Sunteți pe pagina 1din 12

Curs II.

Notiuni de morfologie i taxonomie bacterian

1. Introducere 2. Dimensiunea, forma i gruparea bacteriilor 3. Structuri bacteriene obligatorii - structur i funcii: a. nucleul, b. citoplasma, c. nveliurile celulare 4. Structuri bacteriene facultative - structur i funcii: a. cilii, b. pilii, c. capsula, d.spori 5. Taxonomie bacteriana. Principalele genuri bacteriene implicate n patologia uman 1. Introducere n secolul XXI, microbiologia medical este abordat din perspectiv sistemic. Pentru a nelege relaia complex care se stabilete ntre microorganism, organismul gazd i ecosistemul n care acestea interacioneaz, este necesar s cunoatem att alctuirea i fiziologia microorganismelor, ct i pe cele ale gazdei umane. De exemplu, exist structuri bacteriene care asigur aderena la tegumente sau mucoase prin interaciuni cu diveri receptori ai gazdei - aa cum sunt pilii, mobilitatea aa cum sunt flagelii, enzime sau toxine care asigur supravieuirea microorganismelor prin utilizarea aparatului morfo-funcional al gazdei etc. n pasul urmtor de instruire, nelegerea structurii si funciei microorganismelor, precum i a modului n care acestea se manifest la nivelul organismului uman n condiii variabile care in de gazda uman i/sau de mediu, vor constitui baza necesar pentru aprofundarea mecanismelor procesului infecios, a recunoaterii diagnosticului specific de boal infecioas, precum i a principiilor interveniei terapeutice. 2. Dimensiunea, forma i gruparea bacteriilor
".'

Dimensiunea microorganismelor este de ordinul micronilor, adic a miimilor de milimetru (Iu = 10 -3 mm). Este de aceea evident c, dac dorim s vizualizm structurile microbiene individuale, aspectele pe care le vom observa depind de instrumentul optic cu ajutorul cruia vizualizm aceste microorganisme, de puterea lui de mrire, procedeele utilizate pentru diferenierea microorganismelor etc. Observarea cu ajutorul microscopului optic asigur mrirea de pn la 900-1000 de ori, n timp ce microscopul electronic poate mri de pna la ori. Pentru observaii speciale, se pot utiliza microscopia de fluorescen, microscopia n cmp ntunecat, microscopia confocal, microscopia de for atomic etc.
...

