Ciencia e Inves 2009-1

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
CIENCIA E
INVESTIGACIN
ISSN
1561 - 0861
Versin impresa
VOL. 12 N 1
Enero - Junio 2009
LIMA - PER
CienCia e investigaCin
Universidad nacional Mayor de san Marcos
AUTORIDADES UNIVERSITARIAS Dr. Luis Fernando Izquierdo Vsquez Dr. Vctor Pea Rodrguez
VICERRECTOR ACADMICO VICERRECTORA DE INVESTIGACIN RECTOR
DIRECTORES DE LOS INSTITUTOS Y CENTROS DE INVESTIGACIN

INSTITUTO DE INVESTIGACIN EN CIENCIAS FARMACUTICAS Y RECURSOS NATURALES Juan de
Dios Guevara
Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera

INSTITUTO DE INVESTIGACIN EN QUMICA BIOLGICA, MICROBIOLOGA Y BIOTECNOLO-
Dra. Aurora Marrou Roldn
Dr. Gerardo Gamarra Ballena FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA Dr. Pedro Atilio Cotillo Zegarra Dra. Eloisa Hernndez Fernndez Dr. Julio Lpez Castillo
DIRECTOR ACADMICO DIRECTORA DE LA UNIDAD DE POST-GRADO DECANO
GA
Marco Antonio Garrido Malo
Dra. Arilm Gorriti Gutirrez
CENTRO LATINOAMERICANO DE ENSEANzA E INVESTIGACIN EN BACTERIOLOGA ALIMENTARIA - CLEIBA
CORRESPONDENCIA Y CANJE
JR. PUNO N 1002 - LIMA 1, PER Apartado Postal 4559 Lima 1, Per Telfono: (051-1) 328-4737 Fax : (051-1) 328-1560
Mg. Gloria Gordillo Rocha
DIRECTORA ADMINISTRATIVA
Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera
DIRECTOR DE LA UNIDAD DE INVESTIGACIN
CONSEJO EDITORIAL
DIRECTOR
CONSEJO CONSULTIVO Dra. Bertha Pareja Pareja

Profesor Emrito Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Dr. Amrico Jorge Castro Luna

Director del CEUPS
EDITOR EN JEFE
Dr. Fernando Quevedo Ganoza

Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Dr. Jos Roger Jurez Eyzaguirre

Coordinador del Dpto. Acadmico de Farmacotcnia
Dr. Jos Amiel Prez

Vicerrector de Investigacin Universidad Cientfica del Sur
EDITORES ADJUNTOS
Dr. Benito del Castillo Garca

Facultad de Farmacia Universidad Complutense de Madrid - Espaa
Mg. Elena Rafaela Benavides Rivera Q.F. Tefila Hayde Ziga Cceres
Coordinadora del Dpto. Acadmico de Bioqumica
Dr. Antonio Monge Vega

Universidad de Navarra - Espaa
Dr. Manuel Machuca Gonzales

Investigador en Atencin Farmacutica - Espaa
COLABORADORES
DISEO Y DIAGRAMACIN
William Gabriel Castro Ramos Mnica Rosa Chvez Aguedo

TRADUCCIN
Cinthya Valeria Bringas Ruiz
La Revista Ciencia e Investigacin es una publicacin cientfica semestral editada por la Facultad de Farmacia y Bioqumica y auspiciada por el Consejo Superior de Investigaciones del Vicerrectorado de Investigacin de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. La revista publica artculos cientficos originales e inditos, artculos de revisin y divulgacin cientfica en las reas de: productos y recursos naturales, tecnologa farmacutica y alimentaria, biotecnologa microbiana y ambiental, atencin farmacutica, qumica clnica, y otras, relacionadas con el alimento, el medicamento y el txico. Publica tambin trabajos realizados por acadmicos e investigadores nacionales y extranjeros en idiomas espaol e ingls. Las investigaciones aportan innovacin, desarrollo sostenible y proteccin medio ambiental.
Este nmero fue editado con el apoyo financiero del Vicerrectorado de Investigacin de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Todas las opiniones son responsabilidad de los autores. La mencin de marcas comerciales no significa recomendacin por parte de la facultad, los autores, el comit editor o funcionario alguno de esta casa de estudios.
volUMen 12 ( 1 ) enero - JUnio 2009
CONTENIDO
Editorial:
Ciencia e Investigacin y el investigador .................................................................................
07
ARTCULOS ORIGINALES
Calidad de productos farmacuticos y afines en el per pesquisados por digemid, 2002 2006
Mara Margarita Coral Monge, Jos Jurez Eyzaguirre, Gustavo Bravo Orellana ..........................................................................
09
Actividad antioxidante e inmunolgica de flavonoides aislados de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn)

Enrique Aguilar F., Pablo Bonilla R. .................................................................................................................................................
15
Composicin qumica del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam var. Coca (coca) y evaluacin de su actividad antibacteriana
Geraldine M. Ventura., Amrico J. Castro L ., Mirtha Roque A, Julio R. Ruiz Q. ..........................................................................
24
Actividad cicatrizante de una pomada con aceite esencial de Schinus molle L. Molle en ganado vacuno con heridas infectadas y en ratones
Alex Alba G., Pablo Bonilla R.., Jorge Arroyo A. ..............................................................................................................................
29 37 41
Deteccin de residuos de aflatoxinas en hgado de pollo en mercados de Lima

Teresa Arbaiza F., Augusta Crdova R., Eliana Icochea D., Hilda Cutti. ........................................................................................
Actividad antimicrobiana de cuatro plantas del nor-oriente peruano

Julio R. Ruiz Q., Mirtha Roque A. .....................................................................................................................................................
COMENTARIOS
Notas farmacuticas ................................................................................................................................................ Normas e instrucciones para la publicacin de artculos ..................................................................................................... 48 50
volUMe 12 ( 1 ) JanUary - JUne 2009
CONTENTS
Editorial:
Science and research and the researcher ................................................................................
07
ORIGINAL ARTICLES
Quality of pharmaceutical and related products in Peru inspected by DIGEMID, 2002 2006.
Mara Margarita Coral Monge, Jos Jurez Eyzaguirre, Gustavo Bravo Orellana ..........................................................................
09
Antioxidant activity and immunological of flavonoids isolated from leaves of Smallanthus sonchifolius (yacon).
Enrique Aguilar F., Pablo Bonilla R. .................................................................................................................................................
15
Chemical composition of essential oil Erythroxylum coca Lam var. coca (Coca) and evaluation of its antibacterial activity.
Geraldine M. Ventura., Amrico J. Castro L ., Mirtha Roque A, Julio R. Ruiz Q. ..........................................................................
24
Healing activity of ointment the essential oil of the the wounds infected in the cattle and in mice.
Schinus molle L. molle in front to

29 37 41
Alex Alba G., Pablo Bonilla R.., Jorge Arroyo A. ..............................................................................................................................
Detection of aflatoxin residues in chiken liver in lima markets

Teresa Arbaiza F., Augusta Crdova R., Eliana Icochea D., Hilda Cutti. ........................................................................................
Antimicrobial activity of four plants from Peruvian north-east

Julio R. Ruiz Q., Mirtha Roque A. ....................................................................................................................................................
COMMENTARIES
Pharmaceutical notes ............................................................................................................................................................. Norms and instructions to publish articles ............................................................................................................................. 48 50
Ciencia e Investigacin 2009; 12(1)
editorial
CIENCIA e INVESTIGACIN y EL INVESTIGADOR
y con estos parmetros moldear cuadros de investigadores que asuman exigencias, retos cientficos, tecnolgicos y humansticos, profundizando la investigacin universitaria en la bsqueda de nuevos conocimientos y aportando tecnologa; asimismo, para generar productos que la sociedad necesita, no slo para innovar, y crear un valor agregado a lo que se presenta como resultados de la investigacin. Por lo tanto, la produccin y difusin debe ser ms exigente en la investigacin, ya que hoy en da se tiene herramientas como el hardware y software, y bases de datos que nos permiten obtener informacin actualizada. Si se enlaza la informacin y el conocimiento como soportes de la investigacin, la produccin ser mayor y el avance de la ciencia y tecnologa se globalizarn en beneficio del investigador. Entonces, a la pregunta Cmo identificar y evaluar al investigador?, la respuesta ser: a travs de las publicaciones cientficas de los resultados de sus investigaciones, derivados en patentes de desarrollo tecnolgico, en trabajos de desarrollo humano integral, en proyectos multidisciplinarios y en la formacin de estudiantes semilleros de futuros investigadores, a travs del Fondo de Promocin de Trabajo de Tesis de Pregrado y Grupos de Estudio. Con este soporte, el investigador tendr mayor opcin a desarrollar, por medio del campo virtual, una investigacin en cercana con otros investigadores y mejorar las facilidades de acceso a la publicacin en revistas indexadas de corte internacional. Al interactuar con otros investigadores podr coordinar acciones de trabajo en equipo que se plasmen en talleres de investigacin, donde se vislumbren nuevos conocimientos con mayor objetividad y nuevas lneas de investigacin, que le permitirn formar una cultura de investigadores, comprometida en difundir el conocimiento. En este sentido, tendremos una visin integradora de lo que se quiere hacer y tener para beneficio, no slo de la institucin donde se trabaja, sino para hallar en la investigacin una estrategia para aportar en lo que la sociedad actual requiere y sea un reto para enfrentarnos al futuro. Ante esto, si el investigador se limita a ejecutar sus proyectos con lo que le asigna la universidad, su propsito de completar la investigacin se ver diluido e incompleto, orientndole a buscar financiamiento externo nacional o internacional, desarrollando en el investigador la creatividad e
a investigacin es un proceso complejo en el que se conjugan aspectos tericos, cientficos y tcnicos; con enfoques metodolgicos, analticos y sistemticos, que actan como soporte en aras de la ciencia. La universidad tiene el compromiso de generar y divulgar el conocimiento a partir de la investigacin
innovacin, incrementando el prestigio de nuestra universidad. Finalmente, en este contexto de la investigacin cientfica, seguimos trabajando en la revista Ciencia e Investigacin cumpliendo con el objetivo para la cual fue creada. Son doce aos de publicacin cientfica exitosa, que ser ms reconocida y apreciada con la entrega de manuscritos redactados con sintaxis, estilo literario, claridad y sencillez; para su aceptacin y correspondiente publicacin.
Dr. Amrico Castro Luna
Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14 Facultad de Farmacia y Bioqumica UNMSM 2009
ISSN 1561-0861
CALIDAD DE PRODUCTOS FARMACUTICOS Y AFINES EN EL PER PESQUISADOS POR DIGEMID, 2002 - 2006
Quality of pharmaceutical and related products in Peru inspected by DIGEMID, 20022006
Mara Margarita Coral Monge1, Jos Jurez Eyzaguirre2, Gustavo Bravo Orellana2
1
Qumico Farmacutica; 2Facultad de Farmacia y Bioqumica-UNMSM
RESUMEN
Se revisaron 2843 pesquisas de productos farmacuticos y afines, realizadas por el Equipo de Control y Vigilancia de Establecimientos de la DIGEMID de 2002 a 2006. Los anlisis fisicoqumicos y microbiolgicos fueron realizados por el Instituto Nacional de Salud y luego evaluados por el Equipo de Control y Vigilancia de Productos. Del total de productos pesquisados, se encontr que el 65% son conformes y 35% no conformes. Los resultados de los no conformes se clasificaron para determinar las principales observaciones a la calidad: Rotulado No Autorizado 40%, Producto Deficiente 27%, Crtico 17%, Cambio de especificacin 14%, Sin Registro Sanitario 1% y Forma de Presentacin No Autorizada 1%. De las pesquisas realizadas: 45% fueron medicamentos de marca, 30% medicamentos genricos, 10% material mdico y 9% cosmticos. Resultaron conformes: Medicamentos de marca 69%, medicamentos genricos 64%, material mdico 60% y cosmticos 68%. Respecto al tipo de Establecimiento Farmacutico que presentan conformidad en sus productos tenemos: Laboratorios 69%, Drogueras 62% e Importadoras 67%. Segn pas de procedencia, los conformes fueron 71% nacionales y 59% extranjeros. Palabras clave: DIGEMID, Reglamento, Pesquisa, Calidad de medicamento, Vigilancia sanitaria.
SUMMARY
2843 inquiries were checked, pharmaceuticals and related products, made by the Control and Monitoring Equipment Establishments of DIGEMID from 2002 to 2006. The physicochemical and microbiological analyses were realized by the National Institute of Health and then evaluated by the Control and Monitoring Product. Of the whole of products were found that 65% are satisfied and 35% did not comply. The results of the non-compliant were classified to determine the main observations about quality: Unauthorized labeling 40%, Deficient product 27%, Critical 17%, Specification change 14%, Without sanitary record 1% and Unauthorized presentation form 1 %. In their investigation: 45% were brand name drugs, generic drugs 30%, 10% medical supplies and 9% cosmetics. Were in conformity: brand drugs 69%, generic drugs 64%, medical supplies 60% and cosmetics 68%. Regarding the type of pharmaceutical establishment in accordance presenting their products are: labs 69%, drugstores 62%, importing 67%. By country of origin, the line were 71% home and 59% foreign. Key words: DIGEMID, Regulation, Inquiry, Medicine quality, Sanity alertness.
INTRODUCCIN odo producto farmacutico recorre un largo camino desde su elaboracin hasta su utilizacin por el paciente; siendo posible que en algn lugar de este camino pueda verse afectada la calidad, por factores intrnsicos o extrnsecos. Debido a la seriedad de este problema, la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y la Organizacin Panamericana de la Salud (OPS) han alertado a las autoridades sanitarias sobre la existencia de productos alterados y la necesidad de retirarlos del mercado. As, se han reportado casos de deteccin de partculas negras en un lote de gentamicina en Alemania en 1997; en 1993, en el Reino Unido, se retiraron del mercado cuatro lotes de una formulacin de mitoxantrona inyectable porque se puso en duda la
esterilidad del producto (1-4). Debido a estas situaciones, los organismos reguladores de cada pas han definido procedimientos legales para retirar del mercado los productos defectuosos, estableciendo programas de control para detectar observaciones a la calidad de los medicamentos (1), verificar que se cumplan las especificaciones de calidad establecidas en farmacopeas internacionales reconocidas y asegurar que los medicamentos lleguen a los pacientes en condiciones de calidad, seguros y eficaces (5,6). En el Per, las reglamentaciones existentes: La Ley General de Salud N 26842 y el Reglamento para el Registro, Control y Vigilancia Sanitaria de Productos Farmacuticos y Afines - Decreto Supremo N 010-97SA, con sus respectivas modificaciones y ampliatorias establecen que, el Registro Sanitario de productos far-
Coral M., Jurez J., Bravo G.
Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14
macuticos y afines se otorga slo por referencia, es decir, si se encuentra registrado en cualquier pas del mundo, y por lo tanto cuenta con un Certificado de Libre Venta. Este sistema no permite realizar ningn tipo de evaluacin sobre la eficacia, seguridad y calidad de los productos, permitiendo la existencia en el mercado de medicamentos de valor teraputico cuestionado (7-9). En el presente trabajo se evalu la calidad de los productos farmacuticos y afines del mercado peruano para evitar problemas como el ocurrido en los aos 1980 a 1985, donde murieron nios a quienes se administraron las llamadas bolsitas salvadoras (sales de rehidratacin oral) importadas de Estados Unidos de Norteamrica; en la investigacin se descubri que haban sido fabricadas en un estacionamiento sin ninguna exigencia sanitaria. Otro ejemplo es la adquisicin de sulfato de bario argentino de calidad industrial (no medicinal) para radiodiagnstico por un hospital de la Seguridad Social (10). MATERIALES Y MTODOS
aos 2002 -2006.
Criterios de Seleccin
Criterios de Inclusin: Pesquisas de los productos farmacuticos y afines durante los aos 2002 -2006. Criterios de Exclusin: Productos que presentaban datos incompletos o cuyos resultados no se han remitido, por lo cual no estn inscritos en el libro de pesquisas.
Procedimiento
Se solicitaron las pesquisas realizadas por la DIGEMID entre 2002 a 2006. La toma de muestra se efectu por duplicado, una se quedaba sellada por los inspectores en la empresa como contramuestra y la otra era remitida a DIGEMID. Luego se llenaba el Acta de Pesquisa de Productos Farmacuticos y Afines en el libro de pesquisas del ao correspondiente. El producto pesquisado es remitido al rea de Envo de Muestra, la cual se comunica con el laboratorio o droguera titular del Registro Sanitario. Los estudios de los anlisis fisicoqumicos y microbiolgicos fueron realizados en el Instituto Nacional de Salud y los resultados evaluados por el rea de Evaluacin de Productos Farmacuticos de la DIGEMID. El tiempo del anlisis es segn el tipo de producto a analizar; as, si son estriles 25 das y no estriles 15 das. Se analizaron 2843 productos farmacuticos y afines, registrndose en la Ficha de Recoleccin de Datos diseada, la siguiente informacin: Nombre del producto, pas, titular del registro sanitario, resultados y las columnas con los cdigos respectivos. RESULTADOS
Tabla 1. Cantidad de Productos Pesquisados por ao. Productos Pesquisados Nmero de productos 474 529 485 2843 568 787 2002 2003 2004 2005 Total 2006 Ao Porcentaje (%) 16,67 18,61 17,06 100,00 19,98 27,68
Materiales
Libros de pesquisas de los productos farmacuticos y afines de los aos 2002 al 2006, de la Direccin General de Medicamentos Insumos y Drogas (DIGEMID). Base de datos Perudis de la DIGEMID. Listado de Establecimientos Farmacuticos contenida en la base de datos SISFAR de la DIGEMID. Ficha de Recoleccin de Datos.
Mtodo
El presente es un estudio retrospectivo, transversal y descriptivo, cuyo objetivo fue determinar las principales observaciones a la calidad que presentan los productos farmacuticos (medicamentos de marca, genricos, y productos de origen biolgico) y afines (productos dietticos y edulcorantes, reactivos de diagnstico, productos galnicos, productos naturales, cosmticos, productos sanitarios e instrumental y equipo de uso mdico quirrgico u odontolgico), entre los meses de Octubre a Diciembre del 2007 en la Direccin de Control y Vigilancia Sanitaria (rea de Evaluacin de Productos Farmacuticos) de la DIGEMID.
Muestra
Se seleccionaron 2843 productos de los libros de pesquisas de productos farmacuticos y afines de los
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Calidad de productos farmacuticos y afines pesquisados por DIGEMID
Tabla 2. Resultados de la conformidad de los productos pesquisados por ao. Resultado No conforme Total Conforme Aos 269 216 485 2002 127 474 347 2003 233 529 296 2004 2005 184 568 384 2006 228 787 559 Total 1855 2843 988
35% 988 65% 1855
Tabla 3. Nmero de muestras pesquisadas segn tipo de producto. Medicamentos de Marca Medicamento Genrico Producto Natural Material mdico Cosmtico Galnico Diettico Rubro 2002 153 44 51 9 6 0 6 0 2 203 2003 169 16 63 70 10 529 2 1 0 3 195
Ao 197 172 56 29 10 7 6 2 1 5 280 139 19 60 39 13 568 17 17 11 21 75 9 1 5 5 7
Figura 1. Resultados de las Pesquisas

