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Diferentes tipos celulares estrutura e funo Pensamento inicial: genes seletivamente perdidos quando a clula se diferenciava
Ovelha Dolly
Diferenciao celular
http://www.pucrs.br/fabio/histologia/atl asvirtual/maxim/57a7leg.htm
http://psych.umb.edu/cogsci/Site/Cogni tive_Science_Minor.html
clulas
Algumas protenas so abundantes nas clulas especializadas onde atuam, mas no em outras clulas (hemoglobina) Diferena nos tipos de mRNA subestima a variao total de diferenas no padro de produo de protenas modificaes ps-traducionais
Alterao da expresso gnica em resposta a sinais externos (hormnios glicocorticides) Diferentes tipos celulares respondem de maneiras diversas ao mesmo sinal extracelular
Para a maioria dos genes: controle transcricional + importante (evita sntese desnecessria)
Peter J. Russell, iGenetics: Copyright Pearson Education, Inc., publishing as Benjamin Cummings.
Promotor
A iniciao da transcrio em eucariotos envolve um grande nmero de fatores (fatores de transcrio - FT) Os FT so necessrios para a iniciao e os principais responsveis pelo reconhecimento do promotor Todos os promotores da RNA pol II tem elementos de seqncia prximos ao ponto de incio
ligao do aparato basal determinao do stio de iniciao
Genes housekeeping: tem elementos de seqncia a montante que so reconhecidos por fatores ubquos Reforadores (enhancers): a vrios Kb distante do promotor
Alvos para regulao tecido-especfica e temporal
A transcrio eucaritica est nas maioria das vezes sob regulao positiva
Tamanho do genoma Mdia de 5 stios regulatrios por gene em organismos multicelulares 30000-35000 genes regulados - ???
Promotor
Promotor
Elementos reguladores
Procariotos x Eucariotos
Fatores de transcrio
Reconhecem seqncias reguladoras presentes nos promotores e reforadores (enhancers) dos genes Podem ser de dois tipos:
Fatores gerais necessrios para a expresso de todos os genes transcritos pela RNA pol II Fatores especficos responsveis pela expresso de protenas clula-especficas (ativadores, co-ativadores, repressores e corepressores)
TBP se liga cavidade menor do DNA (domnio Cterminal DNA, N-terminal interao com protenas
Ligao de TBP ao DNA inconsistente com a presena de nucleossomos Ligao de TBP ao DNA-- associao ao DNA RNApolII + fatores
TATAbox: - Ocorre na maioria dos genes - Principal regio promotora da transcrio - Stio primrio de adeso dos fatores de transcrio + TBP (TATA-Binding Protein)
Fatores de Transcrio (FT) - Se ligam a elementos reguladores nos promotores Modificam a taxa de transcrio No ocorre incio de transcrio na ausncia de protenas acessrias.
