Microbiota sedimentelor nisipoase de la litoralul romnesc al Mrii Negre aspecte cantitative, calitative i potenial de bioremediere

(tez de doctorat)
Conductor de doctorat: Prof. univ. dr. Ioan I. Ardelean
Doctorand: Popoviciu Dan Rzvan

Obiective
Determinarea caracteristicilor microbiotei bentice (abunden, biomas, diversitate morfostructural) din sedimente nisipoase din diferite staii de-a lungul litoralului romnesc. Determinarea relaiei dintre granulaia sedimentelor i caracteristicile microbiotei pe care o gzduiesc. Studierea variaiilor sezoniere n ceea ce privete abundena, biomasa i diversitatea morfo-structural a bacteriilor bentice, n relaie cu anumii factori de mediu (concentraia pigmenilor clorofilieni ca expresie a densitii productorilor primari, temperatura apei). Determinarea numrului estimativ i studierea prin metode de microscopie a unor grupe funcionale microbiene implicate n unele cicluri biogeochimice importante de la nivelul sedimentelor marine. Studiul impactului polurii cu hidrocarburi asupra caracteristicilor cantitative (abunden, biomas) i a diversitii morfo-structurale a microbiotei bentice, prin experimente de tip microcosmos. Evaluarea potenialului de bioremediere al microbiotei bentice n cazul contaminrii cu amestecuri de hidrocarburi sau uleiuri lipidice, prin cuantificarea microorganismelor potenial degradatoare. Determinarea influenei adiiei de nutrieni azotai i fosfai asupra eficienei procesului de bioremediere (mai precis, a ratei diminurii concentraiei hidrocarburilor) prin experimente pe microcosmosuri de laborator.

Materiale i metode Determinarea caracteristicilor microbiotei din sedimente nisipoase de diferite granulaii de pe litoralul romnesc al Mrii Negre

Localizarea staiilor de prelevare (septembrie 2010)

Materiale i metode Determinarea caracteristicilor microbiotei din sedimente nisipoase de diferite granulaii de pe litoralul romnesc al Mrii Negre

Fixare chimic (formalin 4%) Detaarea celulelor: Tween 80 (1 mg/l), omogenizare mecanic (2400 rpm) Colorare cu SYBR Green I (1:10000) i iodur de propidiu (20 mg/L; pentru celule moarte) Filtrare (0,2 m) Cuantificarea i msurarea manual a celulelor (microscopie de epifluorescen) Conversia biovolumului n biomas uscat (Loferer-Krbacher et al., 1998) Granulometria sedimentului: dispozitiv Endecotts Minor, cu site de 1000, 800, 400, 200, 180, 125, 90, 53 m

Materiale i metode Evoluia microbiotei bentice n microcosmosuri cu sedimente marine de diferite granulaii

A
0-200 m

B
200-400 m

C
400-800 m

D
800-1000 m

Sedimente nisipoase uscate (105C) i sortate pe clase de mrime Ap marin Prelevare carote la dou sptmni Analiz prin microscopie de epifluorescen cu SYBR Green I (1:10000)

Materiale i metode Determinarea variaiilor sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale

Localizarea staiilor de prelevare (aprilie 2011-martie 2012)

Materiale i metode Determinarea variaiilor sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale
Prelevare lunar de carote de sediment superficial Analiz prin microscopie de epifluorescen cu SYBR Green I (1:10000) i iodur de hexidiu (10 mg/L; pentru bacterii Gram-pozitive) Calcularea densitii celulare i a biomasei uscate

Materiale i metode Determinarea variaiei sezoniere a concentraiei pigmenilor clorofilieni din sediment
Prelevare lunar de carote de sediment superficial (staiile A i C, august 2011-iulie 2012) Stocare la -20C Extracie cu aceton 90%, centrifugare la 3000 rpm Spectrofotometrie Calcularea concentraiei clorofilelor A, B, C pe baza absorbanei la 664, 647, 630 nm, utiliznd ecuaiile tricromatice (Jeffrey & Humphrey, 1975, Mitchell & Kiefer, 1984) Calcularea coeficientului de corelaie Pearson

