ENZIMELE

Enzimele
Majoritatea proceselor fiziologice desfurate n fiinele vii i de ctre fiinele vii sunt datorate unor iruri multiple i complexe de reacii chimice. n fiecare ir (sau secven) de reacii particip o mare varietate de constitueni ai organismului, majoritatea lor fiind ineri. Reaciile la care particip n organism aceti constitueni adesea nu pot fi reproduse n laborator folosindu-se metodele obinuite ale chimiei. Exist ns posibilitatea de a reproduce i in vitro reacii din organism, n condiii asemntoare, dac se folosesc extracte de esuturi care cuprind anumite substane activante. Acestea nu se afl dect n fiinele vii, fiind catalizatori specifici ai reaciilor metabolice. Poart numele de biocatalizatori (enzime). Exist foarte multe enzime, peste 1000. Numrul mare de enzime corespunde att multiplelor reacii, ct i naltei lor specificiti.
6/4/2012

 O enzim catalizeaz un anumit gen de reacii sau o singur reacie dat de un anumit substrat. Substrat = compusul chimic asupra cruia acioneaz enzima, catalizndu-i transformarea respectiv. Majoritatea substanelor care particip la reaciile biochimice din organism, catalizate de enzime sunt substrate.

6/4/2012

nsuiri catalitice ale enzimelor

Enzimele prezint caracteristicile catalizatorilor chimici obinuii. 1. Enzimele catalizeaz numai reacii posibile d.p.d.v. termodinamic. Acestea sunt reacii exergonice care se desfoar spontan. Enzimele, ca orice catalizator, grbete reacia pe care o catalizeaz, sczndu-i energia de activare.
e A B

2. Enzimele nu modific echilibrul chimic la care conduc reaciile reversibile, ci numai accelereaz atingerea lor, cataliznd n fiecare caz, n mod egal, att reacia direct ct i reacia indirect.
R COOR' ester 20%
+

H2O apa

R COOH acid

R'

OH

alcool 80%

n aceast reacie reversibil, echilibrul este atins cnd se realizeaz proporiile indicate de procente, indiferent de la amestecul de acid i alcool sau de la ester i ap.
6/4/2012

 Echilibru ntre ester, acid i alcool: pornind de la acid gras i alcool (a) sau de la ester (b). n prezena enzimei (.....) se ajunge la acelai echilibru, dar mult mai repede:
Acizi grasi liberi % 100 80 60 40 20 0 timp (minute) b a

3. Enzimele i exercit aciunea catalitic intervenind n cantiti foarte mici.

O singur molecul de enzim poate transforma mai multe sute, mii sau chiar milioane de molecule participante la reacii. Ex. 1 g de ureaz elibereaz din uree (la pH=7 i t =20C) n timp de 5 minute 155 g amoniac, iar o molecul de catalaz descompune 5 milioane de molecule de ap oxigenat ntr-un minut (la 0C i pH =6,8).

6/4/2012

4. Enzimele i pstreaz intact structura dinaintea reaciei i dup desfurarea activitii catalitice; modificrile eventuale din cursul procesului catalitic sunt numai tranzitorii. 5. Specificitatea enzimatic este foarte accentuat. La enzime se ntlnesc 4 tipuri de specificiti: a) absolut b) c) d) de grup larg (joas) stereochimic

6/4/2012

Specificitatea absolut O enzim are o specificitate absolut atunci cnd ea catalizeaz o anume reacie dat. Ex. ureaza catalizeaz reacia de hidroliz a ureei:
NH2 O C
+

HOH

NH2

2 NH3

CO2

Specificitatea de grup Enzimele care prezint specificitate de grup catalizeaz o anume reacie, dar care nu este dat numai de o singur substan, ci de un grup de substane strict nrudite. Ex. Maltaza din intestin catalizeaz hidroliza maltozei cu formarea a dou molecule de glucoz:
CH2OH O O CH2OH O + HOH 2 CH2OH O

Maltaza hidrolizeaz nu numai maltoza, ci i toate zaharurile n care se afl o molecul de glucoz legat a- glicozidic, deci toi compuii de tipul aglicozizilor.