CONFORME NO CONFORME
2004
2005
2006 214 20 66 67 16 787 Otros 1 2 0 0 4 1 10 1 1 6
386
Total 1261 847 289 256 35 52 10 24 7 62
Porcentaje (%) 45 30 10 9 1 2 0 1 0 2
Producto Biolgico Producto Sanitario Total Ao
Reactivo de Diagnstico
Tabla 4. Nmero de productos evaluados por tipo de establecimiento. 2002 2003 2004 2005 2006 Total Laboratorio 217 205 1112 235 277 178 Droguera 294 267 1652 324 489 278
474
485
2843 Total 529 485 2843 568 787 474
100
Importadora
DISCUSIN
En el Per contamos con tres documentos importantes: La Ley General de Salud N 26842, publicada el 20 de julio de 1997; el Reglamento para el Registro, Control y Vigilancia Sanitaria de Productos Farmacuticos y Afines del 24 de diciembre de 1997 y la Directiva de Pesquisas de Productos Farmacuticos y Afines del 11 de noviembre de 1998 (8,11,12). Los artculos N 50 y 92 de la Ley General de
Salud, Captulo III: De los productos farmacuticos y galnicos, y de los recursos teraputicos naturales y Captulo V: De los alimentos, bebidas, productos cosmticos y similares, insumos, instrumental y equipo de uso mdico-quirrgico u odontolgico, productos sanitarios y productos de higiene personal y domstica, antes de la modificatoria de 2009, sealaba los requisitos para la obtencin del Registro Sanitario. Esto ha sido tomado para la elaboracin de los reglamentos antes citados, donde se estableca que en base a una
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simple documentacin y en tan slo siete das Especificaciose puede inscribir o reinscribir un producto Sin Registro nes cambiadas Sanitario 14% farmacutico o afn y, es ms, si pasan los siete 1% Forma de presentaObservaciones das y no hay respuesta, esto se toma como un cin no autorizada crticas 1% silencio administrativo positivo. 17% En la DIGEMID, los Registros Sanitarios de Productos Farmacuticos otorgados del 2002 a 2006 disponen de una base de datos digital (Perudis), mientras que los afines se registraron manualmente del 2002 al 2004; segn estos el total de productos farmacuticos y afines registrados el 2006 es de 8112, tanto registros nuevos como reinscripciones. Este alto nmeProducto Rotulado no deficiente autorizado ro de Registros Sanitarios al ao contribuye al 27% 27% uso irracional de los medicamentos, sumado a la escasa presencia del Qumico Farmacutico Figura 2. Resultados No Conformes (2002-2006) en boticas y farmacias, quien es la persona ms adecuada en la orientacin del uso. Sobre Productos Pesquisados, es evidente el incre- a 3,43 % el 2006. Los tipos de productos con mayores obmento en el nmero de pesquisas realizadas en el 2002 (474 servaciones en la calidad, son los medicamentos de marca, pesquisas) respecto al 2006 (787 pesquisas) (Tabla 1), consi- genricos y equipo e instrumental de uso mdico quirrgiderando que la Ley General de Salud establece que el por- co y odontolgico entre los aos 2003 a 2005, los cosmticentaje de pesquisas debe ser el 10% del total de productos cos en 2003 y los productos naturales en 2006 (Tabla 3). farmacuticos y afines registrados por ao. Las pesquisas Los resultados por observaciones en el rotulado nos que se realizan estn en relacin con la Poltica General de muestran que ha habido un ligero descenso desde el 2003, Medicamentos establecida a nivel del Ministerio de Salud. con 17,2%, al 2006 con 13,72%; porque se han realizado camRespecto a la evaluacin efectuada a los pro- bios oportunos, comunicndolos a la DIGEMID (Tabla 5). ductos pesquisados, se observa un incremento en los La disgregacin de los resultados no conformes resultados conformes a travs de los aos; lo cual se entre 2002 a 2006, muestra en primer lugar un 40% en explica debido al control realizado mediante las ins- Rotulado no autorizado; adems, es preocupante que pecciones y auditorias de certificacin, verificando el las Observaciones crticas presenten un 17% y Por decumplimiento de las Buenas Prcticas de Manufactura ficiencia un 27%. Esto podra traer problemas de salud (BPM) en las empresas manufacureras nacionales, pblica por tratarse de observaciones graves que afecas como el cumplimiento de las Buenas Prcticas de tan la seguridad y eficacia del producto (Tabla 5). Almacenamiento (BPA) para el resto de las empresas En relacin a la clase de productos que fueron pesqui(Tabla 2). En relacin a los productos con resultados sados del 2002 a 2006, corresponde a: medicamentos de no conformes, el mayor nmero de problemas son por marca 45%, medicamentos genricos 30%, material mRotulado, mientras por el contrario, la Forma de pre- dico quirrgico u odontolgico 10% y cosmtico 9%, y las sentacin no autorizada ha disminuido a tres desde el observaciones a la calidad corresponden a: medicamentos 2002 y cero en 2006. Los resultados de las pesquizas y de marca 31%, medicamentos genricos 36%, material mde No conformes se muestran en las figuras 1 y 2. dico u odontolgico 40% y cosmticos 32% (Tabla 3). En cuanto a los Productos crticos, se observa una Por el tipo de establecimiento farmacutico donfluctuacin de los resultados del 2002 al 2006; encon- de se pesquis, se encontr: drogueras 58%, laboratrndose observaciones en ensayos microbiolgicos, torios 39% e importadoras 3%; de stos, el porcentaje en la identificacin, disolucin y concentracin del con observaciones al tipo de calidad: crticas, deficienprincipio activo. La mayora de estos productos corres- te, cambio de especificacin y por rotulado, corresponponden a medicamentos de marca y genricos (AINES, den a drogueras 38%, laboratorios 31% e importadoras antibiticos penicilnicos y cefalospornicos). 33%. Para el caso de los laboratorios, hubo un aumento En relacin a los Resultados deficientes, se observa del nmero de conformes en relacin a los no conforque ha habido una disminucin desde 15,88 % en el 2003 mes; estos ltimos han disminuido con respecto a los
12
Tabla 5. Consolidado de los resultados finales de las pesquisas a los productos farmacuticos y afines. Aos 2005 Subtotal 384 13,73 3,17 0,18 100 0,7 0 5,46 108 35 27 9,15 55 6,99 3,43 0 31 67,61 559 71,03 Porcentaje (%) Subtotal Porcentaje (%) 2006 Porcentaje (%) 55,46 52 78 18 4 8,45 2002 Subtotal 347 6,30 84 17,2 22 0,21 100 568 1 2 4,54 0,41 0,38 7,56 0,19 100 485 1 86 17,73 91 40 2 15,88 64 13,2 8,20 7,20 0,60 4,40 0,00 100 529 1 15 2,84 41 30 73,20 296 55,95 269 Porcentaje (%) Subtotal Porcentaje (%) Subtotal 2003 2004
Resultado de evaluacin
Conforme 39 34 21 3
Conforme
No conforme
Crtico
Deficiente
Rotulado
F.P.N.A.*
Cambio de especificacin 0
** Sin registro sanitario
13,72 4,45 3 787
Total
Sin R.S. ** 474
0,38 100
* Forma de presentacin no autorizada
13
Ao 2002 Conforme 137 S 85 1 8 9 6 147 147 137 No S No S 193 16 41 140 77 125 No 130 5 80 Conforme Conforme
Tabla 6. Relacin de resultados de la evaluacin segn el tipo de establecimiento farmacutico (EE. FF.)
EE. FF.
2003
2004
2005 Conforme 167 S 211 6 No 113 3 68
2006 Conforme 203 S 342 14 No 147 7 74
Total 1112 1652 75
Importadora
Laboratorio
Droguera
Tabla 7. Procedencia de los productos farmacuticos y afines con mayores observaciones a la calidad. Aos 2002 Conforme Si 68 106 No 59 Si 190 107 No 126 Conforme 2003 Si 2004 Conforme 184 85 104 No 112 Si 2005 Conforme 249 135 No 90 94 Si 2006 Conforme 310 249 No 129 99 1576 Totales Total de productos 1267 No conformes cant. 525 463 29 % 41
Calidad de productos farmacuticos y afines pesquisados por DIGEMID
Procedencia de los productos evaluados
Extranjero
Nacional
180
167
aos anteriores debido al mayor control que se realiza mediante las inspecciones de seguimiento; caso contrario ocurre con las importadoras y drogueras donde no se exige la presencia permanente del Qumico Farmacutico, quien debe verificar las condiciones de almacenamiento de los productos a fin de asegurar la calidad de los mismos (Tabla 6). Segn la procedencia, el 55% de los productos son de origen nacional y 45% son extranjeros. En relacin a los primeros, del 2002 al 2006 ha habido un incremento de los resultados conformes; los resultados de no conformes se han mantenido constantes del 2003 al 2006. Para los de origen extranjero, en los resultados conformes se observa un descenso entre los aos 2003 y 2004; incrementndose del 2005 al 2006. El porcentaje de los no conformes, del 2002 al 2006, para los de origen nacional fue de 29% y de 41% para los extranjeros (Tabla 7). En el Per, hasta la realizacin del presente estudio, la Ley General N 26842, artculo 50 y 92, estableca que La inscripcin en el Registro Sanitario de productos farmacuticos y afines es automtica, con la sola presentacin de los documentos establecidos en dicho dispositivo, teniendo la autoridad de salud un plazo mximo de 7 das tiles para expedir el documento que acredite el nmero de registro; situacin que ha sido modificada evitando que nuestro pas sea observado al tener la legislacin ms permisiva del mundo, con un proceso de registro poco confiable.
CONCLUSIONES
En la evaluacin de la calidad de los productos farmacuticos y afines pesquisados se encontr: Rotulado no autorizado 40%, Producto deficiente 27%, Crtico 17%, Cambio de especificacin 14%, Sin Registro Sanitario 1% y Forma de presentacin no autorizada 1%. De estos, 31% son medicamento de marca, 36% son genricos, 40% material mdico; mientras que el 32% de los cosmticos presentan resultados de no conformidad. Los productos con observaciones a la calidad, por tipo de establecimiento farmacutico fueron: laboratorios 31%, drogueras 38% e importadoras 33%. De otro lado, de los productos farmacuticos y afines pesquisados no conformes, 29% son de procedencia nacional y 41% extranjera; siendo la India el pas con ms observaciones.
1999 septiembre; 6 (3): 20-22. 2. Barros J. Las polticas farmacuticas. Ediciones UNESCO, Ciudad de Mxico 2002 marzo; 4 (1): 5-7. 3. Agencia Europea de Medicamentos. Grupo de trabajo sobre control e inspeccin de los medicamentos de la Comisin Europea, Gua comunitaria de normas de correcta fabricacin de la EMEA; 2001. Serie de Gua: 180. 4. Organizacin Mundial de la Salud. La OMS intensifica su lucha contra los medicamentos falsificados. 2003 Noviembre. Disponible en: http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2003/pr85/es/index (Fecha de acceso 23 de junio de 2007). 5. Ministerio de Salud. Medicamentos y calidad. 2004. Disponible en: http://www.msal.gov.ar/htm/site/Genericos/ site2/calidad.asp (Fecha de acceso 23 de junio de 2007). 6. Organizacin Mundial de la Salud. Seguridad de los Medicamentos. 2005. Disponible en: http://www.who. int/mediacentre/factsheets/fs293/es/index.htm (Fecha de acceso 23 de junio de 2007). 7. Decreto Supremo N 023-2005-SA del 29 de diciembre: Reglamento de Organizacin y Funciones del Ministerio de Salud (Normatividad Institucional de la DIGEMID, nmero 33 del 01 de enero de 2003). 8. Resolucin Ministerial N 437-98-SA/DM del 06 de noviembre: Directiva de Pesquisas de Productos Farmacuticos y Afines (Normatividad Institucional de la DIGEMID, nmero 92 del 11 de noviembre de 1998) 9. Carvajal J, Flores I. Ensayos de calidad sobre medicamentos existentes en el mercado nacional: Muestreo en el primer trimestre 1992. Tesis para optar al Titulo Profesional de Qumico Farmacutico. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad nacional Mayor de San Marcos. Lima, 1992. 10. Orihuela C. Calidad de los Medicamentos. Foro Salud 2002. disponible en: http://wari.rcp.net.pe/FRE/forosalud/FINAL/pdfs/Rel_Med.pdf (Fecha de acceso 23 de junio de 2007). 11. Ley N 26842-02 del 27 de enero: Ley General de Salud 12. Decreto Supremo N 010-97-SA y Modificatoria DS N 004-00-AS, 006-01-AS y 005-04-SA: Reglamento para el Registro, Control y Vigilancia Sanitaria de Productos Farmacuticos y Afines.
Manuscrito recibido el: 13/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 07/01/2010
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Grupo de Trabajo de la Revista Panamericana de Salud Pblica. Programa de deteccin de fallas de calidad en los medicamentos comercializados. OPS (Washington)
Correspondencia:
Dr. Jos Jurez Eyzaguirre Jr. Los Tulipanes 343 Lima 12 E-mail: jjuareze@unmsm.edu.pe
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ISSN 1561-0861
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE E INMUNOLGICA DE FLAVONOIDES AISLADOS DE HOJAS DE Smallanthus sonchifolius (YACN)

