7

BIODETERIORAREA SI BIODETERIOGENII
7.1. Biodeteriorarea 7.2. Condiii de dezvoltare a biodeteriogenilor 7.3. Surse de contaminare 7.4. Categorii de biodeteriogeni i rolul lor n procesul de biodeteriorare

Prof. Univ. Dr. Ioana Gomoiu* Prof. Dr. Elias Chatzitheodoridis**

* Universitatea Naional de Arte ** Universitatea Naional Tehnic din Atena

7.1. Biodeteriorarea

iodeteriorarea este un proces cu efecte distructive asupra monumentelor istorice i este rezultatul unui complex de interaciuni ntre biodeteriogeni (organisme care se dezvolt pe suprafaa, n profunzimea sau n apropierea monumentului, ntre acetia i substrat, respectiv condiiile de microclimat. Caracteristicile substratului, prezena apei i a depunerilor n principal de natur organic, valoarea temperaturii, lumina, determin desfurarea procesului de biodeteriorare cu intensitate diferit deoarece creterea i multiplicarea biodeteriogenilor are loc numai dac parametrii specifici care le asigur metabolismul au valori corespunztoare.

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

Biodeteriorarea este efectul activitii metabolice a organismelor vii care gsesc condiii optime de dezvoltare. In funcie de intensitatea proceselor metabolice suprafaa operei de art poate fi colonizat de microbiodeteriogeni (microorganisme: bacterii, fungi, alge). Efectele biodeteriorrii sunt specifice pentru fiecare categorie de microbiodeteriogen; acestea se cumuleaz n timp n funcie de mecanismele prin care tipurile de microbiodeteriogeni au colonizat n trepte suprafaa respectiv i au acionat distructiv. Biodeteriorarea s-a identificat att la exteriorul ct si la interiorul monumentului Corbii de Piatr. La exterior, acest proces acioneaz la nivelul rocii i a unicului zid existent dar efectele majore se constat pe termen lung. Astfel, la baza zidului exterior s-au pus n eviden detari prin aciunea combinat a plantelor i a factorilor climatici. In spaiile dintre pietrele de construcie care au devenit decoezive, plantele ierboase i fixeaz rdcinile. Acelai proces s-a identificat n fisurile rocii situate deasupra bisericii unde se dezvolt plante lemnoase (detalii n cap. 3). La interior, biodeteriorarea acioneaz direct la nivelul picturii murale i a suportului acesteia. Efectele biodeteriorrii sau identificat in situ prin examinarea direct, cu ajutorul aparatelor de mrire, n lumin direct i razant iar nregistrarea fotografic a devenit un document care reflect starea de conservare a picturii murale studiat in perioada 2007-2010. Examinarea in situ permite pe baza recunoaterii morfologiei specifice s fie emis suspiciunea de biodeteriorare. Dovada cert a desfurarii procesului de biodeteriorare i implicit a existenei biodeteriogenilor s-a adus dup recoltarea probelor prin metode non distructive, examinarea la microscopul optic i electronic i prelucrarea lor n condiii de laborator, respectiv identificarea categoriei sau a apartenenei taxonomice a acestora. In biserica rupest Corbii de Piatr procesul de biodeteriorare este extins la toi pereii precum i la obiectele existente n fiecare ncpere. Totui, se poate spune c, peretele nordic din naos se afl in faza cea mai avansat de biodeteriorare pentru c a fost colonizat n timp de mai multe generaii succesive de cianobacterii, alge verzi, fungi i briofite. La momentul examinrii, n zonele unde s-au identificat briofite stratul pictural nu mai exist iar mortarul este decoeziv i ader la prile componente ale talului acestora. Un strat extins de biofilm verde este vizibil pe tot peretele nordic, sudic, pe bolt i n altar. De fapt, la intrarea n naos, privirea oricrui vizitator este atras de culoarea verde n diferite nuane care nu permite citirea scenelor picturii murale nici n locurile unde aceasta se mai pstreaz; lacunele sunt acoperite de asemenea de biofilmul de culoare verde n diferite nuane n funcie de grosime i tipul de microorganism generator.

Efectele biodeteriorrii pot fi puse in eviden in situ chiar de ctre restauratori prin examinarea aspectului estetic al suprafeelor i recunoaterea morfologiei specifice. Modificrile aprute ca urmare a procesului de biodeteriorare precum i intensitatea acestora depinde de tipul de biodeteriogen/i precum i de numrul generaiilor de colonizatori care s-au succedat. In biserica rupestr Corbii de Piatr au fost identificate urmtoarele tipuri morfologice de degradri determinate de aciunea combinat a biodeteriogenilor i a condiiilor de microclimat: Cruste de culoare neagr, patin de culoare brun-neagr, exfolieri, pulverulen - sunt determinate de dezvoltarea bacteriilor autotrofe; s-au identificat n partea inferioar a catapetesmei i n altar (fig. 7.1 i 2); Pulverulen de culoare gri-albicioas, patin de culoare nchis - sunt determinate de bacterii heterotrofe filamentoase (actinomicete; fig. 7.3); s-au identificat n zona median a catapetesmei; Suprafa acoperit de biofilm lucios i/sau mat de culoare albstrui-verzuie, patin de culoare nchis - sunt determinate de cianobacterii; s-au identificat n pronaos, pe peretele nordic din naos i n altar (fig. 7.4); Suprafa acoperit de biofilm lucios i/sau mat de culoare verde de diferite nuane, patin de culoare nchis - sunt determinate de alge verzi; s-au identificat pe toi pereii din naos i altar; Aspect pslos sau prfos, pete colorate, exfolieri - sunt determinate de fungi; s-au identificat pe pereii din naos, n altar i proscomidiar (fig. 7.6-9) Strat de culoare verde n diferite nuane, cu aspect continuu sau n mase izolate este determinat de briofite; s-au identificat pe pereii exteriori ai rocii, pe peretele interior nordic din naos (fig. 7.10) i n altar (fig. 7.11); Cruste de diferite culori, excavaii, clivri - sunt determinate de licheni; s-au identificat pe partea exterioar a zidului i pe roc; Crpturi, detari de materiale - sunt determinate de plante superioare (acioneaz mecanic prin rdcini; fig. 7.12) identificate la baza zidurilor precum i de licheni identificai pe zidul exterior i pe roc (acioneaz biochimic prin producerea de acizi organici; fig. 7.13); Un aspect morfologic deosebit al biodeteriorrii observat predominant pe mortar, n altar i sporadic pe peretele nordic este reprezentat de stratul de origine biologic gros de 1-3 mm de culoare brun, consisten moale, avnd forme neregulate. Pictura mural care s-a mai pstrat, are aspect lucios datorit peliculei foarte subire de ap de la suprafa rezultat att din

142

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.1.

Patin i cruste de culoare neagr pe catapeteasm

Fig. 7.2.

Patin i cruste de culoare neagr in altar

Fig. 7.4.

Biofilm produs de cianobacterii peretele nordic din naos

Fig. 7.3.

Strat pulverulent de culoare gri produs de actinomicete sporulate n partea median a catapetesmei

Fig. 7.5.

Biofilm produs de alge verzi n naos

143

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

Fig. 7.6.

Exfolieri n pronaos

Fig. 7.7.

Zone colorate n galben n naos

Fig. 7.8.

Aspect pslos-miceliu nesporulat (Aspergillus niger) n altar

Fig. 7.9.

Aspect pslos-miceliu sporulat (Aspergillus flavus) n altar

Fig. 7.10. Briofite pe peretele nordic n naos

Fig. 7.11. Briofite identificate n altar

144

Fig. 7.12. Plante fixate n crpturile rocii

Fig. 7.13.

Licheni, briofite i plante superioare pe peretele exterior i deasupra acestuia

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.14.

Urme din stratul gros de organisme fotoautotrofe n regresie

Fig. 7.15.

Strat gros de organisme fototrofe n faza de descompunere i urme din cel anterior

percolarea apei n substrat ct i din atmosfera saturat cu vapori (fig. 7.14 i 15). In altar s-au identificat zone n care se menin urmtoarele stadii: strat de organisme fotoautotrofe n dezvoltare, mase mici neregulate de organisme fotoautotrofe descompuse (fig.16), strat continuu extins de microorganisme fotoautotrofe n curs de descompunere (fig. 7.17). Prin examinarea macroscopic (fig. 7.18) n funcie de aspectul morfologic s-a presupus c organismele fotoautotrofe sunt reprezentate de briofite i alge iar descompuntorii sunt fungi microscopici. Cteva mase de dimensiuni mici i forme neregulate dei extrem de fragile au fost desprinse de pe mortar i au fost examinate la microscop. Acestea prezint la suprafa n cea mai mare parte alge descompuse dar i n faz activ; se observ de asemenea hife ale unor specii de fungi neidentifica-

te taxonomic dar implicate n descompunerea algelor moarte. Existena algelor n faz activ este o dovad a existenei apei n substratul respectiv, a folosirii acestuia ca nie ecologic i a ptrunderii luminii (fig. 7.19 i 20). Algele, ajunse n interiorul monumentului la senescen sunt descompuse de fungi (fig. 7.21). Pe dosul maselor analizate ca i n zona central a acestora se gsesc briofite i alge n curs de descompunere (fig. 7.22). Ritmul de descompunere este lent n condiiile de microclimat din biseric, dar se poate afirma cu certitudine c cel de descompunere al briofitelor este mai lent dect cel al algelor datorit complexitii structurii peretelui celulei vegetale. Meninerea tulpinielor de briofite i a frunzulielor n structura maselor analizate ne determin s considerm c forma i reinerea pe suprafaa mortarului este dependent de prezena acestei categorii de organisme foto-

Fig. 7.16.

