Sunteți pe pagina 1din 43

UNIVERSITATEA DIN BUCURETI

FACULTATEA DE CHIMIE
CATEDRA DE CHIMIE ANALITIC

STUDII PRIVIND INFLUENA CANTITII UNOR MACRO- I MICROELEMENTE ASUPRA CALITII VINURILOR
Rezumatul tezei de doctorat

Doctorand: MIHAELA ARTIMON

Conductor tiinific: PROF.UNIV.DR. ION GH. TNASE

Bucureti 2008

CUPRINS
(numerotarea paginilor este cea din teza de doctorat) Introducere ............................................................................................................ PARTEA TEORETIC Cap. 1. Aspecte generale privind compoziia mineral a vinurilor .................. 1.1 Generaliti ................................................................................................. 1.2 Compoziia mineral a vinului ................................................................... 1.2.1 Macroelementele ............................................................................... 1.2.2 Microelementele ............................................................................... 1.2.3 Ultramicroelementele ....................................................................... 1.3 Influena elementelor minerale asupra calitii vinurilor .......................... 1.3.1 Rolul metalelor n producerea vinului i n vin ................................ 1.3.2 Modificri n coninutul de metale n timpul producerii vinului ..... 1.3.3 Precipitri datorate metalelor ........................................................... 1.3.3.1 Precipitri datorate fierului .................................................... 1.3.3.2 Precipitarea datorat cuprului ................................................ 1.4 Aciuni fiziologice ale vinului asupra organismului uman ........................ 1.4.1 Efecte benefice ale diferiilor compui prezeni n vin ..................... 1.4.2 Efecte benefice ale elementelor minerale din vin ............................. 1.4.3 Aspecte toxicologice i de securitate alimentar .............................. 1.5 Determinarea originii geografice a vinurilor pe baza coninutului n metale ..... 1.6 Date privind compoziia mineral cationic a unor vinuri romneti......... 1.6.1 Influena soiului de struguri asupra compoziiei vinurilor ............... 1.6.2 Influena tipului de sol ...................................................................... 1.6.3 Influena anului de recolt ................................................................ 1.6.4 Influena arealului de cultur ............................................................ 1.7 Specierea ................................................................................................... Cap. 2. Tehnici i metode de determinare a elementelor din vinuri ................ 2.1 Prelevarea i pregtirea probelor ............................................................... 2.2 Tehnici i metode analitice ........................................................................ 2.2.1 Tehnici i metode spectrometrice de analiz ................................... 2.2.1.1 Spectrometria de absorbie atomic n vizibil i ultraviolet . 2.2.1.2 Spectrometria de emisie atomic n vizibil i ultraviolet ..... 2.2.1.3 Spectrometria de mas ......................................................... 2.2.1.4 AAS, ICP-OES sau ICP-MS ? ............................................. 2.2.2 Metode electrochimice ............................................................. ......

6 6 10 14 16 19 22 22 23 24 24 28 31 31 32 35 37 40 41 41 43 44 46 51 51 53 54 54 60 62 66 68

2.2.3 Metode cromatografice i electroforetice ....................................... PARTEA EXPERIMENTAL Cap. 3. Studii privind validarea unei metode de determinare a cromului din vinuri prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde ............................. 3.1 Aspecte generale privind validarea unei metode analitice ....................... 3.2 Metod de determinare a cromului din vin prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde ................................................................................................. 3.2.1 Scop i domeniu de aplicare ............................................................. 3.2.2 Principiu ........................................................................................... 3.2.2.1 Optimizarea parametrilor cuptorului i spectrometrului........... 3.2.3 Reactivi ............................................................................................. 3.2.4 Aparatur .......................................................................................... 3.2.5 Mod de lucru ..................................................................................... 3.2.5.1 Pregtirea probei pentru analiz ............................................... 3.2.5.2 Msurare ................................................................................... 3.2.5.3 Calculul rezultatelor ................................................................. 3.3 Caracterizarea parametrilor de performan ai metodei analitice elaborate i dezvoltate .............................................................................. 3.3.1 Aplicabilitate ..................................................................................... 3.3.2 Selectivitate/specificitate .................................................................. 3.3.3 Domeniu de lucru i de liniaritate .................................................... 3.3.3.1 Test de liniaritate ...................................................................... 3.3.3.2 Test de omogenitate a dispersiilor ............................................ 3.3.3.3 Metoda adaosului standard ....................................................... 3.3.4 Liniaritate .......................................................................................... 3.3.4.1 Reprezentarea grafic a erorilor reziduale ................................ 3.3.4.2 Reprezentarea grafic a rspunsurilor relative n funcie de valoarea logaritmic a concentraiei ......................................... 3.3.4.3 Incertitudinea n analiza de regresie ......................................... 3.3.4.4 Estimarea coninutului de crom din probe de vin pe baza ecuiei de regresie ..................................................................... 3.3.5 Sensibilitate ....................................................................................... 3.3.6 Limit de detecie .............................................................................. 3.3.7 Limit de determinare cantitativ .....................................................

70

71 71

76 78 78 78 89 90 91 91 92 93 94 95 95 96 97 104 105 106 107 108 109 110 112 113 114

3.3.8 Exactitate .......................................................................................... 3.3.8.1 Exactitatea metodei evaluat prin gradul de recuperare a cromului.................................................................................. 3.3.9 Precizie ............................................................................................. 3.3.9.1 Repetabilitate ............................................................................ 3.3.9.2 Precizie intermediar ................................................................ 3.3.10 Robustee ........................................................................................ 3.3.10.1 Stabilitatea soluiilor ............................................................. 3.3.10.2 Modificarea fantei de intrare a monocromatorului ............... 3.3.10.3 Modificarea aciditii soluiei analizate ................................ 3.3.10.4 Modificarea tipului de corecie a zgomotului de fond i a tubului de grafit .................................................................. 3.3.11 Estimarea incertitudinii de msurare ................................................ 3.3.11.1 Procedur de lucru ................................................................. 3.3.11.2 Msurand ................................................................................ 3.3.11.3 Identificarea surselor de incertitudine .................................... 3.3.11.4 Cuantificarea componenetelor incertitudinii .......................... 3.3.11.5 Buget de incertitudini ............................................................. 3.4 Determinarea coninutului de crom n vinuri romneti .......................... 3.5 Concluzii .................................................................................................. Cap. 4. Studii privind validarea unei metode de determinare a fierului din vinuri prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n flacr dup calcinare ............................................................................ 4.1 Metod de determinare a fierului din vin prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n flacr dup calcinare ........................ 4.1.1 Scop i domeniu de aplicare ............................................................. 4.1.2 Principiu ........................................................................................... 4.1.3 Reactivi i materiale ......................................................................... 4.1.4 Aparatur .......................................................................................... 4.1.5 Mod de lucru ..................................................................................... 4.1.5.1 Pregtirea probei pentru analiz ............................................... 4.1.5.2 Msurare ................................................................................... 4.1.5.3 Calculul rezultatelor ................................................................. 4.2 Caracterizarea parametrilor de performan ai metodei analitice elaborate i dezvoltate ............................................................................. 4.2.1 Aplicabilitate ..................................................................................... 4.2.2 Selectivitate/specificitate ..................................................................

115 116 126 126 130 134 134 145 147 149 156 159 159 159 160 164 168 171

176 178 178 178 178 179 181 181 182 183 184 186 186

4.2.3 Domeniu de lucru i de liniaritate .................................................... 4.2.3.1 Test de omogenitatea dispersiilor ............................................. 4.2.3.2 Test de liniaritate ...................................................................... 4.2.4 Liniaritate .......................................................................................... 4.2.4.1 Reprezentarea grafic a erorilor reziduale ................................ 4.2.4.2 Reprezentarea grafic a rspunsurilor relative n funcie de valoarea logaritmic a concentraiei ......................................... 4.2.4.3 Incertitudinea n analiza de regresie ......................................... 4.2.4.4 Estimarea coninutului de fier din probe de vin pe baza ecuiei de regresie ..................................................................... 4.2.5 Sensibilitate ....................................................................................... 4.2.6 Limit de detecie .............................................................................. 4.2.7 Limit de determinare cantitativ ..................................................... 4.2.8 Exactitate .......................................................................................... 4.2.8.1 Exactitatea metodei evaluat prin gradul de recuperare a fierului .................................................................................... 4.2.8.2 Compararea rezultatelor cu metoda OIV .................................. 4.2.9 Precizie ............................................................................................. 4.2.9.1 Repetabilitate ............................................................................ 4.2.9.2 Precizie intermediar ................................................................ 4.2.10 Robustee ........................................................................................ 4.2.10.1 Stabilitatea soluiilor ............................................................. 4.2.10.2 Modificarea fantei de intrare a monocromatorului ............... 4.2.10.3 Modificarea aciditii soluiei analizate ................................ 4.2.11 Estimarea incertitudinii de msurare ............................................... 4.2.11.1 Procedur de lucru ................................................................. 4.2.11.2 Msurand ................................................................................ 4.2.11.3 Identificarea surselor de incertitudine .................................... 4.2.11.4 Cuantificarea componenetelor incertitudinii .......................... 4.2.11.5 Buget de incertitudini ............................................................. 4.3 Determinarea fierului n vinuri romneti ............................................... 4.4 Concluzii .................................................................................................. Cap. 5. Concluzii finale ....................................................................................... Bibliografie .............................................................................................................