6/4/2012

 Specificitate larg sau joas Acest gen de specificitate l prezint enzimele care catalizeaz o reacie avnd loc la nivelul unui anume gen de legtur aflat la numeroase substane. Ex. lipazele catalizeaz hidroliza gliceridelor:
CH2O COR CHO COR CH2O COR + 3 HOH CH2OH CHOH CH2OH + 3 R COOH

dar i a altor esteri ai acizilor grai (cu ali alcooli). Specificitate stereochimic O enzim posed specificitate stereochimic atunci cnd ea catalizeaz reacii la care particip sau n care ia natere un anumit izomer steric (optic sau geometric) i nu poate cataliza reaciile n care particip sau ia natere cellalt izomer steric. Ex. succinat dehidrogenaza (SDH) catalizeaz parial dehidrogenarea substratului (acid succinic) prin eliminarea a doi H+ n poziia trans cu formarea izomerului respectiv, acidului fumaric.
6/4/2012

Enzima SDH manifest o specificitate absolut, n sensul c cei 4 atomi de hidrogen din molecula acidului succinic sunt structural identici, dehidrogenarea n poziia cis cu formarea izomerului acidului malic nu este produs de ctre enzim.
SDH FAD HOOC C C C C H acid fumaric COOH COOH acid maleic COOH

COOH H C H H C H COOH

FADH2

H H H

Aceast comportare specific arat faptul c enzima, prin formarea complexului enzim-substrat (ES) determin o orientare spaial a substratului, respectiv a celor 4H, iniial echivaleni, care devine prin acest orientare, neechivaleni poziional. Enzima i recunoate, astfel, numai n aceast poziie asimetric, susceptibil pentru transformarea catalitic. Prin legarea unor substane cu simetrie molecular la situsul catalitic, substanele vor cpta o orientare spaial asimetric.

6/4/2012

Structura enzimelor
Enzimele sunt biocatalizatori de natur proteic. n consecin, structura lor chimic de ansamblu reprezint un edificiu macromolecular complex determinat de nivelurile de organizare structural a proteinelor. Enzimele posed proprieti generale i chimice ale proteinelor. Enzimele se caracterizeaz prin dou trsturi generale: 1. Existena unei configuraii structurale specifice care le ofer activitate catalitic. Moleculele de enzim posed n structura lor anumite zone, denumite situsuri, cu o secven de aminoacizi i conformaie caracteristic, zone eseniale pentru manifestarea activitii catalitice (situs catalitic) sau pentru funcia de reglare (situs allosteric) a unei secvene de reacii. 2. Existena unei configuraii structurale spaiale a moleculei, configuraie care, n ansamblul ei, este responsabil de activitatea enzimatic

6/4/2012

10

 D.p.d.v. Structural, enzimele se mpart n dou grupuri: - enzime de natur exclusiv proteic, constituite n ntregime din proteine; - enzime de natur heteroproteic, formate din dou pri: una proteic, numit apoenzim i una neproteic numit coenzim. Enzimele holoproteice i exercit proprietile catalitice, direct, prin intermediul situsului catalitic, iar enzimele heteroproteice prin intermediului situsului catalitic i al unor cofactori enzimatici (coenzime, grupe prostetice, metale) indispensabili pentru manifestarea activitii catalitice. n cazul enzimelor holoproteice, care nu necesit pentru activitatea lor catalitic prezena unui cofactor, centrul catalitic este sinonim cu situsul catalitic. n cazul enzimelor heteroproteice, care necesit pentru activitatea lor catalitic, prezena unor cofactori, centrul catalitic include situsul catalitic i regiunea din molecul la care se ataeaz cofactorul (coenzima i/sau metal).
6/4/2012

11

n cazul enzimelor de natur heteroproteic, apoenzima fixeaz substratul, iar coenzima desvrete reacia chimic. Ex. Transaminazele (enzime care transport o grup amino de la un aminoacid la un cetoacid) i decarboxilazele aminoacizilor (enzime care catalizeaz decarboxilarea aminoacizilor) au aceeai coenzim piridoxal-fosfatul, i acelai substrat, aminoacidul. Deosebirea de reacie este legat de existena a dou apoenzime diferite.
CHO HO H3C N CH2OPO3H2

n multe cazuri, coenzima este strns legat de apoenzim i nu se poate detaa de aceasta din urm dect prin denaturarea apoenzimei. n alte cazuri, coenzima se detaeaz foarte uor de apoenzim, spre ex. prin simpla dializ. Acest ultim fapt explic de ce dializa diverselor preparate biologice antreneaz adesea inactivarea enzimelor pe care le cuprind.