Diferite faze de existen a organismelor fotoautotrofe

Fig. 7.17.

Strat de briofite si alge n dezvoltare i n descompunere

145

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

autotrofe precum i de mortarul decoeziv la care au aderat. In msura n care particulele de mortar se deprind de perete formaiunea se detaeaz i se identific la baza peretelui sub form de depunere. In zonele unde mortarul este liber presupunem c acesta a fost colonizat numai de ctre algele verzi filamentoase care s-au descompus mai repede, s-au desprins cu uurin i au lsat locul accesibil pentru o nou colonizare; aceasta este posibil n permanen n condiiile de microclimat existente n biseric. In structura unor mase mici de orgine biologic s-au pus n eviden prin observaiile microscopice alge verzi care ader la particule ale mortarului devenit decoeziv (fig. 7.23). Cercetrile efectuate ne permit s propunem urmtorul scenariu al proce-

sului de biodeteriorare pe suprafeele mai sus menionate: Analizele biologice efectuate la nivelul picturii murale demonstreaz faptul c cea mai mare parte a acesteia se afl ntr-un stadiu foarte avansat de biodeteriorare. Prezenta starea de conservare nu este rezultatul exclusiv al biodeteriorarii ci a aciunii simultane a factorilor fizici, chimici si a organismelor vii care au gsit conditii optime pentru cretere, dezvoltare i multiplicare (prezena apei, valori optime de temperatur, pH, lumin, compui organici etc). Ca urmare a procesului de biodeteriorare, la suprafaa i n profunzimea picturii murale precum si a obiectelor de cult din biserica rupestr Corbii de Piatr apar modificri uneori greu sau imposibil de restaurat. Astfel culoarea albstruie si verde determinat de prezena cianobacteriilor

Formarea stratului de origine biologic, continuu, de culoare verde, rezultat din colonizarea suprafeei de ctre alge verzi i briofite; Aderarea acestuia la particulele de mortar;

In stadiul de senescen stratul de orgine biologic este descompus de ctre fungi i actinomicete ceea ce determin nlocuirea culorii verzi cu brun i negru n diferite nuane;

Fig. 7.18.

Detaliu coninnd urme din stratul gros de organisme fototrofe (altar)

Desprinderea unor pri de biofilm descompus duce la apariia spaiilor libere; Formarea maselor mici, groase avnd contur neregulat prin nglobarea particulelor de mortar devenit decoeziv, a fragmentelor de briofite, alge moarte dar i de alge verzi vii;

Recolonizarea spaiilor libere; Meninerea stratului de origine biologic i contur neregulat sub forma maselor dispuse diferit; Continuarea procesului de descompunere i detaare a prilor corespunztoare

Fig. 7.19.

Mase mici neregulate de organisme fototrofe (altar)

146

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

i algelor pe pereii din naos si altar se poate ndeprta de la suprafaa picturii murale prin procesul de curare dar la nivelul porilor rmn celule care pot iniia un nou proces de biodeteriorare n condiiile n care microclimatul nu se schimb. In cazul n care se folosec algicide suprafeele trebuiesc monitorizate pentru c eficiena poate s nu fie cea sperat i in plus pot apare efluorescene. Incercrile de decontaminare efectuate pe peretele nordic au fost eficiente dar dup un an de la aplicare au aprut eflorescene. In alte cazuri, culoarea neagr datorat eliberarii pigmenilor melanici de ctre fungi (Ulocladium chartarum, Cladosporium sp.) poate fi redus ca intensitate prin folosirea compuilor care sunt compatibili cu pigmenii din pictura mural dar nu poate fi ndeprtat n totalitate deoarece acetia

sunt fixai chimic la nivelul stratului pictural sau a mortarului (catapeteasm, proscomidiar). Biodeteriorarea poate avea ca efect pierderea de materie (lacune n stratul pictural si mortar, pierderea coeziunii identificate n pronaos, naos si altar) cnd microbiodeteriogenii folosesc depunerile organice de la suprafaa picturii murale ca substrat nutritiv i elibereaz in timpul colonizarii acizi organici. Modificri cu efect estetic datorit dezvoltrii biodeteriogenilor chimioautotrofi i fotoautotrofi (patina de culoare verde, negr, apariia petelor colorate) s-au pus n eviden pe peretii tuturor ncperilor precum i pe bolta naosului i altarului). Biodeteriorarea este iniiat de biodeteriogeni prin folosirea substratului ca ni ecologic, nutrient (procese de

Fig. 7.21.

Fungi cu rol n descompunerea algelor

Fig. 7.20.

Noua generaie de alge

Fig. 7.22.

Briofite n faza de descompunere - capetele conidiene de Aspergillus niger.

Fig. 7.23.

Alge verzi adernd la mortarul decoeziv

147

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

asimilaie=anabolism) sau prin metaboliii produi (procese de descompunere=catabolism; Gaylarde i colab., 2003). Substratul care urmeaz s fie colonizat devine bioreceptiv (totalitatea proprietilor care favorizeaz ataarea, creterea i multiplicarea uneia sau mai multor categorii de organisme). Biodeteriorarea conduce la modificarea microstructurii, coninutului de ap i a umiditii relative. Pe suprafaa picturii murale din biserca Corbii de Piatr sau identificat microorganisme care determin un proces intens de biodeteriorare i acioneaz att la nivelul stratului pictural ct i al suportului. Dup apariia procesului de colonizare, microbiodeteriogenii fac parte integrant din monument i contribuie la pierderea semnificativ a stratului pictural, la acoperirea acestuia cu biofilm de culoare verde sau neagr. In biserici, comunitile microbiene i stratul pictural fac parte din mesocosm i se caracterizeaz prin stabilitate i izolare de mediul extern (Pepe i colab., 2008). Procesul de biodeteriorare a picturii murale executate n tehnica al fresco ncepe chiar din momentul iniierii colonizrii iar intensitatea acestuia se coreleaz cu cea a metabolismului pe termen scurt, cantitatea de depuneri de natur organic i cu cea a numrului etapelor de succesiune parcurse de la prima colonizare (Saarela i colab., 2004). Primii colonizatori ai picturii murale executate n tehnica al fresco sunt bacteriile chemolitotrofe care determin coroziunea biologic a materialelor de legtur prin capacitatea acestora de a produce acizi. Bacteriile chemoorganotrofe se dezvolt

pe suprafee cu un coninut foarte sczut de compui organici (urme) i sintetizeaz acizi care determin solubilizarea componentelor minerale dar i procese de decolorare (Tomaselli, 2003). Efectele biodeteriorrii determinate de aceast categorie de biodeteriogeni s-au identificat la baza pereilor interiori din naos (la baza acestora). Microorganismele fotoautotrofe se dezvolt pe paviment i pe pereii umezi care primesc lumin natural (prin unica fereastr din naos, ua din pronaos) i/sau artificial (iluminatul electric). Coninutul crescut de compui organici de la suprafaa picturii murale reprezentai de depunerile atmosferice, contactul direct al enoriailor i produii rezultai din descompunerea biodeteriogenilor dup ncetarea activitii vitale, permit colonizarea acesteia de ctre microorganisme heterotrofe (bacterii i fungi) care acioneaz n sens distructiv prin mecanisme biochimice i mecanice, toate conducnd la alterarea estetic a imaginii. Acumularea materiei particulate din atmosfer la suprafaa dezintegrat n condiii de microclimat adecvate (lumin i umiditate) favorizeaz dezvoltarea briofitelor. Momentul n care a nceput prezentul studiu care a constituit obiectivul proiectului Strategie integrat de cercetare a strii de conservare a unor biserici rupestre n vederea restaurrii i punerii n valoare-studiu de caz: Corbii de Piatra (SICBR) 91001/2007 nu a permis punerea n eviden a tuturor etapelor de colonizare pe suprafaa picturii murale. Acestea au fost identificate n diferitele ncperi ale monumentului sau au fost presupuse pe baza cercetrilor de microscopie optic i electronic.

7.2. Condiii de dezvoltare a biodeteriogenilor

In biserica rupestr Corbii de Piatr exist condiii optime pentru dezvoltarea biodeteriogenilor pe tot pracursul anului, ceeace determin un proces continuu de deteriorare, accentuat de cel de biodeteriorare. Pictura mural, acolo unde exist sau mortarul, pot fi folosite ca nie ecologic sau ca substrat nutritiv n funcie de tipul de microbiodeteriogen colonizator. Biodeteriogenii se dezvolt i exercit actiunea lor distructiv asupra monumentului n condiiile existenei substratului ce prezint caracteristici favorabile, a compuilor nutritivi, a apei n substrat i n aer, a luminii, a valorilor optime de temperatur, a curenilor de aer i a desfurrii unor activiti umane neadecvate cu asigurarea conservrii. Substraturile pe care s-au identificat biodetriogeni sunt reprezentate de pictura mural, mortar, roc (ultimele au suprafee ce vin n contact direct cu mediul din biseric) i diferite obiecte religioase sau de folosin curent. Microorganismele fotoautotrofe se dezvolt pe pictura mural i pe mortar pe care le folosesc ca nie ecologic. Pentru fotosintez, n majoritatea cazurilor, aceti microbiodeteriogeni preiau srurile minerale din apa care percoleaz prin roc i n mod excepional cele din substrat; CO2 exist ca gaz n atmosfer dar concentraia acestuia crete datorit procesului de respiraie a biodeteriogenilor, a enoriailor care particip la serviciul religios i a vizitatorilor; lumina natural ptrunde prin fereastra din naos si ua despritoare din pronaos iar cea artificial provine de la candelabrul situat in naos. Structura poroas a stratului pictural,a mortarului i a rocii, prezena unor fisuri i a lacunelor contribuie la creterea randamentului de fixare a microorganismelor, condiie esenial pentru iniierea procesului de colonizare. In acelai timp, celulele fixate sunt protejate de variaiile de temperatur, compuii chimici folosii n decontaminare si au acces mai uor la apa

148

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.24.