187 187 188 191 193 193 195 196 197 197 198 199 199 205 207 207 209 213 214 222 224 225 225 225 226 226 231 233 236 240 245

Prefa La elaborarea tezei s-au avut in vedere urmatoarele obiective: Realizarea unui studiu de literatur asupra rolului pe care l joac micro- i macroelementele n calitatea vinurilor ct i o trecere n revist a metodelor de determinare cantitativ a acestora; Elaborarea i dezvoltarea unei metode de determinare cantitativ a cromului total din vin prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde; Elaborarea i dezvoltarea unei metode de determinare cantitativ a fierului total din vin prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n flacr dup calcinare; Identificarea i caracterizarea parametrilor de performan ai celor dou metode: aplicabilitate, selectivitate/specificitate, domeniu de concentraii de lucru, liniaritate, sensibilitate, limit de detecie, limit de determinare cantitativ, exactitate, precizie (reptabilitate, precizie intermediar), robustee, estimare a incertitudinii de msurare; Aplicarea metodelor propuse i validarea lor pe probe reale; Determinarea cromului i fierului total n vinuri romneti. De ce Cr i Fe?

Pe de o parte pentru c ambele metale:


n cantiti mici sunt eseniale pentru organism: Cr poteneaz aciunea insulinei influennd astfel metabolismul carbohidrailor, proteinelor si lipidelor (necesarul zilnic de Cr: 50-200 g), n timp ce Fe intr in structura hemului, component esenial a citocromilor i a unor pigmeni respiratori celulari (hemoglobin, mioglobin); n cantiti mari devin toxice: toxicitatea fierului se manifest la valori de peste 20 mg Fe/kg mas corporal, 60 mg/kg reprezentnd o doz letal. Se tie c biodisponiblitatea i toxicitatea metalelor nu sunt date de concentraia lor total, depind de formele chimice sub care sunt prezente [10], astfel, Cr(VI) este mult mai toxic dect Cr(III) (de ex. 300 mg bicromat de potasiu este o doza letal). Expunerea ndelungat prin inhalare a compuilor de crom duce la apariia de ulceraii cutanate, dermatit, perforarea septului nazal i manifestri respiratorii de hipersensibilizare. Este cunoscut efectul carcinogen al cromului asupra tractului respirator. OMS a fixat ca limit a coninutului de Cr(VI) n apa potabil de 0,05 mg/L.

Pe de alt parte pentru c:


Fe are un rol deosebit n stabilitatea vinului, prezena Fe n vin n cantitate mare (12-25 mg/L), determin apariia tulburelilor prin formarea fosfatului feric (FePO4) insolubil, care cauzeaz: casarea alb fosfato-feric, specific vinurilor albe, ce se manifest printr-o tulbureal de culoare alburie i care apare numai atunci cnd vinul s-a aflat n contact ndelungat cu oxigenul din aer (mediu oxidant) i casarea albastr sau neagr fosfato-feric, specific vinurilor roii, la care fosfatul feric formeaz un precipitat complex mpreun cu polifenolii din vin (antociani, taninuri), de culoare neagr-albstruie. Cr este folosit alturi de alte elemente (Ba, Ca, Li, Mg, Mn, Na, Rb, Sr etc) la identificarea zonei de provenien a vinurilor (datorit strnsei legturi dintre compoziia vinului fiind determinat de cea a solului din zona geografic de provenien).

Apoi sunt dou elemente care apar la concentraii diferite n vin, Cr la nivel de ppb
i Fe la nivel de ppm permind utilizarea a dou tehnici cu sensibiliti diferite, GFAAS (ppb) i FAAS (ppm). S-au aplicat 2 moduri de prelucrare frecvent ntlnite atunci cnd se aplic pentru analiz AAS, mineralizarea cu microunde i calcinarea. Pentru crom in compendiu OIV nu exista o metoda de referinta, la fier desi exista 2 metode, una spectrofotometrica, si una de referinta, prin FAAS dupa indepartarea alcoolului cu ajutorul unui rotaevaporator, avand in vedere ca cele 2 moduri de mineralizare permit determinarea majoritatii metalelor din vinuri si cum de regula se doreste o analiza a mai multor metale din vinuri am abordat aceste procedee de prelucrare.

(numerotarea tabelelor i figurilor este cea din teza de doctorat)

PARTEA TEORETIC Cap. 1. Aspecte generale privind compoziia mineral a vinurilor Cunoaterea compoziiei minerale a vinurilor prezint o deosebit importan: n vinificaie - pentru controlul asupra stabilitii fizico-chimice i a proprietilor organoleptice; in depistarea prezentei unor contaminanti in vin (un subiect la ordinea zilei pentru oenologia modern l reprezint prezena n vinuri a metalelor contaminante, mai ales a metalelor grele. Unul din obiectivele Subcomisiei pentru Unificarea Metodelor de Analiz i Apreciere a Vinurilor din cadrul O.I.V. este realizarea unei bnci de date mondiale referitoare la coninutul n contaminani metalici ai vinurilor, iniierea unor studii asupra originii acestor contaminani, scderea limitelor admise pentru coninutul n metale contaminante, precum i optimizarea tehnologiilor n scopul reducerii acestor contaminri. in evaluarea aportului nutritiv in dieta zilnica prin consumul rational de vin; in depistarea vinurilor falsificate (fie n scopul de a le ascunde anumite defecte de preparare sau de pstrare, fie pentru a se comercializa un vin de calitate inferioar sub eticheta unui produs superior); in posibilitatea de recunoatere a zonei de provenien a unui vin pe baza compoziiei minerale i a elementelor n urme, aceasta fiind corelat cu compoziia elementar a solului din arealul viticol; Metalele afecteaz proprietile organoleptice ale vinului, incluznd gustul, prospeimea, aroma i culoarea, prin formarea, n principal, de precipitate pe parcursul fermentaiei, maturrii i depozitrii vinului. Metalele cu rspndire mai mic (Cu, Fe, Mn, Zn) i cteva metale care se gsesc n urme sunt favorabile procesului de fermentaie, fiind necesare pentru activarea enzimatic a metalo-enzimelor. Precipitarea K i Ca sub form de tartrai modific pH-ul, favoriznd procesul de oxidare al Cu i Fe, i depunerile de Al, Cu i Fe. Amndou procesele mai sus menionate, oxidarea i depunerile metalice, afecteaz conservarea vinului. Cu, Fe i Mn sunt responsabile de stabilitatea vinurilor

vechi i modificarea calitii senzoriale a acestora dup mbuteliere. n anumite condiii, metalele grele prezente n vin (Fe, Cu, Zn, Cr, Pb, As) dau natere la tulbureli nedorite, cunoscute sub denumirea de casri metalice [11]. Fierul natural coninut n vin (fierul fiziologic) ajunge la 2-6 mg/L n timp ce fierul tehnologic poate atinge valori de pn la 60mg/L [160]. Fe catalizeaz oxidarea compuilor polifenolici, n timp ce Mn favorizeaz formarea de acetaldehide, care reacioneaz cu polifenolii catalizai de Fe cu producerea de precipitate. Toate aceste transformri duc la scderea calitii i stabilitii vinului. Cu, Fe i Mn formeaz compleci stabili cu aminoacizii i polifenolii. Aceste procese apar n timpul maturrii i depozitrii vinului i sunt determinante pentru caracteristicile de mbtrnire, influeneaz aroma final, gustul i chiar i culoarea vinului. n plus, asocierea cationilor de Cu, Fe i Mn cu chelai organici constituie un procedeu natural anti-oxidativ care scade posibilitatea formrii de specii reactive de oxigen responsabile de alterarea vinului. Concentraii mai mari de 1 g/mL Cu2+ i 7 g/mL Fe3+ pot da un gust neplcut, neptor de Cu i Fe i determin apariia depunerilor de Cu i Fe, n special cnd concentraia de taninuri e mare sau pH-ul ridicat. Acest efect nu apare ns cnd vinul prezint o concentraie mare de ioni de Fe(II) i cnd nivelul de Cu, care catalizeaz oxidarea Fe(II), este sczut. Se consider c depunerile de Al apar la concentraii mai mari de 10 g/mL de Al. Consumul moderat de vin contribuie la aportul zilnic necesar de multe metale eseniale, incluznd Ca, Co, Cr, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Mo, Ni i Zn. Vinul contine macroelemente C>10ppm (Na, K, Mg, Ca), microelemente 10pmm>c>10ppb (Fe, Cu, Zn, Mn, Pb etc) si ultramicroelemente c<10ppb (Cr, As, Cd, Ni etc). Continutul mediu al compusilor anorganici prezenti in vin este prezentat in figura 1.1.