La micro scopul optic putem observa microorganismele celulare, cum sunt bacteriile, fungii i paraziii microscopici. Pentru a putea fi observate la micro scopul optic, este necesar ca microorganismele s fie fixate i colorate pe o lam de microscop sau examinate n preparat umed, ntre lam i lamel. Bacteriile fixate pe lam pot deveni vizibile la micro scopul optic obinuit prin coloraii nedifereniale pentru bacterii, cum sunt coloraia cu albastru de metilen i coloraia May-Grunwald-Giemsa, dar cele mai frecvent utilizate n bacteriologie sunt coloraiile bacteriologice difereniale Gram i Ziehl-Neelsen. Hans Christian Gram a fost un farmacolog i medic suedez, care a trit ntre anii 1853 i 1928. n perioada 1883 - 1885 a lucrat n Strasbourg, Marburg i Berlin. n 1884, hicrnd cu Friedlander n Berlin, a observat n timp ce examina esut pulmonar de la pacienii decedai cu diagnosticul de pneumonie, c unii dintre colorani erau reinui preferenial de unele dintre celulele bacteriene. Dac colora un frotiu uscat la flacr cu violet de genian (cristal violet) i fixa colorantul cu soluie Lugol (triiodat de potasiu), dup care decolora cu etanol, unele bacterii, cum sunt de exemplu pneumococii reineau colorantul (gram-pozitivi), n timp ce alte specii se decolorau (gram-negativi). Gram nu a utilizat niciodat contracolorarea microorganismelor gram negative. Cu civa ani mai trziu, patologul german din Frankfurt Carl Weigert (1845-1904) a adugat etapa fmal de contracolorare cu safranin, pentru vizualizarea bacteriilor Gram negative, care pierd coloraia cu cristal violet. Alternativ, s-a folosit uneori fucsina diluat n loc de safranin, n funcie de caracterele de colorabilitate ale diverselor microorganisme. O alt coloraie larg utilizat n diagnosticul microbiologie de rutin al infeciilor cu mycobacterii este coloraia Ziehl-Neelsen, care aplic un procedeu simplu de nclzire, necesar colorrii cu fucsin a peretelui bacterian al acestui gen bacterian, necolorabil prin coloraia Gram. Rezistena ulterioar la decolorare energic cu acid-alcool difereniaz microorganismele acid-alcoolo-rezistente, dintre care fac parte i mycobacteriile, de restul microorganismelor, pe baza structurii biochimice a peretelui bacterian. Pentru observarea prin tehnici de microscopie special se utilizeaz metode corespunztoare instrumentului de observare: fluorocromi pentru microscopia cu fluorescen, preparatul umed pentru microscopia n cmp ntunecat etc. Elemente vizibile la micro scopul optic, pe care le descriem atunci cnd observm un preparat microscopic fixat i colorat pentru microscopie optic, denumit frotiu, sunt: Prezena sau absena celulelor eucariote (leucocite, epitelii), n funcie de materialul examinat: prelevat biologic, respectiv cultur microbian Dimensiunea microorganismelor - apreciat n comparaie cu alte elemente figurate cu dimensiune cunoscut (ex. hematiile au diametrul aproximativ de 7 microni) sau fa de uniti de mrime inscripionate pe lama de microscopie Forma Culoarea - pentru diferenierea cu ajutorul coloraiei Gram, coloraia ZiehlNeelsen Dispoziia sau modul n care se grupeaz microorganismele Mobilitatea - n preparatul proaspat Inc1uzii celulare Spori

Capsula - se observ mai bine cu coloraii negative, adic utiliznd substane care nu coloreaz cap sula, ca de exemplu coloraia cu tu de India

Forma, mrimea, colorabilitatea, modul de grupare ale microorganismelor variaz n funcie de factori intrinseci, care definesc genul i specia din care fac parte bacteriile, dar i n funcie de factori extrinseci, reprezentai de condiiile de cretere (cantitatea i calitatea substanelor nutritive, prezena sau absena inhibitorilor), vrsta culturii microbiene etc. n funcie de form, dispoziie i caractere de tinctorialitate (colorabilitate), putem descrie urmtoarele categorii de microorganisme*: * In partea stanga sunt reprezentate imagini de microscopie optic, iar n partea dreapt imagini de microscopie electronic. 2.1. Cocii - bacterii de form aproximativ rotund, la care lungimea i grosimea sunt aproximativ egale: Exemple: . f Stafilococii - cu specia tip Staphylococcus aureus - sunt coci perfect rotunzi, cu dispoziie n ciorchine (staphylos = ciorchine de strugure n lb. greac), Gram pozitivi n preparate din prelevate biologice pot fi intra sau extracelulari

.,

Streptococii - cu specia tip Streptococcus pyogenes, sunt coci ovalari, dispui n lanuri (strepto = lan), Gram pozitivi

Cocii din specia Streptococcus pneumoniae sunt de form lanceolat, grupai n diplo (doi cte doi), cu vrfurile ascuite fa n fa, Gram pozitivi.

Neisseriile - coci }eniformi, sau n form de boabe de fasole, grupai n diplo, cu feele concave fa n fa, Gram negativi. Pe frotiurile din prelevat biologic se situeaz intra sau extracelular. Principalele specii sunt: Neisseria meningitidis si Neisseria gonorrhoeae

2.2. Bacilii, bacterii de forma alungit, cu aspect de bastonae Exemple: Baci/lus subtilis: bacili cu capetele rotunjite, Gram pozitivi

".'