Colonizarea picturii murale i a mortarului de ctre alge (perete nordic din naos)

Fig. 7.25.

Colonizarea lacunelor de ctre alge (perete nordic din naos)

Fig. 7.26.

Alge fixate n fisuri (altar)

Fig. 7.27.

Alge fixate la nivelul porilor (pronaos)

Fig. 7.28.

Dezvoltarea fungilor pe corpurile moarte ale narilor existente in altar

Fig. 7.29.

Biofilm algal in diferite faze de dezvoltare (perete sudic din naos)

149

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

existent n pori (fig. 7.25 i 26). In pronaos, unii pori, prin pierderea pereilor au confluat iar la suprafa sunt colmatai de alge (fig. 7.27). Prezena unor compui organici n structura stratului pictural (dispersia de cazeinat), sau a unor obiecte din biseric (tergare, icoane, strane, cutii de depozitare, suport papetar de natur celulozic, lumnri), a depunerilor organice care se acumuleaz din atmosfer de-a lungul timpului sau din descompunerea colonizatorilor constituie substratul nutritiv pentru microorganismele heterotrofe (bacterii si fungi). Corpurile narilor sau ale altor insecte, ale acarieni care dup ncetarea activitii vitale rmn ataate de pereii i bolta altarului dar i n proscomidiar, reprezint de asemenea o surs nutritiv pentru fungii ai cror produi de metabolism acioneaz distructiv asupra picturii murale - n locurile unde se mai pstreaz- sau asupra mortarului (fig. 7.28). Apa percoleaz prin structura poroas a rocii i a stratului pictural i determin n corelaie cu valoarea temperaturii creterea valorii umiditii relative. Apa este un factor vital pentru biodeteriogeni dar cantitatea optim este specific pentru fiecare categorie taxonomic. Astfel, cianobacteriile, algele si briofitele se dezvolt pe suprafee care au un coninut mare de ap dar care primesc i lumin. Culoarea verde determinat de dezvoltarea algelor, identificat pe toi pereii din naos indiferent dac au pictur mural sau nu, se coreleaz ntotdeauna cu existena apei n suprafaa acoperit. Incetarea activitii vitale este desigur dependent de starea fiziologic a celulelor respective dar i de reducerea coninutului de ap din suprafa chiar dac are loc pentru perioade scurte i pe suprafee limitate. Dei microorganismele folosesc apa din substrat pentru propriul metabolism, coninutul acesteia nu se reduce substanial datorit aportului provenit din percolarea prin structura poroas. Lumina este strict necesar pentru microorganismele fotoautotrofe. Acestea se dezvolt abundent n direcia ptrunderii fasciculului luminos sau a distribuiei luminii de la candelabru. Lumina este de asemenea necesar pentru desfurarea procesului de sporulare pentru unele genuri fungice (Cladosporium, Ulocladium, Alternaria). In acest ultim caz lumina nu afecteaz procesul de biodeteriorare produs de fungi ci numai parcurgerea ciclului biologic al speciilor respective. Rspndirea acestora pe suprafee necontaminate i implicit colonizarea se poate face prin fragmente de hife (propagule) desprinse din miceliu.

Dei temperatura fluctueaz pe parcursul anului, microorganismele fotoautotrofe sunt adaptate la valorile acesteia i n permanen patina de culoare verde n diferite nuane este evident. Momentul ncetrii activitii vitale a microorganismelor fotoautotrofe se coreleaz cu reducerea intensitii culorii verzi, modificarea acesteia spre brun i intrarea n descompunere, ceea ce echivaleaz cu procesul de colonizare aparinnd treptei urmtoare, iniiat n principal de fungi (micoroganisme heterotrofe care sintetizeaz enzime ce descompun pereii celulari i coninutul citoplasmatic al microorganismelor fotoautotrofe. Fluctuaiile de temperatur favorizeaz apariia condensului pe ferestre (fig. 7.30), mortar sau chiar pe stratul pictural. O parte a condensului de pe perei se evapor i contribuie la creterea valorii umiditii relative iar alta se absoarbe. In ultimele dou cazuri, picturile de condens au att rolul de a stimula creterea i multiplicarea biodeteriogenilor (fig. 7.32 i 33) ct i cel de a transporta celule ale microbiodeteriogenilor de pe suprafee contaminate pe alte suprafee care vor fi astfel contaminate i colonizate n 2-10 zile. In plus, condensul, contribuie la creterea valorii umiditii relative i a coninutului de ap din perei. In biseric, temperatura medie zilnic este de 12.4C iar umiditatea relativ este de 80.3%. Curenii de aer chiar i de intensitate mic determinai de deplasarea enoriailor i a vizitatorilor n interiorul bisericii sau formai prin meninerea deschis n permanen a ferestrei din naos i a uii de la intrarea n pronaos, acioneaz ca un vehicul al celulelor microbiodeteriogenilor existente pe unele suprafee spre cele necontaminate; n acelai timp transport noi microorganisme din exteriorul bisericii, unele dintre acestea fiind chiar biodeteriogeni. Condiiile de microclimat din biserica rupestr Corbii de Piatr sunt favorabile pentru dezvoltarea microorganismelor pe orice suport cu structur organic. De aceea, existena obiectelor religioase i de folosin permanent care au structura lemnoas, cele ce au suport textil si papetar reprezint att substraturi care sunt colonizate rapid ct si surse peremanente de microbiodeteriogeni. Mentionm dintre acestea covoarele gsite n anul 2008, tergarele, icoanele policrome pe substrat lemnos (fig. 7.34), casetele de lemn (fig. 7.35), pervazul ferestrei din naos, stranele, ua din pronaos (fig. 7.36), cutiile de depozitare a lumnriilor din pronaos (fig. 7.37), notele informative pe hrtie (fig. 7.43 i 44)

150

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.30.

Apariia condensului pe ferestre

Fig. 7.31

Apariia condensului pe mortar

Fig. 7.32.

Apariia condensului pe pictur

Fig. 7.33.

Condens la suprafaa biofilmului verde

Fig. 7.34.

Coniophora puteana pe rama unei icoane n naos

Fig. 7.35. Fungi dezvoltai pe cutia cu moate n naos

Fig. 7.36.

Colonizarea uii din pronaos de ctre fungi

Fig. 7.37.

Colonizarea de ctre fungi a lumnrilor depozitate n pronaos

151

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

7.3. Surse de contaminare

Sursele de microbiodeteriogeni pot fi localizate atit n exteriorul i ct si n interiorul bisericii. Prin mijloace de transport specifice sau nespecifice acetia ajung la suprafaa picturii murale i a mortarului, unde n funcie de necesitile nutritive i microclimat pot coloniza sau nu suprafaa respectiv, ajungnd la maturitatea biologic sau nu. Pentru a evalua riscul de contaminare a picturii murale trebuiesc luate n considerare: curenii de aer i ncrctura microbian a aerului (variaz n funcie de microclimat, sezon, orele de desfurare a serviciului regios i cele de vizitare, fluxul enoriailor si al vizitatorilor), structurile arhitecturale (aperturi, nlimea ncperii, locul de plasare a picturii murale). Principalele surse de microorganisme din afara bisericii sunt: vegetaia ierboas i lemnoas din curtea perimetral, de pe roc, punile i culturile agricole din nprejurimi, animalele moarte (accidental). Celulele vegetative bacteriene, fragmentele hifale i sporii din exterior sunt transportate n interior prin intermediul precipitaiilor (ajung n naos prin spaiile din jurul ferestrei), prin apa care percoleaz prin porii rocii, a curenilor de aer (calzi, reci sau de convecie) i a enoriailor (ncrctura microbian a vestimentaiei i a prilor organismului uman care vin n contact cu suprafaa picturii murale). Principalele surse de contaminare din interiorul bisericii se gsesc pe pictura mural, mortar, crmizi, cablul electric. Analizele de laborator au demonstrat prezena fungilor productori de pigmeni melanici (Aureobasidium sp., Alternaria sp. Cladosporium sp. Ulocladium chartarum, Stachybotrys atra) pe cablul electric (fig. 7.38). Pe suportul lemnos al icoanelor , pervaz, strane s-au idenedtificat Coniophora puteana, Chaetomium globosum i Trichoderma viride (fig. 7.39). Tetrapodul a fost colonizat n exclusivitate de Coniophora puteana (fig. 7.40). Pe suportul textil ce conine fibre de celuloz dar i depuneri de natur organic s-au observat pete de culoare brun ce corespund existenei urmtoarelor specii fungice: Aspergillus niger, Cladosporium sp., Alternaria alternata, Aureobasidium pullulans. Se consider c acesta reprezin o sursa de biodeteriogeni pentru pictura mural deoarece exist identitate taxonomic (fig. 7.41). Suportul papetar din coninutul caietului de impresii ale vizitatorilor (situat n pronaos; fig. 7.42), a notelor informative (situate n pronaos i naos; fig. 7.43 i 44) i cel din structura unor icoane, conine urmtoarele specii fungice cu activitate celulozolitic: Cladosporium herbarum, Alternaria alternata, Chaetomium globosum, Trichoderma viride, Aspergillus sp. Lumnrile (fig. 7.45 i 46) depuse de enoriai n diferite locuri, picturile de cear rezultate din arderea nesupravegheat a lumnrilor, corpuri ale insectelor moarte (fig. 7.47) i resturile alimentare ce conin carbohidrai se contamineaz rapid n interiorul bisericii datorit coninutului lor n compui organici i a umiditii crescute. Toate acestea devin o surs de contaminare pentru pictura mural. Aerul de la interiorul i exteriorul monumentelor conine n mod constant microorganisme dar numai numrul redus se consider a fi normal. Prima semnalare asupra naturii transmisibile a deteriorrii locuinelor umane i a vestimentaiei se

Fig. 7.38.