Figura 1.1. Tabelul periodic al elementelor anorganice prezente n vin [9]

OIV a stabilit limite maxime pentru cteva elemente [Compendium of International Methods of Analysis OIV, 2, 2007, MA-E-C1-01-LIMMAX]: Element LMA (mg/L) Na 60 Cu 1 Zn 5 Pb 0,15 As 0,2 Cd 0,01

Cap. 2. Tehnici i metode de determinare a elementelor din vinuri Este evident faptul ca pentru stabilirea corecta a compozitiei minerale un rol esenial revine metodelor de analiz, care trebuie s ndeplineasc anumite condiii referitoare la precizie, exactitate, timp de analiz i costuri de aplicare. n prezent, n toate domeniile analizei chimice, dar cu precadere in domeniul alimentar si farmaceutic, sunt necesare metode analitice de ncredere pentru a asigura conformitatea cu reglementrile naionale i internaionale in vigoare. Utilizarea de metode analitice validate se impune tot mai mult astazi. Printre tehnicile analitice aplicate la determinarea cantitativ a metalelor n vinuri se pot aminti: FAAS, GFAAS, ICP-OES, ICP-MS, VSA, PSA, HPLC cu detecie electrochimic sau FAAS, CZE. Metodele de referin OIV de determinare cantitativa a metalelor sunt cele bazate pe AAS: FAAS, GFAAS, HG-AAS Pentru a alege ct mai corect tehnica de lucru trebuie cunoscute caracteristicile de performanta ale metodelor dar si urmatoarele informatii legate de proba: Cte probe sunt analizate pe sptmn? Ce tip de prob este? (oeluri, roci, eflueni, soluri, etc.) Ce metod de dizolvare poate fi aplicat? Cte i ce elemente trebuie determinate? Care sunt domeniile de concentraie? Ce volum de prob este disponibil? Ce alte opiuni/accesorii sunt luate n consideraie? De ce? Ct de important este informaia izotopic? Ce buget e disponibil pentru cumprare sau nchiriere?

10

Care este costul de proprietate i de ntreinere pentru tehnica folosit pentru a deservi interesele? Ce nivel de pregtire al operatorilor este disponibil? Ca metode de prelucrare a probelor de vin literatura de specialitate ofera o gama

larga de procedee, de la vinul ca atare sau diluat pana la vinul mineralizat: cu microunde, Kjeldahl, calcinare, utilizand HCl, HNO3, H2SO4, H2O2, HClO4 sau amestecuri oxidante in diferite combinatii si raporturi masice sau volumetrice. In acest context ne-am propus in cadrul tezei dezvoltarea i validarea unor metode analitice de determinare cantitativ a cromului i fierului din vin utiliznd ca tehnic AAS cu atomizare n flacara sau cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde sau calcinare.

PARTEA EXPERIMENTAL Cap. 3. Studii privind validarea unei metode de determinare a cromului din vinuri prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde Validarea unei metode analitice este un proces destul de complex care const m parcurgerea a dou etape principale: elaborarea si/sau dezvoltarea metodei analitice caracterizarea metodei analitice Pornind de la datele existente n literatura de specialitate si de la norma europeana EN 14083:2003 de determinare a unor microelemente din produse alimentare a fost pusa la punct o metoda de determinare a coninutului total de Cr din vinuri prin GFAAS dup mineralizare cu microunde. In urma unor studii privind mineralizarea completa a probelor de vin am stabilit raportul volumetric optim de proba vin-acid azotic conc.-apa oxigenata 30% (4:6:2) Optimizarea parametrilor cuptorului i spectrometrului Ca punct de plecare in ceea ce priveste conditiile de lucru pe cuptor si spectrometru au fost folosite prescripiile productorului aparatului: lungimea de und,

11

=357,9 nm, lrgimea fantei de intrare: 0,8 nm, intensitatea curentului lmpii cu catod cavitar: 4,0 mA, semnalul citit: absorban, volumul injectat: 20 L. Pentru evaporarea complet a apei i a altor compui volatili prezeni n proba mineralizata de vin a fost aplicat o uscare n trei pai. Au fost efectuate cteva experimente pe probe mineralizate de vin pentru a stabili viteza optim de cretere a temperaturii i timpul de meninere a temperaturii la o anumit valoare, pentru fiecare etap n parte. Aceste condiii instrumentale sunt prezentate n tabelul 3.2.
Tabelul 3.2. Parametrii optimi ai spectrometrului de absorbie atomic cu cuptor de grafit, corecie Zeeman, stabilii pentru determinarea cromului din probe de vin mineralizat Parametrii spectrometrului 357,9 nm Lime fant 0,8 nm HCL Intensitate curent lamp 4,0 mA Aria picului Timp de integrare 3,0 s 3,0 Tip cmp magnetic 2-field 0,8 T Tip sistem monofascicol Parametrii cuptorului Tip cuptor de grafit Tub placat pirolitic Autodiluie da Cicluri de splare 2 Replicate citire prob 3 Volum de prob injectat 20 L Adncime injector -1,1 mm Etap Temperatur Oprire Timp etap (s) Debit aer Vitez (0C/s) (0C) (s) Uscare 1 90 20 10 13,5 Max Uscare 2 110 2 10 20 Max Uscare 3 130 2 10 20 Max Piroliz 1300 250 10 14,7 Max AZ (auto zero) 1300 0 5 5 Stop (citire) Atomizare 2200 FP 5 5,1 Stop (citire) Curare 2550 500 4 4,7 Max Lungime de und Tipul de lamp Mod de integrare Timp AZ (autozero) Camp Zeeman (field)

Cat priveste temperaturile si timpi de piroliza si atomizare, pentru optimizarea acestora s-au trasat curbele de piroliza ai atomizare utiliznd alternativ corecia Zeeman /lampa cu descrcare n atmosfera de deuteriu, tubul placat pirolitic cu/fr platform, nregistrarea semnalului analitic sub form de arie/nlime. Soluiile de testare au fost: soluie etalon de crom de 10 g/L preparat n HNO3 3,44 mol/L i soluie mineralizat de vin conform metodei puse la punct avnd aceeai concentraie de acid azotic ca i etaloanele. Nu s-a folosit alt modificator chimic dect acidul azotic [14] utilizat la mineralizare i la prepararea soluiilor etalon. Analizand forma curbelor obtinute dar si forma picurilor s-au stabilit conditiile oprime de piroliza si atomizare precum si conditiile de operare ale spectrometrului (tabelul 3.2).

12

Figura 3.3. Curbe de piroliz-atomizare obinute pe soluie etalon de Cr, corecie Zeeman, tub cu/far platform, arie/nalime pic (a-d)

10

Figura 3.4. Curbe de piroliz-atomizare obinute pe soluie etalon de Cr, corecie lamp cu descrcare n deuteriu, tub cu/fr platform, arie/nlime pic (a-d)

11

Figura 3.5. Curbe de piroliz-atomizare obinute pe soluie de vin mineralizat, corecie Zeeman, tub cu/fr platform, arie/nlime pic (a-d)

12

Figura 3.6. Curbe de piroliz-atomizare obinute pe soluie de vin mineralizat, corecie lamp cu descrcare n deuteriu, tub cu/fr platform, arie/nlime pic (a-d)

13

Caracterizarea parametrilor de performan ai metodei n cele ce urmeaz sunt caracterizati, n vederea validrii, parametrii de performan ai metodei de determinare a cromului din probe de vin mineralizate cu microunde, prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare electrotermic, cu corecie Zeeman, tub pirolitic fr platform, semnal nregistrat sub forma ariei picului i aplicndu-se metoda simpl de etalonare. Toate determinrile s-au efectuat pe o anumit matrice de vin, este vorba de un vin alb, Riesling Italian, Premiat Murfatlar, sec, 11,5% vol., DOC-CMD, 2005, procurat din comer, denumit n continuare proba I. Pentru a testa aplicabilitatea metodei i la alte tipuri de vinuri au fost analizate ulterior, dup punerea la punct i validarea metodei, n ceea ce privete recuperarea i precizia, alte dou vinuri de origine controlat: Riesling Italian de Valea Clugreasc, sec, 11,7% vol., 1993, alb (proba II) i Merlot de Murfatlar, demisec,12,5% vol., 2006, rou (proba III). Au fost alese aceste soiuri fiind, alturi de Feteasc alb, Feteasc regal i Cabernet Sauvignon, dintre soiurile cu cea mai mare extindere i se folosesc la obinerea de vinuri seci i demiseci. Astfel de vinuri, avnd un coninut mai sczut de zahr, ridic mai puine probleme n analiz, din punct de vedere al matricei. Inclusiv metodele prezentate n Compendiu OIV, de determinare a unor elemente prin spectrometrie de absorbie atomic, au fost implementate pentru vinurile seci [195]. Aplicabilitate: metoda permite determinarea Cr total din probe de vin la nivel de g/L, dup mineralizare cu microunde prin GFAAS. Selectivitate/specificitate: in general SAA este o tehnica cu selectivitate inalta. Msurrile s-au efectuat la lungimea de und =357,9 nm, folosind o lime a fantei de intrare n monocromator de 0,8 nm. Din studiile de specialitate la aceast lungime de und nu se cunosc elemente care s interfere [123]. n documentele echipamentului este dat fierul ca i interferent la =358,1 nm, aceast lungime de und nefiind una sensibil pentru fier. Pentru a verifica gradul de interferen a fierului n cazul determinrii cromului din vinuri s-a msurat absorbana unui etalon pur de crom de concentraie C=10 g/L i a unui etalon de crom impurificat cu fier la o concentraie C=10 mg Fe/L (adic la o concentraie a fierului n vin C=62,5 mg/L). Rezultatele obinute au artat faptul c, n condiiile impurificrii cu fier chiar la o concentraie de 1000 de ori mai

10

mare dect concentraia analitului, n condiiile experimentale stabilite, nu este afectat selectivitatea determinrilor, diferenele mici ntre rezultate fiind datorate exactitii metodei. Domeniul de lucru i liniaritatea au fost stabilite pe baza a patru teste: testul de omogenitate a dispersiilor, testul de liniaritate, reprezentarea grafic a erorilor reziduale i reprezentarea grafic a rspunsurilor relative n funcie de logaritmul zecimal al concentraiilor corespunztoare. Liniaritatea (R/R2). S-au trasat curbele de etalonare pe domeniul de C=1-16 g Cr/L, aplicand ecuatia de regresie liniar i respectiv neliniar, pentru arie (A) si inaltime de pic (h).

