Lucrri practice Fiziologie II

SimHEART. STUDIUL PROPRIETILOR FUNDAMETALE ALE INIMII

1. ASPECTE TEORETICE
SimHEART este un program de simulare pe calculator a experimentelor efectuate pe inima izolat de obolan, prin metoda Langendorff, privind proprietile fundamentale ale inimii: automatismul i ritmicitatea (cronotropismul); excitabilitatea (batmotropismul); conductibilitatea (dromotropismul); contractilitatea (inotropismul); tonusul muscular (tonotropismul). Programul permite nregistrarea grafic a variaiilor de presiune din ventriculul stng i obinerea unei cardiomecanograme a crei analiz este efectuat cu ajutorul parametrilor de frecven, amplitudine i poziie fa de linia diastolic. Modificarea specific a acestor parametri permite evaluarea efectelor diverselor substane asupra proprietilor inimii. Variaiile de frecven - semnific efecte asupra automatismului, cronotropismului, batmotropismului i dromotropismului: - creterea frecvenei efect pozitiv - scderea frecvenei efect negativ Variaiile de amplitudine - semnific efecte asupra inotropismului: - creterea amplitudinii efect pozitiv - scderea amplitudinii efect negativ Modificarea poziiei graficului fa de linia diastolic - semnific efectele asupra tonotropismului: - supradenivelarea efect pozitiv - subdenivelarea efect negativ Substanele introduse n experimentul SimHEART sunt: Epinefrina (EPI) - mediator al simpaticului, agonist 1 - adrenergic; Acetilcolina (ACH) - mediator al parasimpaticului, agonist M2 colinergic; Propranolol (PRO) - blocant al receptorilor - adrenergici; Fentolamin (PHE) - blocant al receptorilor - adrenergici; Atropin (ATR) - blocant al receptorilor colinergici; Verapamil (VER) - blocant al canalelor de Ca2+ membranare.

Metoda Langendorff permite introducerea simultan n experiment a substanelor cu efecte antagonice asupra proprietilor inimii, n acest sens putnd fi studiate dou mecanisme: inhibiia competitiv pentru acelai receptor - Epinefrin/Propranolol pentru receptorii 1 - adrenergici - Acetilcolin/Atropin pentru receptorii M2 colinergici antagonismul funcional pentru acelai mesager intracelular - Epinefrin/Verapamil pentru Ca2+ intracelular - Epinefrin/Acetilcolin AMPc

Lucrri practice Fiziologie II

2. ORGANIZAREA LABORATORULUI SimHEART

Laboratorul SimHEART cuprinde componentele prezentate n Fig.1: Sistemul de fixare i perfuzare a inimii izolate - inima izolat i canulat la nivelul aortei, este fixat de un sistem de perfuzare permanent cu soluie Krebs oxigenat, cu debit constant de 10 ml/min i la temperatura de 37C. Prin aceeai canul ajung n inima izolat substanele utilizate n experiment. Traductorul de presiune - este conectat cu ventriculul stng prin intermediul unui cateter. Traductorul nregistreaz variaiile de presiune din ventriculul stng, pe care le amplific i n acelai timp le transform n semnale electrice, redate grafic cu ajutorul sistemului inscriptor. Perfuzorul - prezint dou locuri de plasare a eprubetelor. Cnd se utilizeaz consecutiv dou substane, prima eprubet se plaseaz ntotdeauna n locul din dreapta. Fiecare loc permite stabilirea debitului substanei (l/min) i are trei poziii de funcionare: pregtire (activare buton sgeat vertical bec culoare verde), activare (activare buton cu sgeat orizontal), oprire (activare buton STOP). Pentru stabilirea debitului de perfuzie a substanei (Ds), trebuie cunoscute molaritatea iniial (Mi) i molaritatea final dorit (Mf) a soluiei la nivelul inimii, tiind c aceasta este perfuzat continuu cu o soluie Krebs cu debit constant de 10 ml/min = 104 l/min (Dc). Mi x Ds = Mf x Dc