RNApolII A ligao de TFIID ao TATA box o primeiro passo da iniciao da transcrio em eucariotos
Fatores especficos
Elementos de seqncia (curtos): eficincia e especificidade de reconhecimento do promotor. Ex: genes Hsp Vrios elementos de resposta em um gene. Ex: gene metalotioneina
~100pb distantes do ponto de incio ou + distantes (enhancers) Influenciam a freqncia (freqncia de montagem) de iniciao
Fatores especficos
Reforadores (Enhancers)
Promotores sozinhos eucariticos no funcionam sempre
Reforadores (Enhancers)
Podem aumentar a transcrio em centenas ou mais vezes Em leveduras sequence) UAS (upstream activator
Reforadores (Enhancers)
Os reforadores atuam aumentando a concentrao de ativadores nas proximidades do promotor cis e trans-atuantes: reforando a idia da necessidade de proximidade entre promotor e reforador
Proximidade reforador-promotor
Levedura Mediador: complexo de 20 subunidades (coativador)
Peter J. Russell. iGenetics: A molecular Approach 2nd Edition
Isoladores
Os isoladores so capazes de bloquear a passagem de qualquer efeito de ativao ou inativao de reforadores, silenciadores Promovem barreiras heterocromatina contra a propagao da
Ativadores
So FT que reconhecem promotor ou reforador seqncias especficas no Aumentam a eficincia da ligao do aparato basal ao promotor, aumentando assim a freqncia da transcrio Co-ativadores promovem a conexo entre ativador e aparato basal (RNA pol II + fatores basais) Atuao:
Watson. Molecular biology of the gene
Ativador: domnios
Possuem regies separadas independentes para ligao ao DNA e para a ativao (geralmente domnios proticos separados)
Plasmdeo reprter: promotor GAL1 fundido ao gene LacZ de E. coli
Duplo hbrido
Protenas fundidas a diferentes domnios do ativador A interao entre as duas protenas possibilita que o gene reprter seja expresso
Watson. Molecular biology of the gene
Duplo hbrido
As protenas regulatrias possuem domnios de ligao ao DNA, que incluem um ou mais motivos estruturais. Os stios de ligao ao DNA para protenas regulatrias so freqentemente seqncias de DNA repetidas e/ou invertidas (palindrmicas), onde mltiplas subunidades (normalmente duas) da protena se ligam.
helix
com
Cys2/Hys2
GL1 protena monomrica com 5 dedos de zinco. O dedo1 no interage com o DNA
de (forma
Receptor de glicocorticide C4
zinc finger
Alm de motivos de ligao ao DNA, as protenas regulatrias possuem motivos de ligao a outras protenas
RNA polimerase Outras protenas regulatrias Outras subunidades da mesma protena regulatria
Cada hlice parte integrante de uma cadeia polipeptdica, mantidas ligadas pelo motivo leucine zipper na formao do dmero.
Controle combinatrio
Ativadores trabalham sinergicamente para integrar os sinais
Em alguns casos vrios sinais so necessrios para ligar um gene
Peter J. Russell. iGenetics: A molecular Approach 2nd Edition
combinatrio aumento na
Controle combinatrio
A sinergia pode tambm resultar do auxlio mtuo entre ativadores para ligao ao stio de atuao Ligao cooperativa
Controle combinatrio
Genes do tipo acasalante em leveduras
Remodelamento da cromatina
+ comum: alterar a organizao dos nucleossomos Gasto de ATP para o remodelamento
Remodelamento da cromatina
Remodelamento da cromatina
Acetilao das histonas pelas histonas acetiltransferases (HAT)
Co-ativador Ativador
Co-repressor
Repressor
Lisina
Remodelamento da cromatina
Histona - acetilase
Ativao de um promotor
Predominncia de regulao positiva em eucariotos: armazenamento do DNA na cromatina
Silenciamento gnico
Histonas podem ser deacetiladas por histonas deacetilases (HDACs) Deacetilao de histonas est relacionada represso gnica
HDAC
Metilao do DNA
Metilao do DNA
Inativao do cromossomo X
Xic (X-inactivation center): regio de ~450 kb Xic contm o gene Xist, expresso no cromosso X inativo
X inativo: sem acetilao, metilao da seqncias CpG Metilao do promotor Xist no X ativo
Repressores
a menos comum em eucariotos
Repressores
Ativador Superfcie de ativao Repressor
TATA
TATA
TFIID
Alberts
TATA
Repressores
Mig1 recruta complexo repressor Tup1 que recruta a deacetilase E tambm inibe a maquinaria de transcrio
controlada
por
Splicing alternativo
Gene Sex-lethal em moscas (s nas fmeas) Sexo determinado pela relao entre cromossomos sexuais e autossomos
Splicing alternativo
Gene Sex-lethal em moscas (s nas fmeas) Sxl auto-regulao samento) (proces-
Controle traducional
Gcn4 ativador transcricional protenas da biossntese de aminocidos