Materiale i metode Cuantificarea unor grupe fiziologice microbiene din sedimentele litorale
Prelevare de carote de sediment superficial (staiile A i C, aprilie-mai 2012) Inoculare diluii seriale pe medii de cultur specifice Fixatoare de azot aerobe (Hanson & Gundersen, 1976, Zuberer & Silver, 1978, Jones & Betaieb, 1986, Shieh et al., 1988, Tejera et al., 2005, Torpee, 2009) Reacia cu TTC Amonificatoare (Goa et al., 2008) Test cu reactiv Nessler Nitrificatoare (oxidatoare de amoniu; Goa et al., 2008) Test cu reactiv Nessler Denitrificatoare (Britton & Greeson, 1987, Saitoh et al., 2003) Reacia cu albastru de bromtimol Sulfat-reductoare (Chandrika et al., 1990) Coloraie specific Estimarea numrului microorganismelor prin metoda MPN (MPN Calculator)

Materiale i metode Efectul contaminrii cu hidrocarburi asupra microbiotei bentice litorale

Microcosmos martor (sediment nisipos i ap marin steril) Microcosmos contaminat cu motorin (20 g/L) Prelevare de carote la 0, 8, 14 zile (martor), 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 zile (microcosmos contaminat) Analiz prin microscopie de epifluorescen cu SYBR Green I i iodur de hexidiu

Materiale i metode Cuantificarea microorganismelor consumatoare de hidrocarburi i uleiuri lipidice

Prelevare carote de sediment superficial (staiile A, C, septembrie 2011) Inocularea diluiilor zecimale pe mediu Bushnell-Haas cu TTC (0,01%) i sursa de carbon: eter de petrol (C5-C6, 0,5%), benzin (C4-C12, 0,5%), motorin (C10-C15, 0,5%), cear de parafin (C20-C40, 0,5%), ulei de floarea-soarelui (1%), ulei de msline (1%), ulei de in (1%) Calcularea MPN

Materiale i metode Influena nutrienilor asupra bioremedierii sedimentelor contaminate cu hidrocarburi

Microcosmos 1: martor sediment nisipos, ap marin steril, 20 g/L motorin) Microcosmos 2: adiie 5 mg/L NH4NO3, 0,5 mg/L KH2PO4 Microcosmos 3: 25 mg/L NH4NO3, 2,5 mg/L KH2PO4 Microcosmos 4: 50 mg/L NH4NO3, 5 mg/L KH2PO4 Microcosmos 5: 100 mg/L NH4NO3, 10 mg/L KH2PO4 Microcosmos 6: 200 mg/L NH4NO3, 20 mg/L KH2PO4 Prelevare sptmnal de carote de sediment superficial Extracie cu cloroform Uscare la 50C Determinare gravimetric a cantitii totale de hidrocarburi extractibile

Rezultate i discuii Caracteristicile microbiotei din sedimente nisipoase de diferite granulaii de pe litoralul romnesc al Mrii Negre
100% 90% 80% 70% 60% >1000 800-1000 400-800 0-400

50% 40% 30% 20% 10% 0%

I II III IV V VI VII VIII

Proporia diferitelor fracii ale sedimentelor prelevate de-a lungul litoralului (septembrie 2010)

Rezultate i discuii Caracteristicile microbiotei din sedimente nisipoase de diferite granulaii de pe litoralul romnesc al Mrii Negre

12 10
*107 celule/cm3

7
6 5
g/cm3

8 6

4 3 2 1 0

4 2
0 I II III IV Staia V VI VII VIII

II

III

IV

Staia

VI

VII

VIII

Densitatea populaiei microbiene i biomasa microbian uscat pentru fiecare staie (biovolum celular mediu 0,10-0,13 m3)

Rezultate i discuii Caracteristicile microbiotei din sedimente nisipoase de diferite granulaii de pe litoralul romnesc al Mrii Negre

100% 90% 80% 70%

80
70 60 50

60% 50%
40% 30% 20% 10% 0% I II III IV V Staia VI VII VIII

Filamente
Bacili Coci

% 40
30 20 10 0

II

III

IV

Staia

VI

VII

VIII

Proporia procentual a principalelor grupe morfologice bacteriene i proporia procentual a bacteriilor viabile (IP-negative)

Rezultate i discuii Evoluia microbiotei bentice n microcosmosuri cu sedimente marine de diferite granulaii

30 25
*107 celule/cm3

16 14
14 zile
g/cm3

12
10 8

20 15 10

14 zile

28 zile 42 zile 56 zile 70 zile

28 zile 42 zile
56 zile 70 zile

6
4 2 0

5
0 0-200 m 200-400 m 400-800 m 800-1,000 m

0-200 m

200-400 m 400-800 m 800-1,000 m

Evoluia n timp a densitii i biomasei microbiene n fiecare microcosmos

Rezultate i discuii Evoluia microbiotei bentice n microcosmosuri cu sedimente marine de diferite granulaii
14 zile
25
*107 celule/cm3
*107 celule/cm3

28 zile
30 25
*107 celule/cm3

42 zile
30
25 20 15 10 5 0 0 200 400 m 600 800 1000

20
15 10 5

20 15

10
5 0

0
0 200 400 600 800 1000

200

400
m

600

800

1000

56 zile
30
*107 celule/cm3
*107 celule/cm3

70 zile
30 25
20 15 10 5 0

25 20 15 10 5

0
0 200 400 600 800 1000

200

400
m

600

800

1000

Relaia ntre diametrul mediu al granulelor de sediment i densitatea microbian

Rezultate i discuii Variaii sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale

14

8 7 6
g/cm3

12
*107 celule/cm3

10 8 6 4 2 0 Apr. Mai Iun. Iul. Aug.Sept. Oct. Nov. Dec. Ian. Feb. Mar.
Staia A Staia B Staia C

5 4 3 2 1 0

Staia A Staia B Staia C

Apr. Mai Iun. Iul. Aug.Sept. Oct. Nov. Dec. Ian. Feb. Mar.

Evoluia densitii i biomasei microbiene uscate n fiecare staie (aprilie 2011-martie 2012) Biovolum celular mediu: 0,07-0,14 m3

Rezultate i discuii Variaii sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale

Bacili Gram-negativi

Coci Gram-negativi

Forme filamentoase Gram-negative

Bacili Gram-pozitivi

Coci Gram-pozitivi

Forme filamentoase Gram-pozitive

Tipuri morfo-structurale bacteriene (Bara = 10 m)

Rezultate i discuii Variaii sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale

100%

90%

80%

70%
Filamente Gram negative Bacili Gram negativi
Coci Gram negativi

60%

50%

Filamente Gram pozitive Bacili Gram pozitivi

40%
Coci Gram pozitivi

30%

20%

10%

0%
A B Apr. C A B Mai C A B Iun. C A B Iul. C A B Aug. C A B Sept. C A B Oct. C A B Nov. C A B Dec C A B Ian. C A B Feb. C A B Mar C

Proporia procentual a principalelor grupe morfo-structurale bacteriene n fiecare staie (aprilie 2011-martie 2012)

Rezultate i discuii Variaii sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale

Staia A 0.25
1.4 1.2

Staia C

0.2 0.15 0.1

1
g/cm3

g/cm3

Clorofila A Clorofila B

0.8 0.6

Clorofila A Clorofila B Clorofila C

Clorofila C

0.4
0.2

0.05 0
0

Aug.Sept. Oct. Nov. Dec. Ian. Feb. Mar. Apr. Mai Iun.

Aug. Sept. Oct. Nov. Dec. Ian. Feb. Mar. Apr. Mai Iun.

Concentraia pigmenilor clorofilieni (staiile A i C, august 2011-iunie 2012)

Rezultate i discuii Variaii sezoniere ale caracteristicilor microbiotei bentice litorale Matrice de corelaie Pearson: A = abundena microbian, V cel. = biovolumul celular mediu, B =
biomasa microbian, % coci = procentul bacteriilor sferice, % Gram+ = procentul bacteriilor Gram-pozitive, Chl A/B/C = concentraia clorofilei A/B/C, Total Chl = concentraia total a clorofilelor, Temp. = temperatura apei la recoltare
A V cel. B % coci % Gram+ Chl A Chl B Chl C Total Chl Temp.

1,00

0,25 1,00

0,79 0,76 1,00

-0,74 0,06 -0,42 1,00

-0,70 -0,22 -0,61 0,73

0,64 0,29 0,77 -0,50

0,39 -0,09 0,38 -0,37

0,61 0,09 0,69 -0,44

0,61 0,15 0,70 -0,49

0,71 0,35 0,76 -0,86

V cel.

