HIV/SIDA

Human Immunodeficiency Virus

Acquired immunodeficiency syndrome

Sindrome dimmunodeficience aquise

RETROVIRIDAE
ONCOVIRINAE LENTIVIRINAE: HIV SPUMAVIRINAE

Genom ARN
Reverstranscriptaza

ADN proviral
Integraza

Integrare ADN celular

genom ARN +PROTEINE

1981- primele cazuri AIDS (sindrom de imunodeficienta umana dobandita ) raportate in SUA la homosexuali tineri, anterior sanatosi 1981-83- grupe de risc, AIDS- boala transmisa parenteral, sexual (hetero si homosexual), materno-fetal 1983 - se stabileste etiologia virala a bolii prin izolarea virusului

- tulpina numita LAV (Lymphadenopathy Associated Virus) - Luc Montaigner, Franoise BarrSinoussi (Institutul Pasteur din Paris)- Premiul Nobel pentru Medicina 2008
- tulpina numita HTLV III (Human T-cell Leukemia Virus III) - Robert Gallo, Bethesda, SUA/tulpina ARV AIDS associated retrovirus (J. Levy, San Francisco, SUA) 1985 cele 3 tulpini sunt demonstrate a apartine aceluiasi virus redenumit HIV (Human Imunodeficiency Virus), Familia RETROVIRIDAE, GEN LENTIVIRINAE

1985 - sunt livrate primele truse de diagnostic imunoenzimatic

1986 - se descopera HIV2 (Africa de Vest) 1998 secventierea celei mai vechi probe de plasma HIV1 pozitiva cunoscuta -recoltata n 1959, de la un barbat din Congo.

1992 - 1993 - variantele genomice ale HIV sunt ncadrate n clade (A-J), Media distantei intercladale este de aproximativ 27%, intra- cladal 11% din nucleotide.

HIV1 inrudit cu SIVcpzrezervorul natural subspecie din Africa Centrala, Pan troglodites troglodites

Camerun

Camerun; Gabon, Guineea Ecuatoriala

HIV2 (Africa de Vest), inrudit cu SIV sm (sooty mangabey)

Att virusurile umane ct si cele simiene par a avea un precursor comun. In Coasta de Fildes au fost descrises forme de trecere SIV HIV ce determina la om infectii asimptomatice-populatia rural, n afara grupelor de risc pentru achizitia infectiei HIV continua contaminare a omului cu tulpini simiene.

3 transferuri distincte ale SIV cpz de la aceeasi specie: Pan troglodites troglodites
Gao.F et al, Nature, 1999, 397, 436-41 Weiss RA, Wrangham RW, Nature, 1999, 397, 385-6. Keele, BF, 2006 Science www. sciencexpress.org 5

Gp160-precursor

GENOMUL HIV: 1.Gene structurale: env (anvelopa-gp120, gp41) gag : antigene de grup: (capsida, matricea, nucleocapsida;) pol: cx polimerazic-(reverstranscriptaza, integraza, proteaza) 2.Gene reglatorii(rev, tat, nef) 3. Gene accesorii (de maturare)

Gp120- superficiala

P66-Rt

P55-Rt

Gp41-transmembranara P32-proteaza P24- capsida P17- matricea p10/11-integraza p7/9- nucleocapsida

Western Blot

CELULE TINTA IN INFECTIA HIV- celule CD4 pozitive : limfocitele T helper macrofage celule foliculare dendritice (CFD)

Tropism HIV
Tulpini ce utilizeaza coreceptorii CCR5 Macrofagotrope Asociate cu transmiterea HIV
Tulpini R5/X4 Dual-trope

Tulpini ce utilizeaza coreceptorii CXCR4 limfotrope Asociate cu progresia bolii

Linii celulare T CD4+ CCR5+/CXCR4+

Macrofage CD4+ CCR5+

Limfocite T CD4+ CXCR4+

Forma modificata a CCR5- Deletie 32 bp Alela prezenta in forma homozigota- pacienti expusi, dar neinfectati HIV Heterozigota- supravietuitori de lunga durata (non-progresori, lent progresori)

Polimorfism populational
In stadiile timpurii ale infectiei, tulpini:
Macrofagotrope

Nonsincitizante
rata replicativa scazuta

In stadiile tardive ale infectiei, tulpini:

limfotrope

sincitizante
rata replicativa inalta
9

Ciclul Replicativ viral: faza de eclipsa

Adsorbtie gp120 cupleaza receptorul principal CD4 si coreceptorii CCR5 (macrofage) sau CXCR4 ( limfocite Th)

Internalizare prin fuziune: gp41

Decapsidare

10

CRESTEREA LOGARITMICA
NUCLEU

INTEGRAZA HIV LTR

ARN polimeraza ADN dependenta POLII (celulara)

CITOPLASMA

11

FACTORI VIRALI IMPLICATI IN REPLICAREA HIV:

