RECOLTAREA si TRANSPORTUL PROBELOR PENTRU DIAGNOSTIC MICROBIOLOGIC

Modul de prelevare a produselor patologice destinate examinarii bacteriologice conditioneaza in mod direct eficienta etapelor ulterioare, in final, obtinerea unui rezultat fidel. Reguli generale: - prelevarea trebuie executata de catre medic sau cadru medical mediu, sub directa supraveghere a acestuia, in conditii stricte de asepsie, - prelevatul sa fie obtinut direct din leziune, astfel incat produsul patologic sa contina portiunile cele mai caracteristice ca semnificatie etiologica, - prelevarea sa fie executata inainte de inceperea terapiei cu antibiotice sau la 48h de la intreruperea ei. Pe buletinul de trimitere se va specifica tipul antibioticului si doza aplicata, - e necesar a se recolta cantitati suficiente de produs, pentru a face posibile toate examenele, inclusiv cele indicate ulterior, - fiecare produs trebuie recoltat in recipiente sterile, de unica folosinta sau recipiente de sticla sterile, fara urme de antiseptice, - un recipient va contine un singur produs: proba unica recoltata de la un singur bolnav, - recipientul care contine produsul va fi etichetat: nume, prenume pacient; pavilion, salon; - pentru fiecare proba se intocmeste Buletin de trimitere, in care se va specifica: * Nume , prenume pacient, * Nr. Foaie observatie, * Data nasterii, data internarii, * Pavilion, nr. salon, * diagnosticul clinic, * tipul produsului recoltat, * examenul solicitat, * tratament cu substante antimicrobiene, * data recoltei, ora recoltei, * responsabil de recolta, * parafa si semnatura medicului. - Buletinul de analize contine rubrica cu rezultatul examinarii.
1

- recipientele in care se recolteaza produsele de examinat, sunt: * sterile, inchise etans, * din material transparent( sticla, mat. plastic), * dop, capac ce se deschid prin desurubare, * cu sau fara medii de conservare si transport, * pentru germeni anaerobi, conditii speciale de recolta, cu evitarea contactului cu aerul atmospheric. Reguli particulare de recolta: Hemocultura: - sange recoltat dintr-o vena a plicii cotului, dupa antisepsizarea regiunii, cu alcool etilic 70- 95%, apoi cu tinctura de iod, - momentul optim al recoltei: cu aprox. 1 ora inainte de aparitia frisonului si febrei, - se vor recolta 2- 3 perechi de hemoculturi (fiecare pentru dubla insamantare: aeroba si anaeroba), in decurs de 24 ore, in caz de septicemia si in decurs de 48 ore, in suspiciunea de bacteriemie. - la copiii mici e suficienta o singura recolta, - sangele se recolteaza in conditii de stricta sterilitate de catre medic la patul bolnavului, - volumul de sange este de 10- 20 ml la adulti si de 1- 5 ml la copii sub 5 ani. - inocularea flacoanelor de hemocultura se face in conditii de asigurare a asepsiei dopurilor de cauciuc ale recipientelor , - pentru adulti tratati cu antibiotice se folosesc flacoane FAN aerobanaerob (10 ml sange in fiecare flacon), - pentru adulti netratati cu antibiotic, se folosesc flacoane Standard aerobanaerob ( 10 ml sange in fiecare flacon), - pentru copii tratati si netratati cu antibiotic se folosesc flacoane Pedi FAN ( 1-2 ml sange / flac./ proba). Lichidul cefalorahidian: - recoltarea LCR se executa la patul bolnavului de catre medicul clinician, in conditii de absoluta sterilitate, - cat mai la inceputul bolii, - de preferat inaintea aplicarii tratamentului cu antibiotice, - volumul necesar este de 10- 15 ml pentru adulti si de 2- 10 ml pentru copii, - pentru explorari chimice, se va recolta acelasi volum, dar in eprubeta separate.