% coci

% Gram+

1,00

-0,40

-0,49

-0,50

-0,52

-0,84

Chl A

1,00

0,45 1,00

0,69 0,81 1,00

0,77 0,86 0,98

0,48 0,21 0,30

Chl B

Chl C

Total Chl

1,00

0,36

Temp.

1,00

Rezultate i discuii Cuantificarea unor grupe fiziologice microbiene din sedimentele litorale
Numrul estimativ de microorganisme cultivabile ( 103) per cm3 de sediment din fiecare grup fiziologic studiat, n cele dou staii
Grup fiziologic Staia A Staia C

Fixatoare de azot

3,7

11

Amonificatoare

5,3

16

Nitrificatoare

3,7

Denitrificatoare

4,4

8,8

Sulfat-reductoare

3,5

170

Rezultate i discuii Cuantificarea unor grupe fiziologice microbiene din sedimentele litorale
Altele

Coci Gramnegativi

Altele
Bacili Grampozitivi Coci Gramnegativi

Altele

Bacili Gramnegativi
Filamente Grampozitive

Bacili Grampozitivi

Bacili Gramnegativi

Bacili Grampozitivi

Bacili Gramnegativi

Fixatoare de azot aerobe

Altele

Amonificatoare
Altele Coci Bacili GramGramnegativi pozitivi
Bacili Grampozitivi

Nitrificatoare

Bacili Gramnegativi

Coci Grampozitivi

Filamente Grampozitive

Bacili Gramnegativi

Denitrificatoare

Sulfat-reductoare

Grupue fiziologice cultivate: proporia tipurilor morfo-structurale

Rezultate i discuii Efectul contaminrii cu hidrocarburi asupra microbiotei bentice litorale

100%
90% 80% 70% 60% Filamente Gram-negative Coci Gramnegativi Bacili Gramnegativi Filamente Gram-pozitive Coci Grampozitivi Bacili Grampozitivi

100% 90% 80% 70% Filamente Gram-negative Coci Gramnegativi Bacili Gramnegativi Filamente Gram-pozitive Coci Grampozitivi Bacili Grampozitivi

60%
50% 40% 30% 20%

50%
40% 30% 20% 10%

10%
0% 0 zile 2 zile 4 zile 6 zile 8 zile 10 zile12 zile14 zile

0% 0 zile 8 zile 14 zile

Evoluia densitii populaiei microbiene i a proporiei procentuale a grupelor morfostructurale n cele dou microcosmosuri (martor i contaminat)

Rezultate i discuii Densitatea microorganismelor consumatoare de hidrocarburi i uleiuri lipidice

Numrul estimativ de microorganisme degradatoare de hidrocarburi i uleiuri lipidice vegetale ( 103) per cm3 de sediment pentru fiecare staie studiat
Substrat Eter de petrol (0,5%) Benzin (0,5%) Motorin (0,5%) Cear de parafin (0,5%) Ulei de floarea-soarelui (1%) Ulei de msline (1%) Staia A 0 6,5 1,2 0,6 1,8 8,1 Staia C 0,6 3,3 2,4 4 16 23

Ulei de in (1%)

1,7

4,5

Rezultate i discuii Influena nutrienilor asupra bioremedierii sedimentelor contaminate cu hidrocarburi

10000

9000
8000 7000 6000
ppm
Microcosmos 1 1

M. 1
Microcosmos 2 0,9

M. 2

5000

M. 3 M. 4
M. 5 M. 6

Microcosmos 3

2,6

4000
3000 2000 1000 0 7 zile 14 zile 21 zile 28 zile 35 zile 42 zile 49 zile 56 zile 63 zile

Microcosmos 4

2,1

Microcosmos 5

8,8

Microcosmos 6

11

Evoluia concentraiei hidrocarburilor totale n sedimentele din microcosmosuri i numrul estimativ de microorganisme degradatoare de hidrocarburi ( 103) per cm3 (dup 35 de zile)