Vpr- transport intranuclear al complexului preintegrativ Vif- stimuleaza formarea ADN proviral, prin blocarea APOBEC3G celular Vpu- creste eliberarea virionilor HIV Tat-transactivator al promoterului HIV Rev-stimuleaza exportul citoplasmatic al ARNm Nef- interactioneaza cu proteine celulare implicate in semnalizarea celulara permitand supravietuirea pe termen lung a LTh infectate si promovarea apoptozei LT neinfectate

PROTEINE CELULARE IMPLICATE IN REPLICAREA HIV:

-TRIM5 (TRIpartite Motif) la primate intervine in degradarea cx de reverstranscriere in proteazomi -APOBEC3G citozin deaminaza -converteste citozina in uracil in cursul sintezei ADNss(-) este inactivata de proteina vif a HIV

VARIABILITATE HIV :
Rata mare de erori a Rt-azei: 3x10-5 mutatii/ nucleotid/ ciclu replicativ si rata mare de recombinari in cursul reverstranscrierii-folosirea alternativa a celor 2 copii genomice Rata mare de erori a ARN polimerazei celulare Pol II 1:2,000-10,000 Rata replicativa inalta: In fiecare zi se produc circa 10 miliarde de virioni; genom HIV 9749 nucleotide; FIECARE virion progen poate avea cel putin o mutatie!
12

MATURARE- ASAMBLARE- ELIBERARE

Maturarea-Clivarea precursorilor polipeptidici sub influenta proteazei virale

Eliberare prin inmugurire

13

TINTE PENTRU INHIBAREA REPLICARII HIV

RALTEGRAVIR NRTI NNRTI

Indinavir, Darunavir

MEDICAMENTE ANTIRETROVIRALE INHIBITORI AI FAZEI DE ECLIPSA

Adsorbtie la coreceptorii CCR5

Internalizare prin fuziune

gp41 gp120 Variable loops

CD4

Inhibitori CD4??neaprobati pt utilizarein curs de testare

Inhibitori alosterici ai coreceptorilor CCR5

Inhibitorii Fuziunii

Maraviroc (R5) Vicriviroc (R5)

Fuzeon (Enfuvirtide)

Inhibitorii non-nucleozidici (NNRTI)ai reverstranscriptazei (Rt) virale blocarea sitului catalitic al RT

Analogii nucleozidici (NRTI)-si nucleotidici (ntRTI) inhibitori ai reverstranscriptazei virale

competitie cu nucleoz(t)idele celulare, cu stoparea elongarii lantului de ADN proviral

16

PRINCIPALELE CLASE DE ANTIRETOVIRALE FOLOSITE IN PRACTICA

De prima linie: Analogii nucleozidici inhibitori ai reverstranscriptazei virale (NRTI) - compusi apartinnd clasei dideoxinucleozidelor (substante chimice formate dintr-o baza azotat si un rest glucidic a crui grupare hidroxil din pozitia 3' a fost nlocuit cu un substituent ce nu permite participarea la legturi fosfodisterice). In celulele umane, analogii nucleozidici sunt fosforilati de enzimele celulare. Mecanismele care stau la baza activittii lor sunt: - competitia cu nucleozidele fiziologice la nivelul situsurilor de legare ale reverstranscriptazei si blocarea elongatiei lantului ADN rezultat prin reverstranscriere, datorit imposibilittii participarii la legturi fosfodiesterice cu alte nucleozide-

Inhibitorii nonnucleozidici ai reverstranscriptazei virale (NNRTI) sunt activi direct, fr a necesita fosforilare intracelular-blocheaz direct activitatea enzimei, fixndu-se la nivelul unui "buzunar" hidrofob, situat foarte aproape de situl catalitic al Rt
Inhibitorii proteazei virale (PI)-blocheaza clivarea precursorului gag-pol n:- proteine structurale gag(p24, p17, p7) si pol- enzime virale (RT-aza, intrgraza si proteaza p32 nssi). Sunt medicamente active ca atare-blocheaz maturarea si inhib infectivitatea virionilor progeni att n celulele infectate activ ct si n cele infectate cronic, penetrarea lor intracelular fiind bun (inclusiv n macrofage si celule foliculare dendritice - CFD). De rezerva- Inhibitorii fuziunii (Fuzeon), antagonistii coreceptorilor CCR5 (Maraviroc, vicriviroc) si inhibitorii integrazei (Raltegravir)

17

Strategii terapeutice Combinatii divergente medicamente cu mecanisme distincte de actiune: HAART

Highly
Active AntiRetroviral Therapy
HAART: 2NRTI+ 1 PI 2NRTI+ 1 NNRTI

Highly
Expensive AntiRetroviral Therapy

PROFILAXIA TRANSMITERII MATERNO-FETALE

ACTG 076: AZT in monoterapie schema in 3 parti (vezi slide-ul urmator)
Rata transmiterii 25% (placebo) vs < 8% (AZT)

HIVNET 012 in Uganda - 200 mg nevirapina (NNRTI) per os la inceputul

travaliului + 2 mg/kg oral nevirapina per os nou nascutului in primele 3 zile de la nastere Rata transmiterii 25% (placebo) vs. 13% (NVP)