0.7 0.6 0.5 absorbanta (u.a.) 0.4 0.3 0.2 0.1 0 (a) 0 5 10 concentratie Cr ( g/L) 15 20 y = 0.0172x + 0.033 R2 = 0.9996 aria picului inaltimea picului Linear (aria picului) Linear (inaltimea picului)

y = 0.0338x + 0.0756 R2 = 0.9992

Figura 3.12.a. Curba de etalonare obinut prin regresie liniar, 1-16 g/L Cr

11

0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 (b) 0 5 10 concentratie Cr ( g/L) 15 20

y = -0.0002x 2 + 0.0367x + 0.0669 R2 = 0.9997 aria picului inaltimea picului Poly. (aria picului) Poly. (inaltimea picului) y = -6E-05x 2 + 0.0181x + 0.0301 R2 = 0.9998

absorbanta (u.a.)

Figura 3.12.b. Curba de etalonare obinut prin regresie neliniar, 1-16 g/L Cr Reprezentarea grafic a erorilor reziduale Dei s-au obinut coeficieni de determinare R2>0,999, n toate cazurile, distribuia valorilor reziduale nu este aleatorie, ci manifest oarecare tendin la nceputul i la sfritul domeniului ales. Prelucrnd rezultatele din aproape n aproape s-a ajuns la o limitare a domeniului de la C=116ppb crom (figura 3.13) la 514ppb crom (fig. 3.16 si 3.17).

aria picului 0.04

inaltimea picului
0.010 Yi-(a+bXi+cXiXi), (u.a.)

aria picului

inaltimea picului

Yi-(a+bXi), (u.a.)

0.02

0.005

0.000

-0.02

-0.005

-0.04 (a) 0 5 10 15 concentratie Cr ( g/L) 20

-0.010 (b) 0 5 10 15 concentratie Cr ( g/L) 20

Figura 3.13. Erorile reziduale pentru funcia liniar (a) i neliniar (b), 1-16 g/L Cr

12

0.6

0.5

y = 0.0334x + 0.0823 R2 = 0.9993 aria picului inaltimea picului Linear (aria picului)

absorbanta (u.a.)

0.4

0.3

0.2 y = 0.017x + 0.0352 R2 = 0.9997 0.1

Linear (inaltimea picului)

0 0 (a) 5 10 concentratie Cr (g/L) 15

Figura 3.16.a. Curbe de etalonare obinute prin regresie liniar, 5-14g/L Cr


0.6

0.5

y = -0.0001x 2 + 0.036x + 0.0709 R2 = 0.9994 aria picului

absorbanta (u.a.)

0.4 inaltimea picului Poly. (aria picului) 0.2 Poly. (inaltimea picului)

0.3

0.1 y = -3E-05x 2 + 0.0176x + 0.0329 R2 = 0.9998 0 (b) 0 5 10 concentratie Cr ( g/L) 15

Figura 3.16.b. Curbe de etalonare obinute prin regresie neliniar, 5-14g/L Cr


aria picului 0.02 inaltimea picului

Yi-(a+bXi), (u.a.)

0.01

-0.01

-0.02 4 (a) 8 12 concentratie Cr ( g/L) 16

Figura 3.17. Erorile reziduale pentru funcia liniar (a) i neliniar (b), 5-14g/L Cr

13

Testul statistic de liniaritate a permis alegerea intre funcia liniara sau neliniara de etalonare pe domeniul 5-14 ppb Cr. In acest sens s-au calculat dipsersiile celor doua

DS 2 functii, sy1 si sy2, diferena dispersiilor DS i valoarea PG = = 1,10 < F7, 7, 0..99 = 2 sy2
2

6,99. Rezultatul testului arata ca functia neliniara nu aduce o imbunatatire metodei de analiza. Conform testului de omogenitate a dispersiilor dispersia valorilor de informare trebuie s fie independent de concentraie. S-au calculat dispersiile pentru primulsi
2 2 * ultimul punct din domeniul de lucru, s5ppb = 4,982 107 , s14ppb = 6,521 107 i valoarea de *
2 s14 ppb 2 s5 ppb

ncercare PG =

=1,31<F9,9,0.99

=5,35,

deci

abaterea

dispersiilor

nu

este

semnificativ, conform i acestui test domeniul de concentraii de lucru este 5-14ppb Cr. Reprezentarea grafic a rspunsurilor relative n funcie de valoarea logaritmic a concentraiei. Atunci cnd se reprezint grafic rspunsurile relative (absorban/concentraie) n funcie de valoarea logaritmic a concentraiei, linia obinut trebuie s fie orizontal pe ntreg domeniul liniar, cu o deviaie pozitiv la concentraii mici i o deviaie negativ la concentraii mari. Deviaiile nu trebuie sa depaeasc 5% din media rspunsurilor relative, lucru care se respecta practic pe domeniul ales.
absorbanta/concentratie (u.a./mg/L) 0.035 0.033 _____________________________________________________

0.030

0.025

0.020
0.017

_____________________________________________________
0.7 0.8 inaltimea picului 0.9 1 lg conc. Cr ( g/L) 1.1 1.2

0.015 0.6 aria picului

Figura 3.20. Reprezentarea grafic a rspunsurilor relative (A/C) n funcie de lgC

14

Metoda adaosului standard. Pentru a alege corect metoda de etalonare s-a trasat i curba de etalonare folosind metoda adaosului standard pe o proba de vin mineralizat. Se observ c, n cazul metodei adaosului standard, valorile pantei (barie=0,0173, binltime=0,0317) sunt foarte apropiate de cele obinute prin metoda simpl de etalonare (barie=0,017, binlime=0,0334, tabelul 3.5). n consecin, nu este necesar utilizarea metodei adaosului standard.
aria picului 0.8 0.7 0.6 absorbanta (u.a.) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 2 4 6 concentratie Cr (g/L) 8 10 inaltimea picului Linear (aria picului) Linear (inaltimea picului)

y = 0.0317x + 0.4756 R2 = 0.9958

y = 0.0173x + 0.2063 R2 = 0.9982

Figura 3.18. Curba de etalonare obinut prin regresie liniar pentru determinarea Cr folosind metoda adaosului standard In tabelul 3.11 este prezentat un rezumat al caracteristicilor functiei de etalonare liniar. Tabelul 3.11. Rezumat al caracteristicilor metodei i ai funciei de etalonare y = a + bx 0,0352+0,017x ordonata la origine, a 0,0352 panta = sensibilitatea, b 0,017 9,5 media concentraiilor etalon xi, x 0,1970 media valorilor de informare (absorbana), y abaterea standard rezidual, sy1 abaterea standard a metodei, sxo1 coeficientul de variaie a metodei, (Vxo) abaterea pantei, sb abaterea interseciei cu ordonata, sa coeficientul de determinare, R2 coeficientul de corelaie, R liniaritatea, (1-Sb/b)*100 9,5*10-4 0,0558 0,587 0,000105 0,00104 0,9997 0,9998 99,38

15

Sensibilitatea este dat de panta funciei de etalonare a metodei de analiz (b), pentru functia liniara si de derivata de ordinul intai pentru functia neliniara. Calitatea metodei de analiz crete atunci cnd scade abaterea standard rezidual i cnd crete sensibilitatea, raportul dintre cele dou caracteristici definind tocmai abaterea standard a metodei, sxo, i permite analistului s-i verifice calitatea propriei sale munci. Pentru a compara diferite metode de analiz se poate folosi coeficientul de variaie a metodei, exprimat n procente, Vxo. Valorile obinute pentru aceti parametri ai metodei sunt date n tabelul de mai sus. Limit de detecie (DL/LoD): (3*SD/b)= 0,084 g Cr/L Limit de determinare cantitativ (DML/LoQ): (10*SD/b)= 0,279 gCr/L Exactitatea metodei a fost urmarita prin gradul de recuperare a Cr din probe preparate de autosampler, preparate manual, pe blacuri de reactivi fortificate care urmeaza acelasi traseu cu proba si in cele din urma pe probe fortificate. Valorile obinute experimental pentru gradul de recuperare la diferite niveluri de concentraie se nscriu n intervalul 94,38105,50%, cu o medie a recuperrii de 100,163,27%.
Tabelul 3.13. Rezultate experimentale privind gradul de recuperare a Cr n etaloane preparate cu autosampler Cr etalon, 6 g/L (CA) Grad de Cr gsit recuperare g/L (CF) R% 5,926 98,77 6,037 100,62 6,06 101 6,296 104,93 5,663 94,38 5,875 97,92 5,9760,211 99,603,53
(*) (*)

