CURS 2 / 3 octombrie 2011

Experimentele de identificare si descriere a materialului genetic la Ek au demonstrat rolul genetic al ADN:

ADN este molecula ereditatii

Principiul transformarii genetice si transferul experimental de material genetic intre specii diferite
stau la baza unei BIOTEHNOLOGII numita:

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

CURS 2 - GENETICA MD 2

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT (era ingineriei genetice)

CURS 2 GENETICA MD

ADN recombinant
(combinatii noi de ADN):
este realizat in vitro;

1.
- este format din secvente ADN de la specii diferite; diferite;

2.
- se utizeaza enzime de restrictie si ligaze; ligaze;

CURS 2 GENETICA MD

ADN recombinant (rDNA):

este realizat in vitro;

3.
- ADN-ul artificial creat este introdus in celule vii ADNin culturi celulare (E.coli, Drojdia de bere, celule de mamifer), in zigoti, in celule stem embrionare cu scopul de a transfera caractere noi, peste barierele naturale, celulelor sau organismelor.

CURS 2 - GENETICA MD

ADN recombinant:

este realizat in vitro;

4.
Trebuie preluat de celula gazda intr-o forma in intrcare poate fi replicat si exprimat; din acest motiv, este incorporat intr-un vector (molecula naturala intrde ADN utilizata pentru transportul secventelor ADN exogen intr-o celula gazda, capabila sa se intrreplice independent, formand clone moleculare). moleculare).

CURS 2 - GENETICA MD

ADN uman donor Fragmentare cu enzime de restrictie

fragmente

Mixare
Unirea fragmentelor ADN cu vectorul folosind LIGAZE

ADN bacterian

Molecule de ADN recombinant

Introducerea molec. ADN in celula bacteriana

Celula se divide si replica moleculele de ADN recombinant

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT etape

CLONA

CURS 2 - GENETICA MD

TEHNOLOGIA

ADN RECOMBINANT

APLICATII PRACTICE IN

MEDICINA
proteine terapeutice vaccinuri medicamente prin sinteza bacteriana animale transgenice* animale knock-out* (pentru studiul bolilor ereditare umane)

CURS 2 - GENETICA MD

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

ANIMAL TRANSGENIC
organism transformat genetic prin introducerea in momentul fertilizarii a unei noi informatii genetice (gena); - animalul transgenic exprima fenotipic noua informatie genetica si o transmite descendentilor sai.

CURS 2 - GENETICA MD

TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT

ANIMAL KNOCK-OUT NIMAL KNOCK animal model de laborator, obtinut prin introducerea in celulele stem embrionare a unei informatii genetice (gena) modificata (se inactiveaza expresia acelei gene).

CURS 2 - GENETICA MD

10

Gena pt.rezistenta la antibiotice

E.coli cromozom plasmid

ADN uman

ADN bacterian

Unirea fragmentelor ADN de la specii diferite cu ligaze

Fragmentare cu enzime de restrictie

Plasmide cu fragmente de ADN uman Celula bacteriana preia plasmidul din mediul celular E.coli fara plasmid TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT Gena insulinei CURS 2 - GENETICA MD Gena pt. sinteza ARNr

11

Obtinerea animalelor transgenice

A D N

Oita Tracy animal transgenic care produce alpha-antitripsina umana

CURS 2 - GENETICA MD

Beltsville pig animal transgenic care produce hormonul de 12 crestere uman

CUM ESTE ORGANIZAT ADN PENTRU A INDEPLINI URMATOARELE FUNCTII?

1.Stocarea informatiei genetice 2.Exprimarea informatiei genetice 3.Transmiterea informatiei genetice 4.Variatia informatiei genetice

CURS 2 - GENETICA MD

13

ADN

Transcriptie Translatie

ARNm
proteina

CURS 1 - A nu se copia sau distribui fara copyright

GENETICA MD

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 1 Evenimente care au precedat descoperirea structurii ADN in 1953

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright

GENETICA - FIM

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 2 Evenimente care au precedat descoperirea structurii ADN in 1953

CURS 2 - A nu se copia sau distribui fara copyright

GENETICA - FIM

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 3 1952

E.CHARGAFF arata ca, indiferent de specie: Totalul purinelor = totalul pirimidinelor A+G=C+T A/T=1 si G/C=1 principiul echivalentei

Raportul de asimetrie A+T ESTE DIFERIT DE 1 ! G+C *este diferit de la o specie la alta, dar caracteristic pentru fiecare specie. La specia CURS 2 - GENETICA umana este ~ 1,6.
MD

