Sommaire

Introduction ..................................................................................................................................... 02 Chapitre I. Strilisation Et Strilit ................................................................................................. 03 I. Rappels Historiques ..................................................................................................................... 03 I.1 dfinition de la strilit .............................................................................................................. 03 I.2 Dfinition de la strilisation ....................................................................................................... 04 I.3 Efficacit de la strilisation ........................................................................................................ 04 I.4 Conservation de ltat de strilit ............................................................................................... 04 II. Nature Des Agents Infectieux ..................................................................................................... 04 II.2 Les spores ................................................................................................................................. 05 II.3 Les levures et champignons ...................................................................................................... 06 II.3.1 Bactries, nos amies ou ennemis ........................................................................................... 06 II.3.2 Les virus................................................................................................................................. 06 II.4 Nature du virus ......................................................................................................................... 06 II.5 Les ATNC ou prions ................................................................................................................. 07 II.6 Croissance Et Mort Des Micro-Organismes ............................................................................. 08 Chapitre II. Loi de strilisation........................................................................................................ 10 I. Les Deux Lois De La Strilisation ............................................................................................... 10 I.1 Premire loi, destruction en fonction du temps .......................................................................... 10 I.2 Deuxime loi, destruction en fonction de la temprature........................................................... 10 II. Evaluation Des Deux Lois De La Strilisation ........................................................................... 11 II.1 1ire loi : efficacit du temps : temps de rduction dcimale ..................................................... 11 II.2 2ime loi : efficacit de la temprature, loi dArrhenius, valeur dinactivation thermique ......... 11 II.3 Synthse : la rgle des trois dix .......................................................................................... 12 III. Le Couple Temprature / Temps ............................................................................................... 12 Chapitre III. Types de strilisation .................................................................................................. 13 I. Strilisation par les mthodes physiques...................................................................................... 13 I.1 strilisation par la chaleur .......................................................................................................... 13 I.1.1 le flambage .............................................................................................................................. 13 I.1.2 le four pasteur.......................................................................................................................... 13 I.1.3 lautoclave ............................................................................................................................... 14 I.1.4 Autres mthodes...................................................................................................................... 14 I.2 Pasteurisation ............................................................................................................................. 14 I.3. Tyndallisation............................................................................................................................ 15 I.4. flambage lalcool .................................................................................................................... 15 I.4.1 Strilisation par filtration ........................................................................................................ 15 I.4.2 Strilisation par les radiations ................................................................................................. 16 II. Strilisation par des agents chimiques ........................................................................................ 16 II.1 Les antiseptiques liquides ......................................................................................................... 16 II.2. Les antiseptiques gazeux ......................................................................................................... 16 Conclusion ....................................................................................................................................... 18

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Introduction
La strilisation est une technique destine dtruire tout germe microbien d'une prparation (souvent alimentaire) en la portant haute temprature, c'est--dire de 100 C 180 C. Elle a t invente par Nicolas Appert la fin du XVIIIe sicle (appertisation). L'explication thorique a t fournie par Louis Pasteur au XIXe sicle. Dans le domaine bio-industriel, la strilisation est un procd utilis pour dtruire les germes viables ou revivifiables, potentiellement infectieux, des mdicaments ou des dispositifs mdicaux. Par dfinition, l'tat strile d'un produit se traduit par la probabilit d'au plus 1 / 106 de trouver un germe viable ou revivifiable sur (ou dans) un produit. Les procds les plus courants sont: Le traitement thermique (Pasteurisation, Appertisation, Tyndallisation ou la vapeur d'eau : autoclavage) le traitement chimique (souvent: l'oxyde d'thylne) le traitement par ionisation (par exposition un rayonnement gamma mis notamment par le cobalt-60 de synthse, ou un faisceau d'lectrons acclrs). La radiostrilisation du matriel mdico-chirurgical par rayonnement gamma est ralis avec une dose de l'ordre de 25 kGy et peut seffectuer sur le matriel dj plac dans son emballage dfinitif. Ces procds font l'objet d'importants travaux de normalisation, au niveau international, afin notamment de dfinir les rgles prcises de leur matrise.