 Exsudatele si transsudatele seroaselor (lichide pleurale, peritoneale, articulare): - recoltarea se efectueaza prin punctie cu seringa, in conditii riguroase de asepsie, - necesari 10- 15 ml, in cazul lichidelor pleurale si peritoneale si 4- 5 ml pentru cele articulare, - pentru suspiciunea etiologiei cu flora anaeroba, produsul patologic ramane in seringa impins pana la ambou, fara contact cu aerul atmosferic, inchis ermetic, - este total contraindicata recoltarea florei anaerobe cu tamponul. Secretii purulente din colectii deschise (infectii ale pielii si sructurilor subjacente, plagi de diferite categorii: traumatice, chirurgicale, arse etc.): Procedeul prelevarii este diferit in functie de localizarea leziunii: - in colectiile purulente profunde, neabcedate, prelevarea se face prin punctie dupa antiseptizarea regiunii suprajacente, - in cazul plagilor profunde insuficient drenate, fistulizate, (colectii de la nivelul ganglionilor, osului), este indicatea recoltarea cu seringa, dupa antiseptizare prealabila, - produsul recoltat cat mai aproape de baza leziunii, - se pot trimite in eprubete sterile mese de tifon imbibate cu produs, - leziuni cutanate superficiale inchise (vezicule, pustule, flictene, furuncule) este indicata prelevarea prin punctie cu seringa cu ac hipodermic, dupa antiseptizarea cu alcool si spalare cu ser fiziologic steril, - din leziunile deschise, prelevarea produsului se poate face cu tamponul. - Sunt necesare obligatoriu 2 tampoane: unul pentru etalarea frotiurilor si unul pentru insamantarea mediilor (evitarea contaminarii incrucisate). Secretia oculara: - recoltarea se face cu tamponul steril din fundul de sac conjunctival, - cand pleoapele sunt tumefiate, se va recolta cu tamponul sau cu ansa direct de la nivelul unghiului interior, fara coborarea pleoapei, - in caz de orgelet, prelevarea se face direct, cu aceleasi mijloace. - se recolteaza cu tampoane diferite, din ambii ochi. Secretia otica: - se trage de varful pavilionului extern in sus si posterior, pentru a vizualiza conductul auditiv si indrepta tamponul spre locul leziunii.
3

- necesare 2 tampoane (frotiuri si culturi). Secretia vaginala si uretrala: - prelevarea la barbat se face dimineata, inainte de mictiune, prin expresia posteroanterioara a uretrei si comprimarea glandului, - picatura de secretie care apare din meatul uretral, se preleveaza cu tamponul si se etaleaza pe lama de sticla (pentru examenul direct), - la femeie, prelevarea secretiilor vaginale si uretrale se face in primele 10 zile dupa ciclul menstrual, pe masa ginecologica; folosirea valvelor sterile este obligatorie, - sunt necesare 2 tampoane : pentru frotiuri si culture, - la fetite, secretiile vulvo- vaginale se recolteaza cu tampon steril. Urocultura: - in prealabil se face o toaleta a organelor genitale exterioare, cu apa si sapun, stergerea cu tampon de vata imbibat in solutie salina sterila, - prelevarea se face din jet mijlociu, direct in vas steril, cu gatul larg, - volumul necesar unei examinari uzuale este de 10- 15 ml. - in prezenta unei simptomatologii caracteristice, se recolteaza 1- 2 urini la interval de 24 ore, - la bolnavi asimptomatici sunt necesare 2-3 probe de urina repetate, - numai obtinerea aceluiasi rezultat de mai multe ori are semnificatie etiologica. - in infectia gonococica recoltarea urinei se face in aceleasi conditii, cu mentiunea ca se retine primul jet de urina, - urocultura in leptospiroza: se recolteaza urina dupa prima saptamana de boala, in conditii aseptice, dupa o administrare timp de 24- 48 ore de regim alimentar alcalinizant, - urocultura in tuberculoza renala: prelevatul de electie il constituie urina recoltata dimineata, din jetul mijlociu, timp de 3 zile consecutiv. Pana la obtinerea celei de a 3- a probe, urina se pastreaza la frigider. Exsudatul naso- faringian: - dimineata pe nemancate (in absenta unui gargarism cu antiseptice), - sau, cel putin dupa 4 ore de la ingerarea de alimente, - persoana, pe scaun, in pozitie sezanda, cu capul aplecat pe spate, cu fata indreptata spre o sursa de lumina puternica, - se deschide gura la maximum, se apasa limba, se vizualizeaza peretele posterior al faringelui, amigdalele, pilierii si valul paltin,