17

PRINCIPIUL ECHIVALENTEI regula lui CHARGAFF

Proportia relativa (%) a bazelor azotate

Relative Proportions (%) of Bases in DNA A 30.9 28.8 29.3 32.8 27.3 24.7 T 29.4 29.2 29.3 32.1 27.1 32.9 23.6 G 19.9 20.5 20.5 17.7 22.7 18.7 26.0

Organism OM Human Chicken Gaina Grasshopper Lacusta

Arici Urchin Sea de mare Grau Wheat

C 19.8 21.5 20.7 17.3 22.8 17.1 25.7

18

Yeast Drojdia de bere 31.3 E.E.coli coli

CURS 2 - GENETICA MD

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 4 1952/1953

M.WILKINS si R.FRANKLIN bombardeaza molec. de ADN cu raze X folosind tehnica difractiei cu raze X. Concluzia: Molecula ADN are o structura regulata, care se repeta, helicala.

CURS 2 - GENETICA MD

19

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 5

1953 F.CRICK si J.WATSON Propun un model al structurii fizice si chimice molec. ADN (Double Helix) 1962 PREMIUL NOBEL in MEDICINA

CURS 2 - GENETICA MD

20

DESCOPERIREA STRUCTURII ADN - 6 F.CRICK si J.WATSON

1953

Folosind datele existente despre structura moleculei ADN, propun un model al structurii fizice si chimice a molec. ADN publicat in lucrarea lor intitulata Double Helix (Dubla spirala sau Elicea vietii).

CARACTERISTICILE MODELULUI: molec.ADN este formata din 2 lanturi polinucleotidice legate intre ele prin leg.de H care se formeaza la nivelul bazelor azotate. Imperecherile intre baze se fac pe baza de complementaritate. Diametrul helixului este de 2 nm.
CURS 2 - GENETICA MD 21

CARACTERISTICILE MODELULUI:
catenele se infasoara una in jurul celeilalte printr-o rotatie spre dreapta (spiralizare dextrogira); intre perechile de baze succesive exista o distanta de 0,34 nm, iar un tur complet de spira (3600) are 3,4 nm (pasul spiralei), deci 10 b.a. /tur de spira; spatiul dintre coloana glucido-fosforica a unei catene si a celeilalte catene nu este uniform ocupat de b.a. atfel ca, prin rasucirea catenelor apar depresiuni (santuri) inegale ca marime; la nivelul depresiunii mari se fixeaza factorii proteici implicati in transcriptie iar in depresiunea mica se fixeaza histonele.
CURS 2 - GENETICA MD 22

STRUCTURA MOLECULEI ADN

CURS 2 GENETICA MD

23

DEZOXIRIBONUCLEOTID
Unitatea structurala a moleculei ADN este dezoxiribonucleotidul, format din trei elemente distincte: 1. Baza azotata 2. Pentoza 3. Grup fosfat
BAZA

CURS 2 GENETICA MD

24

STRUCTURA MOLECULEI ADN

BAZA

BAZA

CURS 2 - GENETICA MD

Grupare fosforica dezoxiriboza

25

STRUCTURA MOLECULEI ADN

Punti de hidrogen
Capatul 5 Capatul 3 3

Capatul 3
CURS 2 GENETICA MD

Capatul 5
26

B-ADN
CURS 2 GENETICA MD forma clasica descrisa de

Watson&Crick

27

MODELUL WATSON&CRICK

A fost acceptat unanim

CURS 2 GENETICA MD

28

ADN - GENE - CROMOZOMI

CROMOZOM NUCLEU GENE

CURS 2 GENETICA MD

29

Molecula ADN este flexibila, dinamica.

ALTERNATIVE STRUCTURALE ALE MOLECULEI ADN:

(difera prin tipul de spiralizare spre dreapta sau stanga, inclinarea bazelor fata de ax, modificarea pasului elicei si numarul de baze / tura de elice).

1.B-ADN (conformatia biologica principala, caracteristica celulelor vii) 2.A-ADN 3.Z-ADN ( ax glucido-fosforic in zig-zag)
CURS 2 - GENETICA MD 30

Sant mare Sant mic

Sant mare

Sant mic

Sant

A-ADN Z-ADN
FORME DEXTROGIRE
CURS 2 - GENETICA MD

B-ADN

FORMA LEVOGIRA
31

Tranzitia conformationala a moleculei de ADN

A-ADN
CURS 2 - GENETICA MD

B-ADN
32

FORME STRUCTURALE ALE ADN

B-ADN A-ADN Z-ADN

CURS 2 - GENETICA MD

Tatuaje biologice

34