Explorați Cărți electronice
Categorii
Explorați Cărți audio
Categorii
Explorați Reviste
Categorii
Explorați Documente
Categorii
Etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor . Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm. COLORANTUL HISTOLOGIC Substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! COLORANI - grupri cromofore purttoare de culoare - grupri auxocrome capacitatea de a colora GRUPARILE AUXOCROME 1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul 2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului. CLASIFICAREA COLORANILOR - natura lor - caracterele chimice Dup natura lor Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil CLASIFICAREA COLORANILOR Dupa caracterele chimice CLASIFICAREA COLORANILOR Dupa caracterele chimice Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ Dupa caracterele chimice Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie MECANISMUL COLORRII PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen. MECANISMUL COLORRII
Coloraii i colorani
In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 acide 2 bazice 3 neutre MECANISMUL COLORRII Colorant bazic substrat (=proteina) acid (ex: hemalaunul) Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou ETAPELE COLORRII METODE DE COLORARE 1.In funcie de momentul colorrii 2. Dupa nr. de coloranti utilizai 3. Dup mecanism 4. Dup metoda de obinere a coloraiei optime 5. In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului Momentul colorrii Numr de colorani a Simple folosete un singur colorant b Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. Succesiv ii. Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan Mecanism - direct simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare. Metoda de obinere a coloraiei optime - progresive prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare - regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl). Rezultatul colorrii i culoarea colorantului - Ortocromatic substratul se coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului - Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului IMPREGNARI METALICE PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani. - cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg. IMPREGNARE ARGENTIC - folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos.
Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru. COLORAIA HEMALAUN EOZIN 2 colorani: 1 - hemalaunul colorant bazic 2 - eozina colorant acid REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu COLORAIA HEMALAUN EOZINA CU ALBASTRU DE METIL - coloratie tricrom 1. hemalaun 2. eozina 3. albastru de metil REZULTATE 1. Nuclei violet 2. Citoplasma albastru cenusiu 3. Fibrele de colagen albastru intens COLORATIA VAN GIESON - coloratie tricrom 1. hematoxilina feric 2. acidul picric 3. fuxina acid REZULTATE 1. Nuclei negri 2. Citoplasma galben 3. Fibre de colagen rou intens COLORATIA MASSON - coloratie tricrom 1. hematoxilin feric 2. soluia colorant A ce conine fuxin acid 3. soluia colorant B ce conine albastru de anilin REZULTATE 1. Nuclei negru 2. Citoplasma rou violet deschis 3 Fibrele de colagen albastru intens COLORATIA MALLORY Se utilizeaz : 1. fuxin acid 2 albastru Mallory ( contine albastru de anilina i orange G ) REZULTATE 1. Nuclei - rou intens 2. Citoplasma roie
3. Fibre de colagen i reticulin albastru 4. esut muscular neted - violet 5. esut muscular striat - rou portocaliu COLORATIA AZAN - azocarmin C - albastru Heidenhein , cu anilin i orange G REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben COLORATII CITOLOGICE - utilizate pentru evidenierea anumitor organite celulare METODA CAJAL DA FANO - evidenierea complexului Golgi REZULTATE n Nuclei necolorai n Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr n Citoplasma aurie METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD - evidenierea mitocondriilor REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER - evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE 1. Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv - IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu a. Rezorcin fuxina - albastre b. Orcein cafeniu - roscate
TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR METODA HEIDENHEIN (cu hematoxilina ferica) - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate. Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos - metoda Nissl - impregnare argentic - Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu