FACULTAD DE MEDICINA HIPLITO UNANUE ESCUELA DE MEDICINA

CURSO: BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR PRCTICA N1

PRCTICA N1 RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS DEL LABORATORIO. NORMAS DE BIOSEGURIDAD

OBJETIVO: Dar a conocer los lineamientos bsicos de organizacin, instrumental y bioseguridad en el laboratorio.

PRIMERA PARTE: Reconocimiento de materiales y equipos de laboratorio Materiales: Tubos de ensayo Gradillas Placas Petri Luna de reloj Mortero y piln Pipetas aforadas y graduadas Buretas Bomba de succin (propipeta) Baguetas (agitadores) Probetas graduadas Matraces Erlenmeyer y aforados (Fiola) - Matraz Kitasato - Balones Probetas graduadas Vasos de precipitacin (beakers) Mecheros de Bunsen y de alcohol Asas de Kolhe Pinzas de madera o metlicas Trpodes Rejillas de asbesto Termmetro Pisetas (frascos lavadores) Soporte universal Nuez Pinzas de bureta Aros

Equipos: - Balanza analtica - Bao de temperatura - Autoclave - Espectrofotmetro o colormetro - Potencimetro (pH-metro) - Centrfuga

Procedimiento: De acuerdo a las indicaciones proporcionadas por el docente, clasificar los materiales del laboratorio de acuerdo a su composicin y uso. Segn su composicin: - Material de vidrio - Material de plstico - Material de madera - Material metlico Segn su uso: - Material recipiente - Material volumtrico - Material de uso especfico

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PRINCIPALES MATERIALES DE USO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

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PRINCIPALES EQUIPOS DE USO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

CENTRFUGA

BALANZA ANALTICA

BAO DE TEMPERATURA

AUTOCLAVE

ESPECTROFOTMETRO

pH-METRO

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SEGUNDA PARTE: Normas de Bioseguridad El trabajo en el laboratorio requiere la observacin de una serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se est haciendo o a una posible negligencia del operador que se encuentre trabajando en un momento dado. A continuacin listamos una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse durante las prcticas de laboratorio. NORMAS PERSONALES: 1. 2. Lea con atencin, antes de cada prctica, las indicaciones de su gua. Siga todas las instrucciones a menos que el profesor realice alguna modificacin. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Se trabajar con cuidado y de manera organizada. Asimismo se mantendr cada mesa de trabajo limpia, seca y ordenada. No se permitir el ingreso de estudiantes con vestimenta inapropiada por lo que es obligatorio el uso de mandil que le cubra brazos, torso y piernas. Est prohibido el uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. Si se tiene el cabello largo, es obligatorio llevarlo de manera recogida. Est terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas ni consumir alimentos dentro del laboratorio. En caso de derrame, accidente o dao avise inmediatamente al profesor. Al trmino de cada prctica limpiar el rea de trabajo y lavar los materiales utilizados con detergente y agua de cao. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabn. Finalmente cerciorarse que las llaves de gas y agua estn cerradas.

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USO DE REACTIVOS QUIMICOS: 1. 2. 3. 4. 5. Como regla general, no coger ningn producto qumico. El profesor o profesora te lo proporcionar. Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos qumicos peligrosos que puedan salpicar o derramarse. Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de que es el requerido, fijarse bien el rtulo. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor. Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan al desage, aunque estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos. No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succin. Los cidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el cido sobre agua.

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Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Manipule con precaucin los solventes voltiles e inflamables como el ter, acetona y metanol. Nunca evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensacin eficiente. Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente con mucha agua y avisa al profesor. Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente. Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con solventes inflamables en el laboratorio.

USO DE MATERIAL DE VIDRIO: 1. 2. 3. 4. Antes de comenzar cualquier trabajo, verificar que el material de vidrio est en buen estado. Use material de vidrio limpio y no rajado. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras use pinzas, guantes o trapos. Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas dos normas: a. Tener sumo cuidado y tomar en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podras ocasionar un accidente. b. Calentar por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agitar suavemente.

USO DE EQUIPOS ELCTRICOS: 1. 2. 3. Manipule cualquier equipo elctrico con las manos secas y asegrese que el rea de trabajo tambin este seca. Ningn cordn elctrico debe colgar fuera de la mesa de trabajo. Cuando desconecte algn equipo de tomacorriente, jlelo por el enchufe y no por el cordn.

USO DE BALANZAS: 1. Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel sobre los platos de la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizar una luna de reloj. Se debe evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.

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MANIPULACIN DE ESPECMENES: 1. Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con extremo cuidado. Siempre utilice tcnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estriles, etc.). Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.

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NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO EN UN LABORATORIO Clasificacin de microorganismos por grupos de riesgo para el trabajo de laboratorio: Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo) Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los animales. Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo) Agentes patgenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas probabilidades de entraar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio ambiente. La exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero existen medidas preventivas y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es limitado. Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo) Agentes patgenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y teraputicas eficaces. Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado) Agentes patgenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fcilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas preventivas y teraputicas eficaces.