piridoxalfosfat

6/4/2012

12

Categorii de coenzime
Provenite din vitamine hidrosolubile
n majoritatea cazurilor, mici transformri ale moleculelor de vitamine hidrosolubile sunt suficiente pentru constituirea de coenzime cu roluri metabolice importante. Vitamine hidrosolubile i coenzimele corespunztoare: vitamine hidrosolubile coenzima
_ NH2 N H3C N Cl CH2 N S
+

CH3 CH2 CH2 OH

H3C

NH2
+

_ Cl CH2 N S CH3

N N

CH2 CH2 O P O P OH OH OH

vitamina B1 (tiamina)

tiaminpirofosfat (TPP)

H3C H3C

CH2 (CHOH)3 CH2OH N N O N O vitamina B2 (riboflavina) NH

H3C H3C

CH2 (CHOH)3 CH2OPO3H2 N N O N O NH

flavin mononucleotidul (FMN)

6/4/2012

13

Vitamine hidrosolubile
H3C H3C CH2 (CHOH)3 CH2OH N N O N O vitamina B2 (riboflavina) NH
H3C H3C

Coenzima
O O NH2 N N N CH2 (CHOH)3 CH2 O P O P O N N O OH OH CH2 O N NH N O OH OH flavin-adenin-dinucleotidul (FAD)

CONH2 O N

NH2 N N N

CH2 O P O P O CH2 N O OH OH OH OH O H OH OH nicotinamidadenindinucleotid (NAD)

+

CONH2 N vitamina PP (nicotinamida)

CONH2 O N O

NH2 N N N

CH2 O P O P O CH2 N O OH OH OH OH O H

OH OPO3H2 nicotinamiddinucleotid fosfat (NADP)

+

6/4/2012

14

Vitamine hidrosolubile
CHO HO H3C N CH2OH

Coenzima
CHO HO H3C N CH2OH

vitamina B6 (piridoxal)

piridoxalfosfat

CH3

CH3 HO CH2 C CH CO NH CH2 CH2 COOH

O CH2 C O P OH O O N CH2 O N OH OH P OH

CH CO NH CH2 CH2 CO NH CH2 CH2 SH

CH3 OH NH2 N N coenzima A

CH3 OH acid pantotenic

HN HC

O C

HN

O C

NH

NH CH CH CH2 CH2 CH2 CH2 COOH biotina

HC

CH3 CH CH CH CH CH3 S COOH

a- biotina

6/4/2012

15

Vitamine hidrosolubile

Coenzima

H2N N

N N CH2 NH

COOH CO NH CH CH2 CH2 COOH

H2N N

H N N H CH2 NH

COOH CO NH CH CH2 CH2 COOH

OH acid folic

OH

acid tetrahidrofolic (FH4 sau H4 - folat)

vitamina B12 (cobalamina)

coenzima B12

6/4/2012

16

 Coenzime tetrapirolice - au structur foarte asemntoare cu cea a hemului din hemoglobin; - cuprind i ioni metalici, n special Fe care poate exista n dou stri de oxidare diferite: Fe2+ si Fe3+; - coenzimele intervin n transferul de electroni. Ex. Coenzime tetrapirolice: citocromii, catalaza i peroxidaza
Citocromii sunt substane nrudite cu hemoglobina i mioglobina, fac parte din clasa hemoproteinelor. Hemoglobina i mioglobina funcioneaz ca transportori de oxigen, iar citocromii ca transportori de electroni n lanul respirator. Aceste proteine conjugate cuprind drept grup prostetic un nucleu heterociclic complex hemul. Rolul citocromilor este acela de transport de electroni prin oscilaia ionilor de fier ntre valena 2+ si 3+:
cit Fe
2+

_e
+e

cit Fe

3+

6/4/2012

17

 Coenzimele metalice Numeroase enzime cuprind metal angajat ntr-un complex disociabil din care poate fi detaat n stare de ion. Acest proces este reversibil, n sensul c ionul metalic poate fi reintegrat n complex trecnd n stare de atom. Principalele enzime metalice de acest tip sunt: polifenoloxidazele (cu Cu), anhidraza carbonic (cu Zn), peptidazele (cu Mn, Fe, Mg), fosfatazele (cu Mg), arginaza (cu Mn).
Toate enzimele de acest tip sunt inactivate prin eliminarea metalului i reactivate prin fixarea lui (uneori prin fixarea unui cation de metal vecin cu cel natural n tabloul periodoc, deci cu structur atomic asemntoare). Ex. Arginaza din ficat, inactivat prin pierderea Mn, i recapt aciunea hidrolitic prin adaos de Mn2+ sau Co2+. Rolul metalului n sistemele enzimatice este adesea de element de legtur prin formarea unui complex ntre proteina enzimatic i substrat.