Cablu electric colonizat de aceleai specii fungice de pe pictura mural (naos)

Fig. 7.39.

Pervazul este colonizat de Coniophora puteana (naos)

152

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.40.

Tetrapodul contaminat de miceliu de Coniophora puteana n dezvoltare (naos)

Fig. 7.41.

Stergar colonizat de fungi celulozolitici (naos)

Fig. 7.42.

Caietul pentru vizitatori este contaminat de fungi (pronaos)

Fig. 7.43.

Notele informative contaminate de fungi (naos)

Fig. 7.44.

Notele informative contaminate de fungi (pronaos)

Fig. 7.45.

Lumnri contaminate n locul de depunere (catapeteasm)

Fig. 7.46.

Fungi dezvoltai pe picturi de lumnri acoperite de condens (altar)

Fig. 7.47.

Fungi dezvoltai pe corpuri moarte de nari (altar)

153

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

afl n capitolul 14 al Bibliei, Leviticus. Baza tinific a efectului distructiv al microorganismelor nu a fost menionat pentru c la momentul respectiv lipseau cunotinele despre aceast categorie de organisme. Cercetrile efectuate pe picturile din peterile paleolitice (Groth i colab.,1999) au pus n eviden extinderea contaminrii cu actinomicete (bacterii filamentoase heterotrofe) prin intermediul curenilor de aer. Celulele microbiene (vegetative, spori, propagule) sunt transportate n interiorul monumentului prin intermediul curenilor de aer, apei (care circul de la suprafa prin porii rocii, condens), animalelor, slujitorilor bisericii, enoriailor i vizitatorilor. O parte dintre acestea nu se pot nmuli i i nceteaz activitatea vital pentru c nu gsesc condiiile optime pe noul substrat; altele ramn ataate dar n stare latent pentru c pe moment nu au condiii pentru cretere i multiplicare; altele cresc i se multiplic rapid coloniznd substratul i iniiind procesul de biodeteriorare. Umiditatea, temperatura, prezena altor microorganisme i caracteristicile suprafeei sunt eseniale. Pe aceai pictur mural care are n structur sau la suprafat (ca depuneri) compui organici, n funcie de coninutul de ap se pot succeda colonizatori primari (Aspergillus niger, A.versicolor, Paecilomyces variotii, Penicillium sp cnd apa disponibil Aw 0,85) secundari (Aspergillus flavus, Cladosporium herbarum, C. cladosporioides, Mucor circinelloides, Rhizopus cnd Aw=0,850,90) sau colonizatori teriari (Alternaria alternata, Aspergillus fumigatus, Fusarium moniliforme, Trichoderma sp., Sporobolomyces sp, Ulocladium consortiale cnd aw 0,90). In cazul n care ntre colonizatorii de acelai grad exist relaii antagoniste diversitatea taxonomic se reduce. Succesul cel mai mare n colonizare l au speciile cu viteza cea mai mare de cretere. Pentru ca microorganismele s ajung n aerospor celule vegetative i/sau sporii trebuie s se detaeze de pe suprafaa pe care au contaminat-o. Acest proces este dependent de viteza curenilor de aer i turbulen (valori ridicate), structura coloniei (coloniile de Aspergillus versicolor i Penicillium sp. sunt mari, au conidiofori lungi, spori sferici dispui n lanuri lungi i se rspndesc mai uor; coloniile de Cladosporium sp sunt mai mici, au conidiofori scuri i subiri, spori de form oval dispui n lanuri scurte, se rspndesc mai greu la intensiti mai mari ale curenilor de aer), vibraii (deplasarea persoanelor n ncpere, sunete, nchiderea uii cu for, funcionarea instalaiilor de aer condiionat, trafic, cutremurele determin frecvene oscilatorii care rup legtura dintre spori, spori i conidiofori, hife).

Etapele parcurse de microorganismele care se rspndesc prin intermediul aerului sunt urmtoarele:

Sursa de contaminare reprezentat de o suprafa colonizat (pictura mural, mortar, roc, lemn, textile, lumnri, picturi de lumnri)

Detaarea de substrat a celulelor vegetative i a sporilor

Dispersia n aer

Depunerea pe o nou suprafa (ca urmare a actiunii forei de gravitaie)

Impactul pe noua suprafa: ncetarea activitii vitale (spori de Coniophora puteana care ajung pe suprafaa picturii murale); rmnerea n starea de laten (Aspergillus fumigatus, Aspergillus terreus, Cladosporium sphaerospermum, Ulocladium chartarum care ajung pe suprafee pe care se afl eflorescene); colonizarea i iniierea biodeteriorrii (spori de Coniophora puteana care ajung pe suprafaa lemnului din structura stranelor, obiectelor religioase; spori de Aspergillus fumigatus, Aspergillus terreus, Cladosporium sphaerospermum, Ulocladium chartarum care ajung pe biofilmul algal sau talul briofitelor care i-au ncetat activitatea vital).

154

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

In cazul n care vehiculul de transport al microbiodeteriogenilor este altul dect aerul se parcurg urmtoarele etape:

Sursa de contaminare reprezentat de o suprafa colonizat (pictura mural de pe peretele de sud, mortar de pe catapetasm, roc din proscomidiar)

Preluarea de ctre picturile de condens, insecte, contactul direct al enoriailor i al slujitorilor bisericii

Depunerea pe o nou suprafa

Impactul pe noua suprafa: ncetarea activitii vitale (sporii de Aspergillus niger de pe ua de la intrarea n pridvor care ajung pe pictura mural fr depuneri organice); rmnerea n starea de laten (aceeai spori care ajung pe suprafaa mortarului de pe peretele nordic pe care se dezvolt briofite dar care sunt n stare activ); colonizarea i iniierea biodeteriorrii (aceeai spori care ajung pe suprafaa mortarului de pe peretele nordic din altar pe care s-a identificat att biofilm inactiv ct i briofite n descompunere).

Cercetrile efectuate la microscopul optic au demonstrat c sporii care sunt pe suprafee umede i sunt preluai de condens sunt transportai n interiorul picturilor de ap iar cei preluai de pe suprafee uscate (foarte reduse ca dimensiune n interiorul bisericii) sunt transportai la exteriorul acestora. In structura aerosporei predomin ziua sporii de Cladosporium iar noaptea cei de Sporobolomyces. Numrul cel mai mare de spori de Alternaria se gsete n aerospora de la sfritul lunii august-nceputul lunii septembrie, cel de Sporobolomyces n luna august iar cel de Cladosporium n luna august i nceputul lunii septembrie. Sporii bazidiomicetelor (Serpula lacrymans i Coniophora puteana) predomin n aerospora din lunile augustoctombrie (Lacey, 1996). Cercetrile referitoare la compoziia aerosporei din interiorul bisercii Corbii de Piatr au pus n eviden existena sporilor de: Alternaria alternata, Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Penicilium sp, Coniophora puteana, Cladosporium herbarum, Trichoderma viride, Ulocladium chartarum. Fragmentele hifale i sporii existeni n aer sau inhalai prin aplecarea asupra zonelor contaminate, determin reacii imunologice specifice n organismul uman. Majoritatea sporilor fungici sunt alergeni datorit faptului c au proteine cu greutatea molecular 10.000-80.000Da, localizate la nivelul peretelui celular, membranei plasmatice i citoplasmei. Literatura de specialitate menioneaz c reactivitatea imunologic a fragmentelor hifale se estimeaz prin citotoxicitate i producerea de mediatori proinflamatori (Gorni, 2004). Dei majoritatea sporilor fungilor sunt alergeni, cei de Alternaria i Cladosporium determin apariia astmului bronic. Aspergillus fumigatus i Aspergillus niger produc aspergiloza invaziv cu efecte grave asupra strii de sntate (Lacey, 1966). Sensibilitate mare la sporii fungici i fragmentele hifale au persoanele cu sistem imunitar deficitar dar cele care frecventeaz regulat biserica se vor sensibiliza n timp scurt datorit faptului c toxinele fungice se percep olfactiv chiar de la intarea n biseric. Inhalate zilnic i pe termen lung toxinele se manifest ca ageni cancerigeni.

7.4. Categorii de biodeteriogeni i rolul lor n procesul de biodeteriorare

Principalele categorii de biodeteriogeni identificai n biserca rupestr Corbii de Piatr sunt: cianobacteriile, algele, briofitele (organisme fotoautotrofe) i fungii (microscopici i macroscopici ca microorganisme heterotrofe).