Fig.1. Organizarea Laboratorului SimHEART

Lucrri practice Fiziologie II Dac se pornete de la o soluie iniial cu Mi = 10-3M, i se modific Ds putem obine urmtoarele valori Mf, respectnd formula: Mf = Mi x Ds x 10-4 Mi 10-3 Ds (l/min) 1 10 100 Mf 10-7 10-6 10-5

Stativul cu eprubete - cuprinde substanele ce pot fi utilizate pentru experiment n diverse concentraii iniiale (Mi). Pentru a uura munca n laborator toate substanele utilizate au concentraia iniial de 10-3 M. Sistemul de inscripionare - permite nregistrarea n timp real a modificrilor induse de utilizarea diverselor substane. Prezint un sistem de etalonare a nregistrrii ca vitez (Speed - cm/s) i amplitudine (Resolution - mV/Div), precum i un sistem de schimbare a culorii peniei (Pen Color) ce poate fi utilizat atunci cnd se studiaz interaciunea ntre dou substane. Cu autorul butonului POWER On/Off sistemul de inscripionare se pornete cnd se nregistreaz efectele unei substane i se oprete cnd inima trebuie splat de substanele introduse n experiment. Cu ajutorul cursorului vertical plasat la marginea din dreapta a sistemului de inscripionare se stabilete poziia liniei diastolice a nregistrrii.

3. PREGTIREA EXPERIMENTULUI SimHEART

OSCILOSCOP - se etaloneaz nregistrarea pentru - Vitez (speed) - 1 cm/sec - Amplitudine (resolution) - 5 mV/div STATIV EPRUBETE - se alege eprubeta cu soluia dorit, n concentraie de 10-3M i se plaseaz n locul din dreapta al perfuzorului; - dac se utilizeaz i a doua substan aceasta se plaseaz n locul din stnga al perfuzorului; - se stabilete debitul pentru fiecare substan conform protocolului 1 l/min 10 l/min 100 l/min - se pregtete perfuzorul (lumina roie lumin verde). NREGISTRAREA - se alege culoarea dorit pentru inscriptor (albastru, negru, rou sau galben); - se pornete osciloscopul (POWER/ON); - la nceputul fiecrei etape trebuie nregistrat un scurt traseu de repaus; - se activeaz perfuzorul (butonul cu sgeat vertical) cu substana dorit; - se ateapt obinerea efectului i stabilizarea traseului; - se oprete OBLIGATORIU administrarea substanei (STOP) i nregistrarea traseului (POWER/OFF). Aceast manevr se repet dup fiecare etap deoarece soluia Krebs care perfuzeaz permanent inima izolat trebuie s spele substana utilizat.

Lucrri practice Fiziologie II ANALIZA TRASEULUI - se efectueaz imediat dup fiecare experiment: - se activeaz tasta ANALYSIS; - cu ajutorul butonului din stnga al mouse-ului care se ine apsat se trage de nregistrare pn la segmentul dorit; - se determin FC (nr. vrfuri pe 5 diviziunix24) i amplitudinea (10 mmHg/diviziune); - se noteaz valorile obinute n tabelul corespunztor, precum i observaiile privind efectele asupra proprietilor inimii, precum i interaciunea dintre substane; - se copiaz pe caiet graficele obinute i se marcheaz momentul administrrii substanei, precum i molaritatea utilizat (Mf); - pentru revenirea la etapa de nregistrarea se activeaz tasta Lab; - se completeaz tabelul cu concluziile finale i se rspunde la ntrebri.