Concluzii
Sedimentele nisipoase prelevate din diverse staii de-a lungul litoralului romnesc au prezentat diferite densiti ale populaiei microbiene, toate de ordinul a 107-108 celule/cm3 (valorile extreme ntlnite fiind de 4,32-12,64 107 celule/cm3) Biomasele microbiene din sedimentele studiate au nregistrat valori cuprinse ntre 1,63 i 6,99 g/cm3 Bacteriile baciliforme Gram-negative sunt dominante n sedimentele litorale (38-60%), iar biovolumul mediu celular variaz ntre 0,07 i 0,14 m3. Din totalul celulelor cuantificate, ntre 30 i 42% aveau integritatea membranei celulare afectat (nu erau viabile) Se confirm existena unei relaii negative ntre densitatea microbiotei bentice i granulaia sedimentelor n care se gsesc, fr ca aceast relaie s fie una absolut sau proporional. Granulometria influeneaz i distribuia diferitelor grupe morfo-structurale bacteriene (proporia bacteriilor sferice tinde s creasc odat cu granulaia sedimentului) i procentajul celulelor viabile (mai mare n sedimentele grosiere) n condiiile microcosmosurilor de laborator, colonizarea bacterian a sedimentelor sterile decurge extrem de rapid, ceea ce pare a indica o origine planctonic a majoritii microorganismelor bentice S-a demonstrat existena unor variaii sezoniere ale densitii, biomasei i compoziiei microbiobentosului litoral. Densitatea celular i biomasa au prezentat corelaii pozitive semnificative cu temperatura apei i cu concentraia pigmenilor clorofilieni din sediment (ca indicator al densitii productorilor primari de la acest nivel)

Concluzii
Condiiile de mediu nefavorabile (temperaturi sczute, producii primare sczute, sedimente cu granulaie mai mare) sunt asociate cu o cretere a procentului bacteriilor Gram-pozitive i al cocilor Gram-negativi de talie mic Concentraia pigmenilor clorofilieni este dependent de caracteristicile sedimentului, iar raportul dintre diferitele tipuri de clorofile studiate confirm rolul diatomeelor ca principali productori primari la nivelul sedimentelor litorale Prin metoda MPN s-a reuit izolarea i cuantificarea unor microorganisme implicate n diferite fazel ale ciclului biochimic al azotului din sedimentele litorale: fixatoare de azot aerobe, amonificatoare, nitritbacterii i denitrificatoare, totaliznd sub 0,05% din totalul celor cuantificabile direct. Densitatea relativ sczut a amonificatoarelor indic existena unor surse alternative de amoniu la nivelul sedimentelor. Analiza microscopic a artat c bacteriile fixatoare de azot i cele nitrificatoare cultivabile sunt predominant Gramnegative, n timp ce amonificatoarele i denitrificatoarele sunt mai ales Gram-pozitive Densitatea bacteriilor sulfat-reductoare (predominant Gram-negative) difer mult n funcie de tipul de sediment, atingnd valori foarte ridicate n nisipurile fine i slab oxigenate Dei evident afectat de contaminarea experimental cu hidrocarburi, revenirea relativ rapid a microbiotei bentice, ca i prezena a unor microorganisme capabile s degradeze diferite tipuri de amestecuri de hidrocarburi sau uleiuri lipidice indic un important potenial de bioremediere n cazul acestui tip de poluare

Concluzii
Experimentele de tip microcosmos au artat c, dei adiia de nutrieni azotai i fosfai duce la o cretere a densitii microorganismelor potenial degradatoare de hidrocarburi, aceasta nu se traduce neaprat ntr-o degradare mai rapid a hidrocarburilor, efectul putnd fi chiar advers. De aceea, n cazul biostimulrii trebuie s se in cont i de ali factori, cum ar fi gradul de oxigenare al sedimentelor

Activitate tiinific Lucrri tiinifice publicate/acceptate spre publicare pe tematica abordat

Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I, 2010 Changes in bacterial abundance and biomass in sandy sediment microcosms supplemented with gasoline. Ovidius University Annals Biology-Ecology Series 14: 139-145 Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2011 Bacterial abundance, biomass and proportion of living cells in littoral sandy sediments on the Romanian Black Sea coast, n SGEM 2011: 11th International Multidisciplinary Scientific GeoConference, vol. II: 995-1002 Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2011 Evolution of microbial density and biomass in different grain-sized marine sediment microcosms. Annals of the Alexandru Ioan Cuza University of Iai, Section I, n curs de publicare Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2012 Seasonal variation of bacterial abundance, biomass and morpho-structural diversity in littoral sandy sediments on the Romanian Black Sea coast, n SGEM 2012: 12th International Multidisciplinary Scientific GeoConference, vol. III: 965-972