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Chapitre I. Strilisation Et Strilit I. Rappels Historiques Si javais lhonneur dtre chirurgien, pntr comme je suis des dangers auxquels exposent les germes des microbes rpandus la surface de tous les objets, particulirement dans les hpitaux, non seulement, je me servirais dinstruments dune propret parfaite et aprs les avoir soumis un flambage rapide, je nemploierais que de la charpie, des bandelettes et des ponges pralablement exposes un air port la temprature de 130 150, je nemploierais quune eau qui aurait subi la temprature de 110 120 On connat tous cette phrase de PASTEUR, pre fondateur de la bactriologie et de la strilisation, mais on connat moins Nicolas APPERT qui fut un prcurseur. Ce fut lui, le premier qui eut lide de passer les conserves alimentaires dans leau bouillante pour en assurer la conservation (le procd est encore nomm appertisation ) Ce procd permit un certain gnral BONAPARTE de disposer dune arme bien nourrie et exempte de scorbut lors de la campagne dItalie en 1795. (Un prix avait t propos par le Directoire pour cette recherche) De l imputer la victoire plus APPERT quau gnie militaire Corse Cest dailleurs lEmpereur qui, en 1810, remit le prix de 12.000 F Nicolas Appert. On savait empiriquement que des procds comme les fumigations permettaient la conservation des aliments et empchaient la putrfaction. On savait aussi que lincinration des cadavres danimaux empchait de mme les propagations de maladies, mais cest seulement partir de Pasteur et de lidentification des microbes (de micros et bios , respectivement petit et vie ) On se rappelle lextraordinaire exprience montrant linexistence du concept de gnration spontane que Pasteur dcrivit dans le grand amphithtre de la Sorbonne. Voici en quoi a consist cette exprience : Un ballon tait pourvu dun mlange nutritif limpide (eau de levure sucre) puis, port bullition. Pasteur introduisit ensuite de lair chaud calcin et scella le ballon au moyen dun chalumeau. La solution est reste limpide. Pasteur, deux mois aprs, a ouvert le ballon en y admettant de lair calcin, mais en plongeant simultanment un petit tube ouvert avec un bouchon de coton, videmment plein de particules et de poussires, puis rescella le ballon. Le liquide alors sest troubl et a ferment. La fermentation ne se produit donc pas Spontanment , mais en prsence de germes en suspension dans lairLa microbiologie tait ne. I.1 dfinition de la strilit La strilit est labsence de microorganismes viables La norme EN 285 dfinit ltat strile comme ltat dun dispositif mdical exempt de microorganismes Par extension, en raison de lexistence dautres agents infectieux, on considre que les levures et champignons sont des microorganismes et pour les autres agents considrs comme non vivants, on dira que la strilit est labsence dagents actifs. Du fait quil est impossible de vrifier la strilit dun objet sans lui faire perdre son caractre strile, la strilit est en ralit une notion de probabilit. On verra que labsence absolue de microorganismes et autres agents nexiste pas, mais que les conditions pratiques de strilisation ne laissent un nombre dagents infectieux tellement faible quils ne peuvent se dvelopper et recouvrer leur pouvoir pathogne. Selon la norme EN 556, il doit y avoir une chance sur un million seulement que lobjet soit contamin.

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On peut prendre des images de guerre pour illustrer la strilisation : lattaque dun fortin. Plus il y aura dassaillants, plus il y aura de survivants au tir des mitrailleuses. Cependant, mme si les assaillants sont repousss ou tus, il est impossible de garantir que TOUS les assaillants ont t tus. Il reste (heureusement) quelques survivants, mais en trop petit nombre pour retenter un assaut. Il en est de mme des bactries et autres agents infectieux I.2 Dfinition de la strilisation La strilisation consiste soumettre les agents infectieux un procd physique en vue de leur limination et rendre strile (selon la dfinition prcdente) la charge du strilisateur (ou synonyme, dun autoclave) I.3 Efficacit de la strilisation Comme dj crit, le procd choisi doit tre tel quil ny ait plus que une chance sur un million de trouver un objet non strile, soit, de faon un peu sotrique, une rduction 6 logs I.4 Conservation de ltat de strilit Une fois quun objet a t strilis, il faut quil soit dans un emballage qui lui conserve cet tat de strilit. (Cest la trs grande diffrence entre la strilisation et la dsinfection) Ce dernier procd ne permet pas de conserver ltat de strilit immdiatement obtenue par laction du dsinfectant Cest pourquoi, la plupart des objets striliser sont au pralable conditionns dans un emballage permable lagent strilisant, mais impermable lair dans les conditions normales de conservation. Lorsque les produits striliser sont dans des emballages tanches (ex, conserves domestiques ou dans lindustrie pharmaceutique, les flacons de verre, emballages polythylne ou poche PVC) cest, en quelque sorte lemballage qui devient son propre autoclave et qui doit reproduire lintrieur les conditions de la strilisation (temps, temprature et/ou pression, absence de spores)