Antioxidant activity and immunological of flavonoids isolated from leaves of Smallanthus sonchifolius (yacon)
1
Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga. Ayacucho-Per. 2Instituto de Investigacin en Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios Guevara, Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima-Per.
Enrique Aguilar F.1, Pablo Bonilla R.2
RESUMEN
El presente trabajo de investigacin se desarroll con el objetivo de aislar y elucidar la estructura qumica de los flavonoides de las hojas de Smallanthus sonchifolius y determinar su actividad antioxidante e inmunolgica en ratones albinos Balb/C. Las hojas fueron colectadas en el departamento de Ayacucho y sometidas a un proceso de extraccin hidroalcohlica, desengrasado con ter de petrleo y extraccin de los flavonoides con acetato de etilo. Los flavonoides fueron aislados por cromatografa en capa fina y sus estructuras elucidadas por espectrofotometra ultravioleta, utilizando las tablas de Mabry y col. Se determin su bioactividad a la Artemia salina y la toxicidad aguda mediante la prueba de dosis lmite. La actividad antioxidante fue evaluada utilizando la actividad secuestradora del DPPH, actividad inhibidora de la formacin del radical hidroxilo y lipoperoxidacin en microsomas hepticos; y la actividad inmunolgica se evalu en ratones inmunosuprimidos experimentalmente con ciclofosfamida. Se obtuvo un rendimiento de fraccin flavnica de 1% y los flavonoides aislados fueron: 5,7-dihidroxi-4-metoxiflavonol, 5,7,3-trihidroxi-4-metoxiflavonol, 5-hidroxi- 4-metoxi-7-O-glicosilflavona y 7,4-dihidroxi-3,5-dimetoxiflavona, los que demostraron tener actividad antioxidante semejante a la rutina, quercetina y vitamina C, dependiente de la concentracin (p<0.05); y la actividad inmunolgica al estimular el aumento del nmero de los glbulos blancos y rojos en animales inmunosuprimidos y sin evidencia de toxicidad significativa. Se concluye que, los flavonoides presentes en las hojas de Smallanthus sonchifolius tienen actividad antioxidante, inmunolgica y no muestran toxicidad a las dosis ensayadas. Palabras clave: Smallanthus sonchifolius, flavonoides, antioxidante, actividad inmunolgica.
ABSTRACT
This work was carried out with the purpose to isolate and structural chemistry elucidate the flavonoids of the leaf from the Smallanthus sonchifolius and to determine his antioxidant and immunological activity in mice Balb/C. The samples were collected in the department of Ayacucho and were extracted with ethanol 80%, while that fats, waxes, and chlorophyll removed with petroleum ether, the aqueous layer was extracted with ethyl acetate. The flavonoids were isolated from the ethyl acetate extract for thin layer chromatography preparative, using the solvents system BAW (4:1:5) and visualized with ultraviolet light at 366 nm. The flavonoids structure was elucidated by ultraviolet spectroscopic, using the Mabry et al tables. It was determined the bioassays utilizing brine shrimp (Artemia salina) and the acute oral toxicity for the doses limit test in mice. The antioxidant activity was evaluated for DPPH scavenger, inhibition the liberation de hydroxyl radical and lipid peroxidation in hepatic microsomal. The immunological activity was evaluated experimentaly in inmmunosupressed mice with cyclophosphamide. It was obtained 1% yielding of flavonic fraction. The flavonoids isolated were: 5, 7-dihydroxy-4methoxyflavonol, 5, 7, 3-trihydroxy-4-methoxyflavonol, 5-hydroxy-4-methoxy-7-O-glycosilflavone and 7,4-dihydroxy-3,5dimethoxyflavone, that to demonstrate have antioxidant activity similarly to rutin, quercetin and vitamin C, concentration dependent (p<0.05) and the immunological activity, stimulating the increase the number of the both white blood and red blood cells in inmunosupressed mice and without evidence significant toxicity. It was conclude that the flavonoids in leaf of Smallanthus sonchifolius have antioxidant and immunological activity and any evidence of toxicity at. Key words: Smallanthus sonchifolius, flavonoids, antioxidant, immunological activity.
INTRODUCCIN a especie originaria de los Andes sudamericanos Smallanthus sonchifolius yacn (Fam. Asteraceae) (1), ha despertado renovado inters por su contenido de compuestos fenlicos en
las hojas y races reservantes (2-4); las hojas han demostrado tener actividad hipoglicemiante (5), antioxidante (6) , sobre el metabolismo heptico (7). Los flavonoides han demostrado tener una gran actividad biolgica, principalmente como antioxidantes (8-11). Se pretende
15
Aguilar E., Bonilla M
aislar y elucidar los flavonoides de las hojas y demostrar su actividad antioxidante e inmunolgica.
MATERIALES Y MTODOS Material biolgico

Se utilizaron 24 ratones albinos Balb/C, adquiridos en el Instituto Nacional de Salud, Chorrillos Lima, de 15-24 gramos, 12 de cada sexo para ver toxicidad y, para el estudio inmunolgico 40 ratones machos de 15-24 gramos. Todos en buen estado de salud, acondicionados en jaulas del Bioterio de los Laboratorios de Farmacia de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga mantenidos con alimento balanceado (ratonina) y agua ad limitum, por una semana antes de los ensayos. Las hojas de Smallanthus sonchifolius yacn fueron colectadas del Campo Experimental del Instituto de Investigacin y Experimentacin Agraria de Ayacucho (INIEA), a 2700 m.s.n.m., desecadas a temperatura ambiente y pulverizadas utilizando un molino de cuchillas, obtenindose un polvo seco de color verde oscuro, almacenndose en frascos mbar. Se realiz una extraccin con etanol al 80% por un proceso de doble extraccin, evaporacin a sequedad del extracto, desengrasado con ter de petrleo (con la finalidad de eliminar grasas, ceras, pigmentos y otros metabolitos que puedan interferir con la extraccin de flavonoides), seguido de ensayo de solubilidad. Luego se hizo una extraccin lquido-lquido con acetato de etilo utilizando un embudo de separacin, para recuperar finalmente la fraccin de acetato de etilo y evaporarla a sequedad.
desapareado y es de color azul-violeta, se basa en la desaparicin de dicho color hacia el amarillo plido por la reaccin de la sustancia antioxidante, pudiendo cuantificarse la reaccin espectrofotomtricamente a 515 m por diferencia de absorbancias, con lo que se determina el porcentaje de inhibicin del radical DPPH. Clculos:
% Actividad = antioxidante 1 - (A2 - A3) A3 x 100
Dnde: A1: Absorbancia del patrn de referencia A2: Absorbancia de la muestra A3: Absorbancia del blanco de la muestra
Actividad secuestradora del radical hidroxilo (16). La tcnica para generar los radicales hidrxilo se basa en la reaccin del hierro con el perxido de hidrgeno, llamada Reaccin de Fenton: Fe+2-EDTA+H2O2 g Fe+3-EDTA+OH+OH La lectura espectrofotomtrica se realiza a 412 m. Para la estimacin de la actividad captadora de radical hidroxilo de la sustancia problema, los resultados se expresan como porcentaje de inhibicin de la produccin de formaldehdo respecto de la reaccin control (ausencia del producto a ensayar).
% Inhibicin = C-P C x 100
Ensayos biolgicos Bioactividad sobre la Artemia salina L.

Se utiliz la metodologa descrita por Cceres, y Meyer et al (12,13).
Siendo: C = Reaccin control P = Reaccin con el compuesto problema
Toxicidad aguda
Se utiliz el Mtodo de Dosis Lmite en ratones Balb/c de ambos sexos, segn Betancourt, 2004 (14).
Actividad Antioxidante
Actividad secuestradora del radical 1,1-difenil-2picrilhidrazilo (15). La tcnica empleando el radical DPPH (1,1-difenil-2-picril hidrazilo hidratado), que tiene un electrn
Actividad inhibidora de la lipoperoxidacin lpidica microsomal (15). Se emplea el modelo de la inhibicin de la peroxidacin producida por un prooxidante como el perxido de hidrgeno. La inhibicin se evidencia por una disminucin en la produccin de malondialdehdo, producto de la peroxidacin lpidica. Se utiliz la fraccin de acetato de etilo del extracto alcohlico de las hojas de Smallanthus sonchifolius a las concentraciones de 30, 150 y 300 g, y como estndares los flavonoides rutina y quercetina, y la vitamina C, a las mismas concentraciones.
16
Actividad antioxidante e inmunologica de flavonoides de S. sonchifolius Tabla 1. Actividad inhibidora de la lipoperoxidacin lpidica microsomal. Reactivo Tubo Blanco Control 1.5 1.4 0.1 0.5 0.5 0.5 1.3 0.1 0.1
Actividad inmunolgica
Efecto de la fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius sobre la inmunosupresin inducida por la ciclofosfamida (18). El mtodo usado fue descrito por Ziauddin et al. Se utilizaron ratones albinos machos, de 18 a 25 g de peso, divididos en 5 grupos, cada uno con 8 ratones. El Grupo I, utilizado como control, recibi el vehculo carboximetilcelulosa (CMC) al 0,1% y el Grupo II de la ciclofosfamida tambin recibi CMC 0,1%, durante 15 das respectivamente. Los grupos III, IV y V recibieron la fraccin de acetato de etilo a las dosis de 100, 200 y 400 mg/kg por va oral, disuelto en CMC 0,1%, respectivamente, durante 15 das previo a la administracin de ciclofosfamida. Los grupos II al V recibieron ciclofosfamida a la dosis de 30 mg/kg, va oral, en los siguientes tres das. En el da 19, se extrajo la sangre, por puncin cardiaca, de cada uno de los animales; esta se recibi en viales estriles con anticoagulante heparina para realizar el recuento de glbulos blancos y rojos.
Microsomas hepticos (2mg/mL) Buffer fosfato 100 mM pH 7.4 H2O2
Muestra
Leer en espectrofotmetro a 535 nm, a esta longitud se mide el complejo Malondialdehdo cido tiobarbitrico.
Extracto o Estndar (flavonoides: rutina y querecetina y vitamina C)
Tabla 2. Extracto etanlico al 80% de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), marcha de solubilidad. Muestra problema (mg de extracto) 5 5 5 5 5 5
(+++) Soluble,
ter de petrleo Acetato de etilo n-butanol Metanol Agua Etanol Cloroformo n-hexano
Solvente 1 mL
Resultados + +
Anlisis de datos
Los resultados se expresan en forma de medias y su desviacin estndar. La CL50 y la DL50 se determinaron utilizando el paquete estadstico Probits. Para la significancia estadstica se utiliz el Anlisis de Varianza y la Prueba de Tukey al 95% de confianza. RESULTADOS
+++ +++
(+) Poco soluble
++ ++ ++
(++) Medianamente soluble,
+++
Tabla 3. Extracto etanlico al 80% de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), marcha fitoqumica. Ninhidrina Reactivo Gelatina Mayer Hager Baljet FeCl3 Resultado ++ ++ ++ ----++
Shinoda (Mg0+ HCl) Dragendrff Liebermann Kedde Wagner
Compuestos fenlicos Flavonoides Alcaloides Alcaloides Alcaloides Alcaloides Lactonas
Aminocidos libres Metabolito Taninos
NaOH + 2,4-dinitrofenilhidrazina
a-naftol + H2SO4
++ ++ ++ ++
(++) bastante;
Triterpenoides y esteroides Lactonas y cumarinas Grupo carbonilo Glucsidos
(+++) Abundante;
++
(+) poco;
(--)nada
17
Tabla 4. Extracto etanlico al 80% de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), fraccionamiento. Fraccin Acuosa Etrea Acetato de Etilo Verde Negruzco Amarillo Rojizo Amarillo Color 42.30 g 10.80 g 56.00 g Peso 38.77 51.33 9.9 % Color Rojo Intenso Negativo Shinoda
Tabla 5. Fraccin en acetato de etilo del extracto etanlico al 80% de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), cromatograma en capa fina. Comp. N 1 2 3 4 5 6 7 0.875 0.8 0.7 0.5 Rf Marrn Marrn Visible
(fluorescencia)
Ligera coloracin roja
Ligera coloracin azul
Azul Negruzco
Negativo
FeCl3
Luz Uv 366 Celeste Roja
0.725 0.625 0.425
Marrn oscuro Marrn oscuro Marrn Marrn Marrn
Prpura intenso Prpura intenso Prpura Prpura Prpura
Marrn Azulado Azul Intenso Azul Intenso Azul Intenso Azul Azul Azul
FeCl3
l UV ---
Metabolito Flavonol Flavonol Flavonol Flavona Flavona Clorofila
258, 269, 346 258, 269, 346 258, 282, 340 258 258, 322
258, 316
Actividad Antioxidante
90
Fenilpropanoide
% Actividad Antioxidante
80 70 60 50 40 30 20 10 0 Vitamina C Rutina Tratamiento Quercetina Fraccin Flavnica
DISCUSIN
Figura 1. Fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), actividad secuestradora del radical DPPH.
De la maceracin hidroalcohlica de un kg de hojas secas, se obtuvo un rendimiento de extracto de 109,10 g, que representa un 10%. El extracto etanlico de las hojas de Smallanthus sonchifolius yacn mostr tener una buena solubilidad en solventes polares como el etanol o metanol, mediana solubilidad en solventes como cloroformo y acetato de etilo; baja solubilidad en solventes poco polares como ter de petrleo y n-hexano, y en sol-
ventes altamente polares como el agua; esto indica presencia de sustancias de mediana y alta polaridad (Tabla 2). La marcha fitoqumica del extracto etanlico reporta presencia de aminocidos libres, taninos, compuestos fenlicos, flavonoides, terpenoides, azcares, lactosas, cumarinas, y compuestos con grupo carbonilo (Tabla 3). Mediante ensayos cromatogrficos se confirm la presencia de compuestos fenlicos, flavonoides, terpenos y lactonas, utilizando como adsorbente silicagel 60-G y como
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Actividad antioxidante e inmunologica de flavonoides de S. sonchifolius
100 90
% Actividad Antioxidante
80 70 60 50 40 30 20 10 0 Rutina Quercetina Tratamiento Fraccin Flavnica
Figura 2. Fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), actividad inhibidora de la formacin del radical hidroxilo.
18.00 16.00 Malondialdhedo moles x cm x 10-8 14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 Vitamina C Rutina Tratamiento Quercetina Fraccin Flavnica
fase mvil, CHCl3:MeOH (12:1); observados los cromatogramas a la lmpara de luz UV 366 m se detect presencia de flavonoides, se revel con FeCl3 al 5% que detect compuestos fenlicos, con el reactivo de Lieberman dio terpenos y con el de Kedde lactonas sesquiterpnicas. Para aislar los flavonoides se procedi a realizar una extraccin lquido-lquido en el extracto etanlico, primero con ter de petrleo para eliminar las grasas, despus con acetato de etilo para extraer los flavonoides, quedando como residuo la fase acuosa. Se verific la presencia de flavonoides con la reaccin de Shinoda y compuestos fenlicos con FeCl3 5%, resultando positivo para la fraccin de acetato de etilo, y ligeramente
Figura 3. Fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), actividad inhibidora de la formacin del Malondialdehido.
en la fraccin acuosa, con un rendimiento de 9,9% en la fraccin de acetato de etilo, que representa un 1% de contenido flavnico (Tabla 4). Al respecto, Valentov et al. refieren un proceso de extraccin utilizando Soxhlet y metanol como solvente. En dicho procedimiento, despus de eliminar el metanol, el extracto fu resuspendido en agua y desengrasado con ter de petrleo; para luego ser extrado con acetato de etilo obteniendo un rendimiento de 0,26 g, que representa el 1,3% del total, valor ligeramente superior al nuestro. Posiblemente el mayor rendimiento se deba a que despus del proceso de desengrasado, la fase acuosa fue acidificada con H3PO4 0,01 mol/L,
19
Actividad Inmunolgica
20 12 000 18 10 000
Globulos Blancos x 1000
8 000
Globulos Rojos (x 10+6)

Blanco Cliclo 100 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg
16
14
6 000
12
4 000
10
8 2 000
extrayendo compuestos como el cido clorognico, cido cafeico y cidos dicafeilqunicos. Los flavonoides fueron aislados y purificados mediante cromatografa en capa fina a escala preparativa, utilizndose como adsorbente silicagel 60-G, como sistema de solventes butanol:cido actico:agua (BAW) (4:1:5), y observados a la lmpara de luz UV 366 m. Fueron recuperados del silicagel con metanol, logrndose aislar 7 fracciones, de las cuales 6 correspondan a compuestos fenlicos con probable estructura flavnica y la otra a la clorofila, por la fluorescencia roja caracterstica. El uso del sistema BAW (4:1:5), est reportado por Lock de Ugaz 10. Las estructuras qumicas de las seis fracciones aisladas fueron elucidadas mediante correlaciones qumicas con los datos obtenidos por espectroscopa UV-Visible en metanol y por comparacin con espectros dados en la literatura por Mabry et al. 17 sugirindose la estructura de 4 flavonoides y un fenilpropanoide (Tabla 5).
Figura 4. Fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), actividad inmunolgica segn el nmero de glbulos blancos.
Tratamiento
Blanco
Cliclo
100 mg/kg
200 mg/kg
400 mg/kg
m = fluorescencia prpura intensa, comparando con las tablas de Mabry et al. (17) se propone la siguiente estructura: 5,7,3-trihidroxi-4-metoxiflavonol.
Figura 5. Fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn), actividad inmunolgica expresada segn el nmero de glbulos rojos producidos.
Tratamiento
MeOH Fraccin N 5. lmax = 258 322 m. UV 366 m = fluorescencia prpura, correlacionando los datos espectroscpicos con las tablas de Mabry et al. (17) se propone la estructura: 5-hidroxi-4-metoxi-7-O-glicosilflavona. MeOH Fraccin N 6. lmax = 258 282 340 m. UV 366 m = fluorescencia prpura, interpolando los datos con las tablas de Mabry et al. (17) se sugiere la estructura: 7,4dihidroxi-3,5-dimetoxiflavona.
Elucidacin de estructuras
Fraccin N 2. lMeOH = 258 316 m. UV 366 m = fluomax rescencia celeste intensa, comparando con las tablas de Mabry et al. (17) se propone la siguiente estructura: 5,7-dihidroxi-4-metoxiflavonol. Fraccin N 3 y 4.
lMeOH = 258 269 346 m. UV 366 max
MeOH Fraccin N 7. lmax = 258 m. UV 366 m = Fluorescencia prpura, comparando con las tablas de Mabry et al. (17) se propone la estructura de un fenilpropanoide. Simonovska et al. (2) despus de hidrolizar una fraccin de acetato de etilo, de los extractos metanlicos de la raz tuberosa y hojas, detectaron la presencia de quercetina en una cromatografa en capa fina, siendo revelado con el reactivo ster difenilborico del cido 2-aminoetilo al 1% en metanol (NST) lo que produjo una fluorescencia de color amarillo a la luz UV de 366 m y otros dos flavonoides desconocidos; resultados que son muy cercanos al nuestro, porque el flavonoide de la fraccin N 3, que se encuentra en mayor cantidad por las manchas muy intensas del cromato-
20
grama, muestra ser un derivado de la quercetina. Los otros flavonoides, que los mismos autores los reportan como desconocidos, en este trabajo se les asigna la estructura correspondiente a un flavonol y una flavona. En una especie relacionada, el Smallanthus fruticosus, se ha determinado la presencia de una flavona, la centaureidina(6).
Actividad antioxidante
La actividad antioxidante se determin mediante la captacin del 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH), midiendo la actividad inhibidora de la formacin de radicales libres y la produccin de malondialdehdo como indicador de lipoperoxidacin (Figuras 1- 3). En todos los casos, la fraccin flavnica mostr actividad antioxidante dependiente de la concentracin, a mayor concentracin mayor actividad antioxidante; pero no mostraron diferencias cuando se compara con la vitamina C, los flavonoides estndar quercetina y rutina, tal como se muestra en sus respectivas pruebas estadsticas, donde existe significancia en las concentraciones ensayadas, pero no con las sustancias de comparacin; es decir, tiene una actividad antioxidante comparativamente similar a la vitamina C, quercetina y rutina. Respecto a la actividad antioxidante de los flavonoides se sabe que las flavonas y sobre todo los flavonoles se muestran como los ms activos contra los radicales libres(9). El 5,7-dihidroxi-4-metoxiflavonol y el 5,7,3-trihidroxi-4-metoxiflavonol que se encuentran en mayor cantidad son flavonoles, mientras que los otros flavonoides son derivados de flavonas; esto explica la actividad antioxidante de la fraccin flavnica del extracto alcohlico, comparado a la rutina y quercetina que son flavonoles(6). Utilizando la fraccin de acetato de etilo, de un extracto metanlico, determinaron que el IC50 (g/mL) necesario para neutralizar al DPPH es 24.32.7 g/mL, mientras que en el presente trabajo con la fraccin flavnica sin hidrolizar, el IC50 fue 24,7 g/mL. Los mismos autores en su prueba de inhibicin de la lipoperoxidacin reportan un IC50 de 32.82.3 g/mL, en nuestro caso fue de 14,10 g/mL, que significa que se logr una mejor proteccin contra el dao sobre los lpidos del microsoma heptico. Cuando los flavonoides tienen orto sustituciones en el anillo A o B, son estructuras que tienen una buena accin inhibidora de la formacin del radical hidroxilo. En nuestro caso, los flavonoides aislados de las fracciones 2 y 3, tienen hidroxilos en posicin orto en el anillo A, lo que explicara su accin sobre dicho radical. Hirano et al. (19) evaluaron la actividad de 10
flavonoides sobre el DPPH, demostrando que esta actividad dependa de la naturaleza qumica. La quercetina mostr una mayor actividad secuestradora que la luteolina. En la Figura 3 se muestra la actividad antioxidante como inhibicin de la produccin de malondialdehdo por lipoperoxidacin de las membranas, no encontrando diferencias estadsticamente significativas entre la vitamina C, rutina, quercetina y la fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius. Posiblemente estas sustancias tienen la capacidad de actuar protegiendo las membranas de los microsomas hepticos, penetrando los espacios acuosos y lipdicos de dichas membranas, neutralizando el radical perxido producido por el H2O2. Nakagawa et al. (20) estudiaron el efecto sobre la lipoperoxidacin lipdica de la quercetina y de la rutina sobre fracciones de lisosomas hepticos, atacados por generadores de radicales libres hidroflicos y lipoflicos. Hallaron que la quercetina tena un mejor efecto protector sobre las membranas biolgicas que la rutina, su correspondiente glicsido, concluyendo que la quercetina tena una gran actividad antioxidante, debido a su habilidad para penetrar las membranas de los lisosomas hepticos.
Actividad inmunolgica
El sistema inmune es altamente complejo, intrnsecamente regulado por un grupo de clulas cuya funcin integrada es esencial para la salud. La respuesta inmune podra producirse por interacciones entre las clulas que la conforman o mediante respuestas de los mensajeros intracelulares que incluyen a las hormonas, citoquinas y autacoides elaboradas por varias clulas. Los autacoides usualmente incluyen histamina, kininas, leucotrienos, prostaglandinas y serotonina. El sistema inmune puede ser modificado por la dieta, agentes farmacolgicos, contaminantes ambientales, y sustancias qumicas naturales como las vitaminas y los flavonoides. Los flavonoides pueden tener efectos sobre las funciones de las clulas T, clulas B, macrfagos, clulas NK, basfilos, clulas del mastocito, neutrfilos, eosinfilos y plaquetas. La actividad inmunolgica de la fraccin flavnica de las hojas de Smallanthus sonchifolius se determin evaluando la respuesta inmune frente a la inmunosupresin producida por ciclofosfamida a la dosis de 30 mg/kg, despus de la administracin por 15 das de los extractos a las dosis de 100, 200 y 400 mg/kg de peso, respectivamente. La administracin previa de los extractos es con la finalidad de estimular el sistema inmunolgico
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y preparar al organismo para hacer frente a la ciclofosfamida, un agente inmunosupresor que produce una disminucin del nmero de glbulos blancos y glbulos rojos, elementos celulares comprometidos con la respuesta inmune; asimismo, tambin produce una disminucin de la hemoglobina como parte del dao a los eritrocitos y por ende una menor oxigenacin de las clulas. Los glbulos blancos son fuertemente afectados por la ciclofosfamida como se observ en el grupo tratado con dicho agente inmunosupresor, mientras que las dosis ensayadas permiten una recuperacin del nmero de leucocitos, pero no al nivel del grupo control. La prueba estadstica indica una alta significancia (p<0.05), demostrando el efecto de la dosis de la fraccin flavnica para atenuar el dao producido por la ciclofosfamida, estando la dosis de 400 mg/kg ms cercana al grupo control que no recibi el agente inmunosupresor (Figura 4). Los glbulos rojos tambin son afectados por la ciclofosfamida, tal como se muestra en el grupo tratado con el agente inmunosupresor, pero a diferencia de los glbulos blancos, con las dosis ensayadas se logra una mejor recuperacin en su nmero, inclusive ligeramente superior al grupo control. El anlisis estadstico nos muestra una alta significancia (p<0.05), indicando tambin el efecto de la dosis de la fraccin flavnica, para neutralizar el efecto inmunosupresor de la ciclofosfamida, alcanzndose con la dosis de 200 mg/kg un nmero de eritrocitos semejante al grupo control y con la dosis de 400 mg/kg un nmero ligeramente superior al grupo no tratado. La actividad protectora sobre los glbulos rojos se puede explicar por la capacidad de inhibir la lipoperoxidacin de sus membranas por los flavonoides, (Figura 5) (21). Estos resultados sugieren que, la fraccin flavnica del extracto hidroalcohlico de las hojas de Smallanthus sonchifolius yacn contienen flavonoides que atenan el efecto inmunosupresor de la ciclofosfamida y estimulan la recuperacin del mismo. Hoy se conoce que existe relacin entre la actividad antiinflamatoria de los flavonoides y su actividad sobre el sistema inmune. Varios flavonoides especficamente afectan la funcin de sistemas enzimticos crticamente comprometidos en la generacin de los procesos inflamatorios especialmente la tirosina y la kinasa de la protena serina-treonina. Recientemente, ha llegado a ser evidente que esas enzimas estn ntimamente involucradas en la traduccin de las seales del sistema inmune, as como de otras clulas activadas por hormonas, autacoides, neurotransmisores, y factores del crecimiento. Middleton et al. (22) en una revisin amplia sobre los efectos de los flavonoides
en las clulas, sealan que estos actan modulando la respuesta de linfocitos T, linfocitos B, macrfagos y monocitos, mastocitos, basfilos, neutrofilos, eosinofilos y plaquetas. El aspecto estructural tambin es importante en la respuesta inmunolgica. Por ejemplo, para inhibir la liberacin de histamina, un mediador implicado en procesos alrgicos, los requerimientos estructurales son semejantes a los descritos para la actividad antioxidante anteriormente mencionados. Los flavonoles quercetina, kamferol y la miricetina son reportados como potentes inhibidores de la liberacin de histamina en los mastocitos de peritoneo de ratas. Se concluye que, los flavonoides presentes en las hojas de Smallanthus sonchifolius tienen actividad antioxidante, inmunolgica y no muestran toxicidad a las dosis ensayadas.
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Correspondencia:
Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera Direccin: Jr. Jos Mara Plaza N 274, Lima 11 - Per. E-mail: pbonillar@unmsm.edu.pe
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ISSN 1561-0861
COMPOSICIN QUMICA DEL ACEITE ESENCIAL DE Erythroxylum coca Lam var. coca (COCA) Y EVALUACIN DE SU ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Chemical composition of essential oil Erythroxylum coca Lam var. coca (Coca) and evaluation of its antibacterial activity
1
Instituto de Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios Guevara - Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. 2Instituto de Qumica Biolgica, Microbiologa y Biotecnologa Marco Antonio Garrido Malo - Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Ventura G.1, Castro A.1, Roque M.2, Ruiz J.2
RESUMEN
El estudio consisti en evaluar el aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca (Coca) proveniente de la provincia de Quillabamba, regin Cusco y determinar su actividad antibacteriana; as mismo, elucidar su composicin qumica por Cromatografa de Gases / Espectrometra de Masa (CG/EM). La parte usada de la planta fueron las hojas secas proporcionadas por la Empresa Nacional de la Coca ENACO S.A., las que se trataron con un sistema de destilacin por arrastre con vapor de agua. El rendimiento del aceite esencial fue de 0,08% v/p y en ste se practicaron los ensayos fisicoqumicos: miscibilidad, densidad e ndice de refraccin. En la composicin qumica se encontraron los siguientes componentes: Guaia1(5),(11)diene, tcadinene, (2E,7R,11R)-3,7,11,15-tetrametil-2-hexadecen-1-ol, eudesm-4(14)-en-11-ol, hexahydrofarnesil cetona, cido hexadecanoico, fitol, cido cis-9-octadecenoico y cido octadecanoico. El estudio de la actividad antibacteriana in vitro, utilizando el mtodo de excavacin placa cultivo a concentraciones de 10 y 50% del aceite, mostr mayor actividad a Staphylococcus aureus cepa ATCC 25923, que frente a las cepas de Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis, y Pseudomonas aeruginosa cepa ATCC 27853. Se determin que los componentes qumicos del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. Var coca (Coca) poseen actividad antibacteriana contra Staphylococcus aureus. Palabras clave: Erythroxylum coca, actividad antibacteriana, Staphylococcus aureus.
SUMMARY
The study was to evaluate the essential oil of Erythroxylum coca Lam. var. coca (Coca) - from Quillabamba province, Cusco region and determine its antibacterial activity, and elucidate the same chemical composition by Gas Chromatography / Mass Spectrometry (GC / MS). The plant part used the dried leaves were provided by the National Coca Company ENACO SA, which dealt with a system by steam distillation of water. The essential oil yield was 0.08% v/p and on that physicochemical tests were performed: Miscibility, density and refractive index. In the chemical composition found the following components: Guai-1(5),(11)-diene, t-cadinene, (2E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecan-1 -ol, eudesm-4(14)-en-11-ol, hexahydrofarnesil ketone, hexadecanoic acid, phytol, cis-9-octadecenoic and octadecanoic acid. The study of antibacterial activity in vitro, using the method of excavation culture plate at concentrations of 10 and 50% of the oil showed greater activity to Staphylococcus aureus strain ATCC 25923, than against strains of Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 strain. It was determined that the chemical components of essential oil of Erythroxylum coca Lam. Var coca (Coca) have antibacterial activity against Staphylococcus aureus. Keywords: Erythroxylum coca, antibacterial activity, Staphylococcus aureus.
INTRODUCCIN l Per posee una flora autctona cuyas especies han llegado a trascender a nivel mundial desde un punto de vista social, econmico, cientfico y cultural; una de stas es la planta Erythroxylum coca Lam var. coca, de la familia Erythroxylaceae. Es una especie cultivada y conocida por el contenido de su principal metabolito secundario, el alcaloide cocana.
Es una planta de hoja perenne, originaria de Amrica del Sur, sobre todo de Per, Bolivia, Brasil y Colombia. El gnero Erythroxylum est formado por unas 250 especies que proliferan en la zona tropical del continente americano. Especies de ste gnero fueron introducidas en la isla de Java, las Indias Occidentales, India y Australia. Es un arbusto muy ramificado que mide hasta 3 metros de altura. Su corteza rugosa es de color pardo rojizo. Sus hojas son simples alternas con peciolo corto de borde entero y de forma elptica u
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Composicin del aceite escencial de E. coca y actividad antibacteriana
oblongo elptica, pice agudo, base aguda, de 2-7 cm de largo por 1-4cm de ancho, de color verde lustroso en la parte superior, ms claras o amarillentas en la inferior, provistas de dos lneas longitudinales conniventes en ambas extremidades, las cuales le dan una caracterstica original y el modo de identificarlas. Las flores son pequeas, amarillentas o blanco marfil, pedunculadas, perfumadas, solitarias, en cimas o fascculos axilares. El fruto es una drupa oblonga de color rojo de 6-8mm de largo y 3-5mm de dimetro. Las condiciones idneas para sta planta son los valles calientes de la vertiente oriental de la Cordillera de los Andes, entre 600 y 2000 metros de altitud con una temperatura media de 20 C con humedad de 90 por ciento y suelos arcillosos ricos en nitrgeno(1, 2). Los aceites esenciales generalmente son fluidos, ms livianos que el agua, de olor fuerte y penetrante que recuerdan a la planta de origen, incoloros o amarillentos, translcidos, miscibles en solventes orgnicos e inmiscibles en agua (3,4). Slo dos especies son cultivadas en el Per: Erythroxylum coca Lam var. coca, en el Sur y Centro del Per, principalmente en la regin de Hunuco y Cusco, y Erythroxylum novogranatense (Morris) coca en el Norte del pas, sobre todo en la regin La Libertad (5, 6). La actividad antibacteriana que presentan los aceites esenciales, frente a agentes patgenos, se debe a su composicin qumica en sustancias terpnicas, sesquiterpnicas y aromticas(7, 8). El objetivo de la investigacin fue determinar la composicin qumica del aceite esencial de la especie Erythroxylum coca Lam var. coca y su actividad antibacteriana. MATERIALES Y MTODOS El estudio es de tipo analtico, experimental, prospectivo y longitudinal, habindose realizado en los laboratorios del Instituto de Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios Guevara y en el Instituto de Microbiologa y Parasitologa Simn Prez Alva de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Clase Orden Familia Gnero Especie Nombre vulgar
: Dicotiledneas : Rutales : Erythrolylaceae : Erythroxylum : Erythroxylum coca Lam. var. coca : Coca
Las cepas utilizadas para el anlisis microbiolgico fueron:
Gram Positivo Bacillus subtilis Staphylococus aureus Staphylococus epidermidis Gram Negativo Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa
: Cepa clnica : ATCC 27853 : Cepa clnica : ATCC 25923 : Cepa clnica
Extraccin del aceite esencial