7.4. 1. Cianobacteriile i algele

Biodeteriogenii cu cea mai mare raspndire n interiorul bisericii Corbii de Piatr sunt reprezentai de cianobacterii i alge verzi. Nutriia lor de tip fotoautotrof a determinat prezentarea

155

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

Fig. 7.48

Alge verzi pe suprafaa vruielii (pronaos)

Fig. 7.49

Alge verzi n lacunele din vruiel (pronaos)

Fig. 7.50

Microorganisme fotoautotrofe pe partea inferioar a peretelui sudic din naos

Fig. 7.51

Algeverzi dezvoltate pe scena Nasterea lui Iisus, detaliu Baia Pruncului

Fig. 7.52

Alge verzi dezvoltate pe detaliu din scena ntmpinarea Domnului

Fig. 7.53

Alge si cianobacterii dezvoltate pe peretele nordic din naos

lor mpreun n aceast lucrare i nu tipul de organizare celular (procariot respectiv eucariot) In pronaos, dei pereii sunt vruii este vizibil culoarea verde determinat de dezvoltarea algelor verzi att pe suprafaa vruielii (fig. 7.48), n lacunele existente (fig. 7.49), ct i pe treapta care conduce spre naos; pavimentul situat la baza pereilor prezint de asemenea biofilm de culoare verde.

In naos, cianobacteriile i algele verzi au fost identificate pe peretele sudic (fig. 7.50-52) i nordic (fig. 7.53), pe catapeteasm n partea inferioar i median, pe paviment inclusiv pe treapta care conduce spre altar, n altar precum (fig. 7.54) i pe bolt (fig. 7.55 i 56). In altar, algele verzi i cianobacteriile sunt mai mult vizibile pe peretele de est att partea dinspre sud (fig. 7.57) ct i

156

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.54

Alge verzi dezvoltate pe catapeteasm i pe treapt

Fig. 7.55

Alge verzi i cianobacterii dezvoltate pe bolt

Fig. 7.56

In lumin razant se observ c au existat mai multe etape de colonizare de-a lungul timpului

Fig. 7.57

Alge verzi i cianobacterii n altar- perete estic

Fig. 7.58

Algele se dezvolt i n lacune

Fig. 7.59

Algele se dezvolt i n fisuri

cea dinspre nord datorit accesului direct al luminii naturale (fig. 7.58). Este cunoscut faptul c accesul direct al luminii stimuleaz dezvoltarea microorganismelor fotoautotrofe att pe suprafaa picturii murale, n lacune (fig. 7.58) ct i n fisuri (fig. 7.59). De asemenea algele se pot fixa n porii mortarului i de la acest nivel pot genera mai multe trepte de colonizare a suprafeei

respective n cazul n care se ncearc ndeprtarea mecanic sau condiiile de mediu sunt nefavorabile pentru perioade scurte de timp (fig. 7.60). Pe suprafaa stratului pictural reprezentnd detaliu din scena Naterii Domnului se observ de asemenea biofilmul de culoare verde n stare activ. Algele verzi au fost puse in evident i prin studiile de microscopie optic att n stare activ (culoare verde) pe suprafaa

157

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

mortarului din scena Invierea lui Lazr (fig. 7.61) ct i n faza de regresie (culoarea devine brun datorit ncetrii fotosintezei; fig. 7.61). Algele verzi pot fi colonizatori unici ai suprafeei picturii murale (fig. 7.62) sau n asociaie cu briofitele (fig. 7.63). Cianobacteriile au fost identificate prin cercetrile efectuate la microscopul electronic att la suprafaa mortarului ct i n lacunele existente, ca celule de form sferic, inconjurate de teaca polizaharidic. Pe unele suprafee s-a identificat consoriul cianobacterii-fungi (fig. 7.64). Microorganismele fotoautotrofe reprezint colonizatorii primari majori de-a lungul timpului i sunt recunoscute uor datorit culorii albstru-verzui i verde care acoper cea mai mare parte a pereilor bisericii inclusiv acolo unde pictura se mai pstreaz. Apa sub toate formele ei i temperatura acioneaz ca factori de deteriorare dar n acelai timp favorizeaz dezvoltarea acestor biodeteriogeni. Algele i cianobacteriile s-au adaptat la lumina redus care ptrunde prin fereastr sau u (cnd este

deschis) dar i la cea artificial din timpul serviciului religios. Cianobacteriile i algele sunt organismele generatoare de biofilme; celulele sunt nconjurate de un strat de polizaharide n care se absorb att minerale (compuii anorganici n general) ct i compui organici din substrat; n plus, favorizeaz aderarea materiei particulate din aer, a particulelor pulveruente din stratul pictural i mortar (aflate in stare decoeziv). Biofilmul creeaz un micromediu n care se acumuleaz acizi organici care sunt produi de metabolism ce deterioreaz biochimic prin extragerea componenilor minerali sau dizolvarea carbonailor. Sub biofilm s-au observat chiar excavaii datorit faptului c aceste microorganisme se localizeaz n fisuri microscopice sau la nivelul interfeei cristalelor unde determin creterea capacitii locale de reinere a apei i dizolvare a materialului adiacent. Apa care percoleaz provoac detaarea cristalelor i formarea excavaiilor. Dup ncetarea activitii vitale a algelor, biofilmul devine de culoare brun sau neagr (n absena pigmenilor verzi); este umed si poate avea chiar aspect lucios (datorit apei care

Fig. 7.60

Alge fixate in porii mortarului pe scena nvierea lui Lazr (Marta)

Fig. 7.61

Alge n faz activ pe mortarul detaat

Fig. 7.62

Alge n faz de regresie

Fig. 7.63

Asociaia alge verzi-briofite (altar)

158

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

percoleaz). Ca urmare a traseului parcurs de condens sau de apa care provine din roc se observ n altar resturi ale biofilmului inactiv . Biofilmele afecteaz distribuia apei prin capilaritate i difuzia vaporilor de ap. Compuii activi de suprafa (acizi grai, glicolipide, enzime) din structura biofilmului imobilizat n pori scad tensiunea apei i implicit umiditatea specific; n consecin micorogansimele sunt protejate de uscciune, este stimulat colonizarea i activitatea de biocoroziune. La momentul examinrii, colorarea picturii murale poate fi aparent sau real. Biofilmul activ de culoarde verde-albstruie (format de Cyanobacteria: Gloeocapsa sp) i verde (format de alge verzi-Chlorophyceae: Chlorococcum sp.i Chlorella vulgaris), patina brun (apare dup ncetarea activitii vitale a cianobacteriilor i algelor), patina verde intens (format de Chlorophyceae), determin colorarea aparent a picturii murale. Prin ndeprtarea n termen scurt de la punerea n eviden a patinei i a biofilmului se constat c stratul pictural nu prezint modificri de

Fig. 7.64 a) Cianobacterii dezvoltate la suprafaa mortarului i n stratul superficial

culoare. Pigmenii verzi de origine biologic se sintetizeaz numai n faza activ i sunt implicai n procesul de fotosintez. Cnd condiiile de microclimat devin improprii, biofilmul este n regresie iar culoarea verde dispare. Zurita i colab. (2005) au pus n eviden pe suprafaa pietrei acoperit de microalge cruste minerale sau stromatolite n care carbonatul de calciu era predominant. Biofilm n stare activ i n regresie s-a identificat n toate ncperile monumentului. Examinrile la microscopul optic au demonstrat c cianobacteriile si algele verzi ptrund prin fisurile i crpturile din stratul pictural. In cazul n care acesta s-a pierdut, pe mortar, crmizi i chiar la nivelul rocii s-a constatat c att cianobacteriile ct i algele verzi ptrund n structura poroas unde se fixeaz prin intermediul stratului extern de exopolizaharide. De la acest nivel acioneaz ca surs care poate genera n permanen un nou biofilm sau o nou patin verde. Pierderea coeziunii substratului acoperit de biofilmul verde este rezultatul contraciei i expansiunii acestuia. Lucrrile de restaurare nu trebuiesc ncepute pn nu se reduce umiditatea sub toate formele la minimum posibil pentru condiiile pe care le ofer situsul geologic, reducerea contactului cu lumina i tratamentul cu algicid. Examinarea periodic a strii de conservare i implicit a creterii biologice se vor efectua att pe parcursul lucrrilor de restaurare ct i dup ce acestea s-au terminat. Este o activitate care trebuie desfurat n paralel cu monitorizarea microclimatului (Nugari i colab., 2009). Chertov i colab. (2004) sugereaz ndeprtarea periodic a depunerilor de natur organic i tratamentul periodic cu biocizi. In cazul bisericii Corbii de Piatr recomandm ndeprtarea resturilor substraturilor organice imediat dup ncheierea serviciului religios, evitarea depozitrii lumnrilor, publicaiilor i obiectelor religioase n incinta bisericii, desfurarea unei activiti educaionale a enoriailor i vizitatorilor pentru evitarea depunerii picturilor de cear pe paviment sau pictura mural, a substratului papetar i a lumnrilor sub icoane, spaii libere, crpturi.

7.4.2.Briofitele
Briofitele sunt plante inferioare fotoautotrofe i de dezvolt n spaii i pe substraturi umede, cu acces la lumin. In biserica rupestr Corbii de Piatr s-au identificat briofite pe peretele nordic din naos i n altar, n zonele unde apa a acionat ca factor de deteriorare i care au fost colonizate anterior de multe generaii de alge i cianobacterii .Macroscopic s-au pus n eviden mase compacte de briofite care se dezvolt n lacune profunde dar i tulpinie ale acestora, individualizate, care ader la stratul pictural (fig. 7.65). Examinrile microscopice au confirmat existena briofitelor i algelor n faz activ (fig. 7.66) i inactiv de cretere (fig. 7.67).