II. Nature Des Agents Infectieux Les agents infectieux sont les bactries ; les levures et champignons ; les virus (N.B. (Les virus ntant pas considrs comme des tres vivants, on parlera dans ce cas dinactivation). les prions (syn. : ATNC (Agents Transmissibles Non Conventionnels) responsables des maladies dgnratives du type CREUTZFZLD-JAKOB chez lhomme et chez lanimal de type EBS (Encphalopathie bovine spongiforme), plus connue sous le nom de maladie des vaches folles

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II.1 Notions sommaires sur les bactries Commenons par rappeler deux synonymes : microbes ou germes Il sagit de cellules autonomes, composes comme les cellules classiques dune paroi, (facultativement) dune capsule, et dun cytoplasme. Les bactries sont dpourvues de noyau, mais sont pourvues dADN nuclaire (les bactries sont dites protocaryotes , par opposition aux tres plus volus pourvus de noyau et dits eucaryotes du grec eu = bien) La figure 1 ci-dessous comprend tous les lments constitutifs dune bactrie mais ici, tous ne sont pas indispensables pour comprendre laction des agents strilisants. On distingue les bacilles (en formes de btonnets, cf. tymologie latine bacillus) et les cocci, en forme de sphre. Pour lantibiothrapie, ces notions sont importantes, notamment par rapport la coloration que peuvent prendre les bactries en prsence de colorants pour leur identification (on connat la classification en Gram + ou Gram -)

Figure 1 : structure dune bactrie, (avec tous ses lments facultatifs ) II.2 Les spores Cest une proprit exclusive des bacilles. Le bacille se replie sur lui-mme et sentoure dune barrire rsistante la chaleur. Le bacille ainsi sporul diminue ses besoins mtaboliques et notamment son besoin en eau et ses changes avec lextrieur. Si on peut se permettre la comparaison, les microbes sont comme les individus replis sur eux mmes , ils sont peu cooprants Les micro-organismes sont sensibles la chaleur (compris les formes sporules, mais haute temprature) mais cette sensibilit varie dune espce lautre. Le procd de strilisation choisi devra videmment tenir compte des variations entre les espces microbiennes et avoir lefficacit souhaitable pour liminer les espces les plus rsistantes.

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Il y a lieu dviter la formation de spores qui compromettent lefficacit de la strilisation Pour cela, le maintien de latmosphre humide est souhaitable, ce qui est le cas de la strilisation par la chaleur humide. Dans le cas de strilisations sches comme la radiostrilisation et loxyde dthylne, il faut alors travailler basse temprature. II.3 Les levures et champignons Les deux termes sont pratiquement synonymes. Les champignons et levure sont eucaryotes Si on connat les champignons chapeau ou en lamelle (genre cpes ou girolles), on sait aussi quil existe des micro-champignons, non visibles loeil nu. Ces micro-champignons sont tout simplement des cellules identiques celles des champignons classiques mais qui nont pas russi se regrouper pour crer un appareil vgtatif comme les champignons communs. Ils peuvent tre responsables de maladies infectieuses redoutables comme certaines mycoses viscrales, notamment chez les sujets immuno-incomptents. (SIDA, greffs, cancers) II.3.1 Bactries, nos amies ou ennemis Ce titre provoquant avait t choisi par un chirurgien de Boucicaut dans les annes 1970, le Pr. Raymond VILLAIN, pour rappeler, dans un dessin anim, que nous devions respecter les bactries utiles (il ajoutait classiquement paix sur les plaies aux germes de bonne volont ! ) Que deviendrait le jus de raisin press, si des levures ne favorisaient pas la transformation des sucres en alcool, pour la plus grande joie de nos palais ? Si lhomme sain sait rsister naturellement aux bactries, il nen est pas de mme de lhomme malade ; celui-ci, affaibli par la maladie est plus facilement agress par les agents infectieux. Autre cause daffaiblissement des patients, lintervention chirurgicale. En effet, louverture de la peau casse la premire carapace naturelle et a fortiori lors dinterventions viscrales avec des dsquilibres cologiques considrables (bactries anarobies au contact de lair) Il est donc ncessaire, pour ne pas re-contaminer le malade, que celui-ci soit opr et soign avec du matriel strile (do la clbre phrase de Pasteur mise en introduction) II.3.2 Les virus (Du latin, virus = poison) Cest Pasteur qui leur a donn ce nom ; les mots grecs toxon ou pharmakon tant largement utilis avec toxique et pharmacie, Pasteur sest servi du terme latin jusqualors inusit. A la suite de lidentification rgulire des germes , on comprit vite quil existait des maladies infectieuses sans germes Comme il tait videmment impossible de revenir la thorie de la gnration spontane, Pasteur mit lhypothse dagents responsables de trop petite taille pour tre visibles au microscope, mais qui seraient identifiables par des moyens plus puissants que le microscope de la fin du XIXe sicle. Cest prcisment ce qui arriva avec le microscope lectronique du XXe sicle. II.4 Nature du virus Le virus est la frontire du vivant et de lorganique. (Figure 2) Leur caractre inclassable a fait dire Andr Lwoff les virus sont les virus Il sagit pour lessentiel dune capsule protique, facultativement entoure dune enveloppe lipoprotique emprisonnant des ARN ou ADN qui peuvent infecter le noyau dune cellule.