Fusobacterium fusiformis: bacilli cu capetele ascuite, Gram pozitivi

Corynebacterium diphteriae: bacilli cu capetele mciucate, cu dispoziie n form de litere majuscule - M, V, X sau litere chinezesti; se pot colora inegal i pot conine incluzii

Bacil/us cereus: bacili cu capete tiate drept, dispuse n lanuri, Gram pozitivi

2.3. .Cocobacili - bacterii a cror form este de Bordetella pertussis, Brucella

COC1

uor alungii: Pasteurella,

Pasteurella spp .

.,

Bordetella spp.

Brucella spp.

2.4. Vibrioni : Vibrio - form de virgul

2.5. Spirili: spire rigide - Spirillum 2.6. Spirochete: spire flexibile: Treponema, Borrelia, Leptospira

2. 7. Actynomicete: filamente lungi (culturi tinere) i forme bacilare prin fragmentare (culturi vechi)
'4

Microscopia electronic poate fi utilizat n dou variante: microscopie electronic de baleiaj, n care sistemul optic preia i transmite fasciculul de electroni trimis ctre prob i reflectat de structurile sale, respectiv microscopia electronic de transmisie, n care sistemul optic preia fascicului de electroni transmis prin grosimea preparatului microscopic. Microscopia electronic ne ofer posibilitatea de a observa structurile fme ale microorganismelor. Bacteriile Gram pozitive i Gram negative posed, n general, aceleai elemente structurale generice (Fig. 1), care se deosebesc de cele ntlnite la celulele eucariote.

",'

Fig. 1. Bacteria generic - principalele elemente structurale Principalele elemente de difereniere ntre celulele procariote i eucariote sunt redate n tabelul 1 i se refer la alctuirea nucleului, a organitelor, nveliurilor celulare, metabolismul respirator etc.

Tabelul 1. Caractere de difereniere ntre celulele procariote i eucariote Caracterul Eucariote (alge, fungi, plante, animale) >5J.1.m nuclear, Membran nucleoli, genom diploid, cromozomi Mitocondrii, aparat Golgi, reti cui endoplasmic Ribozomi 80 S (subuniti 40 S i 60 S) Conine colesterol Prezent numai la fungi Procariote (bacterii) 00,5 -30 um Fr membran nuclear, genom ADN circular, haploid Nu au mitocondrii, aparat Golgi, reti cui endoplasmic Ribozomi 70 S (50 S i 30 S) Nu conine colesterol Prezent, structur complex lipide i cu proteine, peptidoglican Asexuat Flagel simplu, uneori
A

Dimensiune Nucleu Organite citoplasmatice

Membrana celular Perete celular

.,

Reproducere Micare Respiraie

nivelul membranei La celulare Modificat dup Patrick A. Murray et al. - Medical microbiology, 6th Edition, Mosby Elsevier, 2009 3. Structuri bacteriene obligatorii i funciile lor: 3.1. Nucleul celulelor procariote nu are membran i nucleoli; totui, la microscopul electronic se poate observa o structur discret la nivelul citoplasmei, numit "nucleoid". Nucleul ocup 10% din volumul celulei bacteriene i constituie 2-3% din greutatea sa uscata. Cromozomul bacterian este circular, de obicei o singur copie / celul bacterian, cu o greutate de aproximativ 4000 kb. Este .legat de membrana citoplasmatica prin mesosom (invaginatie a membranei cu rol n segregarea cromozomilor dupa replicare). Compoziia chimic a nucleului const n: 60%ADN, 30% ARN nou sintetizat, 10% proteine. Fig. 2 - Structura ADN:

Sexuat i asexuat Flagel complex, n unele cazuri La nivelul mitocondriilor

Fig. 3 - Bazele azotate:


~N

o o

, ,

'[

lcJr;t
o
"0

Unodine

Gw.nosine

Adenosine

ADN bacterian are structur de dublu helix, format din lanuri antiparalele, n oglind. Lanurile nucleotidice sunt pliate, aceast pliere fiind strict necesar pentru realizarea funciilor ADN. Procesul de pliere are loc cu ajutorul unor enzime, cum este de exemplu ADN-girza. . ~ Enzimele pot fi inta unor antibiotice, care mpiedic plierea i duc la moartea celulei bacteriene, prin imposibilitatea de exercitare a funciilor ADN. Fig. 4 - Plierea lanului de ADN