Fig. 7.64 b) Cianobacterii i fungi la suprafaa mortarului i n stratul superficial

159

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

Fig. 7.65

Mase compacte de briofite-tulpiniele ader la stratul pictural

Fig. 7.66

Briofite i alge n stare activ

Fig. 7.67

Briofite n faza de descompunere

Fig. 7.68

Briofite i alge n diferite faze de existen

Fig. 7.69

Miceliu de Aspergillus niger cu rol n descompunerea briofitelor

Fig. 7.70

Briofitele sunt indicatori ai suprafeelor umede (se observ picturi de condens)

Pe aceeai suprafa pot coexista diferite faze din ciclul biologic al acestor organisme fototrofe (fig. 7.68). Sub talul briofitelor s-au observat celule de alge moarte, cu dispunere filamentoas i s-a constatat c nu mai exista strat pictural iar mortarul era decoeziv. Aa se explic ancorarea rhizoizilor pe depuneri, chiar la nivelul porilor i colonizarea unor suprafee mari. Tulpiniele izolate sunt ferm ataate de substrat i au pe termen scurt rolul de a menine particulele pulverulente de mortar. In gene-

ral talul briofitelor este subire dar pe peretele nordic din altar, exist taluri suprapuse cu grosimea de 2-3mm. Dup ncetarea activitii vitale, talul briofitelor este descompus n prinicipal de fungi iar procesul se recunoate prin identificarea miceliului cu aspect pslos i de culoare alb n faza nesporulat respectiv cu aspect catifelat, diferit colorat dup sporulare (fig. 7.69). Valorile acide ale pH din substrat (de la nivelul rizoizilor) precum i acidul carbonic (rezultat din reacia cu apa a dioxi-

160

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

bioindicatori ai suprafeelor umede, a unei stri de conservare neadecvate n consecin a pierderii stratului pictural, i a procesului de bioteriorare n faz avansat.

7.4.3. Fungii
Fungii sunt microorganisme heterotrofe i au fost pui n eviden n toate spaiile interioare, pe diferite suporturi: pictura mural i mortar acoperite de compui organici, hrtie, lemn, textile, lumnri, picturi de lumnri, corpuri de nari moarte, cablul electric. Fungii microscopici pot fi recunoscui de ctre restauratori ca formaiuni de origine biologic de culoare neagr, brun, albstruie, alb cu aspect catifelat (faza de sporulare) sau pslos (miceliu nesporulat). Aspectul morfologic al suprafeelor suspectate de a fi colonizate de ctre fungi a fost nregistrat fotografic. De pe toate suprafeele menionate s-au recoltat probe prin decuparea unui fragment de substrat biologic, mortar sau de miceliu, cu excepia picturii murale de pe care s-au recoltat probe prin rularea unui bastoncini steril umectat n ap distilat steril. Probele s-au prelucrat micologic n 20 ore de la momentul recoltrii. Ulterior s-au identificat taxonomic speciile predominante. S-au efectuat de asemenea, observaii la microscopul optic i la cel electronic. In natur, fungii sunt microorganisme cu rol de descompuntori ai materiei organice. Acest rol se pstreaz i n cazul bisericii rupestre Corbii de Piatr unde fungii au ca substrat nutritiv depunerile atmosferice, organismele fotoautotrofe i corpurile insectelor de la suprafaa picturii murale. Pe peretele nordic din naos s-a identificat o zon cu alge n faz final de descompunere (fig. 7.71) dar si zone care sunt n timpul unui nou proces de colonizare de ctre alge. In funcie de momentul n care a nceput colonizarea unele mase intra n descompunere. In partea inferioar a peretelui nordic are loc procesul de colonizare de ctre organisme fotoautotrofe i este iniiat cel de descompunere bacterian i fungic (Actinomyces sp respectiv Fusarium sp). In zona central a peretelui nordic a fost surprins momentul nceputului colonizrii de ctre Aspergillus niger (fig. 7.72); n aceeai zon se afl miceliu deshidratat de culoare neagr(n diferite nuane) aparinnd genurilor Alternaria, Ulocladium i Cladosporium. S-au identificat diferite faze de colonizare a stratului pictural: n desfurare (Aspergillus niger) i terminal dar se menine viabilitatea sporilor de Alternaria, Ulocladium i Cladosporium. In zona central a aceluiai perete la procesul de descompunere particip Actinomyces sp (bacterie heterotrof filamentoas), Alternaria, Cladosporium sp. i Chaetomium sp. Pe catapeteasm s-au identificat mase compacte i izolate de de miceliu de culoare neagr (n diferite nuane) aparind

Fig. 7.71

Pe peretele nordic din naos sunt alge n faza final de descompunere

Fig. 7.72

Colonie de Aspergillus niger nesporulat

dului de carbon produs n timpul respiraiei) creeaz mediul de reacie pentru extragerea cationilor (minerali) din substrat. Umiditatea crescut din substratul acoperit cu briofite se menine permanent att datorit percolrii apei ct i a faptului c talul se interpune ntre substrat i atmosfera nconjurtoare iar apa se evapor greu; n funcie de temperatur, pe suprafaa talului de briofite ca de altfel i pe suprafaa biofilmului s-au pus n eviden picturi de condens (fig. 7.70). Briofitele sunt

161

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

genurilor Aspergillus, Ulocladium, Cladosporium i Alternaria (fig. 7.74). Dei colonizarea zonei centrale de ctre alge nu este extins, procesul de descompunere este iniiat de ctre Aspergillus niger (miceliu de culoare neagr pentru c este sporulat intens) i de Ulocladium chartarum (miceliu de culoare brun cu sporulare moderat; fig. 7.75). In alt zon a catapetesmei s-a identitificat miceliu gros, sporulat, de culoare neagr i aspect lucios (Aureobasidium pullulans), miceliu sporulat, de culoare brun cu aspect catifelat (Alternaria alternata) i miceliu dens cu aspect pslos de culoare alb (Aspergillus niger fig. 7.76). Pictura mural este acoperit cu miceliu de culoare violet aparinnd unei specii de Fusarium (fig. 7.77). Mortarul (inclusiv resturile vegetale din stratul de intonaco) este acoperit cu miceliu sporulat de Ulocladium chartarum i Chaetomium globosum. Pe peretele sudic al naosului, pe ornamentul de pe arcul de deasupra niei centrale ca i pe scena Iisul Emanuel binecuvn-

tnd (detaliu din nia central) speciile descompuntoare aparin genurilor Actinomyces (bacterie filamentoas) i Fusarium (fig. 7.78). Aceleai specii au fost identificate pe chipul Pstorului din scena Naterii Domnului (fig. 7.79) dar n lacune apare un nou proces de colonizare iniiat de alge verzi. Folosind lupa sau microscopul mobil, s-a observat in situ miceliu format din hife ramificate (de form tubular) i chiar sporii de form aproximativ sferic sau alungit, de culoare brun, neagr sau violacee. Miceliul nesporulat n curs de dezvoltare este alb sau colorat specific pentru fiecare specie, are aspectul pslos i se poate prelua prin micri de rsucire pe un ac lung. Dup efectuarea testului, acul se sterilizeaz prin nclzire la rou pentru a evita rspndirea miceliului pe alte suprafee sau n aer. Miceliul nesporulat n regresie este casant i de culoare brun (diferite nuane). Prin observaiile la microscopul optic ale probelor recoltate prin metode non distructive s-a pus n eviden miceliu

Fig. 7.73

Suprafa extins colonizat de organisme fotoautotrofe n faz de descompunere (naos)

Fig. 7.74

Suprafa extins colonizat de alge n faz de descompunere (catapeteasm)

162

Fig. 7.75

Miceliu de Aspergillus niger i Ulocladium chartarum (catapeteasm).

Fig. 7.76

Fungi descompuntori productori de pigmeni melanici

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

aerian format din hife tubulare, cu grade diferite de ramificare (fig. 7.80). Miceliu aerian dezvoltat pe biofilm demonstreaz procesul de descompunere n desfurare. Unele fragmente de tencuial care se desprind datorit decoeziunii, anterior colonizate de alge verzi, la momentul observaiei au fost colonizate n totalitate de fungi, ceea ce demonstreaz faptul c primul proces de colonizare s-a desfurat cu intensitate mare datorit condiiilor optime de la suprafaa peretelui, iar dup senescen procesul s-a desfurat de asemenea cu intensitate mare datorit faptului c n prezena resturilor alimentare ajunse intmpltor fungii s-au dezvoltat rapid (fig. 7.81). In zonele de pe perete unde mortarul este decoeziv, dup desprindere, s-a identificat la microscop miceliu sporulat de Aspergillus niger (fig. 7.82) i ulterior prin prelucrarea micologic a probei prin metode cultivrii pe mediu nutritiv specific s-a confirmat aceeai identitate. La fel ca i organismele fotoautotrofe insectele care i nceteaz activitatea intr n descompunere prin participarea fungilor. Pe piciorul unei insecte moarte s-au observat capete conidiene de Ulocladium sp. ceea ce sugereaz maturitatea miceliului i procesul intens de descompunere a chitinei (fig. 7.83). Picturile de cear ajunse pe suprafaa picturii murale sau pe sfnta mas sunt colonizate rapid de fungi. Microscopic s-au pus n eviden capete conidiene de Penicillium sp (fig. 7.84). La microscopul electronic s-a constatat c aceeasi bucat mic de mortar era colonizat n acelai timp de alge i de fungi (fig. 7.85). Distribuia miceliului pe suprafaa biofilmului semnific iniierea procesului de descompunere. In zonele unde miceliu se distribuie la suprafaa mortarului i chiar la nivelul porilor acestuia se presupune prezena depunerilor organice. Experimentul efectuat in situ care a constat n analiza microscopic a unui fragment de mic nainte i dup plasare n proscomidiar timp de 6 luni a demonstrat c aceasta a fost colonizat de Aspergillus niger (fig. 7.86) precum i de miceliu aparinnd altor specii. Decolorarea stratului pictural pe suprafeele anterior colonizate de fungi este rezultatul capacitii acestor biodeteriogeni de a sintetiza acizi organici. Prin scderea pH se modific nuana pigmentului original. Aceste forme de degradare s-au observat n naos i n altar. Colorarea real a picturii murale de ctre pigmenii de origine biogen, apare cnd microbiodeteriogenii sintetizeaz aceti compui pe care i localizeaz la nivelul peretelui celular sau i elibereaz n substrat (pictura mural, resturi vegetale din intonaco, mortar). Colorarea picturii murale de ctre fungii care produc pigmeni melanici (Ulocladium chartarum i Cladosporium herbarum, Aureobasium pullulans) s-a pus n eviden n biserica rupestr Corbii de Piatr, n partea