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Les virus soit dailleurs soit ADN, soit ARN ; il nexiste pas de cohabitation entre les deux formes dacide nuclique

Figure 2 : Coupe transversale dun virus (retirer lenveloppe pour les virus nus )

Il en rsulte plusieurs consquences : Le virus est un tre frustre, ne pouvant que se dvelopper sur des cellules ou tissus (les cultures en laboratoires sont sur oeuf incub ou cultures de cellule) Il nagit que sil est entier. Un virus ayant perdu son enveloppe perd son pouvoir infestant (lenveloppe est son talon dAchille ) Sa reproduction nest pas de type sexu (encore que celle des bactries ne lest pas non plus) Son mcanisme daction est trs intimiste (brins dADN ou dARN qui pntrent le noyau dune cellule et prennent la place de lADN ou ARN de la cellule) Les antiviraux (quand ils existent) ne doivent pas tre toxiques pour la cellule infecte par le virus, mais pour le seul virus lui-mme, et ce nest que trs rcemment que lon a mis au point des mdicaments antiviraux, gure avant les annes 1980 et lpidmie de SIDA.

Les virus (et plus particulirement les virus enveloppe) sont toutefois sensibles la chaleur et des tempratures beaucoup plus basses que les microbes. Les procds de strilisation sont rputs inactiver les virus et non les tuer dans la mesure o ce ne sont pas des organismes vivants.

II.5 Les ATNC ou prions

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Si les maladies dgnratives taient connues depuis longtemps des stades endmiques chez lanimal (tremblante du mouton) et chez lhomme, (maladie de Creutzfekld-Jakob) cest videmment lpidmie de vaches folles qui a remis cette question lordre du jour. Les prions sont mal connus. Il sagit de petites protines, assez curieusement dpourvues de pouvoir antignique (parce que probablement protges par une protine enveloppante qui les masques aux anticorps anti-prions) Les prions rsistent aux agents mcaniques classiques et ne sont dtruits (ou inactivs) que dans des conditions drastiques de temprature ou de trempage dans des solutions corrosives comme la soude normale ou leau de javel fortement concentre. On pensait que le prion infestait seulement les tissus nerveux ou ophtalmiques. On estime aujourdhui quil existe des nouveaux variants pouvant se loger dans les ganglions, le tube digestif II.6 Croissance Et Mort Des Micro-Organismes Les phnomnes de croissance et de mort des agents infectieux est capital pour comprendre lobjectif recherch par la strilisation. La croissance des bactries est du type exponentiel (cf. annexe) et rpond la formule gnrale

N : nombre de bactries prsentes ; N0 : nombre de bactries initiales au dbut de lobservation (au temps t = 0) ; e : 2,721828 base des fonctions exponentielles ; k : coefficient, fonction de lespce bactrienne ; t : temps de croissance observ.