4. ETAPELE EXPERIMENTULUI SimHEART

4.1. ACIUNEA EPINEFRINEI ASUPRA PROPRIETILOR INIMII I INTERACIUNEA CU ALTE SUBSTANE 4.1.1. ACIUNEA EPINEFRINEI ASUPRA PROPRIETILOR INIMII PRINCIPIU: se administreaz EPI n trei doze diferite i se determin curba doz-efect. Efectele epinefrinei asupra proprietilor inimii pot fi observate n Fig.2. EPI 10-3 M cu debit 1 l/min 10-7 M Amplitudine Condiii FC (b/min) (mm Hg) REPAUS EPI 10-7 M EPI 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M Amplitudine Condiii FC (b/min) (mm Hg) REPAUS EPI 10-6 M EPI 10-3 M cu debit 100 l/min 10-5 M Condiii FC Amplitudine (b/min) (mm Hg) REPAUS EPI 10-5 M Denivelare (mm Hg) -

Denivelare (mm Hg) -

Denivelare (mm Hg) -

INTERPRETARE: epinefrina stimuleaz toate proprietile inimii direct proporional cu doza administrat; stimuleaz proteina Gs, cuplat cu receptorii 1 adrenergici, determin creterea AMPc (prin activarea adenilat ciclazei) i activarea unui influx de Ca2+ prin canale membranare operate de ligand.

4.1.2. INTERACIUNEA EPINEFRINEI CU ALTE SUBSTANE PRINCIPIU: se administreaz EPI n doz de 10-7 M, se ateapt stabilizarea traseului i apoi fr a opri administrarea EPI se adaug n etape Propranolol (PRO) (Fig.2), Fentolamin (PHE) (Fig.3) i Verapamil (VER) (Fig.4) n doze de 10-6 M. LOC dreapta: EPI 10-3 M cu debit 1 l/min 10-7 M LOC stnga: PRO 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M 4

Lucrri practice Fiziologie II Condiii REPAUS EPI 10-7 M PRO 10-6 M FC (b/min) Amplitudine (mm Hg) Denivelare (mm Hg) -

Fig.2. Efectele Propranololului asupra modificrilor induse de Epinefrin inhibiie competitiv INTERPRETARE: Propranololul inhib efectele epinefrinei prin mecanism de inhibiie competitiv pe receptorul 1 - adrenergic LOC dreapta: EPI 10-3 M cu debit 1 l/min 10-7 M LOC stnga: PHE 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M Condiii FC Amplitudine (mm Denivelare (b/min) Hg) (mm Hg) REPAUS EPI 10-7 M PHE 10-6 M

Fig.3. Lipsa de modificare a efectelor induse de Epinefrin la administrarea de Fentolamin absena receptorilor - adrenergici INTERPRETARE: Fentolamina nu modific efectele epinefrinei deoarece fibra miocardic nu exprim receptori -adrenergici

Lucrri practice Fiziologie II LOC dreapta: EPI 10-3 M cu debit 1 l/min 10-7 M LOC stnga: VER 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M Condiii FC Amplitudine Denivelare (b/min) (mm Hg) (mm Hg) REPAUS -7 EPI 10 M VER 10-6 M

Fig.4. Efectele Verapamilului asupra modificrilor induse de Epinefrin - antagonism funcional INTERPRETARE: Verapamilul inhib efectele epinefrinei prin antagonism funcional (Epinefrina crete Ca2+ intracelular, iar Verapamilul scade Ca2+ intracelular). 4.2. ACIUNEA ACETILCOLINEI ASUPRA PROPRIETILOR INIMII I INTERACIUNEA CU ALTE SUBSTANE PRINCIPIU: se administreaz acetilcolin (ACH) n doz de 10-6 M, se ateapt stabilizarea traseului i apoi fr a opri administrarea ACH se adaug n etape epinefrin (EPI) (Fig. 5) i apoi atropin (ATR) (Fig. 6) n doze de 10-6 M LOC dreapta: ACH 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M LOC stnga: EPI 10-3 M cu debit 1 l/min 10-7 M Condiii FC Amplitudine Denivelare (b/min) (mm Hg) (mm Hg) REPAUS -6 ACH 10 M EPI 10-7 M

Fig.5. Efectele Acetilcolinei asupra proprietilor inimii i interaciunea cu Epinefrina antagonism funcional 6