Para la obtencin del aceite esencial se trabaj con 10 kg de hojas secas de Erythroxylum coca Lam. var. coca, utilizando un sistema de hidrodestilacin por arrastre con vapor de agua. El aceite esencial se conserv en un frasco de color ambar y en refrigeracin, para su posterior anlisis organolptico y propiedades fsicas y qumicas.
Determinacin de los componentes qumicos del aceite esencial por Cromatografa de Gases/Espectrometra de Masas (CG/EM) (9)
Se realiz en un Cromatgrafo de Gases acoplado a un Espectrmetro de Masas (CG/EM) Perkin Elmer, modelo GC: Autosystem. TemXL, MS: Turbo Mass en las siguientes condiciones: Columna capilar de silicagel fundida 30 m de largo, dimetro 0,25 , temperatura inicial 10oC/min, temperatura final 110oC (1 min), inyeccin: 240oC, volumen de inyeccin: 5 L. La deteccin y elucidacin de los componentes qumicos fue por comparacin con los estndares de espectros de masas de las respectivas bibliotecas.
Material biolgico
Las hojas secas, fueron proporcionadas por la Empresa Nacional de la Coca (ENACO), presentando la siguiente taxonoma segn el Sistema Cronquist (1967). Reino Divisin : Plantae : Magnoliophyta
Determinacin de la actividad antibacteriana

Cepa de estudio Los medios de cultivo empleados para identificar
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Ventura G., Castro A., Roque M., Ruiz J.
las caractersticas morfolgicas de crecimiento de las cepas fueron: Agar Mac Conkey, Agar manitol salado, Agar Meller Hinton y Agar sangre. Preparacin de la suspensin de los microorganismos (Inculos) Para la preparacin del inculo de prueba se tom una asada de cada uno de los cultivos y se suspendi en 5 mL de solucin salina fisiolgica hasta alcanzar la turbidez de 0,5 de la escala de Mc Farland equivalente a 1 2 x 10(6) UFC/mL. Mtodo de excavacin en placa agar El mtodo se fundamenta en la difusin del aceite esencial en medio slido en zonas alrededor de la excavacin a una extensin tal que permita inhibir el crecimiento de los organismos sensibles. El efecto antimicrobiano est dado por el dimetro de la zona de inhibicin. La dilucin del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca fue preparado a concentraciones de 10 y 50%. Los resultados se interpretaron por la observacin y medicin de los dimetros presentes en los halos de inhibicion de crecimiento. RESULTADOS
Espectrometra de Masas (CG/EM) logrndose caracterizar los componentes qumicos que se presentan en la Tabla 1 y Figura 1.
Tabla 1. Composicin qumica del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca realizado por Cromatografa de Gases / Espectrometra de Masas (CG/EM). Guaia-1(5),(11)diene tCadinene Componentes Tiempo de retencin (Tr) 3,82 4,64 5,62 10,70 11,20 11,35 6,34 7,96 9,71
(2E,7R,11R)-3,7,11,15-tetrametil-2hexadecen-1-ol Eudesm-4(14)-en-11-ol cido hexadecanoico Fitol cido octadecanoico Hexahidrofarnesil cetona
cido cis-9-octadecenoico
Determinacin de la actividad antibacteriana in vitro de Erythroxylum coca Lam. var. coca

2-6. Los resultados se presentan en la Tabla 2 y Figuras
Extraccin del aceite esencial

Se hizo mediante el sistema de destilacin por arrastre con vapor de agua, logrndose obtener un rendimiento de 0,08% v/p. Caractersticas organolpticas - Aspecto: Oleoso y mvil - Color: mbar - Olor: Sui generis - Sabor: astringente
Tabla 2. Actividad antimicrobiana mediante el mtodo excavacin placa-cultivo. Microorganismo Concentracin 21 mm 10% 14 mm 15 mm ----25 mm 50% 18 mm 19 mm -----
S. aureus E. coli
Ensayos fsicos
Determinacin de densidad Se determin mediante el mtodo del picnmetro expresando un valor de 0.007. Determinacin del ndice de refraccin: Se midi con el Refractmetro ABBE a 20oC, obtenindose un resultado de 1,49. Miscibilidad El aceite esencial mostr ser miscible en alcohol absoluto, en n-hexano, ter etlico, cloroformo y no miscible en agua.
B. subtilis
S. epidermidis P. aeruginosa
DISCUSIN
Determinacin de la composicin qumica del aceite esencial de Erythoxylum coca Lam. var. coca.
Se realiz por Cromatografa de Gases /
El estudio preliminar de Erythroxylum coca Lam. var. coca report, con la aplicacin del mtodo de destilacin por arrastre con vapor de agua, un rendimiento de 0,08% v/p de aciete esencial al que se le determinaron algunas constantes fsicas y qumicas: miscibilidad, densidad e ndice de refraccin y que responden a las propiedades indicadas para los aceites esenciales(3). La determinacin de la composicin qumica, realizada por Cromatografa de Gases/Espectrometra de Masas (CG/EM), permiti identificar componen-
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Composicin del aceite escencial de E. coca y actividad antibacteriana
100 95 90 85 80 75 70 65
0.73
5.62
Relative Abundance
60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 2.61 2.39 3.73 4.84 3.82 5.03 6.83 7.96 9.49 6.48 9.71 10.70 10.99 11.20 11.35 11.57 14.40 15.56 17.02 18.39 6.34
Time (min)
Figura 1. Cromatograma de Gas del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca
Figura 2. Actividad antibacteriana: Aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca - Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Figura 3. Actividad antibacteriana: Aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca - Staphylococcus epidermidis cepa clnica.
Figura 4. Actividad antibacteriana: Aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca - Bacillus subtilis cepa clnica.
Figura 5. Actividad antibacteriana: Aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca - Pseudomona aeruginosa ATTC 27853.
Figura 6. Actividad antibacteriana: Aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca - Escherichia coli cepa clnica.
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Ventura G., Castro A., Roque M., Ruiz J.
tes qumicos hidrocarbonados, oxigenados y cidos orgnicos, destacndose entre ellos a las siguientes sustancias: Guaia-1(5),(11)diene, tcadinene, (2E,7R,11R)-3,7,11,15-tetrametil-2-hexadecen-1-ol, eudesm-4(14)-en-11-ol, hexahydrofarnesil cetona, cido hexadecanoico, fitol, cido cis-9-octadecenoico y cido octadecanoico. Los resultados obtenidos en el anlisis microbiolgico del aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca, demuestran la presencia de mayor actividad antibacteriana frente a bacterias Gram positivas Bacillus subtilis cepa clnica, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis cepa clnica; con mayor actividad contra Staphylococcus aureus ATCC 25923 y menor frente a bacterias a Gram negativas: (Escherichia coli cepa clnica y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853). En un estudio realizado con el extracto de Erythroxylum coca Lam. var. coca se evidenci su propiedad inhibitoria de crecimiento in vitro frente a Enterobacterias, Cocos y Bacillus(10). As mismo, en otro estudio realizado con el extracto acuoso de Erythroxylum novogranatense (Morris), se observ efecto inhibitorio frente a bacterias y hongos(11), siendo de similar resultado con el nuestro. En el aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca, se identificaron los siguientes componentes qumicos: Guaia-1(5), (11)diene, tcadinene, guaiol, eudesm-4(14)-en-11-ol, hexahydrofarnesil cetona, cido hexadecanoico, (2E, 7R, 11R)-3,7,11,15- tetrametil2-hexadecen-1-ol, cido cis-9-octadecenoico y cido octadecanoico. Se determin que el aceite esencial de Erythroxylum coca Lam. var. coca, evidencia actividad antibacteriana a los microorganismos Gram positivo: Bacillus subtilis cepa clnica, Staphylococcus epidermidis cepa clnica y Staphylococcus aureus ATTC 25923, destacndose sobre este ltimo una mayor actividad antibacteriana. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el:08/01/2010
Correspondencia:
Q.F. Geraldine Ventura Yahuana Mz. E Lote 5 Urb. Ro Santa, Lima 39 - Per E-mail: geraldinevy@hotmail.com
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ISSN 1561-0861
ACTIVIDAD CICATRIzANTE DE UNA POMADA CON ACEITE ESENCIAL DE Schinus molle L. MOLLE EN GANADO VACUNO CON HERIDAS INFECTADAS Y EN RATONES
Healing activity of ointment the essential oil of the Schinus molle L. molle in front to the wounds infected in the cattle and in mice
1
Instituto de Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios Guevara Facultad de Farmacia y Bioqumica. UNMSM. 2 Laboratorio de Farmacologa. Facultad de Medicina. UNMSM.
Alba Gonzalez Alex1, Bonilla Rivera Pablo1, Arroyo Acevedo Jorge2
RESUMEN
En la presente investigacin se evalu la actividad cicatrizante del aceite esencial de Schinus molle L. mollea diferentes concentraciones, en comparacin con un producto comercial. Se encontr que el aceite esencial del Schinus molle L. molle, constitudo principalmente por monoterpenos y sesquiterpenos, en pomada y teniendo como base vaselina slida. Los resultados mostraron que el producto posee propiedades cicatrizantes frente a heridas infectadas en ganado vacuno las que sanaban de manera apropiada; as mismo, los experimentos llevados a cabo en ratones de cepa Balb C 53, corroboraron la experiencia mencionada, siendo la concentracin al 2% la que present mayor poder cicatrizante frente a la pododermatitis y mastitis subclnicas. Palabras clave: Schinus molle L, aceite esencial, pomada, cicatrizante, pododermatitis, mastitis.
SUMMARY
In the present investigation was evaluated the healing effect of the essential oil of Schinus molle L. molle to different concentrations, in comparison with a commercial product. The one was determined that the essential oil of the Schinus molle L. molle, mostly have monoterpenoids and sesquiterpenoids in ointment having as base solid petroleum jelly. The results mostrated what the product also has healing properties front to the wounds infected in the cattle, in which they healed of appropriate way; the carried out experiments in mice cepa Balb C 53, corroborated the mentioned experience, being the concentration to 2% that presented/displayed greater to be able healing front to the pododermatitis and reported subclinical mastitis. Key words: Schinus molle L, essential oil, oint ment, healing, pododermatitis, mastitis.
INTRODUCCIN l Schinus molle L. molle es una especie vegetal muy difundida en el Per, siendo su desarrollo ptimo en los climas de los valles interandinos. Especie perteneciente a la familia Anacardiaceae. El uso popular medicinal ubica a las hojas del molle desde un repelente de mosquitos hasta un analgsico en dolores reumticos. Se postul que, el aceite esencial presente en las hojas del molle pudiera tener efectos benficos en la cicatrizacin de las heridas en el ganado vacuno, cuyos resultados experimentales se verificaran mediante pruebas preclnicas en ratones albinos. El objetivo fue evaluar la actividad cicatrizante del aceite esencial de Schinus molle L. molle a diferentes concentraciones, en comparacin con un producto comercial frente a heridas infectadas en ganado vacuno.
GENERALIDADES Caractersticas morfolgicas. Es un rbol que crece espontneamente en muchos lugares de Amrica y en el Per. La talla y grosor de este rbol vara, es de poca copiosidad, sus ramas son numerosas y quebradas, relativamente delgadas. La corteza es agrietada, hojas imparimpinadas, alternas, angostas de bordes dentados; cortamente pecioladas, coriceas aovadas, oblongas con nervadura principal muy marcada, prominente en ambas caras. Frescas tienen un color verde claro, sabor amargo y picante. Presenta panculas de pequeas flores verdosas, actinomorfas, pentmeras de carpelos libres o concreciones siempre unilobuladas. Los frutos son pequeas drupas de tamao menor al de una arveja, de color rojizo, olor aromtico y sabor dulce, razn por la cual se usa en la elaboracin de la chicha de molle. Las semillas que forman el fruto son pequeas, de superficie arrugada y aspecto caracterstico (1-3).
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Alva A., Bonilla P., Arroyo J.
Distribucin geogrfica. El Schinus molle L. es propio de las regiones clidas y secas de Sudamrica. Vive en las laderas occidentales de la regin interandina, vertientes occidentales de los andes peruanos, en la costa y en los valles. Su lmite superior se encuentra en el centro y sur del Per, alrededor de 3500 msnm (1-3). Usos del molle. En la literatura se registran las propiedades curativas que se le asignan a las distintas partes de la planta. Hojas: Antirreumtico, cicatrizante, en la limpieza de los dientes, digestivo. Fruto: Antirreumtico, en la retencin urinaria, emenagogo, expectorante, antiparasitario. Corteza y resina: Antirreumtico, cicatrizante, en dientes careados. Otros usos: En tincin (hojas), frutos en bebidas fermentadas, como saborizante, la corteza como aromatizador. El cocimiento de hojas de molle aplicadas en baos locales desinflama la pierna de los hidrpicos y gotosos. Las hojas mojadas curan las heridas, los hombres que trabajan en las minas repelen los mosquitos colocndose una corona de hojas de molle en la cabeza (1-3). Los aceites esenciales. Son obtenidos del material fresco que los contienen, utilizando principalmente destilacin por arrastre de vapor de agua. Obtenido el aceite esencial, ste es secado con sulfato de sodio anhidro. Son lquidos voltiles a temperatura ambiente, lo que los diferencia de los aceites fijos; densidad inferior a la del agua, ndice de refraccin elevado y la mayora desvan la luz polarizada. Son lipoflicos y miscibles en los disolventes orgnicos habituales. Son los constituyentes odorferos o esencias de una planta. La palabra esencial fue derivada del latn quinta essentia, que significaba el quinto elemento asignado a estos aceites, ya que la tierra, el fuego, el viento y el agua fueron considerados los cuatro primeros elementos. Los aceites esenciales son compuestos muy heterogneos, constituidos por monoterpenos, sesquiterpenos, cidos orgnicos, lactonas, anhdridos, teres, fenoles y compuestos aromticos (4-7). Metabolitos secundarios presentes en Schinus molle l. molle. El estudio fitoqumico de Schinus molle L. molle indica que contiene taninos, alcaloides, flavonoides, saponinas esteroidales, esteroles, terpenos y aceite esencial. El aceite esencial presente en las hojas contiene cido behenico, bergamota, bicyclogermacreno, borneno, cadineno, cadinol, calacoreno, calamenediol, calamaneno, canfeno, carvacrol, cido glico, butirato de geraniol, limoneno, mirceno, cido linoleico, cido palmtico, entre otros (4-7). Propiedades farmacolgicas de los aceites esenciales. Poder antisptico, propiedades antiespasmdicas y sedantes, estimulan la secrecin gstrica por lo que
son digestivos y estomquicos(4); estimulacin uterina, antiinflamatorio en casos de cervicitis y vaginitis. El aceite esencial de Schinus molle L. no presenta toxicidad en animales ni en los seres humanos(3,8). Segn investigacin realizada por Guba R, en 2008, los aceites esenciales no demostraron ser txicocarcingenos en los animales de experimentacin utilizados (8). Actividad antibacteriana in vitro del aceite esencial de Schinus molle L. Estudios reportados concluyeron que, el aceite esencial de Schinus molle L. muestra actividad antibacteriana contra cepas Gram (+), como Staphylococcus aureus, y contra Gram (-) tales como: Escherichia coli, Enterobacter, Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae y Proteus vulgaris. Asimismo, Pauli A.(9) evalu las propiedades antimicrobianas de los aceites esenciales, llegando a la conclusin que stos tienen accin inhibitoria frente a bacterias, hongos y levaduras.
Anatoma animal.
Piel. El grosor de la piel del vacuno es mayor que el de cualquier otro animal domstico; en general tiene de 3 a 4 mm, pero en la base de la cola y en el corvejn tiene cerca de 5 mm y, en la papada 6 y 7 mm. Pezuas. Cuatro en cada miembro, cubren los extremos de los dedos. Ubre. Las mamas son llamadas popularmente ubre y en general son cuatro. Son glndulas cutneas modificadas, que estn asociadas funcionalmente con los rganos genitales, de forma que pueden ser consideradas como accesorias de ellos. Cada glndula tiene la forma de un cono corto, aplanado, comprimido transversalmente y tiene una superficie media plana. Las glndulas mamarias estn formadas por la masa glandular o cuerpo de la glndula y la papila o tetina. La base est relacionada con la pared abdominal, a las que se une por medio de un tejido areolar, que contiene un plexo venoso, los ndulos linfticos mamarios y una cantidad variable de grasa. El vrtice est constituido por la tetina, que tambin est aplanada transversalmente y cuya longitud vara de 2,5 a 5 cm. Entre la base de las tetinas se encuentra el surco nter-mamario. Sobre el vrtice de cada una de las tetinas, normalmente existen dos pequeos orificios situados juntos, stos son las aberturas de los conductos lactferos (10). Heridas en el ganado vacuno. La reparacin de los tejidos comprende dos procesos distintos: (1) La regeneracin o sustitucin de las clulas lesionadas por otras de la misma clase, a veces sin que queden huellas residuales de la lesin anterior, y (2) La sustitucin por tejido conjuntivo llamado fibroplasia o fibrosis, que
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Actividad cicatrizante de aceite escencial de S. Molle en vacunos y ratones
deja una cicatriz permanente. En la mayora de los casos, estos dos procesos contribuyen a la reparacin (9, 10).
con arreglo de diodo HEWLETT PACKARD. MTODOS
Infecciones tisulares comunes causadas por heridas infectadas en ganado vacuno.
Coleccin de la muestra vegetal