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Figure 3 : Croissance des bactries On sintresse classiquement, pour valuer la croissance bactrienne, au nombre de gnrations lheure, (ainsi Escherichia Coli 37 a une croissance de 3 gnrations lheure) ce qui correspond peu prs un doublement de la population toutes les 28 minutes. Toutefois, la croissance des bactries nest pas infinie et la population arrive un plateau o on aune dcroissance exponentielle des bactries, mais qui sont elles-mmes remplaces une vitesse exponentielle par de nouvelles gnrations.

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Chapitre II. Loi de strilisation

I. Les Deux Lois De La Strilisation Nous aurons deux mmes lois symtriques la croissance des germes : Une dcroissance exponentielle selon les paramtres : Temps. Chaleur (ou quivalent) I.1 Premire loi, destruction en fonction du temps Si on tudie la strilisation en fonction du temps (chaleur constante) on aura une destruction exponentielle du type :

N reprsente le nombre de bactries survivantes aprs un cycle de strilisation ; N0 reprsente le nombre de bactries survivantes au dpart. e = 2,721828 base des fonctions exponentielles. k un coefficient tenant compte des autres paramtres (entre autres de la temprature affiche). t le temps dexposition lagent strilisant. le signe (-) pour indiquer quil va sagir dune dcroissance.

I.2 Deuxime loi, destruction en fonction de la temprature. Cette deuxime loi, (dite loi dArrhenius) est parfaitement symtrique la premire. Si nous nous intressons maintenant la destruction en fonction de la temprature, on aura une destruction exponentielle du type :

N reprsente le nombre de bactries survivantes aprs un cycle de strilisation. N0 reprsente le nombre de bactries survivantes au dpart. e = 2,721828 base des fonctions exponentielles. k un cofficient tenant compte des autres paramtres (entre autres du temps dexposition lagent strilisant). q (lire thta) la temprature dexposition lagent strilisant. le signe pour indiquer quil va sagir dune dcroissance.

Dans les deux cas, on constate que : On natteint jamais la valeur zro bactries restantes. Il reste toujours un petit nombre, si symbolique soit-il. Cest pourquoi, la strilit rejoint la notion de probabilit dj dcrite. Le nombre de bactries dtruites est proportionnel au nombre initial de bactries. Comme dj dit, on doit avoir une destruction rduisant au millionime la population initiale, soit une rduction 106 .Comme log 106 = 6, on parle de rduction de 6 logs

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Autrement dit, une strilisation sera dautant plus efficace que le matriel striliser sera propre. On ne strilise bien que ce qui est propre tout comme un lave-vaisselle est plus efficace quand la vaisselle est au dpart propre. Nous le verrons dans la troisime partie, place et organisation de la strilisation dans lhpital II. Evaluation Des Deux Lois De La Strilisation On peut mesurer les deux paramtres, temps et temprature et valuer leur efficacit. II.1 1ire loi : efficacit du temps : temps de rduction dcimale Lorsque lon, utilise de leau pour striliser, on constate qu temprature constante, le temps ncessaire pour diviser par dix la population bactrienne initiale est toujours le mme. Ce qui est prvisible si on transforme la courbe exponentielle en droite et quon reprsente ce facteur temps sur un papier semi-logarithmique. (Figure. 4)

Figure 4 : Temps de rduction dcimal Ce temps de rduction dcimale est symbolis par la lettre D et ne dpend que de la nature de lagent infectieux. Pour la bactrie rpute la plus rsistante la chaleur, bacillus stearothermophilus, ce temps de rduction D 121 C est de 1,5 mn. II.2 2ime loi : efficacit de la temprature, loi dArrhenius, valeur dinactivation thermique On a, ce qui est prvisible une loi symtrique (tudie par le savant hollandais) Exprimentalement, on a constat quune lvation de 10C rduisait de 1/10e la population bactrienne.