Cr etalon, 9 g/L (CA) Grad de Cr gsit recuperare g/L (CF) R% 8,772 97,47 9,351 103,9 8,890 98,78 9,495 105,5 9,216 102,4 8,932 99,24 9,1090,287 101,223,19
(*) (*)

Cr etalon, 12 g/L (CA) Grad de Cr gsit recuperare g/L (CF) R% 11,47 95,58 11,78 98,17 12,39 103,25 12,11 100,92 12,43 103,58 11,58 96,50 11,960,41 99,673,43
(*) (*)

Recuperare medie total, R% : 100,163,27 (**) medie abaterea standard calculat pentru n=6 (**) medie abaterea standard calculat pentru n=18
(*)

16

De regula, la un set de 10 analize se intercaleaza un etalon de control pentru a verifica daca se mentin parametrii metodei la performantele initiale, cu astfel de puncte de control (ultimele 20) se pot intocmi diagrame de control pentru a verifica functionalitatea echipamentului in timp.
9.816 9.624 concentratie Cr ( g/L) 9.432 9.240 9.048 8.856 8.664 8.472 8.280

---------------------------------------------------------------------------------------------

LCS=9,813

---------------------------------------------------------------------------------------------

LC=9,049

--------------------------------------------------------------------------------------------0 3 6 9 12 15 18 21

LCI=8,285

(a)

numar determinare

Figura 3.21.a. Diagrama de control pentru valori individuale x privind regsirea concentraiei etalonului de 9 g/L Cr

1.148

amplitudine mobila R ( g/L)

--------------------------------------------------------------------------------------------0.861

LCS=0,938

0.574

0.287 ---------------------------------------------------------------------------------------------

LC=0,287

(b)

12

15

18

21

num ar determ inare

Figura 3.21.b. Diagrama de control pentru amplitudini mobile R privind regsirea concentraiei etalonului de 9 g/L Cr

17

De asemenea poate fi urmrit recuperarea pe etaloane preparate de ctre analist la diferite niveluri de concentraie. n cadrul studiilor de precizie a metodei au fost preparate cte 10 soluii etalon de crom pentru trei niveluri de concentraie (5, 10 si 14 g/L). Cu ajutorul acestor date poate fi verificat i exactitatea metodei (tabelul 3.15).
Tabelul 3.15. Rezultate experimentale privind gradul de recuperare a Cr n etaloane preparate manual Cr etalon, 5 g/L (CA) Cr etalon, 10 g/L (CA) Cr etalon, 14 g/L (CA) Grad de Grad de Grad de Cr gsit Cr gsit Cr gsit recuperare recuperare recuperare g/L (CF) g/L (CF) g/L (CF) R% R% R% 4,853 97,06 10,43 104,3 14,35 102,50 4,74 94,8 10,18 101,8 13,88 99,14 4,727 94,54 10,47 104,7 14,14 101,00 4,897 97,94 10,39 103,9 13,76 98,29 4,821 96,42 10,46 104,6 13,95 99,64 4,688 93,76 10,52 105,2 14,47 103,36 4,705 94,1 10,27 102,7 14,29 102,07 4,75 95 10,15 101,5 14,51 103,64 4,825 96,5 10,62 106,2 14,07 100,50 4,861 97,22 10,31 103,1 14,18 101,29 14,160,25 4,7870,073 95,731,46(*) 10,380,15 (*) 103,81,51(*) 101,141,79(*) (*) (*) Recuperare medie totala, R% : 100,233,74 (**) (*) medie abaterea standard calculat pentru n=10 (**) medie abaterea standard calculat pentru n=30

Se observ i n acest caz c valorile recuperrilor se nscriu n limitele acceptate teoretic. Comparnd valorile recuperarilor obinute n cele dou situaii, etaloane preparate cu ajutorul autosamplerului i de ctre analist, se constat, n acest ultim caz, un interval mai larg al recuperrilor att luate individual (93,76106,2%) ct i al mediilor fiecrui nivel de concentraie (95,73103,8%). Media recuperrii coninutului de crom din blancurile de reactivi fortificate este de 98,64%, iar valorile obinute individual se nscriu n intervalul 94,03-104,55%, nedepind limitele admise teoretic pentru acest nivel de concentraie [3].

18

Tabelul 3.17. Rezultate experimentale privind gradul de recuperare a Cr n blancuri de reactivi fortificate

Nr. crt. Ziua 1

Cr determinat n blancul de reactivi (g/L) <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD <LD

Cr adugat la blancul de reactivi (g/L)

Ziua 2

Ziua3

Cr gsit n blancul fortificat (g/L) 6,039 6 6,273 5,819 R1% = 100,733,79 5,983 6 5,642 5,803 R2% = 96,822,85 5,768 6,114 6 5,826 R3% = 98,383,09

Grad de recuperare Cr (%) 100,65 104,55 96,98 99,72 94,03 96,72 96,13 101,90 97,10

Recuperarea medie total: R% =98,643,30 (valoare medie abaterea standard)

n lipsa materialelor de referin, erorile sistematice [185, 212] cauzate de prelucrarea probei ct i interferenele nespectrale [201] pot fi studiate pe proba supus analizei, mai ntai n starea sa iniial i apoi mbogait cu o cantitate cunoscut de analit. Avantajul acestei metode este c se lucreaz direct pe matricea probei. Au fost analizate trei tipuri de vin, dou albe (probele I i II) i unul rou (proba III), mai ntai nefortificate i apoi fortificate cu analitul de interes la diferite concentraii.
Tabelul 3.18. Rezultate experimentale privind gradul de recuperare a Cr n mineralizatele de vin fortificate nainte de mineralizare (probele I-III) Cr gsit n proba de Cr det. n proba de Cr adugat la Grad de (*) proba de vin vin nefortificat recuperare Proba vin fortificat g/L R% g/L (CA) g/L (CU) (CF) (CF-CU) 10,25 3,132 104,40 7,118 3 9,738 2,620 87,33 9,474 2,356 78,53 I Recuperare medie: R% =90,09 11,53 4,620 5 11,21 4,300 10,97 4,060 Recuperare medie: R% =86,53 12,44 5,891 7 12,80 6,251 92,40 86,00 81,20 84,16 89,30

6,910

6,549

19

13,19

6,641

94,87

Recuperare medie: R% =89,44 Recuperare medie global: R % =88,69 8,212 2,960 8,262 3,010 3 8,198 2,946 Recuperare medie: R% =99,01 10,61 5,348 5 10,27 5,008 10,20 4,850 Recuperare medie: R% =101,96 12,55 7,200 7 12,76 7,410 12,86 7,510 Recuperare medie: R% =105,33 Recuperare medie global: R % =102,10 21,54 2,63 21,97 3,06 3 21,72 2,81 Recuperare medie: R% =94,44 22,94 4,97 5 22,40 4,43 23,75 5,78 Recuperare medie: R% =101,2 24,82 6,10 7 25,15 6,43 25,74 7,02 Recuperare medie: R% =93,10 Recuperare medie global: R % =96,25 Recuperarea medie total: R% =95,688,96 (*) media a trei probe paralele, fiecare prob citit de trei ori 87,67 102 93,67 99,4 88,6 115,6 87,14 91,86 100,29 98,67 100,17 98,20 106,96 100,16 98,76 102,86 105,86 107,29

5,252

5,262 II 5,350

18,91

17,97 III 18,72

Valorile obinute experimental pentru gradul de recuperare la diferite niveluri de concentraie se nscriu n intervalul 78,53-115,6%, cu media total a recuperrii de 95,68%, respectnd valorile prevzute de literatura de specialitate [3]. Pentru prelucrarea statistic a acestor rezultate n vederea stabilirii influenei pe care o poate avea nivelul de concentraie ct i matricea probei asupra determinrilor s-a aplicat testul one-way ANOVA (analiza de varian univariat sau unifactorial sau pe o singur cale) [87, 205, 206, 233] pe trei tipuri de vin (probele I-III), mai nti individual pe fiecare tip de vin i apoi pe toate cele trei vinuri la un loc (tabelul 3.22).

