hydrolases (ex: grains d'aleurone).

3.2.

Identification des lysosomes dans la cellule

Laspect du lysosome nest pas suffisant pour lidentifier dans la cellule. On effectue donc un test cytochimique spcifique: la dtection de lactivit de la phosphatase acide (seule hydrolase prsente dans tous les lysosomes). Ce test permet de marquer les lysosomes dans les coupes. En microscopie lectronique transmission (MET) on reprera un prcipit noir (opaque aux lectrons). Le principe du test est schmatis sur la figure 4.L. Etape 1: On fournit la cellule un substrat phosphat (ex: glycrophosphate) pour accentuer la raction. Etape 2: Le substrat est hydrolys dans les lysosomes par la phosphatase acide ( pH5) librant ainsi le groupement phosphate (HPO4 2-). Etape 3: On fournit la cellule du nitrate de plomb. Le plomb forme des liaisons ioniques avec (HPO4 2-) formant ainsi un prcipit visualisable au MET.