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On sintresse un paramtre symtrique, not Z, valeur dinactivation thermique (exprim en degrs Celsius) qui est caractristique de chaque espce bactrienne. Toujours pour bacillus stearothermophilus, cette valeur dinactivation thermique Z est de 10C. On a une reprsentation similaire sur papier semi-logarithmique celle du temps de rduction D (figure 5)

Figure 5 : Valeur dinactivation thermique II.3 Synthse : la rgle des trois dix On peut rsumer ces deux lois dinactivation (thermique et dcimale) par la phrase unique suivante : Tous les dix degrs ou toutes les dix minutes, la population bactrienne est rduite 10% de sa valeur dorigine

III. Le Couple Temprature / Temps

Cela a t vrifi au dpart empiriquement, puis de faon plus scientifique. Ainsi, on a des valeurs quivalentes comme lindique le tableau suivant : TEMPERATURES 120 125 130 134 140 60 mn 19 mn 6 mn 2,4 mn 0,6 mn TEMPS

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Chapitre III. Types de strilisation

La destruction des micro-organismes ou strilisation est indispensable lors de la prparation du matriel et des milieux destins aux manipulations, ainsi qu'avant le lavage ou l'limination du matriel et des milieux utiliss. Dans le premier cas, il est indispensable d'utiliser des mthodes qui ne sont pas susceptibles de gner la prolifration ultrieure des germes tudis : on utilise essentiellement des mthodes physiques. Dans le deuxime cas, il sera possible d'utiliser des mthodes plus varies et effet plus durable (mthodes physiques ou chimiques). Il faut opposer la strilisation qui est la destruction totale des germes, la dsinfection qui est une destruction plus grossire. La loi de destruction des micro-organismes est de type logarithmique. Le nombre d'individus tus est li la population et au temps d'exposition. Du fait de la loi de destruction, il est ncessaire de rduire au maximum le nombre de germes prsents avant strilisation par l'emploi de matriel propre et peu pollu, de striliser pendant un temps relativement long, de vrifier la destruction des germes, d'tablir et d'utiliser ventuellement un barme de strilisation.

I. Strilisation par les mthodes physiques

I.1 strilisation par la chaleur I.1.1 le flambage Il est bas sur l'emploi du bec Bunsen. Cette mthode est utilise pour la strilisation extemporane (pour utilisation immdiate) du matriel de manipulation : extrmit de l'se, extrieur des pipettes Pasteur et pipettes gradues, col des tubes essai, tubes contenant des milieux de culture, erlenmeyers et flacons divers, taloirs ... Il est noter que le bec Bunsen, rgl avec une flamme bleue, la plus chaude, cre une zone de strilit d'un diamtre d'environ 20 cm, par ascendance de l'air de cette zone. Toutes les manipulations d'ouverture de tubes et botes de culture, d'ensemencement, devront tre ralises dans ce diamtre. Pour que cette zone soit effectivement strile, les courants d'air et dplacements de personnes sont proscrire. I.1.2 le four pasteur C'est un four - tuve air chaud et sec. Il est utilis pour la strilisation de la verrerie vide (tubes essai, botes de Ptri, tubes culture et bouchons, pipettes Pasteur et rcipients divers). La verrerie striliser doit tre propre et parfaitement sche, ventuellement bouche avec du coton et emballe dans du papier solide. Elle est alors dispose l'intrieur du four et subit un chauffage de :

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30 minutes 1 heure 170 - 180C. 2 heures 160C ce qui a pour but d'viter le brunissement du coton.

Le matriel ainsi strilis sera laiss dans l'tuve jusqu' son refroidissement complet, puis stock l'abri des poussires. Pour ces oprations, compte tenu des tempratures relativement leves, il est conseill d'utiliser le plus possible de la verrerie de type "pyrex". I.1.3 lautoclave C'est un appareil trs performant qui est indispensable dans une unit de microbiologie. Il est utilis pour striliser les milieux de culture neufs ou souills, mais peut galement striliser tout autre matriel de microbiologie. Le chauffage a lieu sous pression de vapeur d'eau, une temprature de 100 130C, pendant une dure qui varie en fonction du milieu, de la temprature utilise et du volume des rcipients. En milieu satur d'humidit et sous pression, la strilisation s'opre des tempratures infrieures celles qui sont ncessaires en milieu sec. Le matriel striliser est dpos dans les paniers mtalliques de l'autoclave dont on aura vrifi le niveau d'eau avant chaque opration de strilisation. Les rcipients sont pralablement bouchs avec du coton (viter de le prendre avec les doigts - utiliser de prfrence une pince) et recouverts de papier d'aluminium ou de papier d'emballage trs rsistant. Pour la suite des oprations : mise en chauffe, jet de vapeur, monte de pression, lire attentivement la notice du constructeur. Ces appareils tant relativement chers, on peut utiliser une cocotte minute spcialement achete et rserve cet usage. Les tempratures atteintes ne dpassant pas 115C, les temps de chauffe seront prolongs de la moiti du temps ncessaire en autoclave. Attention prendre un modle suffisamment haut, pouvant accepter les tubes de culture dans leur galerie mtallique. I.1.4 Autres mthodes Certains milieux de culture fragiles (comme les milieux au dsoxycholate) ne supportant pas les tempratures leves, on procde une bullition 100C. I.2 Pasteurisation La pasteurisation est toujours suivie d'un refroidissement rapide. Elle peut se faire en bouteilles ou en vrac. Dans le premier cas, utilis essentiellement pour la bire, le cidre ou les jus de fruits, la boisson est mise en bouteilles; celles-ci sont capsules puis soumises une

