Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP12

Diagnosticul de laborator al sifilisului

Treponema pallidum Produse patologice: - serozitate din ancrul sifilitic (stadiul I.) - snge (ex. serologic) 1. Examen direct microscopic preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat forme spiralate mobile (rotaie, flexie) preparate colorate o coloraie Giemsa o coloraie negativ (Burri) o impregnare argentic (Fontana-Tribondeau) Morfologie: forme spiralate, spire regulate, capete drepte, dimensiuni: 6-16 /0,25m 2. Izolare prin metode biologice treponemele patogene nu pot fi cultivate pe medii arificiale inoculare intratesticular la iepure orhit sifilitic 3. Diagnostic indirect serologic 1. Reacii serologice clasice - evidenierea anticorpilor antilipoidici - antigen folosit: cardiolipina reacia de floculare (VDRL) latexaglutinare (RPR) reacia de fixare a complementului (RFC) - pot apare reacii fals pozitive - pentru confirmare, diagnosticul se completeaz cu reacii moderne (specifice) 2. Reacii serologice moderne evideniaz anticorpii antiproteici antigene folosite antigene treponemice specifice de gen i de specie o Reacii cu specificitate de gen: RFC CIEF o Reacii cu specificitate de specie: FTA Abs (Fluorescent Treponemal Antibody Absorbtion Test) TPHA (reacie de hemaglutinare pasiv) TIT (testul se imobilizare a treponemelor) ELISA

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

Diagnosticul de laborator al leptospirozei

Leptospira interrogans Leptospira biflexa Produse patologice - prima sptmn de boal: o snge (pentru evidenierea leptospirei) - din a doua sptmn: o urin (recoltat dup alcalinizare) o LCR o snge pentru serologie 1. Examen direct microscopic - preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat forme spiralate mobile - preparate colorate o coloraie Giemsa o coloraie negativ (Burri) o impregnare argentic (Fontana-Tribondeau) Morfologie: - forme spiralate, spire regulate, dese i mici, cu capetele ncurbate - dimensiuni: 6-40 /0,25m 2. Izolare - pe medii de cultur o prin nsmnare pe mediul Korthoff (cu ser de iepure) o incubare: 28-30C, pn la 60 zile o control: din 5 n 5 zile, prin preparat nativ examinat la microscopul cu fond ntunecat pe animale de laborator o cobai, hamster auriu, iepure

3. Diagnostic serologic - Reacia de aglutinare liz (RAL) o antigenul folosit: culturi vii de leptospira o diluii succesive de ser (Ac?) o preparat nativ examinare la microscop cu fond ntunecat - RFC, IF, Precipitare n gel Mancini, CIEF, ELISA, RIA

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de Borrelia burgdorferi

Produs patologic - snge pentru serologie - LCR - cpua infectant 1. Examen microscopic direct - detectarea microscopic a spirochetelolor n sngele uman nu a putut fi realizat - diagnosticul direct a putut fi realizat totui prin evidenierea microorganismelor n seciuni tisulare, prin impregnare argentic. Morfologie: - forme spiralate, spire neregulate, deformabile n cursul micrii, cu capetele drepte, dimensiuni: 20-30 /1m 2. Izolare - s-au obinut colonii pe mediul Kelly modificat, la temperatura de 28-30C, n microaerofilie 3. Diagnostic serologic se evideniaz anticorpii din snge i din LCR prin imunofluorescen i reacii ELISA, deorece dau reacii ncruciate cu Treponema pallidum, se efectueaz n paralel i reacia TPHA.

-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

Diagnosticul de laborator al tuberculozei

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Produsul patologic - n tuberculoza pulmonar sput, aspirat bronic, lichid pleural, spltur gastric - n tuberculoza renal urina (toat cantitatea de urin emis dimineaa) - n tuberculoza genital secreie vaginal, cervical, sperm, secreie prostatic - n tuberculoza articular, osoas lichid sinovial, puroi - n tuberculoza ganglionar material din puncie ganglionar, puroi - n meningita tuberculoas LCR 1. Examen direct - frotiu colorat Ziehl-Neelsen bacili lungi i subiri, uor ncurbai, roii (acidoalcolorezisteni), fondul preparatului fiind albastru 2. Izolare - pe mediul Lowenstein-Jensen - incubare la 37C, pn la 90 de zile 3. Identificare - caractere morfotinctoriale (vezi examenul direct) o factorul cord caractere de cultur o tipul uman are o cretere eugonic, favorizat de prezena glicerinei crete n 2-3 sptmni colonii de tip R, neregulate, uscate, conopidiforme, ca firmiturile de pine coloniile se detaeaz uor de pe mediu i se emulsioneaz greu n ser fiziologic n mediu lichid formeaz la suprafa un vl gros ce se ntinde mai repede o tipul bovin are o cretere disgonic crete mai lent, ntr-o lun colonii de tip S, mici, netede coloniile se detaeaz greu de pe mediu i se emulsioneaz uor n ser fiziologic n mediu lichid formeaz la suprafa un vl subire, friabil, cu dezvoltare lent inoculare la animale de experien cobaiul