20

Tabelul 3.22. Rezultatele statistice obinute prin aplicarea testului ANOVA la recuperarea Cr din probele I-III

ANOVA: unifactorial SUMAR Grup Recuperare (%) Proba I Proba II Proba III A (3g /L) 90,09 99,01 94,44 B (5g /L) 86,53 101,96 101,2 C (7g /L) 89,44 105,33 93,10 ANOVA Dispersia Intergrup Intragrup Total SS 6,66 329,57 336,23 df 2 6 8

Numr 3 3 3 MS 3,33 54,93

Sum

Medie

Varian

283,54 94,51 19,90 289,69 96,56 75,65 287,87 95,96 69,24 Media general 95,68 F-calculat 0,061 F-critic 5,143

Precizia a fost demonstrata prin studii de repetabilitate i precizie intermediar

Repetabilitate: se exprim de regul prin abaterea standard relativ procentual a


repetabilitii (RSDr%), limita repetabilitii, indexul Horrat i prin intervalul de ncredere al mediei rezultatelor obinute. n general, calcularea RSD se face pentru o populaie de rezultate n6, iar intervalul de ncredere al mediei se poate determina la un nivel de ncredere de 95% [204]. (adic un prag de semnificaie =0,05). Repetabilitatea metodei dezvoltate n acest studiu a fost demonstrat ntr-o prim etap pe etaloane de crom de diferite concentraii (5, 10 i 14 g/L crom). S-au observat valori mici ale abaterii standard calculat n condiii de repetabilitate (<2%) care, pe etaloane i pentru cele trei niveluri de concentraie la care s-a lucrat, nu prezint o anumit dependen de concentraie. De asemenea, s-au obinut valori mici pentru repetabilitate, indexul Horrat, abaterea standard a mediei, intervalul de ncerdere la un nivel de siguran de 95%. Pe etaloane metoda s-a dovedit precis. S-a urmrit apoi repetabilitatea pe probe reale lund n lucru trei vinuri, dou albe (probele I i II) i unul rou (proba III) care au fost prelucrate conform procedurii descrise. S-a lucrat pe cte 6 probe independente pentru fiecare tip de vin. Rezultatele obinute, exprimate n g crom la litru de vin sunt date n tabelele 3.29-3.31.

21

Proba I xi Cr (g/L)

(xi- x )2 Numr de determiari (n)

Tabelul 3.29. Rezultate obinute la repetabilitate pentru proba I 1 2 3 4 5 43,38 40,39 41,53 40,85 46,61 0,808501 4,363225 0,89271 2,643334 17,10787 6 42,476 2,278 5,191 5,364 6,316 r (g/L) OIV Valoarea Horwitz r Index Horrat r sm (g/L) tsr / n (g/L) 6,378 17 0,315 0,9302 2,390

6 42,10 0,141251

x (g/L) sr (g/L)

2 r

RSDr % r (g/L) Ghid Eurachem

x tsr / n (g/L)

40,08544,866

Proba II xi Cr (g/L)

(xi- x )2 Numr de determinri (n)

Tabelul 3.30. Rezultate obinute la repetabilitate pentru proba II 1 2 3 4 5 32,18 33,46 33,44 32,34 32,14 0,279312 0,567762 0,529256 0,138012 0,31979 6 32,71 0,6057 0,366875 1,852 1,679 r (g/L) OIV Valoarea Horwitz r Index Horrat r sm (g/L) tsr / n (g/L) 1,696 17,67 0,105 0,247 0,635

6 32,69 0,00024

x (g/L) sr (g/L)

2 r

RSDr % r (g/L) Ghid Eurachem

x tsr / n (g/L)

32,07433,345

Tabelul 3.31. Rezultate obinute la repetabilitate pentru proba III Proba III xi Cr (g/L) 1 113,5 1,010025 2 119,72 27,19623 6 114,51 3,1672 10,03119 2,766 8,779 3 112,06 5,978025 4 111,38 9,765625 5 113,56 0,893025 8,868 14,63 0,19 1,293 3,323 111,18117,83 6 116,81 5,313025

(xi- x )2 Numr de determinri (n)

x (g/L)
sr (g/L)

r (g/L) OIV Valoarea Horwitz r Index Horrat r sm (g/L) tsr / n (g/L)

2 r

RSDr % r (g/L) Ghid Eurachem

x tsr / n (g/L)

Valorile acceptate ale abaterii standard relative depind de nivelul de concentraie al analitului si nu le depasesc pe cele prevazute teoretic. Precizia intermediar conform definiei dat de ICH reprezint variabilitatea pe termen lung a procesului de msurare atunci cnd probe identice sunt analizate/msurate prin aceeai metod, acelai laborator, utiliznd dou sau mai multe instrumente diferite, de ctre operatori diferii, pe o perioada mai lung de timp i este

22

determinat prin compararea rezultatelor unei metode pentru un anumit numr de sptmni. n acest scop au fost analizate cte 6 probe identice de vin (proba I)

conform procedurii analitice descrise anterior de ctre analiti diferii, n zile diferite i cu reactivi diferii. Rezultatele obinute mpreun cu mrimile statistice calculate i care se cer a fi verificate n astfel de studii, sunt trecute n tabelul recapitulativ 3.40.
Tabelul 3.40. Recapitularea rezultatelor i parametrilor statistici obinuti la demonstrarea preciziei intermediare a metodei de determinare cantitativ a cromului din vin prin GFAAS Proba de vin I Analist 1 Analist 2 xi Cr, (g/L) Analist 3 Analist Parametru 1 n 6 1 41,19 44,55 41,19 Analist 2 6
43,409 1,974 4,547 5,471 5,527

2 44,18 43,79 43,73 Analist 3 6


42,822 2,105 4,915 5,834 5,894

3 44,56 45,40 46,36 Analist 1+2 12


43,335 2,098 4,841 5,815 5,874

4 42,79 44,45 42,25 Analist 1+3 12


43,042 2,166 5,032 6,003 6,065

5 40,13 39,98 42,99 Analist 2+3 12


43,115 1,969 4,567 5,458 5,513

6 46,72 42,29 40,41 Analist 1+2+3 18


43,164 2,052 4,755 5,689 5,746

x (g/L)
sr,(g/L) RSDr% r [4] (g/L) r [OIV] (g/L) Horwitz value r Horrat value Hor sm (g/L) tsr / n (g/L)

43,262 2,403 5,554 6,660 6,728

17 0,327
0,981 2,521 40,74 45,78

17 0,267
0,806 2,071 41,34 45,48

17 0,289
0,859 2,208 40,61 40,03

17 0,285
0,606 1,332 42,00 44,67

17 0,296
0,625 1,375 41,67 44,42

17 0,269
0,568 1,251 41,86 44,37

17 0,280
0,484 1,021 42,14 44,18

x tsr / n (g/L)

Rezultatele experimentale obinute pe proba de vin I i valorile calculate ale parametrilor statistici n vederea evalurii preciziei intermediare dovedesc c metoda, elaborat i dezvoltat pentru determinarea cantitativ a cromului din probe de vin, rmne precis cu creterea variabilitii analitice i creterea numrului de msurri realizate. Robusteea unei proceduri analitice este o msur a capacitii acesteia de a rmne neafectat de variaii mici, dar deliberate, ale parametrilor metodei i ofer o indicaie privind sigurana metodei pe parcursul unei utilizri n condiii normale. In cadrul studiilor de robustete s-au urmrit stabilitatea soluiilor etalon, stabilitatea soluiilor de probe, modificarea deschiderii fantei de intrare n monocromator, influena

23

aciditii soluiilor analizate, modificarea condiiilor de lucru ale spectrometrului de absorbie atomic cu cuptor de grafit, modificri n ceea ce privete corecia zgomotului de fond (lampa cu descrcare n deuteriu) i tubul de grafit utilizat (tubul cu platforma). Pe parcursul unei zile atat solutia etalon de crom de 20g/L cat si solutia de vin mineralizat cu un continut in crom de ~7g/L, sunt stabile, lucru dovedit prin diagramele de control pentru valori individuale si amplitudini mobile. In ceea ce priveste stabilitatea solutiei etalon de crom de 20g/L pe parcursul a 23 de zile, rezultatele arata ca soluia i pstreaz compoziia nemodificat n ceea ce privete coninutul de crom timp de 17 zile, nu ns i 23 de zile (fig. 3.23 si .3.24).
0.35 y1 = 0.0183x + 0.0551 R2 = 0.9974 0.3 y3 = 0.0174x + 0.0548 R2 = 0.9991 0.25 y5 = 0.0193x + 0.0478 R2 = 0.9967 absorbanta (u.a.) 0.2 y7 = 0.0168x + 0.0566 R2 = 0.9991 0.15 y15 = 0.016x + 0.0558 R2 = 0.9991 0.1 y9 = 0.0176x + 0.0496 R2 = 0.9986 0.05 y11 = 0.0169x + 0.0498 R2 = 0.9992 0 0 2 4 6 8 10 conce ntratie Cr (g/L) 12 14 16 y23 = 0.0172x + 0.0194 R2 = 0.9986 y17 = 0.0183x + 0.0621 R2 = 0.9972 y13 = 0.0169x + 0.0511 R2 = 0.9962 ziua 1 ziua 3 ziua 5 ziua 7 ziua 9 ziua 11 ziua 13 ziua 15 ziua 17 ziua 23 Linear (ziua 1) Linear (ziua 3) Linear (ziua 5) Linear (ziua 7) Linear (ziua 9) Linear (ziua 11) Linear (ziua 13) Linear (ziua 15) Linear (ziua 17) Linear (ziua 23)