Activitate tiinific Alte lucrri tiinifice

Ardelean, I.I., Moisescu, C., Popoviciu, D.R., 2009 Magnetotactic bacteria and their potential for terraformation, n Seckbach, J., Walsh, M. (eds.) From Fossils to Astrobiology. Records of Life on Earth and the Search for Extraterrestrial Biosignatures, 335-350, Springer, Heidelberg Bercu, R., Broasc, L., Popoviciu, R., 2010 Comparative anatomical study of some gymnospermae species leaves. Botanica Serbica 34: 21-28 Popoviciu, D.R., 2010 Terraforming Mars via the Bosch reaction: turning gas giants into stars, n Levine, J.S., Schild, R.E. (eds.) The Human Mission to Mars. Colonizing the Red Planet, 911-924, Cosmology Science Publishers, Cambridge Popoviciu, D.R. Terraformarea: primul pas spre colonizarea spaiului extraterestru. Natura, n curs de publicare

Activitate tiinific Participri la manifestri tiinifice

Ardelean, I.I., Sima, L.E., Ghi, S., Popoviciu, D.R., Lzroaie, M.M., 2009 Quantification of marine bacteria in pure culture and microcosms by epifluorescence microscopy and flow cytometry (poster), 3rd Congress of European Microbiologists, Gteborg Bercu, R., Broasc, L., Popoviciu, D.R., 2009 Anatomical comparative study of some gymnospermae species leaves (poster), 5th Balkan Botanical Congress, Belgrad Ardelean, I., Sima, L., Ghi, S., Sarchizian, I., Popoviciu, D.R., Lzroaie, M.M., 2009 Cuantificarea bacteriilor marine din microcosmos prin microscopie de epifluorescen i citometrie n flux (poster), A 49-a Sesiune Anual de Comunicri tiinifice a Institutului de Biologie Bucureti Popoviciu, D.R., Ardelean, I., 2010 Changes in bacterial abundance and biomass in sandy sediment microcosms supplemented with gasoline (poster), Simpozionul omagial Biodiversitate prezent i perspective, Universitatea Ovidius Constana Ardelean, I., Ghi, S., Popoviciu, D.R., Damian, V., Sarchizian, I., Manea, M., Apostol, I., Iordache, I., Armelu, A., Apostol, D., 2010 Microbial dynamics and diversity studied by the use of quantum dots and fluorescent molecules (poster), 14th Evolutionary Biology Meeting, Marseilles Ardelean, I., Damian, V., Sarchizian, I., Ghi, S., Manea, M., Apostol, I., Popoviciu, D.R., Iordache, I., Armelu, A., Apostol, D., 2010 The use of quantum dots to visualize heterotrophic and photosynthetic bacteria in pure cultures and microcosms (poster), A 50-a Sesiune Anual de Comunicri tiinifice a Institutului de Biologie Bucureti Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2011 Densitatea, biomasa i diversitatea morfologic a bacteriilor din sedimente nisipoase de la litoralul romnesc al Mrii Negre (prezentare oral), A XXI-a sesiune de comunicri tiinifice a Facultii de tiine ale Naturii i tiine Agricole, Universitatea Ovidius, Constana Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2011 Bacterial abundance, biomass and proportion of living cells in littoral sandy sediments on the Romanian Black Sea coast (poster), 11th International Multidisciplinary Scientific Geo-Conference & Expo on Modern Management of Mine Producing, Geology and Environmental Protection SGEM 2011, Albena Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2011 Evolution of microbial density and biomass in different grain-sized marine sediment microcosms (poster), The Anthropogenic Impact Upon Black Sea Region Biodiversity International Scientific Conference, Agigea Constana Popoviciu, D.R., Ardelean, I.I., 2012 Seasonal variation of bacterial abundance, biomass and morpho-structural diversity in littoral sandy sediments on the Romanian Black Sea coast (poster), 12th International Multidisciplinary Scientific Geo-Conference & Expo on Modern Management of Mine Producing, Geology and Environmental Protection SGEM 2012, Albena