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aspersion d'eau de plus en plus chaude, jusqu' 65 - 75C; elles sjournent cette temprature pendant 20 30 minutes, puis elles sont refroidies par de l'eau de plus en plus froide. La pasteurisation en vrac, gnralement utilise dans le cas du lait, peut se faire de deux faons : dans la pasteurisation basse, le lait est chauff 60 - 70C pendant 30 minutes, ce qui ncessite des rcipients de volume important; dans la pasteurisation haute, la plus utilise en France, le lait est chauff 85 - 90C pendant 20 30 secondes. Cette opration se fait dans des appareils plaques ou tubes. L'appareil se divise en 3 parties : l'changeur, dans lequel le lait froid se rchauffe en changeant de la chaleur avec le lait pasteuris; le pasteurisateur proprement dit; et le rfrigrant, o le lait pasteuris, qui a dj t refroidi par le lait froid, va se refroidir encore en changeant sa chaleur d'abord avec de l'eau froide, puis avec de l'eau glace. I.3. Tyndallisation John TYNDALL : physicien irlandais (Leighlin-Bridge 1820 - Hinhead, Surrey, 1893). Il a dcouvert le phnomne de regel de la glace (1871), grce auquel il a expliqu la marche des glaciers, ainsi que l'effet qui porte son nom. Il a imagin une mthode de strilisation qui consiste en chauffages discontinus une temprature relativement basse (60 ou 70C suivant le cas), suivis de refroidissements. On admet qu'au cours de ces priodes de chauffage discontinu, les bactries perdent leur aptitude sporuler. Actuellement, la tyndallisation consiste en une srie de 3 pasteurisations de 1h. 70 - 80C, spares par un intervalle de 24 heures temprature ambiante, ce qui permet la germination et la destruction des spores, sans l'emploi d'une temprature excessive. Cette mthode est utilise pour les milieux fragiles contenant srum, uf ou toute substance thermosensible de forte viscosit qui ne peut tre strilise par filtration. Dans le cas de son utilisation, il faut veiller la protection des cotons, car l'humidit excessive entrane des contaminations. I.4. flambage lalcool Il est utilis pour la strilisation de matriel de manipulation en verre, ou la dsinfection des paillasses. Attention, opration dangereuse ! I.4.1 Strilisation par filtration Cette mthode est utilise pour les milieux sensibles la chaleur, mais n'est possible que lorsque la viscosit de ces milieux est faible. On utilise alors, suivant le cas, les bougies de porcelaine (type Chamberland), les filtres de verre poreux (le verre fritt N5 arrte de nombreuses bactries) ou les membranes filtrantes usage unique, de type Millipore ou Sartorius. Ces dernires sont actuellement les plus utilises dans les laboratoires.