Funciile ADN sunt: _ Funcia de matrice pentru sinteza de ARNm i proteine Funcia de replicare a materialului genetic Materialul genetic extracromozomal este reprezentat de plasmide, fragmente de ADN capabile de replicare autonoma sau controlata. Structural or este similar cu cea a cromozomului circular. Numai la cateva specii putem ntlni plasmide cu structura liniar. Dimensiunea plasmidelor este de aproximativ 1-200 kb (lkb == JOOO perechi baze). Pot exista 1-700 copii/celula. Funcia plasmidelor este incomplet cunoscut, dar prezena acestora confer o serie de avantaje, deoarece pot fi implicate n procese care conduc la creterea rezistenei la factorii de mediu i/sau a virulenei, prin: Codificarea unor proteine care des compun moleculele de antibiotic Codificarea unor proteine care confer virulenta: ex. Ent P307 E. coli enterotoxina (E. coli enteropatogen) etc. Schimbul de ADN ntre celulele bacteriene - plasmide conjugative

3.2. Citoplasma Citoplasma este structura aflata in interiorul membranei citoplasmatice. Este format dintr-o matrice citoplasmatic, reprezentat de coninutul citoplasmei, fr materialul genetic. Matricea este puin structurata, are o consisten de gel i prezint o serie de granule, n care se gsesc dicerse componente ale compartimentelor funcionale citoplasmatice. Principalele compartimente funcionale ale citoplasmei sunt: enzimele glicolitice - enzimele implicate n sinteza ADN, n special la nivelul furcii de replicare enzime implicate n sinteza unitilor structurale etc. Constituenii chimiei ai citoplasmei sunt: proteinel, inclusiv enzime, vitamine, ioni, acizi nucleici i precursori, aminoacizi i precursori, zaharuri i derivai, apa (n proporie de 80%. .\ Citoplasma are rol n procesul de cretere, metabolismul celulei, multiplicare. Incluziile citoplasmatice sunt structuri interne vizibile la microscop, individualizate de restul citoplasmei, avnd n general un rol functional. Clasificarea incluziilor citoplsmatice: a. Majoritatea incluziilor sunt poli-beta-hidroxialcanoai (PHA), cele mai comune fiind poli-beta-hidroxibutiraii (PHB), pentru care alcanul este metilul. PHB este un polimer format din uniti hidrofobe repetitive, de care se leag diveri radicali proteici, lipidici, fosfai etc. Funcia principal a acestor incluzii este aceea de stocare de compui carbonai i energie, fiind similare ca funcie rezervelor de substane grase la mamifere. Unii PHA au proprieti plastice, astfel nct pot fi folosii pentru obinerea unor forme de material plactic biodegradabil. Fig. 5 - Incluzii poli-beta-hidroxibutirat electronic de baleiaj) la micro scopul electronic (microscopie

b. . energie Incluziile . l

de glicogen, constituie de asemenea depozite de comnpui carbonai

c. Globule de polifosfai si sulfai sunt depozite care vor fi utilizate n situaii critice i conin substane strict necesare supravieuirii. Ex.: "granule de volutina" la

10

Spirillum volutans; corpusculi Babe-Negri la Corynebacterii - se coloreaz n rou cu colorani albatri, motiv pentru care sunt denumite "granulaii metacromatice" d. Cristale si structuri cristaline - legate de procesul sporularii la Clostridii e. Vezicule cu gaz, structuri impermeabile pentru apa, dar permeabile pentru gaze; la Cyanobactenium (stramosul cloroplastelor de la plante) servesc la reglarea pozitiei in coloana de apa, pentru accesul optim la lumin i substane nutritive) f. Un tip structurat de incluzii celulare este endosporul (vezi CapA - Structuri bacteriene facultati ve). O alt component structural a citoplasmei bacteriilor sunt ribozomii, structuri complexe n componena carora intr acidul dezoxiribonucleic i proteine. n citoplasma bacteriilor ntlnim toate cele trei tipuri de ARN cunoscute: ARN ribozomal, sintetizat in cantitati mari n faza de cretere exponential; rol n cataliza sintezei proteice ARN de. transfer: molecule care convertesc codul genetic din limbajul acizilor nucleici n limbajul aminoacizilor , ARN mesager: dirijeaz ncorporarea aminoacizi lor n proteine; este o "fotocopie" a ADN pe baza creia lucreaz ARNm. n componena ribozomilor ntlnim peste 50 de proteine diferite, care posed funcii diferite i formeaz o unitate functional cu ARNr
I

3.3. Membrana celular: Membrana celular este o component a celulei n imediata vecintate a citoplasmei i reprezint cea mai conservat structur n lumea vie. Este cea mai important barier ntre interiorul i exteriorul celulei, aflndu-se n interaciune dinamic, selectiv, cu mediul n care se dezvolt bacteria. Are o compoziie chimic de natur lipo-proteic, cu o grosime de 8 nm. Fig. 6 - Structura membranei celulare Proteina Radicali de natura proteica

Acizi grai

Proteina

ntre moleculele lipidice vecine se stabilesc legturi hidrofobe i legturi de hidrogen, iar ntre moleculele lipide i proteine legturi de hidrogen .: Legturile ionice apar ntre sarcinile negative proteice, cationii divaleni Mg+2 i Ca+2 i extremitile hidrofile ale lipidelor.

11

Proteinele pot fi mobile sau ancorate de structuri din membran sau din vecintatea meinbranei. Membrana reprezint astfel o structura fluid, cu consistena unui ulei de densitate joas, care este descris ca un "mozaic fluid", matrice n care lipidele se misc liber, dar rar s se mute de pe o parte pe alta a membranei. Funciile membranei: Contine citoplasma Bariera osmotic: previne scurgerea liber a materialului intracelular, conform legii osmozei (patrunderea apei in celula, conform principiului echilibrrii soluiilor: sruri, zaharuri, ioni etc. mai concentrai in citoplasma) Bariera seiectiv pentru schimburile intre interiorul si exteriorul celulei: Transport liber: apa, moleculele hidrofobe i moleculele hidrofile mici; moleculele hidrofobe pot ptrunde dizolvndu-se in dublul strat lipidic Transport controlat: moleculele hidrofile: aminoacizi, acizi organici, sruri anorganic - mecanisme de transport specific cu ajutorul proteinelor La nivelul membranei pot aciona o serie de antibiotice care, prin compromiterea funciilor celulare, distrug celula: ex. Polymyxin B (acioneaz ca un detergent) i Gramicidina. Aceste antibiotice au ns efecte i asupra membranelor celulare din organismul uman, motiv pentru care nu se apeleaz la ele dect n situaii extreme, cnd alte antibiotice mai puin toxice nu mai sunt active. Antibioticele care au ca int membrana celular se mai pot utiliza limitat sub forma unor preparate cu aplicaie local (topic) i n doze mici. 3.4. Peretele celular Peretele celular este o structur critic pentru bacterii. Fr acest perete rigid, celula s-ar umfla prin ptrunderea apei ctre mediul hipertonic intracelular i ar exploda. n interiorul celulei exist o presiune pozitiv de 5-20 atmosfere, mai mare la Gram pozitivi. Peretele celular al bacteriilor este structur unic n lumea vie. Numai plantele mai au perete celular, dar de alta natur. Bacteriile de interes medical prezint trei tipuri de perete celular; Gram pozitiv, Gram negativ i peretele celular cu structur special al mycobacteriilor.' Funciile peretelui celular: Determina forma celulei Particip n procesul de diviziune (formarea septului de diviziune) a. Structura peretelui bacterian la bacteriile Gram pozitive: Cel mai important component structural al peretelui bacterian la bacteriilor gram pozitive este peptidoglicanul. Acesta are structura unei reele formate din lanuri paralele cu structura de polimer format din uniti repetitive de acid N-Acetil Muramic (NAM) i N-Acetil-Glucozamin (NAG). Lanurile sunt unite ntre ele prin puni peptidice. Fig. 7. Structura chimic a peptidoglicanului - reprezentare analogic

12