Anlisis Qumico Grado Bioqumica Curso 2011/12

TEMA 1 INTRODUCCIN AL ANLISIS QUMICO

Este tema aporta una revisin panormica del Anlisis Qumico, sus distintas vertientes y su terminologa bsica. La importancia de la Qumica Analtica queda plasmada a travs de sus aplicaciones en todos los campos de la ciencia. Los pasos generales implicados en un anlisis cuantitativo se revisan de forma exhaustiva mostrando la importancia de la Qumica Analtica para la resolucin de problemas de diversos mbitos.

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1. 2. 3. 4.

Generalidades Conceptos bsicos en Anlisis Qumico Clasificacin de los mtodos de anlisis El proceso analtico

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1.

GENERALIDADES

Se puede definir la Qumica Analtica como una ciencia de medicin basada en un conjunto de ideas y mtodos tiles en todos los campos de la ciencia. La Qumica Analtica se ocupa de separar, identificar y determinar la composicin relativa de cualquier muestra de materia. Por otro lado, se considera al Anlisis Qumico como la parte prctica de la Qumica Analtica, que aplica los mtodos desarrollados por la misma para la resolucin de problemas. El Anlisis Qumico de una muestra de materia puede abordarse desde dos puntos de vista: anlisis cualitativo y anlisis cuantitativo. El anlisis cualitativo establece la identidad qumica de las especies en la muestra. El anlisis cuantitativo determina en forma numrica la cantidad relativa de las especies que componen la muestra. La Qumica Analtica ha jugado un papel fundamental en el desarrollo de la ciencia. De hecho, su gran importancia ha propiciado que sea cultivada de forma asidua desde los inicios de la historia de la Qumica. La relacin de la Qumica Analtica no se reduce simplemente a otras ramas de la qumica, sino a otras muchas ciencias, por lo que es frecuente que se la califique como Ciencia Central. Asimismo, la naturaleza interdisciplinaria del anlisis qumico le convierte en una herramienta vital en laboratorios mdicos, industriales, acadmicos y gubernamentales.

2.

CONCEPTOS BSICOS EN ANLISIS QUMICO

Resulta conveniente antes de adentrarnos en el Anlisis Qumico definir los trminos ms frecuentemente empleados en este mbito: Se denomina muestra a una parte representativa de la materia objeto de anlisis, siendo una alcuota de la muestra una porcin o fraccin de la misma. Se llama analito a la especie qumica objeto del anlisis. La matriz de la muestra ser el conjunto de todas aquellas especies qumicas que acompaan al analito en la muestra. La tcnica analtica es el medio utilizado para llevar a cabo el anlisis qumico, mientras que el mtodo analtico es un concepto ms amplio pues no slo incluye a la o las tcnicas analticas empleadas en un anlisis sino tambin todas las operaciones implicadas hasta la consecucin del resultado final. Rara vez un mtodo de anlisis es especfico, en el mejor de los casos ser selectivo. Por esta razn es muy comn la aparicin de especies interferentes durante

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un anlisis, estas especies qumicas influyen en la respuesta del analito, pudiendo disminuir dicha respuesta (interferencia negativa) o incrementarla (interferencia positiva). El enmascaramiento es una va comnmente empleada para eliminar interferencias, mediante la cual la especie interferente es transformada en otra especie qumica que no altera la respuesta del analito. La mayor parte de los mtodos analticos son relativos, es decir el contenido de analito en la muestra se obtiene a travs de un patrn de referencia. Se denomina disolucin patrn o estndar a una disolucin de concentracin exactamente conocida. La grfica que representa la respuesta analtica en funcin de la concentracin del analito correspondiente se llama curva de calibrado o curva estndar.

3.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ANLISIS

Para llevar a cabo un anlisis cuantitativo hay que llevar a cabo dos mediciones: La primera medida es el peso o volumen de la muestra bajo anlisis. La segunda medida es una cantidad que es proporcional a la cantidad de analito presente en la muestra.

Los mtodos analticos se clasifican en funcin de la naturaleza de esta ltima medida, en este sentido hablamos de: Mtodos Clsicos o Qumicos: - En los mtodos gravimtricos se determina la masa de analito o de algn compuesto relacionado qumicamente con l. - En los mtodos volumtricos se mide el volumen de una disolucin de concentracin conocida que contiene la cantidad de reactivo necesaria para reaccionar completamente con el analito. Mtodos Instrumentales: Los mtodos electroanalticos conllevan la medida de alguna propiedad elctrica como potencial, intensidad de corriente, resistancia o cantidad de electricidad. Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la medida de alguna propiedad de la radiacin electromagntica tras la interaccin con los tomos o molculas de analito; o bien la produccin de radiacin

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electromagntica a partir del analito cuando la materia ha sido sometida a algn tipo de excitacin. Existe un grupo miscelneo de mtodos que implican la medida de la relacin carga-masa, velocidad de desintegracin radioactiva, calor de reaccin, conductividad trmica, actividad ptica o ndice de refraccin.

Mtodos de separacin: cuando se desarrollaron estos mtodos su finalidad inicial era la eliminacin de interferentes antes de proceder a aplicar la tcnica analtica seleccionada. En la actualidad, existen mtodos de separacin que son mtodos de anlisis en s mismos, como por ejemplo la cromatografa.

4.

EL PROCESO ANALITICO

Un anlisis cuantitativo implica una secuencia de etapas que implican desde la definicin del problema planteado hasta la elaboracin de un informe y sus conclusiones. En algunos casos, es posible omitir una o ms etapas; por ejemplo, si la muestra se encuentra en el estado fsico y condiciones adecuadas para ser analizada mediante la tcnica seleccionada, es posible que no se requiera ningn tratamiento previo de la misma. A continuacin pasamos a detallar cada uno de las etapas del proceso analtico: - DEFINICIN DEL PROBLEMA: En esta primera etapa se plantea el tipo de anlisis requerido y la escala de trabajo, convirtiendo as las cuestiones generales en cuestiones especficas que puedan responderse a travs de medidas. - SELECCIN DEL MTODO DE ANLISIS: Esta etapa resulta fundamental para el xito del proceso analtico global, en ocasiones puede ser la etapa ms difcil, requiriendo algo de experiencia e intuicin. La seleccin del mtodo de anlisis generalmente representa un compromiso entre: exactitud requerida, concentracin prevista del analito en la muestra, disponibilidad de tiempo, factor econmico, complejidad de la muestra y nmero de muestras bajo anlisis, entre otros factores. - El siguiente paso del proceso analtico es la OBTENCIN DE LA MUESTRA, tambin llamada toma de muestra o muestreo. Para que la informacin obtenida sea significativa, es necesario que la muestra tenga la misma composicin que el resto del material del que se obtuvo.

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Cuando este material es de gran tamao y heterogneo, la obtencin de una muestra representativa requiere gran esfuerzo. Supongamos un vagn cargado con 25 toneladas de arroz, del que se sospecha un contenido de arsnico superior al legislado. La toma de muestra requiere un plan adecuado con el fin de conseguir una pequea masa del material cuya composicin represente con exactitud a la totalidad del material muestreado. La obtencin de muestras de carcter biolgico representa otro tipo de problema de muestreo. La complejidad de los sistemas biolgicos y la influencia del modo de toma de muestra sobre los resultados obtenidos han propiciado el desarrollo de procedimientos estrictos de muestreo y transporte de muestras a los laboratorios clnicos, con el fin de obtener muestras representativas y mantener su integridad. En realidad, los problemas de muestreo suelen ser menores que en estos casos. Sea cual sea la complejidad de la materia a analizar, la muestra ha de representar la totalidad de dicha materia y ha de presentar carcter homogneo. - TRATAMIENTO DE LA MUESTRA: Son escasos los problemas que se resuelven sin necesidad de tratamiento de la muestra antes de proceder a la medida; por ejemplo, la medida del pH de una muestra de agua de ro puede llevarse a cabo directamente sin tratamiento alguno de la muestra. Lo habitual, es que la muestra necesite algn tipo de tratamiento, con el fin de: preparar la forma y el tamao de la muestra, as como la concentracin del analito o los analitos en la forma qumica y concentracin, adecuadas para la tcnica analtica seleccionada y/o eliminar interferentes de la matriz de la muestra. La etapa de tratamiento de la muestra ha de llevarse a cabo teniendo en cuenta las siguientes consideraciones: Han de evitarse tanto las prdidas de analito como las posibles contaminaciones introducidas en la muestra. El analito ser transformado a la forma qumica ms adecuada para el mtodo analtico seleccionado. Por ejemplo, la determinacin de manganeso mediante espectrofotometra de absorcin molecular en el visible requerir su transformacin a MnO4-. Si es necesario, se eliminarn las interferencias de la matriz, con el fin de incrementar la selectividad del mtodo. Por supuesto, resulta totalmente inadmisible la introduccin de nuevas interferencias. Debe considerarse la dilucin o preconcentracin del analito, de manera que ste se encuentre en el intervalo de linealidad del mtodo seleccionado.

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La mayora de los anlisis, aunque por supuesto no todos, se llevan a cabo en disoluciones de la muestra preparada en un disolvente adecuado. Si la muestra es slida, lo ms habitual es proceder a su trituracin para disminuir el tamao de partcula, mezclarla de forma efectiva para garantizar su homogeneidad y almacenarla en condiciones adecuadas, si el anlisis no se va a llevar a cabo de inmediato. En el caso en que la muestra ya se encuentre en estado lquido pero no vaya a analizarse tras su recogida, por supuesto las condiciones de almacenamiento han de tenerse en consideracin; por ejemplo, si una muestra lquida se mantiene en un recipiente abierto, el disolvente podra evaporarse modificando as la concentracin del analito. En el caso de que el analito fuese un gas disuelto, el recipiente de la muestra debe mantenerse en un segundo recipiente sellado para impedir contaminacin por gases atmosfricos. Si el analito no se encuentra disuelto, ser necesaria su disolucin en el disolvente adecuado. En determinadas ocasiones es suficiente con mantener en contacto el disolvente (agua, disolucin reguladora, etanol) con la muestra slida durante un corto periodo de tiempo y, tras la centrifugacin de la mezcla, recoger el lquido sobrenadante conteniendo el analito. Como ejemplo de esos casos en que la transferencia del analito a la fase lquida resulta sencilla, podemos citar el caso de la determinacin de cido acetilsaliclico en un preparado farmacutico llevada a cabo mediante un mtodo volumtrico. En este ejemplo, en primer lugar se tritura la muestra slida y seguidamente se procede a su disolucin en etanol, lo que permite la transferencia del analito a la fase acuosa. Sin embargo, en muchas ocasiones esta etapa de disolucin no resulta tan sencilla y es necesario emplear disolventes ms fuertes (cidos, bases, agentes oxidantes) e incluso la aplicacin de energa externa a travs de sistemas de microondas, ultrasonidos, etc. Una vez que el analito se encuentra en fase lquida, la siguiente cuestin es conocer si se encuentra en la forma qumica adecuada para llevar a cabo la medida de la propiedad analtica. Por ejemplo, si se pretende determinar sulfonamidas mediante una tcnica espectrofluorimtrica, dado que las sulfonamidas no son especies fluorescentes, es obvio que ser necesario someterlas a una reaccin qumica para su transformacin en especies fluorescentes. La eliminacin de interferencias se considera como parte de la preparacin de la muestra y resulta indispensable antes de proceder a la etapa de medida, para ello se recurrir al mtodo de separacin ms adecuado. No se cuentan con reglas generales para la eliminacin de interferencias. La mayora de los anlisis qumicos se llevan o deben llevarse a cabo sobre varias rplicas de la muestra, cuyas masas o volmenes se determinan con mediciones

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cuidadosas a travs de balanzas analticas o material volumtrico de precisin. La realizacin de rplicas mejora la calidad de los resultados e informa acerca de la fiabilidad del anlisis. Las medidas cuantitativas de rplicas de muestras se suelen promediar y luego se aplican diversas pruebas estadsticas a los resultados para establecer la fiabilidad y descartar datos atpicos, si los hubiera. - PROCESO DE MEDIDA: Todos los resultados analticos dependen de la medida final de una propiedad fsica o qumica del analito. Las valoraciones o titulaciones se encuentran entre los mtodos analticos ms precisos. En una valoracin, el analito reacciona con un reactivo estandarizado mediante una reaccin de estequiometria conocida. La cantidad de reactivo estandarizado necesario para alcanzar la condicin de equivalencia se relaciona con la cantidad de analito presente. Por tanto, la valoracin es un tipo de comparacin qumica. En la calibracin con un estndar externo, la muestra se prepara por separado del estndar. La propiedad analtica medida (S) depende de manera conocida y reproducible de la concentracin del analito (CA). En teora, la medida de la propiedad es directamente proporcional a la concentracin segn la siguiente ecuacin S = K x CA. Salvo dos excepciones, los mtodos analticos instrumentales requieren la determinacin emprica de K con estndares o patrones del analito. La determinacin del valor de K se denomina calibracin. En una primera aproximacin es posible obtener el valor de K con el uso de un nico estndar externo y seguidamente calcular el contenido de analito en la muestra problema. Los estndares externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de interferencias de los componentes de la matriz en la disolucin del analito. Se preparan una serie de estndares externos de distintas concentraciones conocidas del analito. Idealmente se utilizan tres o ms disoluciones en el proceso de calibracin. La calibracin con un nico patrn, que sera la propuesta en la diapositiva anterior, no es recomendable pues conlleva un alto riesgo de error. La calibracin se lleva a cabo al obtener la seal de respuesta (altura o rea de pico, absorbancia, voltaje, etc.) como funcin de la concentracin conocida del analito. Al representar grficamente los datos y ajustarlos a una ecuacin matemtica se obtiene la curva de calibrado. El mtodo de mnimos cuadrados es el mtodo de anlisis de regresin ms empleado para datos bidimensionales. La constante de proporcionalidad (K) corresponde a la pendiente de calibracin. Seguidamente la seal analtica obtenida para la muestra analizada se sustituye en la ecuacin de calibracin obtenindose la concentracin del analito. Los factores de dilucin o precocentracin a los que hubiese sido sometida la muestra antes del proceso de medida, habrn de ser considerados para la obtencin del resultado final.

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Cuando se emplean estndares externos, se supone que cuando en la muestra y el estndar est presente la misma concentracin de analito, se obtendr la misma respuesta. Sin embargo, esto no siempre ocurre as y en esos casos es necesario recurrir a otros mtodos de calibracin como el del estndar interno o el de adiciones estndar a las muestras. En el mtodo del estndar interno se agrega a las muestras, estndares y blancos una cantidad conocida de una especie de referencia, que ser seleccionada de forma que tenga propiedades fsicas y qumicas semejantes a las del analito. La seal de respuesta es la relacin entre la seal del analito y la de la especie de referencia (representada en el eje de ordenadas). En el eje de abcisas se representa la concentracin del analito en las disoluciones estndar. Este mtodo puede compensar cierto tipo de errores si stos influyen en el analito y la especie de referencia en la misma proporcin. El mtodo de adiciones estndar a las muestras se usa cuando es difcil o imposible duplicar la matriz de la muestra. Se adiciona a la muestra una cantidad o cantidades conocidas de una disolucin estndar del analito. En el mtodo de un solo punto, se toman dos porciones de muestra: una se mide como de costumbre, y a la otra se le agrega una cantidad conocida del analito. Ambas respuestas se utilizan para calcular la concentracin de analito en la muestra. En el mtodo de adiciones mltiples, a varias alcuotas de muestra se le agregan cantidades conocidas de la disolucin estndar del analito y se obtiene la curva de calibracin de adiciones mltiples. - EVALUACIN DE LOS RESULTADOS, INFORME Y CONCLUSIONES: Los resultados analticos estn incompletos sin una estimacin de su fiabilidad. Por tanto, si pretendemos que los resultados tengan valor, debe proporcionarse alguna medicin de la incertidumbre relacionada con los clculos obtenidos. Adems, el informe final no
slo debe plasmar los resultados obtenidos sino tambin las limitaciones concretas del mtodo de anlisis empleado. En cualquier caso, ste puede ir dirigido a un especialista o para el pblico en general, de modo que ser necesario asegurarse de que es apropiado para el destinatario previsto. Una vez escrito el informe, el analista puede o no estar implicado en el uso de su informacin. Como mnimo el analista tiene la responsabilidad de asegurar que las conclusiones que se extraigan de sus datos sean coherentes con los mismos.