- recoltarea se efectueaza cu tampoane de vata sterile, insistandu- se asupra zonelor cu eritem, punctelor de puroi, secretiei mucopurulente, pseudomembranelor, - se recolteaza cel putin 2 tampoane (frotiu Gram pentru diagnosticul asocierii anaerobe fuso- spirilare, Angina Plaut- Vincent)), - in caz de suspiciune de difterie, se recolteaza 3 tampoane faringiene si 2 tampoane nazale, - daca leziunea este profunda, in fosele nazale, recoltarea secretiilor este efectuata de catre specialist ORL, prin rinoscopie anterioara, cu speculul nasal, - este indicat ca pe buletinul de trimitere sa se specifice examenul solicitat, Sputa si aspiratul bronsic: - prelevarea sputei se efectueaza din expectoratia de dimineata, cand pacientul isi face toaleta bronsiilor, - in prealabil, bolnavul va efectua o gargara cu ser fiziologic, - se va insista asupra obtinerii sputei propriu-zise si nu a salivei sau secretiilor nazale, - produsul este prelevat intr-un recoltor steril, de unica folosinta, din materil plastic transparent, cu capac etans, ce se deschide prin desurubare, - la copiii sub 2 ani, care inghit sputa, prelevarea se efectueaza prin spalatura gastrica, - metoda fidela dar laborioasa, care necesita servicii specilizate si aparatura deosebita: bronhoscopia, consta in recoltarea spalaturii bronsice, prin lumenul bronhoscopului, indreptat direct spre locul leziunii, - recoltoarele trebuie etichetate cu nume, prenume, pav., salon, data si ora recoltei. - prelevarea sputei in tuberculoza pulmonara : se face prin expectoratie spontana sau provocata, procedandu- se la recolte repetate, cu mentinerea intre timp a produsului la frigider. Coprocultura: - recoltarea materiilor fecale se realizeaza in recipiente speciale (coprorecoltoare) din material plastic transparent, sterile, cu capac etans, indepartat prin desurubare, - produsul care permite cele mai multe izolari este scaunul emis spontan, proaspat, - la bolnavii cu scaune diareice, in perioada de stare, se recolteaza cu lopetica recoltorului portiuni de scun cu mucus, sange, sau esantioane din 2- 3 locuri diferite,
5

- la bolnavii cronici, purtatori, persoane nespitalizate, scaunul va fi provocat prin purgativ salin ( sulfat de Na si Mg), - pentru controlul purtatorilor de bacilli tifici, prelevarea se face timp de 3 zile consecutiv, dupa administrare unica de purgativ, - in cazul purtatorilor cronici de bacilli dizenterici, se folosesc sonde Nelaton nr. 16- 18, - conservare in mediu Cary- Blair sau transport imediat, Lichid gastric, lichid duodenal si bila: - recoltarea lichidului gastric se efectueaza dupa tehnica cunoscuta cu urmatoarele precautii: neadministrarea pranzului de proba, sterilizarea sondei, gargara prelungita cu apa oxigenata, - sucul gastric se recolteaza dimineata pe nemancate, dupa 8- 12 ore de la ultima masa, - se introduce sonda Foucher si sucul gastric se obtine prin sifonare in recipient steril, - tubajul duodenal se executa dimineata, pe nemancate, (8- 10 ore de post), - bolnavul in decubit dorsal, - se introduce lent sonda Einhorn, pana cand reperul 45 apare in dreptul arcadei dentare (in stomac dupa aprox. 45 min), - se schimba pozitia bolnavului in decubit lateral drept, se solicita bolnavului sa inghita sonda pana la diviziunea 65( atingerea duodenului), - se aspira cu seringa de 10 ml, - primul continut se arunca (suc gastric), - se aspira lichid galben, consistent= lichid duodenal, - dupa 10 min se scurge lichid galben- portocaliu= bila A; dupa alte 20 min, se scurge lichid castaniu= bila B, Probe de exereza chirurgicala si necroptice: - prelevarea organelor de exereza este de competenta exclusiva a specialistului chirurg, - in caz de necropsie, se recolteaza sange din inima, organe, tesuturi si colectii purulente, cu instrumentar steril, de uz strict in scop bacteriol. - recoltarea de puroi, lichide pleurale, peritoneale, se executa cu seringa si se transvazeaza in recipient steril, - nu se recomanda recolta cu tamponul.

TRANSPORTUL PROBELOR catre laboratorul de microbiologie se efectueaza in cel mai scurt timp posibil de la momentul recoltei, - se efectueaza in recipiente sterile, - insotite de buletine de analiza corect completate, - Lcr si hemoculturile se transporta imediat, la temperatura corpului,constituind urgente majore, - in suspiciune de flora anaeroba, produsul se transporta in seringa, cu evitarea contactului cu aerul atmospheric, in cel mai scurt timp, - se folosesc la nevoie medii de conservare si transport: Stuart, Amies, Cary- Blair. - se efectueaza doar de catre persoane instruite in acest scop, - timpul maxim admis de la recoltarea produsului este de 1 ora, dupa care, rezultatul este compromis.