Se colectaron 20 Kg de hojas de Schinus molle L. en el departamento de Ayacucho, a 3000 msnm.
Pododermatitis infecciosa. Es una enfermedad del ganado vacuno caracterizada por inflamacin de los tejidos sensibles de las pezuas y produce cojera intensa. Esta enfermedad es atribuida a la bacteria Fusobacterium necrophorum. Se reporta la sinergia de este germen con Dichelobacter nodosus y B. melaninogenicus. La enfermedad ocurre durante todas las estaciones, pero es ms frecuente en poca lluviosa; sin embargo, se sabe que ha ocurrido durante el tiempo seco, cuando el suelo esta firme y el ganado tiene acceso a hoyos de agua estancada. Probablemente el suelo duro y seco predispone al tejido interdigital y a los talones a sufrir contusiones. Una vez que ocurre una lesin cutnea los organismos presentes en aguas estancadas infectan fcilmente la herida (11,13). Mastitis. En la vaca lechera, la mastitis puede definirse como inflamacin de la glndula mamaria casi siempre causada por infeccin por patgenos bacterianos o micticos. Los organismos contaminantes incluyen a Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus y Mycoplasma sp. Los factores que predisponen a la infeccin dentro de la glndula son: poca higiene durante el ordeo, mquinas de ordeo defectuosas, manejo errneo del ordeo, lesiones en las tetillas, lceras en las tetillas y poblaciones de patgenos en el medio ambiente (12). MATERIALES Y EQUIPOS
Procedimiento de obtencin del aceite esencial

El aceite esencial de Schinus molle L. fue obtenido en el Laboratorio de Docencia, Investigacin y Produccin de Farmacia y Bioqumica, de la Universidad San Cristbal de Huamanga - Ayacucho, por el mtodo de arrastre de vapor. Las pruebas de autenticidad se realizaron en el Centro de Desarrollo, Anlisis y Control de Calidad de Medicamentos y Fitomedicamentos (EFPFYB) Taller de Mecnica HOLGER K. HANSEN (FIQ), en la Universidad de Huamanga.
Ensayo de miscibilidad del aceite esencial

Se evalu cualitativamente la miscibilidad del aceite esencial en solventes de polaridad creciente (Tabla 1).
Mtodos fsico-qumicos y ensayos organolpticos

ndice de refraccin: Real Farmacopea Espaola, 2da. Edicin. Pag. 23. Densidad: Real Farmacopea Espaola, 2da. Edicin. Pag. 23. Espectro UV: CEDACMEF 006 A006 - 2006.
Elaboracin de pomada
Se derritieron 100 g de vaselina slida por vez, aadiendo directamente al medio el aceite esencial correspondiente a las distintas concentraciones motivo de experimento (1,75%, 2% y 3,75%), siguiendo parmetros de elaboracin (14).
Material biolgico
Ratones albinos consanguneos, Cepa Balb C 53 procedentes del Instituto Nacional de Salud de ambos sexos, de un mes de edad, de 20 a 25 g de peso corporal promedio. Ganado vacuno.
Procedimiento en pododermatitis
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Material farmacolgico
Medicamento tpico o producto comercial (pomada con actividad cicatrizante).
Material bsico de vidrio Equipos

Destilador por arrastre de vapor. Espectrmetro UV/Visible
Estandarizacin del mtodo
Se identifica a los animales que presentan signos de pododermatitis. Tener el equipo limpio y desinfectado. Conducir al animal hasta el sitio de sujecin. Sujetar al animal y usar la jaula de recorte de pezua. Limpiar la base del casco con el cuchillo de limpieza y agua limpia, hasta descubrir la herida a tratar. Aplicar la pomada en el rea afectada (15). Se utilizaron dos vacas lecheras, con caracterstica
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de edades y razas semejantes, a las que se les hizo un corte a nivel de la panza de dos centmetros de longitud, para favorecer la contaminacin de la herida por agentes microbianos (durante el reposo), siendo esto corroborado por el mdico veterinario encargado. Una vez que la infeccin fue certificada se procedi a untar pomada de molle a la concentracin de 3,5% sobre las heridas, cada ocho horas por espacio de siete das, al cabo de los cuales se evalu la cicatrizacin de las mismas.
Prueba de la actividad cicatrizante de la pomada de molle