Fig. 7.77

Zon de culoare violacee colonizat de Fusarium sp

Fig. 7.78

Specii de Actinomyces i Fusarium pe scena Iisus Emanuel binecuvntnd

Fig. 7.79

Specii de Actinomyces i Fusarium pe chipul Pastorii din scena Naterea lui Iisus

163

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

Fig. 7.80

Miceliu aerian dezvoltat pe biofilm

Fig. 7.81

Miceliu pe suprafaa mortarului

Fig. 7.82

Miceliu sporulat de A.niger

Fig. 7.83

Miceliu sporulat de U.chartarum

inferioar a catapetesmei. Aceste specii sintetizeaz un strat complex de polizaharide (50% carbohidrai, 15-20% melanin, proteine i acizi grai) cu dispunere extern fa de peretele celular. Pentru celulele productoare, polizaharidele extracelulare favorizeaz aderarea la support (condiie esenial i pentru colonizare i implicit pentru biodeteriorare), protecia n condiii de uscciune dar reprezint i un loc de depozitare a sursei de carbon ca rezerv nutritiva. In funcie de cantitatea de polizaharide sintetizat i de etapa din ciclul biologic al speciei pe suprafaa colonizat se poate observa biofilmul de culoare neagr. Volumul stratului de polizaharide poate fi mai mare dect cel al citoplasmei datorit apei reinute. In funie de condiiile de microclimat, se produce stres mecanic asupra substratului datorit ciclurilor repetate de deshidratare-rehidratare (Warscheid i Braams, 2000). In acelai timp stratul de polizaharide reprezint o barier pe care biocizii trebuie s o strbat n drumul spre atingerea intei de aciune. Pigmenii melanici sunt foarte rezisteni la biodegradare i de aceea suprafaa colonizat ulterior de o alt specie rmne de culoare neagr datorit meninerii nealterate a acestor pigmeni (Gutierrez i colab., 1995). Patina de culoare neagr este rezultatul aciunii successive a proceselor biotice i abiotice care transform suprafaa picturii murale,a mortarului sau a pie-

trei ntr-un micromediu hidrofilic adecvat pentru colonizare. Biopolimerii sintetizai n cursul fazei active de cretere i cei eliberai din celule prin autoliz pot suferi un process spontan de copolimerizare. Enzimele care catalizeaz reacii oxidative au un rol important n condensarea compuilor cu greutate molecular mic. In stadii avansate ale procesului, reaciile abiotice contribuie la ntrirea materialului polmeric i fixarea fizico-chimic pe suprafeele mai sus menionate. Stratul de exopolizaharide contribuie la procesul de biodeteriorare i prin capacitatea de a favoriza aderarea materiei particulate din atmosfer (praf, compui organici) i implicit la formarea unui strat hidrofilic; reprezint n acelai timp un mediu n care difuzeaz acizii organici sintetizai sau acidul carbonic format chimic- acetia acioneaz ca ageni de solubilizare sau chelatare a mineralelor. Detarile stratului pictural au loc n timp i pot fi un efect al creterii fungilor sub acesta, folosind fisurile i crpturile ca nie ce asigur aderarea i protecia sporilor i a propagulelor (naos, perete nord i sud). Cu siguran respectivul strat pictural nu ader perfect la stratul de intonaco iar hifele prin aciune mecanic l detaeaz cu uurin. Specii ca Aspergillus niger, Ulocladium chartarum, Alternaria alternata i Cladosporium herbarum, produc si acizi organici (n cantiti diferite n

164

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.84

Capete conidiene de Penicillium sp pe picturi de cear

Fig. 7.85

Hife coloniznd mortarul i biofilmul senescent

Fig. 7.86

Mica plasat n proscomidiar

Fig. 7.87

Miceliu sporulat de Aspergillius niger dezvoltat pe mic

funcie de informaia genetic deinut) care determin dezintegrarea stratului de intonaco i arriccio. Fungii formeaz miceliu de substrat care ader la suprafaa stratului pictural iar ncercrile de ndeprtare provoac straparea. Aceast mecanism de aciune a fost demonstrat n condiii de laborator pe o fresc ce a fost contaminat cu fungi izolai de pe pictura mural de la monumentul Corbii de Piatr. Pierderea coeziunii i apariia pulverulenei s-a observat de asemenea pe suprafeele de mortar i crmid (naos perete de nord i catapeteasm) anterior colonizate de ctre fungi productori de acizi organici. Hifele ca structuri tipice ale fungilor penetreaz suprafeele poroase (mortar, roc, stratul pictural) pe care ulterior le colonizeaz ceea ce are ca efect frmiarea, modificarea porozitii i a permeabilitii (Gaylarde i colab., 2003). Ca urmare a capacitii de a sintetiza acizi organici care sunt ulterior eliberai n substrat apar eroziuni i desfacerea lamelar a mineralelor. Apa care perfoleaz roca precum i condensul format pe pereii interiori reacioneaz cu dioxidul de carbon rezultat din respiraia tuturor biodeteriogenilor, enoriailor i vizitatorilor i se formeaz acidul carbonic. Acesta dizolv carbonatul de calciu, carbonatul de magneziu, silicaii i azotaii din structura mortarului i a rocii. In consecin are loc alterarea compoziiei substratului i

pierderea unor fragmente (Jain i colab, 2009). Activitatea de restaurare nu se poate ncepe nainte de decontaminarea suprafeelor. Pentru recomandarea unui biocid se efectueaz n laborator teste de sensibilitate a biodeteriogenilor izolai de pe suprafeele ce urmeaz a fi decontaminate (Blazquez I. colab., 2000). Msurarea zonei de inhibiie a creterii biodeteriogenilor permite alegerea biocidului i a concentraiei n vederea efecturii tratamentului de decontaminare.Pentru monumentul Corbii de Piatr n care coninutul de ap (substrat, aer) este mare, n urma testelor de laborator, testarea compatibilitaii cu pictura mural i consideraiile ecotoxicologice s-a ales Biotin R 5%. Examinarea periodic a suprafeei picturii murale restaurate poate pune n eviden depunerile de compui organici ce pot fi ndeprtate folosind biotehnologii specifice pentru restaurare (suprafaa care prezint depuneri proteice este inoculat cu cellule de Pseudomonas stutzeri aplicate pe o compres; proteazele sintetizate de aceast bacterie hidrolizeaz depunerile proteice; n ultima etap suprafaa se trateaz pentru asigurarea ndeprtrii celulelor- Fernandes, 2006). In vederea efecturii tratamentelor pentru decontaminarea picturii murale i a suportului s-a testat sensibilitatea microorganismelor n cultur pur fa de biotin R n concentraie de

165

Fig. 7.88

Aspectul morfologic al zonei aleas pentru decontaminare

Fig. 7.89

Aspectul zonei 1 dup decontaminare

Fig. 7.91

Aspectul zonei 1 la 12 luni dup decontaminare

Fig. 7.93

Eficiena tratamentului se menine dup 12 luni de la aplicarea tratamentului

1,0; 2,0; 3,0; 4,0 i 5,0ml/100(n aceton). Concentraia eficient s-a considerat a fi aceea care a determinat cea mai mare zon de inhibiie a creterii fiecrei culturi pure. Alegerea biocidului Biotin R a avut la baz att spectrul larg de aciune ct i proprietatea de a fi insolubil n ap, calitate care ar rspunde la condiiile de microclimat din biseric. Solubilitatea acestuia n aceton sau white spirit i asigur remanena n substrat n condiiile n care prin pereii monumentului percoleaz apa iar umiditatea relativ depete valoarea de 90%. Cercetrile efectuate n etapele anterioare au pus n eviden c n anumite perioade ale anului n funcie de regimul de precipitaii i temperatur se formeaz condens ale crui picturi se scurg pe perete sau formeaz o pelicul fin de ap la suprafaa picturii care are temporar un aspect lucios; n altar s-a identificat chiar acumularea apei pe paviment. Biotestele s-au efectuat n naos pe pictura mural i suportul acesteia, ntr-un spaiu reprezentnd o escavaie, pe crmid i pe lemn. Pentru pictura mural s-a ales o zon din partea central de pe peretele de nord al naosului (n prima ni dinspre vest). Metoda a constat n rularea unui bastoncini steril avnd la una din extremiti vat ferm ataat la suprafaa acestuia, dup in-

troducerea n soluia de iotin R 5%. Rularea fiecrui bastoncini s-a fcut pe suprafaa de 50 mm, n 3 etape. Suprafeele pe care s-au efectuat bioteste au fost supuse monitorizrii din punct de vedere al aspectului estetic precum i al coninutului de microorganisme (alge, bacterii heterotrofe, fungi). Inregistrrile fotografice i analizele microbiologice s-au efectuat dup 8 i 12 luni de la aplicarea tratamentului. Suprafaa aleas pentru biotest conine att pictur mural ct i mortar acoperite de biofilm algal n dezvoltare, identificat prin culoarea verde i aspectul lucios ct i biofilm n faza de senescen recunoscut prin culoarea neagr cu aspect lucios dac suprafaa conine ap i cu aspect mat dac aceasta este uscat. S-a remarcat prezena algelor n principal n lacune i secundar pe pictura mural; n unele lacune biofilmul se afl n faza de descompunere. Menionm c n funcie de coninutul de ap din substrat pot fi identificate i eflorescene. Zona 1 a fost reprezentat de o lacun n care s-a identificat prin examinarea direct i prin microscopie optic biofilmul format n principal de alge verzi i rare briofite. In zona nr. 1 mortarul este decoeziv i acoperit cu alge verzi i sporadic cu briofite. Datorit faptului c mortarul avea aspect pulverulent,

166

Biodeteriorarea i biodeteriogenii

Fig. 7.94

Aspectul zonei 3 nainte de tratament (biofilm n regresie)

Fig. 7.96

Aspectul zonei 3 la 12 luni dup tratament pictura este vizibil dar pe margini apar eflorescene

Fig. 7.101 Suprafaa crmizii nainte de tratament complet acoperit cu alge verzi

Fig. 7.102 Dup 12 luni crmida este necolonizat de alge dar apar eflorescenele

prin rulare s-a ndeprtat i partea superficial a acestuia. La sfritul tratamentului au rmas cteva zone de culoare verde imposibil de ndeprtat datorit faptului c algele erau fixate n structura poroas (fig. 7.89). Dup 8 i respectiv 12 luni de la tratamentul cu Biotin R pe suprafaa mortarului s-au identificat aceleai zone n care algele erau fixate n suprafaa poroas. Tratamentul cu biocid nu a permis recolonizarea sau extinderea algelor fixate (fig. 7.91). Pictura mural devine vizibil dei se pstreaz pe suprafaa redus. Zona 2 a fost reprezentat de asemenea de mortar al crui aspect era pulverulent. Aceasta a fost colonizat de ctre alge dispuse n mase isolate datorit prezenei masive a eflorescenelor. Tipul de dezvoltare este determinat de prezena eflorescenelor pe suprafaa respectiv i implicit de sensibilitatea algelor la sruri. Prin tratamentul efectuat cu biocid a avut loc ndeprtarea algelor cu excepia celor fixate n structura poroas. Faptul c dup 8 i respective 12 luni de monitorizare s-a constatat c suprafeele de culoare verde nu s-au extins demonstreaz c tratamentul a fost eficient. Zona 3 a fost reprezentat de pictur mural i era acoperit de biofilm n regresie. In lacun se observ la nivelul mortarului colonizarea de ctre alge (fig. 7.94). Dup prima etap de trata-

ment, pigmentul verde de origine algal este vizibil n lacunele existente n stratul pictural. Dup ultima etap a tratamentului stratul pictural devine vizibil. Eficiena tratamentului cu Biotin R s-a pus n eviden pe parcursul monitorizrii att la 8 ct i la 12 luni. La sfritul interalului sunt vizibile eflorescenele pe marginea suprafeei tratate (fig. 7.96). Zona 4 este reprezentat de mortar acoperit de alge i briofite. Dup tratamentul cu biocid s-au ndeprtat numai briofitele; zonele de culoare verde identificate dup 8 respectiv 12 luni de la aplicarea tratamentului nu semnific procesul de recolonizare ci pigmentul de culoare verde, de origine biologic fixat n suprafaa poroas. Rmn evidente tulpiniele briofitelor uscate (din generaiile anterioare). Biotestele n nia de mici dimensiuni practicat in stlpul dinspre est al primei arcade s-au efectuat de asemenea cu Biotin R 5%. Suprafaa respectiv era acoperit cu briofite i cianobacterii. Etapele parcurse pentru acest biotest sunt comune cu cele de pe pictura mural. Pe parcursul tratamentului unele tulpinie de briofite s-au fixat pe suprafaa rugoas mortarului i de aceea au fost ndeprtate cu ajutorul pensei. Dup 12 luni de monitorizare s-a constatat c briofitele nu s-au mai dezvoltat. Este

167

 CORBII DE PIATRA - Studiu Interdisciplinar

efectul combinat al currii mecanice (s-au ndeprtat resturile de mortar i de tal) i a celei chimice. Rmn totui vizibile cianobacteriile fixate n structura poroas. Biotestele pe crmid s-au efectuat urmnd aceeai procedur, pe latura liber a unei crmizi din catapeteasm (n stnga uii diaconeti din partea nordic) acoperit n ntregime de biofilm algal (fig. 7.101).

Monitorizarea efectuat pe parcursul a 12 luni a demonstrat absena recolonizrii suprafeei tratate i implicit eficiena tratamentului cu Biotin R (fig. 7.102). Se remarc totui prezena eflorescenelor ca rezultat al percolrii apei prin substrat, a evaporrii acesteia i cristalizrii srurilor.

BIBLIOGRAFIE
Blazquez, A., B., Lorenzo, J., Gomez-Alarcon, G., 2000, Evaluation of the effect of some biocides against organisms isolated from historic monuments, Aerobiologia, 16, 423-428. Chertov, O., Gorbushina, A., Deventer, B., A model for microcolonial fungi growth on rock surfaces, Ecological Modelling, 177, 415-426. Fernandes, F., 2006, Applied microbiology and biotechnology in the conservation of stone cultural heritage materials, Appl. Microbiol. Biotechnol., 73, 291-296. Gaylarde, C., Gaylarde, P., 2005, A comparative study of the major microbial biomass of biofilms on exteriors of buildings in Europe and Latin America, International Biodeterioration & Biodegradation, 55, 131-139. Gaylarde, C., Ribas Silva, M., Warscheid, Th., 2003, Microbial impact on buiding materials:an overview, Materials and Structures, 36, 342-352. Gorbushina, A.A., Petersen, K., 2000, Distribution of microorganisms on ancient wall paintings as releated to associated faunal elements, International Biodeterioration & Biodegradation, 46, 277-284. Gorbushina, A.A.,Heyrman, J., Dornieden, T., Gonzales-Delvalle, M., Krumbein, W.E., Laiz, L., Petersen, K., SaizJimenez, C., Swings, J., 2004, Bacterial and fungal diversity and biodeterioration problems in mural painting environments of St.Martins church (Greene-Kreiensen, Germany), International Biodeterioration & Biodegradation,53, 13-24 Gorny, R., L., 2004, Filamentous microorganisms and their fragments in indoor air, Ann Agric Environ Med, 11, 185-197. Groth, I., Vettermann, R., Schuetz, B., Schumann, P., SaizJimenez, C., 1999, Actinomycetes in Karstic caves of northern Spain, J Microbiol Methods, 36, 114-122. Gutierrez, A., Martinez, M.,J., Almendros, G., Gonzales-Vila, F.J., Martinez, A.T., 1955, Hyphal-sheath polysaccharides in fungal deterioration, The Science of the Total Environment, 167, 315-328. Jain, A., Bhadauria, S., Kumar, V., Chauhan, R.S., 2009, Biodeterioration of sandstone under the influence of different humidity levels in laboratory conditions, Building and Environment, 44, 1276-1284. Lacey, J., 1996, Spore dispersal its role in ecology and disease: the British contribution to fungal aerobioogy. Nugari, P.,M., Realini, M., Roccardi, A., 1993, Contamination of mural paintings by indoor airborne fungal spores, Aerobiologia, 9, 131-139. Nugari, M., P., Pietrini, A.,M., Caneva, G., Imperi, F., Visca, P., 2009, International Biodeterioration & Biodegradation, 63, 705-711. Pepe, C., Sannino, L., Palomba, S., Anastasio, M., Blaiotta, G., Villani, F., Moschetti, G., 2008, Heterotrophic microorganisms in deteriorated medieval wall paintings in southern Italian churches, Microbiologogical Research, doi:10.1016/ j.micres.2008.03.005. Saarela, M., Alakomi, H-L., Suihko, M_L., Maunuksela, L., Raaska, L., Mattila-Sandholm, T., 2004, Heterotrophic microorganisms in air and biofilm samples from Roman catacombs, with special emphasis on actinobacteria and fungi, International Biodeterioration & Biodegradation, 54, 27-37. Tomaselli, L., 2003, Biodeterioration process on inorganic substrata. COALITION, Newsletters 6, 5-9. Zurita, Y.P., Cultrone, G., Sanchez Castillo, P.S., Sebastian, E., Bolivar, F.C., 2005, Microalgae associated with deteriorated stonework of the fountain of Bibatauin in Granada, Spain, International Biodeterioration & Biodegradation, 55, 56-61. Warscheid, T., Braams, J., 2000, Biodeterioration of stone, International Biodeterioration & Biodegradation, 46, 343-368. Xxx Bible, Leviticus, 14th chapter, verses 34-35

168