-4-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

4. Antibiograma
se efectueaz pe mediul Lowenstein n care au fost incluse tuberculostatice

5. Diagnostic indirect Intradermoreacia Mantoux o se inoculeaz intradermic tuberculin purificat (PPD, 2 uniti) o este o IDR alergic o dac persoana nu a venit n contact cu germenele (nu a fost bolnav, nu a fost vaccinat), atunci la locul inoculrii nu apare nici o reacie o dac persoana a mai venit n contact cu germenele (a fost sau este bolnav, a fost vaccinat), atunci la locul inoculrii se declaneaz o reacie alergic tardiv (dat de implicarea imunitii celulare), urmat de apariia unui eritem i a unei induraii locale o reacia se interpreteaz n funcie de mrimea i intensitatea induraiei

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de germeni din genul Mycoplasma

M. hominis M. pneumoniae M. genitalium, M. orale, M. salivarium Produsul patologic - periaj endobronsic, lavaj bronho-alveolar - grataj al mucoaselor - urin - aspirat gastric (nou-nscui) - secreie vaginal - snge (dg. serologic) 1. Examen direct - n produs patologic se pot cuta antigenele bacteriene prin tehnici imunologice: imunofluorescen direct, imunoprecipitare, reacii imunoenzimatice 2. Cultivarea - dificil (timp 5-21 zile) - necesit medii bogate n colesterol, extract de levur, precursori pentru sinteza de acizi nucleici - creste lent, n atmosfer microaerofil - Mycoplasma hominis - creste pe medii speciale cu arginin, n 1-4 zile 3. Identificare - Caractere morfotinctoriale o sunt bacterii foarte mici, cu dimensiuni de 300 nm motiv pentru care nu pot fi evideniate la microscopul optic. o nu au perete bacterian, lipsa peretelui bacterian le confer o foarte mare plasticitate si polimorfism
-5-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

o apar ca forme filamentoase, bacilare, cocoide. Caractere de cultur o coloniile apar n cteva zile, sunt foarte mici, vizibile cu lupa o coloniile au aspect de ou prjit. Caractere biochimice o fermentarea glucozei o hidroliza ureei si argininei Identificare antigenic o se detecteaz anticorpii specifici prin imunofluorescen, ELISA Imunoblot o prezena IgM specifice sau cresterea titrului de anticorpi n seruri pereche recoltate la 15 zile interval sunt martorii unei infecii recente.

n infeciile cauzate de micoplasmele genitale diagnosticul este exclusiv bacteriologic si presupune izolarea pe medii.

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de germeni din genul Chlamydia

Chlamydia trachomatis Chlamydophyla psittaci Chlamydophyla pneumoniae bacterii mici, 0,2 m, cocoide, parazii intracelulari obligatorii cu perete rigid, multilaminat, asemntor ca structur cu cel al bacteriilor Gram negative.

Chlamydia trachomatis
Produsul patologic - raclajul blnd al mucoaselor pentru a recolta celule - se examineaz: o produs endouretral, din endocolul uterin (recoltor special burete/perie) o raclat conjunctival o de la nou nscut se recolteaz secreia nasofaringian o de la cazurile de linfogranulomatoz venerian se examineaz aspiratul ganglionar si puroiul din fistul. 1. Examen direct - se pot aplica tehnici de imunofluorescen direct care utilizeaz anticorpi monoclonali anti-Chlamydia trachomatis, marcai, pentru evidenierea corpusculilor elementari.
-6-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP12

2. Cultivare - izolarea se poate face pe culturi celulare (Mac Coy, HeLa.) sau ou de gin embrionat - n celulele infectate se formeaz incluzii citoplasmatice, nconjurate de o matrice bogat n glicogen - din acest motiv, incluziile chlamydiene pot fi evideniate prin colorare cu iod (Lugol). - coloraia Giemsa, mai frecvent utilizat permite diferenierea incluziilor tinere alctuite din corpi reticulai care se coloreaz n albastru si a incluziilor mature n care predomin corpii elementari care se coloreaz n rou. 3. Identificare - cele mai sensibile metode de diagnostic sunt cele de biologie molecular: o hibridizare o PCR. 4. Diagnosticul serologic o evidenierea anticorpilor formai fa de antigenele cu specificitate de gen, specie i tip prin RFC, IF, ELISA, Western blot o prezena anticorpilor de tip IgM sau seroconversia este semn de infecie recent o n infeciile genitale se caut anticorpi de tip IgA a cror prezen denot o infecie activ

Chlamydophila psittaci
Produs patologic - pentru diagnosticul psitacozei/ornitozei o sput o tampon nasofaringian o esut pulmonar o snge diagnostic serologic 1. Examen direct - evidenierea acizilor nucleici prin PCR 2. Diagnostic serologic - se determin prezena anticorpilor prin IF

Chlamydophila pneumoniae
Produs patologic: - sput, lavaj bronho-alveolar - snge - serologie Detectarea acizilor nucleici prin PCR - diagnostic rapid i specific. Izolarea este dificil, nu se practic n diagnosticul de rutin. Diagnosticul se bazeaz pe serologie, evidenierea anticorpilor prin IF indirect sau ELISA. Seroconversia apare la 3 sptmni de la debutul bolii.
-7-