Lucrri practice Fiziologie II INTERPRETARE: acetilcolina inhib toate proprietile fundamentale ale inimii, cu excepia tonotropismului. Epinefrina inhib efectele acetilcolinei prin antagonism funcional (epinefrina crete AMPc i Ca2+ intracelular, iar acetilcolina scade AMPc i Ca2+ intracelular). Acetilcolina activeaz proteina Gi, cuplat cu receptorii M2 colinergici, determin scderea AMPc intracelular (prin inhibiia adenilat ciclazei) i activarea unui eflux de K+ prin canale membranare operate de ligand. LOC dreapta: ACH 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M LOC stnga: ATR 10-3 M cu debit 10 l/min 10-6 M Condiii FC Amplitudine Denivelare (b/min) (mm Hg) (mm Hg) REPAUS -6 ACH 10 M ATR 10-6 M

Fig.6. Efectele Acetilcolinei asupra proprietilor inimii i interaciunea cu Atropina inhibiie competitiv BIBLIOGRAFIE 1. Braunwald E. Heart Disease: A Textbook for Cardiovascular Medicine. Ed. WB Saunders Co, 1992. 2. Chaitman BR. Exercise Stress Testing in Braunwald-Heart Disease. A Textbook for Cardiovascular Medicine. 6th Edition, 2001. 3. Noveanu L, Mihala G. Fiziologie practic - Aparatul Cardiovascular. Aparatul Respirator. Ed. Mirton, 2005.

TESTE (UN SINGUR RSPUNS CORECT)

1. Care dintre proprietile fundamentale ale fibrei miocardice de lucru pot fi studiate cu ajutorul metodei Langendorff: A. Cronotropismul B. Batmotropismul C. Inotropismul D. Toate afirmaiile sun corecte 2. Prin metoda SimHEART sunt redate grafic: A. Activitatea electric a inimii izolate de obolan B. Activitatea contractil a ventriculilor C. Variaia de presiune din ventriculul stng D. Variaia de presiune din aort 3. Modificarea amplitudinii mecanogramei reflect efectele substanelor asupra: A. Cronotropismului B. Batmotropismului 7

Lucrri practice Fiziologie II C. D. Dromotropismului Nici un rspuns nu este corect

4. Molaritatea final a unei soluii este 10-6M dac: A. Mi=10-3M, Dk=10 ml/min, Ds=1 l/min B. Mi=10-3M, Dk=104 l/min, Ds=1 l/min C. Mi=10-3M, Dk=104 l/min, Ds=10 l/min D. Mi=10-3M, Dk=10 ml/min, Ds=100 l/min 5. Care dintre urmtoarele substane au un efect cronotrop pozitiv: A. Epinefrina B. Acetilcolina C. Atropina D. Verapamil 6. Inhibiia competitiv apare ntre: A. Epinefrin i Acetilcolin B. Epinefrin i Propranolol C. Acetilcolin i Verapamil D. Epinefrin i Verapamil 7. Administrarea de fentolamin nu influeneaz efectele epinefrinei deoarece miocardul nu exprim receptori: A. 1 - adrenergici B. 2 - adrenergici C. - adrenergici D. M2 - muscarinici 8. Efectele stimulatoare ale epinefrinei se realizeaz prin: A. Creterea influxului de Ca2+ prin canale voltaj-dependente B. Activarea proteinei Gs C. Activarea proteinei Gi D. Scderea AMPc 9. Efectele inhibitoare ale acetilcolinei se realizeaz prin: A. Aciune pe receptori M2 - muscarinici cuplai cu proteina Gi B. Inhibiia adenilat-ciclazei C. Activarea canalelor de K+ membranare operate de ligand D. Prin toate mecanismele menionate 10. Scderea Ca2+ citosolic este un mecanism comun pentru aciunea urmtoarelor substane: A. Verapamil B. Acetilcolin C. Propranolol D. Pentru toate substanele enumerate RSPUNSURI: 1-D, 2-C, 3-D, 4-C, 5-A, 6-B, 7-C, 8-B, 9-D, 10-D