6/4/2012

18

Efectorii enzimatici
ansamblul compuilor chimici care intervin n modificarea mecanismului activitii enzimatice. Principalii efectori enzimatici: activatorii i inhibitorii. Activatorii substane care ajuta enzimele s-i desfoare activitatea lor catalitic, prin aciunea numit activare. Exist mai multe modaliti de activare a unei enzime: 1. activarea prin ioni. Unii ioni metalici (Mg2+, Mn2+, Zn2+, Co2+) si unii anioni (Cl-) acioneaz, fiecare, drept activatori specifici pentru anumite enzime. n absena lor, enzimele respective nu mai acioneaz asupra substratelor corespunztoare.
Ex. Dac se dializeaz un preparat de amilaz salivar, aceasta i pierde activitatea specific de a hidroliza amidonul la pH-ul su optim 6,8. Activitatea este ns rectigat prin adaos de ioni Cl- (din NaCl), ceea ce denot c aceti anioni sunt activatori enzimatici.

19

2. activarea prin transformarea unei proenzime n enzim Unii activatori transform o proenzim inactiv n enzim activ, deblocnd grupe reactive din molecula proenzimei. Aceti activatori acioneaz prin demascare.
Ex. Tripsinogenul este o proenzim inactiv proteolitic, aflat n sucul pancreatic. Cnd ns acesta ajunge n intestinul subire, enterochinaza (enzim secretat de mucoasa intestinal) ndeprteaz din tripsinogen un hexapeptid determinnd o rearanjare a moleculei (dou resturi de histidin se plaseaz n faa serinei, constituindu-se astfel centrul activ al tripsinei (n procesul de descompunere a hranei, tripsina are proprietatea de a descompune componenii macromoleculari foarte duri). Acest gen de activare se ntlnete i la alte enzime proteolitice, spre ex., la pepsinogen care este demascat de ionii H+ sau de ctre nsi pepsina din stomac, pentru a trece n pepsin activ.

3. activarea prin antiinhibiie Const n nlturarea unei substane care desfurarea reaciei enzimatice, numit inhibitor.

mpiedic

Ex. Cianurile alcaline activeaz ureaza inhibat de srurile de cupru.

20

4. Activarea prin protejarea enzimei Toi compuii care protejeaz enzimele mpotriva agresorilor chimici (ex. oxidanii pentru enzimele care cuprind cistein n centrul lor activ) sunt considerai activatorii enzimelor respective. Cei mai frecveni activatori de acest tip sunt cisteina nsi i glutationul. Asemenea compui reductori activeaz papaina, cu grupe SH n centrul activ i care este inactivat uor de oxidani.
Glutationul este un tripeptid. Importana acestui peptid deriv din faptul c el se gsete n toate esuturile organismelor vii. Este un tiol universal care i transfer agenii oxidani periculoi organismului, grupa tiol transformndu-se n disulfur.
NH2 CH HO2C CH2 CH2 C O SH glutation H N CH O C N H CH2 CO2H

21

 Inhibitorii sunt compui care influeneaz negativ desfurarea activitii enzimatice, determinnd scderea vitezei procesului, pn la zero. Aciunea inhibitorilor se numete inhibiie. Nu orice substan care mpiedic o reacie enzimatic este inhibitor( ex. un compus care se combin cu substratul fcndu-l inapt s reacioneze). Astfel, viteza este ncetinit din cauza lipsei substratului. Inhibitorii sunt compuii care acioneaz asupra enzimelor. O substan sau un agent (ex. temperatura) care denatureaz proteina enzimatic nu trebuie socotit inhibitor. Sunt inhibitori numai substanele care au aciuni specifice asupra enzimelor influennd negativ cinetica procesului enzimatic. Exist dou tipuri de inhibitori: competitivi, cei care acioneaz asupra enzimei n concuren (competiie) cu substratul i necompetitivi, cei care acioneaz independent de substrat.

22