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I.4.2 Strilisation par les radiations La strilisation par les U.V. est utilise au laboratoire pour la dcontamination de l'air et des paillasses situes sous la hotte de protection : le rayonnement n'agit que de faon directe et sa pntration est faible. Des instruments ou des rcipients tels que les botes de Ptri peuvent tre strilises de la sorte. D'autres radiations (rayons X, , ) , peu utilises, peuvent cependant servir pour la strilisation industrielle des botes de Ptri en matire plastique : strilisation par ionisation. II. Strilisation par des agents chimiques Ils sont utiliss en gnral pour la dsinfection des salles et plans de travail et pour la destruction des germes ports par des instruments souills. Ce mode de strilisation doit tre systmatiquement pratiqu, dans nos laboratoires, pour les lames et pour la verrerie qui ne passe pas en autoclave. II.1 Les antiseptiques liquides L'alcool thylique 60% pour la dsinfection des paillasses et des instruments. Mais certains germes tant rsistants, la dsinfection n'est pas toujours vidente. L'hypochlorite de sodium (eau de Javel) est utilise dilu au 1/4 dans les bacs destins recevoir les lames usages, ou en pissette pour la dsinfection des mains, des paillasses et des sols. Rappelons que l'eau de Javel est toujours largement employe en milieu hospitalier, dans certaines industries et domicile. Les savons et dtergents agissent surtout par leur pouvoir mouillant, ce qui facilite l'limination des germes. Dans le commerce, des produits antiseptiques (Dsogerm sp. par exemple) sont trs efficaces sur les bactries et sans danger pour l'homme. On les emploie pour dsinfecter le petit matriel, les appareils de fabrication en industrie, mais aussi les paillasses et les mains aprs manipulations, dans les cabinets mdicaux et dentaires, les laboratoires ... II.2. Les antiseptiques gazeux Les vapeurs d'une solution chauffe de formol sont utilises pour dsinfecter les pices et les tuves. Dans les annes 70, les salles de classe taient dsinfectes par ce procd. Au Centre hospitalier de Haguenau, nous avons observ une enceinte vapeur de formol et d'ammoniac, servant la dsinfection des couveuses et des respirateurs, le rle de l'ammoniac tant de diminuer la toxicit des vapeurs.

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L'oxyde d'thylne est utilis dans l'industrie pour la dsinfection de certains matriels en plastique usage unique. Dans les centres hospitaliers, une enceinte est rserve ce type de dsinfection pour le matriel d'intubation par exemple, qui ne supporte pas l'chauffement. Ce matriel, achet strile passe une seule fois dans l'enceinte oxyde d'thylne, pour une deuxime utilisation, puis il est dtruit. On peut noter que les types de strilisation sont nombreux et que, quelque soit le matriel traiter, il existe actuellement une mthode adapte. A notre niveau, dans un laboratoire ou une salle de classe dans laquelle les lves manipulent des souches bactriennes, il est indispensable de respecter les rgles fondamentales de lasepsie : Port d'une blouse en coton, ferme. Travail dans la zone de strilit du bec Bunsen. Flambage rapide des orifices des tubes cultures et du matriel de prlvement et d'ensemencement. Immersion de toutes les lames et petit matriel dans l'eau de Javel. Nettoyage rigoureux des mains avant et aprs la sance. Nettoyage des paillasses et du matriel ventuellement contamin. Lavage bullition des blouses contamines.

Au niveau du laboratoire, les botes de Ptri et tubes de culture usags seront

entirement immergs dans de l'eau de Javel pendant 24 h. Les botes en plastique seront ensuite incinres.

La verrerie et tout le matriel supportant la chaleur seront soigneusement lavs puis

striliss dans une tuve chaleur sche (180C pendant 30 45 minutes) ou un autoclave (120C pendant 20 30 minutes).

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Conclusion
Bien quinconnus du public, les services de Strilisation ont un rle cl face au risque infectieux. Tout geste mdical ou chirurgical ds quil est invasif comporte un risque infectieux, cest dire que tout dispositif mdical introduit dans lorganisme est source potentielle dinfection. Il est donc ncessaire de nettoyer et de striliser les dispositifs mdicaux, lchelle des laboratoires et mme dans notre vie quotidienne, cest dire dtruire les micro-organismes prsents sur le matriel aprs tout geste invasif. Compte tenu de la rsistance des Agents Transmissibles Non Conventionnels (A.T.N.C.) ou prions, particules protiques responsables de la maladie de Creutzfeldt-Jakob, les procdures de strilisation ont t normalises. Il sagit de la mise en uvre dun ensemble de mthode et de moyens visant liminer par destruction tous les micro-organismes vivants de quelque nature et sous quelque forme que ce soit, ports par un objet parfaitement nettoy. Striliser, cest lopration permettant dliminer ou de tuer les micro-organismes ports par des milieux inertes contamins, le rsultat de lopration, non limit la dure de lapplication, tant ltat de strilit. Les procdures de strilisation visent limiter les contaminations microbiennes lorigine dinfections nosocomiales, sources de complications pour les patients et coteuses pour la collectivit.