HAART administrat mamei rata transmiterii <3-5% Cezariana-Scade riscul transmiterii cu 50%, asociata cu tratamentul ARV scade riscul
transmiterii >87% De citit articol PMTC HIV se gaseste pe grup yahoo virusologie la rubrica Files in folder cazuri HIV)

PMTC- preventia transmiterii materno-fetale

Pregnancy
Labor & Delivery

Newborn

ZDV ZDV 100mg po 5x/d Target: In Utero ZDV IV:

Load 2mg/kg 1 mg/kg/hr

2mg/kg q 6

ZDV syrup hr x 6 wk

Target: Intrapartum

Target: Postpartum

PROFILAXIA TRANSMITERII HIV

CAPRISA 004 (The Centre for the AIDS Program of Research in South Africa) - gel vaginal 1% tenofovir, analog nucleotidic inhibitor al Rt
Incidenta HIV : la cele care au primit tenofovir : 5.6 per 100 femei anual La cele care au primit placebo : 9.1 per 100 100 femei anual

Reducerea risc infectie HIV cu 39% / 54% la cele cu aderenta mare

Truvada (tenofovir =analog nucleotidic inhibitor al RT si emtricitabine- analog nucleozidic inhibitor al RT )

reducere risc infectii HIV la MSM in medie cu 44% - 73% (aderenta mare).

EVOLUTIA NATURALA A INFECTIEI HIV: INFECTIA PRIMARA-ASIMPTOMATICA-ARC-SIDA

MONITORIZARE-PARAMETRII: - CLINIC - IMUNOLOGIC (numar celule CD4 +) -VIRUSOLOGIC (incarcare virala= numar copii ARN HIV/ml plasma

1. Infectia primara (sindrom retroviral acut)

Titru viral ridicat > 10 milioane copii ARN HIV/ml Scadere tranzitorie a nr celule CD4+ Infectia preponderenta a macrofagelor- cal troian (tulpini HIV ce utilizeaza coreceptorul CCR5) Simptomatologie nespecifica (febra, oboseala, rash, limfadenopatii,sindrom mononucleosis-like) Fereastra serologica- diagnostic-ARN HIV prin Rt-PCR

2. Infectia asimptomatica- raspuns imun puternic

Virionii provin din celule CD4+ infectate recent, activate, in curs de diviziune
Raspuns citotoxic eficient Productia de novo de limfocite CD4+ compenseaza liza produsa direct de virus si cea CD8 indusa

CD4 ARN HIV

Virusul persista in ganglioni limfatici si celule dendritice ; limfocitele CD4+ de

memorie au ADN proviral integrat

Eficienta rspunsului imun influenteaz nivelul ncrcrii virale - set-point concentratie plasmatic a virusului

Walker BD, Goulder PJ. AIDS. Escape from the immune system. Nature. 2000;407:313-4.

3. ARC-AIDS Related Complex

PATOGENIE HIV
Replicare viral masiv n tesutul limfoid-selectie tulpini CXCR4 (SI) Depletia limfocitelor T CD4+ infectate Hiper-reactivitate imun generalizat

4. SIDA/AIDS
Cresterea masiva a titrului viral la nivelul din infectia primara scaderea nr celulelor CD4+<200/mm3 IO cu risc vital

INFECTIE LT CD4 + ACTIVATE SI REPLICAREA HIV

Depletie masiva a LT CD4 +, mai ales la nivelul mucoaselor(GALT)

Translocatie bacterianaliganzi TLR Reactivare virusuri latente

RI specifice anti HIV umorale si celulare

Productie masiva de proteine specifice HIV tat, nef, gp120

ACTIVARE IMUNA SISTEMICA Epuizarea sistemului imun Declinul capacitatii regenerative celulare Imunosenescenta

Sinteza de citokine proinflamatorii si chemokine

Adrese de Internet utile celor interesati de diagnosticul, tratamentul si prevenirea infectiei HIV
http://hivatis.org/atisnew.html (HIV AIDS Treatment Information Service) http://www.actis.org (AIDS Clinical Trials Information Service) si de aici prin http://www.actis.org/relatedwebs.html o suita de alte situri grupate pe capitole de interes (prevenie, transmitere, vaccinuri, infectia HIV pediatric, reagenti pentru diagnostic, etc.), http://hivinsite.ucsf.edu/InSite extrem de complexa baza de date a Universittii din California, San Francisco, cu statistici de ultim or si informatii despre preventie, transmitere, terapie, cercetri multidisciplinare. http//www.medscape.com/Home/Topics/ID/AIDS.html- o adresa indispensabil tuturor specialistilor implicati n tratarea pacientilor HIV pozitivi. http://www.cdc.gov/std/program- pentru preventia bolilor transmisibile sexual (STD), a TBC si SIDA http://www.atdn.org/access/drugs.html-date actualizate despre medicamentele antiretrovirale

Catedra de Virusologie UMF Carol Davila