BARRERAS DE CONTENCIN Los laboratorios presentan diversas barreras de contencin que previenen el escape y dispersin de agentes biolgicos de riesgo. Barrera primaria: Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo (vestimenta de uso exclusivo, cabina de bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad). Barrera secundaria: Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseo del laboratorio e implementacin de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad). Barrera microbiolgica: Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migracin de microorganismos entre los espacios situados a ambos lados del mismo y permite controlar la concentracin de microorganismos en el ambiente, dentro de lmites prefijados. Tiene como objetivo proteger al operador o al operador y al proceso. Barrera microbiolgica parcial: Es un dispositivo o sistema que limita la migracin de microorganismos entre los ambientes situados a ambos lados del mismo. En este tipo de barrera se recomiendan Prefiltros, Filtros HEPA (Filtros de alta eficiencia para el

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control de partculas en suspensin) as como cabinas de bioseguridad clase I o II, lo cual depender del tipo de trabajo que se efecta en un determinado laboratorio. Barrera microbiolgica absoluta: Es un dispositivo o sistema hermtico, a prueba de filtraciones de aire o gas, que evita en forma total la migracin de microorganismos entre el ambiente confinado por la barrera y el ambiente exterior de la misma. La barrera microbiolgica absoluta puede confinar al producto o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. En este caso se recomienda una cabina de bioseguridad de tipo III. Barrera qumica: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias irritantes, nocivas, txicas, corrosivas, lquidos inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad qumica. Barrera fsica: Son dispositivos o sistemas de proteccin individual o colectiva que protegen contra las radiaciones ionizantes, no ionizantes, ruidos, carga calrica, quemaduras y vibraciones excesivas.

NIVELES DE BIOSEGURIDAD De acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de contencin requerida, los procedimientos y tcnicas a usar, se han establecido los siguientes niveles de Bioseguridad. Nivel de Bioseguridad I: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio bsico, por personal adiestrado en los procedimientos que se ejecutan en l. En este nivel se trabaja con agentes clasificados en el Grupo de riesgo I por presentar un peligro mnimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. En el nivel de Bioseguridad I no se requiere equipo especial ni un diseo especfico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con entrenamiento en microbiologa. Nivel de Bioseguridad II: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio bsico, por personal adiestrado en el manejo de agentes de riesgo del grupo II. Es similar al nivel I y en l se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel I en las siguientes caractersticas: 1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes patgenos. 2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo. 3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzo cortantes contaminados. 4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en cabinas de trabajo microbiolgico.

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Nivel de Bioseguridad III: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de contencin. El personal debe contar con adiestramiento especfico para el manejo de agentes de alto riesgo clasificados en el grupo de riesgo III. En el laboratorio se realiza trabajo con agentes que pueden causar un dao serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos. El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin siguiendo protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente. Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de contencin mxima. Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos clasificados en el grupo de riesgo IV por representar un alto riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que presentan caractersticas antignicas, patognicas u otras similares a agentes de nivel III y IV son confinados a nivel IV hasta que exista suficiente informacin cientfica para establecer a cual grupo de riesgo pertenecen. El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento especfico y extensivo en el manejo de agentes infecciosos, y cuenta con entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y controlado. El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin de caractersticas superiores a las exigidas para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los trajes estn diseados para cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiracin individual asociado y una leve sobrepresin interna para evitar as la entrada accidental de partculas infecciosas. Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.

TIPOS DE LABORATORIOS En relacin con el grado de riesgo los laboratorios combinan las caractersticas de diseo, construccin, medios de contencin, equipo, prcticas y procedimientos de operacin necesarios para trabajar con agentes patgenos de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se clasifican en 3 categoras: Laboratorio bsico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1 y el de nivel de bioseguridad 2; Laboratorio de contencin: con nivel de bioseguridad 3, y Laboratorio de contencin mxima: con nivel de bioseguridad 4.

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SEALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

SEALES DE ADVERTENCIA

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SEALES DE PROHIBICIN

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SEALES DE OBLIGACIN

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SEALES DE SALVAMENTO

SEALES CONTRA INCENDIOS

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CUESTIONARIO 1. Describa de forma breve el uso de los siguientes instrumentos y equipos de laboratorio: a) b) c) d) e) f) g) h) Balanza Termmetro Espectrofotmetro Centrfuga pH-metro o potencimetro Bao de temperatura Autoclave Termociclador : : : : : : : :

2.

Completar la siguiente tabla: GRUPO DE RIESGO Grupo de riesgo 1 Grupo de riesgo 2 Grupo de riesgo 3 Grupo de riesgo 4 MICROORGANISMO* Indicar 5 ejemplos Indicar 5 ejemplos Indicar 5 ejemplos Indicar 5 ejemplos

* Indicar el nombre cientfico y tipo de cada microrganismo (hongo, bacteria, virus, etc).

3.

Qu es el agua regia y qu es la mezcla sulfocrmica? Describir su composicin y principales usos. a) Agua regia b) Mezcla sulfocrmica : :

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