Figura 3.23. Date privind stabilitatea etalonului de crom de 20 g/L pe parcursul a 23 de zile

24

0.08

------------------------------------------------------------------------------------------------- LCS=0,0734
intersectia cu ordonata a 0.06

------------------------------------------------------------------------------------------------- LC=0,0502
0.04

------------------------------------------------------------------------------------------------- LCI=0,0271
0.02

0 ziua 1 ziua 3 ziua 5 ziua 7 ziua 9 ziua 11 ziua 13 ziua 15 ziua 17 ziua 23

0.05

0.04 amplitudine mobila R

0.03

------------------------------------------------------------------------------------------------- LCS=0,0284

0.02

0.01

------------------------------------------------------------------------------------------------- LC=0,0087

0 ziua 3 ziua 5 ziua 7 ziua 9 ziua 11 ziua 13 ziua 15 ziua 17 ziua 23

Figura 3.24. Diagrame de control pentru valori individuale ale ordonatei la origine, a i amplitudini mobile (R) privind stabilitatea etalonului de crom C=20 g/L pe parcursul a 23 de zile

Un studiu realizat, de asemenea, pe o prob de vin mineralizat, pstrat la frigider n flacon de polietilen (cu o concentraie C~7 g/L) a artat c pe parcursul celor 30 de zile urmrite, soluia i-a pstrat stabilitatea (fig. 3.27). Probele au fost citite la un interval de dou zile. S-a obinut concentraia medie x = 6,867 g/L, abaterea standard s=0,198 g/L i abaterea standard relativ procentual RSD% = 2,88%.

25

7.40

7.20 concentratie Cr ( g/L)

7.00

6.80

6.60

6.40

6.20

(a)

ziua 1

ziua 3

ziua ziua 5 7

ziua 9

ziua 11

ziua 13

ziua ziua 15 17

ziua 19

ziua 21

ziua 23

ziua ziua 25 27

ziua 29

numar determinare

Figura 3.27.a. Diagrama de control pentru valori individuale x privind stabilitatea soluiei de vin mineralizat pe parcursul a 30 de zile
0.8

amplitudine R ( g/L)

0.6

--------------------------------------------------------------------------------------------------- LC=0,647

0.4

0.2

--------------------------------------------------------------------------------------------------- LC=0,198

(b)

ziua 3 ziua 5 ziua 7 ziua 9 ziua 11

ziua 13

ziua 15

ziua 17

ziua 19

ziua 21

ziua 23

ziua 25

ziua 27

ziua 29

Figura 3.27.b. Diagrama de control pentru amplitudinea mobil R corespunztoare stabilitii soluiei de vin mineralizat pe parcursul a 30 de zile

S-a studiat influena aciditii mediului asupra determinrilor de absorban pe soluii de acid azotic de concentraii variabile de la C=0 moli/L, pn la C=3,44 moli/L, preparate cu ap ultrapur. Pe baza rezultatelor obinute (fig. 3.29) se poate spune c determinrile privind coninutul de crom depind semnificativ de concentraia de acid azotic. De aceea,

26

etaloanele de crom se recomand s fie preparate n acid azotic cu molaritate identic cu probele supuse msurrilor i toate diluiile ulterioare, atunci cnd este cazul, s se efectueze cu acid azotic C=3,44 moli/L.
0.04

0.03 absorbanta (u.a.)

0.02

0.01

0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 concentratie HNO3 (m oli/L) 0.006

----------------------------------------------------------------------------------0.005 amplitudinea, R (u.a.)

LCS=0,0055

0.004

0.003

0.002

----------------------------------------------------------------------------------0.001

LC=0,0017

0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 concentratie HNO3 (m oli/L)

Figura 3.29. Diagrama privind influena concentraiei HNO3 asupra determinrilor de absorban

In ceea ce priveste modificarea conditiilor de lucru ale spectrometrului (latimea fantei de intrare in monocromator, corectia zgomotului de fond Zeeman sau cu lampa cu descarcare in atmosfera de deuteriu) si ale cuptorului de grafit cu sau fara platforma, metoda s-a dovedit a fi robusta (fig. 3.28, tabelul 3.52).

27

Estimarea incertitudinii de msurare Sursele relevante de incertitudine sunt ilustrate n diagrama cauz-efect din figura 3.38.
Precizie, P Repetabilitate (repet. conc.; prep. prob) Precizie intermediar (repet. conc., prep. prob) Recuperare, R MRC

Temp. Vpip Etalon. Repet. Soluie etalon Repet. Etalon. Temp. Puritate/ Incertitudine

CCr Curba de etalonare Temp. Etal. Rep. Vpip Vbc Temp. Etal. Repet.

Vbc Conc. curba, Cm

Diluie prob, D Figura 3.38. Diagrma cauz-efect pentru determinarea incertitudinii Cr prin GFAAS

Incertitudinea extins U(CCr), aplicnd un factor de extindere k=2 (pentru un


nivel de ncredere de 95%), pentru proba I de vin atunci cand se aplica rezultatului o corectie tinand cont de gradul de recuperare este : U(CCr)=2*2,2511=4,5022 g/L Cantitatea de crom determinat prin GFAAS dup mineralizare este de: (44,7724,502) g/L (cu corecie) unde incertitudinea specificat este calculat folosind un factor de extindere k=2. Mrimea contribuiilor ficrei componente poate fi mai bine comparat ntr-o histogram care indic incertitudinea standard relativ (figura 3.39).

28

u(R) Componenta incertitudine

u(P)

u(D)

u(CM)

[u(CCr)]C

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

Incertitudinea standard relativa

Figura 3.39. Incertitudini n determinarea Cr prin GFAAS corecie R

Determinarea coninutului de Cr n vinuri romneti Au fost analizate in ceea ce priveste continutul de crom 47 de probe de vin (27 albe i 20 roii) achiziionate din magazin sau direct de la productor. Au fost selectate n special vinuri seci sau demiseci din patru regiuni viticole romneti i anume: Podiul Transilvaniei, Dealurile Moldovei, Dealurile Munteniei i Olteniei i Colinele Dobrogei. n acest scop fiecare prob a fost analizat de 3 ori i s-a calculat abaterea standard i abaterea standard relativ n condiii de repetabilitate. In vinurile albe se observ valori ale coninutului de crom variabile de la 18,84g/L pn la 104,80g/L cu o medie de 44,73g/L crom. Vinurile roii au un coninut cuprins ntre 15,71g/L i 115,83g/L cu o medie de 49,91g/L crom. Dac se ine cont de faptul c necesarul zilnic de crom este de 50-200 g (a se vedea seciunea 1.4.2) i c vinurile romneti conin frecvent crom ntre 30-60g/L (din cte se observ n cele 47 de vinuri studiate) consumul de vin poate fi considerat o surs important de asigurare a cerinelor zilnice de crom. Se observ diferene ntre vinurile din comer i cele achiziionate direct de la productor. In ultimul caz i n mod deosebit la vinurile albe, se observ coninuturi mai mici i oarecum apropiate la soiurile care provin din aceeai podgorie i mult diferite de cele provenite din alte areale viticole. De exemplu, vinurile de Pietroasa sunt mai srace

29

n crom dect cele de Valea Clugreasc. De asemenea, vinurile roii au un coninut mai ridicat n crom dect cele albe. In unele cazuri apar diferene ntre soiuri sau ntre anii de producie.

Cap. 4. Studii privind validarea unei metode de determinare a fierului din vinuri prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n flacr dup calcinare
Cercetrile realizate, in mod analog cu cele pentru crom, n vederea elaborrii i validrii unei metode de determinare a fierului prin FAAS au condus la urmtoarele rezultate: - stabilirea unei metode de mineralizare a probelor de vin prin calcinare la t=5500C i dizolvare a cenuii obinute cu un amestec de acid clorhidric i acid azotic; - stabilirea condiiilor optime de lucru pe flacr; - stabilirea parametrilor optimi de lucru ai spectrometrului (=248,3nm, laimea fantei de intrare a monocromatorului: 0,2nm, corecia de fond: D2-HCL, timpul de citire semnal: 4s); Studiile de validare au dovedit c metoda dezvoltat: - permite determinarea Fe din vinuri prin FAAS dup calcinare, mg/L; - este specific, la =248,3nm nu se cunosc elemente interferente; - este liniar pe domeniul de concentraii 1,5-15 mg/L fier; - LoD=0,03467 mg/L, LoQ=0,1156 mg/L; - este exact: mediile recuperrilor pe etaloane i probe reale (90-107,4%) i compararea rezultatelor obinute cu metoda testat cu cele obinute folosind metoda de referin propus de OIV. Mediile recuperrilor (90-107,4%) s-au nscris n limitele teoretice prevzute pentru nivelul de concentraie la care s-a lucrat (<20 mg/L). Testul ANOVA aplicat recuperrilor obinute pe trei vinuri i trei niveluri de concentraie nu evideniaz diferene ntre matricile i nivelurile de concentraie analizate, valoarea raportului F calculat fiind mai mic dect cea critic. Rezultatele obinute prin metoda testat i cea comparativ pe dou vinuri au fost supuse testului t i s-au obinut valori ale lui t (1,01 si 1,06) mai

30

mici dect valoarea critic, t=2,10, adic exist o bun concordan ntre rezultate. - este precis, s-au obinut valori mici pentru abaterea standard relativ, abaterea standard a mediei, intervalele de ncredere pentru medii, limita repetabilitii, calculate n condiii de repetabilitate i precizie intermediar. Indexul Horrat a fost subunitar n toate cazurile studiate, pe etaloane i probe mineralizate. - metoda este robust n raport cu aciditatea soluiei analizate. Modificarea deschiderii fantei de intrare a monocromatorului determin ns modificri ale pantei curbei de etalonare, respectiv ale sensibilitii metodei. Diagramele de control ntocmite pe valori individuale i amplitudini mobile pe o perioad de 30 de zile au artat ca soluia etalon de fier de concentraie C= 7,5 mg/L preparat n acid azotic C=0,1 mol/L, pstrat fie la frigider fie la temperatura camerei, este stabil. Proba mineralizat de vin pstrat la frigider a fost stabil timp de 30 de zile, perioad monitorizat. - incertitudinea de msurare este afectat n mare parte de repetabilitate apoi de recuperare i curba de etalonare; o influen mult mai mic o are diluia probei. - cantitatea total de fier determinat n 44 de vinuri romneti (24 albe i 20 roii) variaz ntre 0,836 mg/L i 9,305 mg/L cu o medie de 4,043 mg/L la vinurile albe i ntre 1,951 mg/L i 11,08 mg/L cu o medie de 4,386 mg/L la vinurile roii. n mod frecvent vinurile conin ntre 2 mg/L i 5,5 mg/L fier, cantiti care nu afecteaz stabilitatea fizico-chimic a vinului. Fierul este mai puin folosit n studiile de stabilire a zonei de provenien a unui vin, deoarece acesta este de multe ori corelat cu surse exogene.

31

CONCLUZII FINALE Experienele realizate n teza de doctorat au urmrit: elaborarea, dezvoltarea i validarea a dou metode de analiz i anume, o metod de determinare a cromului din vin prin spectrometrie de absorbie atomic cu atomizare n cuptor de grafit dup mineralizare cu microunde i o metod de determinare a fierului din vin prin spectrometrie de absorbie atomic dup calcinare. Ne-am propus punerea la punct a unei metode de determinare a cromului din vin deoarece metodele prezentate de ctre OIV nu includ cromul. n cazul fierului, dei exist metode OIV de determinare, am ales o metod alternativ n ceea ce privete partea de prelucrare a probei, este vorba de calcinare. Avantajul metodei propuse este reliefat prin faptul c proba astfel obinut poate fi analizat prin AAS n vederea determinrii i a altor metale prezente n vin. Vasta literatur existent n domeniu i cercetrile originale au condus la urmtoarele concluzii generale: Cunoaterea compoziiei minerale a strugurilor i vinurilor prezint o deosebit importan n vinificaie, deoarece constituenii minerali contribuie la echilibrul ntre componeni i influeneaz potenialul redox i procesele biochimice care se petrec n must i vin, cu influen asupra stabilitii fizico-chimice i a proprietilor organoleptice. Influena metalelor asupra calitii vinurilor nu este strict determinat de cantitatea lor total, cunoaterea fizico-chimic a formelor sub care se gsesc metalele n vinuri ajut la o mai bun nelegere a efectelor lor nutriionale i/sau toxice i a proceselor implicate n maturarea i mbtrnirea vinului, formarea de depuneri sau creterea vitezei de oxidare. Cunoaterea compoziiei minerale i a elementelor n urme permite identificarea zonelor de provenien a vinului, lucru de un real interes atunci cnd se pune problema falsificrii produselor originale. Att cromul ct i fierul sunt folosite, alturi de alte elemente, pentru determinarea autenticitii vinurilor. Metodele de analiz utilizate la determinarea metalelor din vinuri sunt deosebit de importante la stabilirea corecta a continutului de metale in vinuri, cele

32

recomandate oficial, n special cnd se pune problema unor litigii, sunt cele care au la baz spectrometria de absorbie atomic n vizibil i ultraviolet aplicat pe probe nemineralizate sau mineralizate pe cale umed sau calcinare. Cercetrile realizate n vederea elaborrii i validrii unei metode de determinare a cromului prin GFAAS dupa mineralizare cu microunde si a fierului prin FAAS dupa calcinare au condus la concluzia ca cele dou metode sunt relativ uor de realizat, sunt sensibile, nu necesit prelucrri dificile ale probei (mai puine surse de erori), nu necesit adaosuri de modificatori de matrice, nu necesit utilizarea metodei adaosului standard, sunt exacte, precise i robuste. n schimb, necesit echipamente si reactivi scumpi si operatori calificati. Bibliografie selectiv 67- M. Artimon, M. Pele, D. Balan, A. Ghionea, The correlation between metals concentration and the origin of wine, Buletin USAMV-CN, 60, 278-281, 2004. 87- M. Artimon, O. Iordache, M. Pele, I. Gh. Tnase, G. Vasile, Chromium determination from romanian wines using atomic absorption spectrometry, ISEAC 35 -

35th International Symposium on Environmental Analytical Chemistry, Gdansk,


Polonia, book of abstracts, pag. 135, 22-26 iunie, 2008. 88- M. Artimon, O. Iordache, G. Vasile, I. Botu, Researches concerning lead and cadmium contents in fruits, Lucrri tiinifice U.S.A.M.V.B., Seria B, L, 304-310, 2007. 105 - M. Artimon, D. Blan, G. Lu, M. Pele, Improvements in determination of lead in roumanian wines by electrothermal atomic absorption spectrometry, 1st thematic

workshop of the EU project NORMAN, Chemical Analysis of Emerging Pollutants,


Mao, Menorca-Spania, book of abstracts, p. 78, 27-28 November 2006. 106 - M. Artimon, I. Gh. Tnase, G. Vasile, Methods for the determination of the trace-elements of wine, European Society for New methods in Agriculture research,

XXXVI ESNA Annual Meeting, Iai, Romnia, Ion Ionescu de la Brad, 231-238, 2006.
107 - M. Artimon, I. Botu, O. Iordache, F. Israel-Roming, G. Vasile, Studies regarding food quality monitorisation heavy metal contents in fruits in Romania,

33

ISEAC 35 (35th International Symposium on Environmental Analytical Chemistry,


Gdansk, Polonia, book of abstracts, pag. 136, 22-26 iunie 2008. 108 - M. Artimon, Specific aspects of the heavy metals analysis in the sludge proceeding from refineries wastewater treatment plants, Ovidius University Annals of

Chemistry, 17 (2), 213-216, 2006.


160 - M. Artimon, I. Gh. Tnase, G. Vasile, "The validation of the method for iron determination from roumanian wines, using flame atomic absorption spectrometry", acceptat pentru publicare la Revue Roumaine de Chimie, 2008. 214 - M. Artimon, G. Vasile, L. Catana, Determination of some heavy metals in tomatoes and tomato sauce, Proceeding of BIOATLAS 2008 - International Conference

on New Research in Food and Tourism, Brasov, pag. 251-257, 4-7 iunie 2008.
233 - M. Artimon, I. Gh. Tnase, M. Pele, Gh. Campeanu, G. Vasile, Aspects concerning validation of a method for chromium content determination in Roumanian wines by ETAAS after microwave mineralization, acceptat pentru publicare la

Roumanian Biotechnological Letters.


234 - M. Artimon, V. Dumitrescu, I. Gh. Tnase, M. Pele, R. Nedelcu, The optimization of the methods for Cu, Zn and Pb content determination in Roumanian wines by AAS after dry or microwave mineralization, acceptat pentru publicare la

Roumanian Biotechnological Letters.


240 - M.Artimon, I.Gh.Tnase, M.Pele, G.Vasile, Studies regarding the evaluation of the performance characteristics in order to validate a method for iron determination in wines using flame atomic absorption spectrometry, Simpozionul 115 de ani de

cercetare, nvmnt i producie viti-vinicol i pomicol la Pietroasa i Istria, 3031 octombrie 2008, Bucuresti-USAMV, Istria i Pietroasele, Buzu. 241 - M.Artimon, I.Gh.Tnase, M.Pele, G.Vasile, Studies Regarding the Evaluation of the Performance Characteristics in Order to Validate a Method for Iron Determination in Wines Using Flame Atomic Absorption Spectrometry, Lucrri

tiinifice USAMVB, Seria B - LII - 2008, p.93-101.

34

242 - Artimon, O. Iordache, M. Pele, I. Gh. Tnase, G. Vasile, Chromium determination from romanian wines using atomic absorption spectrometry, trimis pentru publicare la International Journal of Environmental Analytical Chemistry, 2008.

35