Las concentraciones utilizadas en la pomada fueron de 3,5%, 2% y 1,75%, dispuestas de la siguiente manera: Cinco vacas tratadas con pomada al 3,5% de aceite esencial de molle. Cinco vacas tratadas con pomada al 2% de aceite esencial de molle. Tres vacas tratadas con pomada al 1,75% de aceite esencial de molle. Tres vacas como grupo control. Tres vacas como grupo que recibi el producto comercial. RESULTADOS
Actividad cicatrizante de la pomada de molle sobre lesiones inducidas en ratones albinos Balb C 53. Se utilizaron 40 ratones albinos, distribuidos al azar en 5 grupos; a los que se depil el lomo con un depilatorio comercial, despus de un reposo de 24 horas, se realizaron dos incisiones sobre el lomo. Se aplic tpicamente dos veces al da por siete das: un grupo recibi slo la base de la pomada (vaselina 100%, constituyndose en el grupo control); tres grupos recibieron la pomada en tres niveles de concentracin (1,75; 2.0 y 3,75% respectivamente) y un grupo el producto comercial, siendo el grupo de referencia farmacolgico. Luego se les sacrific por dislocacin cervical y, en una lesin, se procedi a medir la fuerza o tensin en gramos que abriera la herida cicatrizada utilizando un dinammetro; la otra incisin fue retirada y conservada en formol al 10% para analisis histopatolgico (16). ANLISIS ESTADSTICO Los datos se expresan en valores medios error estndar, para establecer la diferencia significativa se utiliza una p<0,05 haciendo uso del anlisis de varianza y, para establecer si los diferentes tratamientos son significativos, se aplica el test de mltiples comparaciones. Se utiliza el programa estadstico SPSS versin 13.16.
Tabla 1. Ensayo de miscibilidad del aceite esencial de Schinus molle L. Aceite esencial Solvente ter de petrleo +++ n-hexano +++
Cloroformo
Tabla 2. Caractersticas fsico-qumicas y organolpticas del aceite esencial de Schinus molle L. Indice de refraccin Espectros UV Aspecto Sabor Color Olor Densidad 210 nm: 1,959; 225 nm: 1,838; 265 nm: 0,665 amargo viscoso mbar picante 0,8658 g/mL 1,4780
++++
Acetato de etilo
++++
Metanol
+++
Etanol
+++
Tabla 3. Prueba piloto de la actividad cicatrizante de la pomada del aceite esencial de Schinus molle L. al 3.75% en vacas con Pododermatitis. Pomada al 3,75% Vacas tratadas Blanco Vaca N 1 -------++++ Vaca N 2 ------+++
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Tabla 4. Prueba de la actividad cicatrizante de la pomada del aceite esencial de Schinus molle L. en ganado vacuno a diferentes concentraciones vs Producto comercial (Aftisanol)
Vacas tratadas N 147 N 121 N 89 CUTA N 124 N 187 N 115 N 207 N 190 N 47 N 89 N 47 N 187
Diagnstico clnico pododermatitis pododermatitis Mastitis con herida supurante externa Pododermatitis Herida en el lomo Herida superficial Pododermatitis Pododermatitis Mastitis con herida supurante externa Herida en el lomo Mastitis con herida supurante externa Herida en el lomo Herida superficial
Concentracin al 3,75 % ++++ ++++ ++++ ++ ++++ Concentracin al 2 % ++++ ++++ ++++ ++++ +++ Concentracin al 1,75% + ++ +++
Producto comercial ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
Tabla 5. Valores medios de la fuerza de tensin para abrir las lesiones en proceso de cicatrizacin del lomo de ratones. Vaselina 100% Pomada 2,0% Tratamiento Media (g) 10,25 6,00 7,50 4,13 2,88 Error estndar 0,23 0,59 0,38 0,46 0,35 Intervalo de Confianza 95% Superior 8,85 5,11 6,41 3,30 2,34 Inferior 11,65 6,89 8,59 4,95 3,41 2 8 5 5 3
Mnimo
Mximo 13 8 9 6 4
Aftisanol tintura Pomada 3,75% Pomada 1,75%
Tabla 6. Anlisis de varianza de los datos de la fuerza de tensin para abrir las lesiones en proceso de cicatrizacin del lomo de los ratones. Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 317,10 49,25 267,85 35,00 39,00 4,00 df Mean Square 1,41 66,96 47,59 F Significancia 0,000
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Tabla 7. Test post hoc de mltiples comparaciones de los datos de la fuerza de tensin para abrir las lesiones en proceso de cicatrizacin del lomo de ratones. Vaselina 100% (I) Tratamiento (J) Tratamiento Pomada 1.75% Pomada 2.0% Pomada 3.75% Vaselina 100% Pomada 2.0% Pomada 2.0% Vaselina 100% Vaselina 100% Vaselina 100% Pomada 2,0% Pomada 1.75% Pomada 3.75% Pomada 3.75% Pomada 1.75% Pomada 3.75% Pomada 1.75% Aftisanol tintura Aftisanol tintura Aftisanol tintura Aftisanol tintura Diferencias de medias -7,38 -3,13 -4,63 -1,25 7,38 4,25 2,75 -4,25 -1,50 -2,75 1,50 3,38 1,25 -6,13 -1,88 -3,38 1,88 4,63 6,13 3,13 Error estndar 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 0,59 Significancia 0,000 0,000 0,000 0,042 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,016 0,003 0,000 0,000 0,016 0,000 0,042 0,000 0,003 0,000 Intervalo de confianza 95% Inferior -4,33 -5,83 -2,45 6,17 3,05 1,55 -5,45 -2,70 -3,95 0,30 2,17 0,05 -7,33 -3,08 -4,58 0,67 3,42 4,92 1,92 -8,58 Superior -1,92 -3,42 -0,05 8,58 5,45 3,95 -3,05 -0,30 -1,55 2,70 4,58 2,45 -4,92 -0,67 -2,17 3,08 5,83 7,33 4,33 -6,17
Aftisanol tintura Pomada 1,75% Pomada 2,0% Pomada 3,75%
Se observa que existe diferencia significativa a una p<0,05 al comparar los diferentes tratamientos entre s.
DISCUSIN Investigaciones realizadas por Nagaraja TG et al. en 1998 en Actinomyces pyogenes determinaron inhibicin de crecimiento bacteriano con presencia de proteasas y neurominidasas en bacterias frente a aceites esenciales, siendo ambas bacterias Gram positivas (17) . El mecanismo de accin de la actividad del aceite esencial no ha sido dilucidado, pero si consideramos su valor antisptico podemos relacionarlos con los mecanismos de accin de los antispticos utilizados comnmente, stos mayormente favorecen la precipitacin de protenas en las bacterias, mientras que los antibiticos presentan desde inhibicin de la sntesis de la pared celular hasta errores de trascripcin de protenas, con la consiguiente lisis celular (18). En 1998, Carrasco E.(3) determin que el aceite esencial de Schinus molle L., obtenido del fruto, presentaba
actividad antimicrobiana contra cepas de Staphylococcus aureus entre otros y siendo este microorganismo un Gram positivo, a semejanza del Fusobacterium necrophorum causante de pododermatitis en el ganado vacuno; es que el aceite esencial de molle podra actuar inhibiendo la sntesis de su pared celular o favoreciendo la precipitacin de protenas. Al realizar una prueba piloto de la actividad cicatrizante de la pomada del aceite esencial de Schinus molle L. al 3,75% en vacas con Pododermatitis, se observ que favorece la cicatrizacin de las heridas infectadas (Tabla 3). Tambin se observ que las concentraciones de 3,75% y 2% favorecen una evolucin clnica (cicatrizacin) en mayor grado que la de 1,75% (Tabla 4). En las pruebas in vitro realizadas en el laboratorio de Farmacologa de la Facultad de Medicina de la UNMSM, con ratones albinos consaguneos, cepa Balb
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10,50 10,00 9,50 9,00 8,50 8,00
Promedio en gramos
7,50 7,00 6,50 6,00 5,50 5,00 4,50 4,00 3,50 3,00 2,50 Vaselina 100% Aftisanol tintura Crema 1.75% Crema 2.00% Crema 3.75%
Figura 1. Actividad cicatrizante expresado como fuerza de tensin para abrir lesiones en proceso de cicatrizacin en el lomo de ratones.
Tratamiento
Figura 2. Control de lesin sin tratamiento sobre el lomo del ratn de experimentacin.
Figura 3. Cicatrizado, presencia de grueso tejido sin llegar a ser normal. Lomo del ratn de experimentacin.
Figura 4. Cicatriz completa, con formacin de capa corneal, superficie del lomo del ratn de experimentacin.
Figura 5. Hay cicatrizacin, engrosamiento del epitelio por presencia de queratina superficial, sobre el lomo del ratn.
Figura 6. Existe cicatrizacin, paredes con los tejidos cicatrizales, zona ausente de folculo piloso en herida superficial en el lomo del ratn.
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C 53 procedentes del Instituto Nacional de Salud MINSA, se observaron los resultados de la actividad cicatrizante de la pomada del aceite esencial de Schinus molle L . (Figura 1), y en el estudio histopatolgico de los animales que recibieron tpicamente pomada al 2,0% se observaron paredes con tejidos en cicatrizacin, seguidas por los que usaron la crema en 3,75% y 1,75% (Figuras 2-6). Puede observarse, en la Tabla 5, que el error estndar presente en los grupos de experimentacin es muy cercano, siendo mayor el del producto de marca, y entre las concentraciones probadas, la de 2%. Cuando analizamos en funcin del coeficiente de variacin, los datos recogidos para la concentracin al 2% y la del producto comercial, observamos que los valores son prcticamente los mismos, por lo cual afirmamos que los grupos utilizados en esta prueba tuvieron igual variabilidad. C.V. 2% = 0,46/ 7,5 (100) = 6,0 C.V.AFTISANOL= 0,59/10,25 (100) = 5,7 En las Tablas 6 y 7, se observa que al aplicar los diferentes tratamientos existen diferencias significativas (p<0,05) al comparar los diferentes tratamientos. Control de lesin sin tratamiento: se aprecia continuidad y cicatrizacin incompleta, reaccin inflamatoria, fibroblastos abundantes sobre el lomo del ratn de experimentacin (Figura 4). Existe cicatrizacin, paredes con los tejidos en cicatrizacin, zona ausente de folculo piloso en herida superficial en el lomo del ratn (Figura 8). Es decir los cortes histolgicos confirman la ptima cicatrizacin en las heridas tratadas con la pomada a concentracin de 2% de aceite esencial de Schinus molle L. Se puede concluir que, la pomada a concentracin de 2% de aceite esencial de Schinus molle L. contribuye en la cicatrizacin de las heridas expuestas en el ganado vacuno y en ratones albinos Balb C 53, y que los valores medios de la fuerza de tensin a un intervalo de confianza al 95% denota que la pomada al 2% presenta una cicatrizacin con mayor resistencia a rotura frente a las concentraciones al 1,75% y 3,75%. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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Correspondencia:
Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera Direccin: Jr. Jos Mara Plaza N 274 Lima 11 - Per. E-mail: pbonillar@unmsm.edu.pe
2.
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ISSN 1561-0861
DETECCIN DE RESIDUOS DE AFLATOXINAS EN HGADO DE POLLO EN MERCADOS DE LIMA

Detection of aflatoxin residues in chicken liver in lima markets
1
D.A. Produccin Animal. Facultad de Medicina Veterinaria. UNMSM. 2 D.A. Farmacologa, Bromatologa y Nutricin. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UNMSM. 3 D.A. Salud Animal y Salud Pblica. Facultad de Medicina Veterinaria. UNMSM. 4 Bachiller Medicina Veterinaria. UNMSM.
Arbaiza F. Teresa1, Crdova R. Augusta2, Icochea D. Eliana3 , Cutti Hilda4
RESUMEN
Las aflatoxinas causan una variedad de alteraciones en las aves, influyendo en la patologa heptica (aflatoxicosis). Siendo el hgado el ms afectado, al ser expendidos en mercados de alimentos, ponen en riesgo la salud del consumidor por los probables residuos de aflatoxinas. El objetivo de este estudio fue detectar la presencia de aflatoxinas en hgado de pollos procedentes de los mercados de abastos de Lima. Se muestrearon 16 mercados de diferentes sectores socio econmicos de Lima. De cada mercado se subclasificaron hgados normales y aparentemente sospechosos. El anlisis de las 32 muestras se realiz en el Laboratorio de Bioqumica, Nutricin y Alimentacin Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM. Se emple para la deteccin de aflatoxinas el mtodo de ELISA, que cuenta con la aprobacin del Research Institute of AOAC, empleando el kit Veratox HS (alta sensibilidad 0, 1, 2, 4 y 8 ppb). Por ser los hgados muestras muy complejas, se utiliz para la extraccin columnas de inmunoafinidad Neo Column para aflatoxinas (04/08). El lmite de deteccin fue de 0,5 ppb. No se detect aflatoxinas en los hgados analizados. Se asume que el aspecto de los hgados subclasificados como sospechosos, podra tener origen en otros procesos metablicos y que la presencia de secuestrantes en los alimentos de pollos tiene buen rendimiento. Palabras clave: aflatoxinas, aflatoxicosis, hgado de pollo.
SUMMARY
Aflatoxins cause a variety of disorders in poultry, especially affecting the liver (aflatoxicosis). Contaminated livers may become a health risk to consumers when expended in food markets. The purpose of the present study was to detect the presence of aflatoxins in chicken livers in Lima food markets. Samples were collected in 16 markets located in various socioeconomic sectors of Lima. From every market livers were subclassified as normal and apparently suspicious. Analysis of 32 samples was conducted at the Laboratory of Biochemistry, Nutrition and Animal Feeding, Veterinary Medicine Faculty, San Marcos University. Aflatoxins were determined through the ELISA method approved by the AOAC Research Institute, using the Veratox HS (high sensitivity, 0, 1, 2, 4, and 8 ppb). Liver samples are quite complex so immunoaffinity extraction columns (NEOCOLUMN for aflatoxins, 04/08) were used. The detection limit was 0.5 ppb. None of the sampled was detected with aflatoxins. The aspect of livers considered as suspicious might be due to other metabolic processes than aflatoxin contamination, but also to the good performance of micotoxin adsorbents in food. Key words: Aflatoxins, Aflatoxicosis, Chiken liver.
INTRODUCCIN l conocimiento cientfico de los alimentos y los controles de calidad son elementos fundamentales para la salud comunitaria; dentro de este contexto debe considerarse la evaluacin de los riesgos toxicolgicos y los grados de incidencia originados por micotoxinas. Los hongos productores de aflatoxinas se encuentran en una variedad de alimentos, especialmente vegetales, de gran importancia en la dieta humana y animal, como son cereales y oleaginosas. Cuando no existe un control adecuado en la alimentacin animal, se presentan cuadros agudos
de aflatoxicosis originados por diversidad de micotoxinas en desmedro de la produccin, en trminos econmicos y de reduccin de fuentes alimentarias para la poblacin. Para el ser humano, el mayor riesgo es la toxicidad crnica asociada al consumo de pequeas cantidades de toxinas durante perodo prolongado (1). Los residuos de micotoxinas en el organismo animal no slo implican que el animal ingiera un alimento contaminado con los consiguientes riesgos de toxicidad, sino tambin el peligro para los humanos que los consuman. Bsicamente, existen dos vas de intoxicacin: la primaria, cuando se consume directamente
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Arbaiza T., Cordova A., Icochea E., Cutti H.
un alimento contaminado y la secundaria cuando se ingieren residuos de micotoxinas presentes en la carne, vsceras, huevos o leche (2). La aflatoxina es un contaminante comn de los alimentos, especialmente en las dietas bsicas de muchos pases en vas de desarrollo. Esta toxina es producida por la accin mictica durante las etapas de produccin, cosecha, almacenamiento y procesamiento del alimento, y es considerada un contaminante inevitable de los alimentos por la Food and Drug Administration (FDA) de USA (3). La aflatoxina B1 es absorbida va tracto gastrointestinal dentro del sistema portal sanguneo y llevada al hgado donde se metaboliza. Una porcin es activada y fijada en los tejidos hepticos. Algunos metabolitos conjugados de la aflatoxina B1, que son solubles en agua, se excretan por la bilis y consecuentemente van a las heces. Otros conjugados (tambin solubles en agua) y productos de degradacin de aflatoxina B1, al igual que los metabolitos no conjugados de sta, son transferidos al sistema circulatorio y distribuidos sistmicamente. Eventualmente, los mencionados residuos van a la leche, huevos, msculo y tejidos comestibles (4). El dao de la sntesis proteica y la disminucin de la facilidad del organismo para movilizar las grasas estn relacionados aparentemente con la lesin heptica (necrosis y cambios grasos) que presentan los animales afectados por aflatoxinas en forma precoz. En el interior de los hepatocitos, las aflatoxinas se unen a macromolculas tales como DNA, puntos endoplasmticos para fijacin de esteroides y diversas enzimas. El primer cambio producido por aflatoxina B1 observado en ratas es la modificacin de la estructura del nucleolo del hepatocito; la lesin de ste es compatible con la unin observada entre las aflatoxinas y el DNA nuclear. Entre los cambios estructurales posteriores se incluyen la disgregacin y reduccin en el nmero de ribosomas, la proliferacin del retculo endoplasmtico liso, la prdida de glucgeno y la degeneracin de las mitocondrias. El efecto inmunolgico de las aflatoxinas parece ser una depresin humoral no especfica y que, en parte, produce una alteracin en los anticuerpos tisulares (5). En Japn, Bintvihok y col. (2002), realizaron estudios sobre la presencia de residuos de aflatoxina en hgado, msculo y huevos de aves domsticas, para lo cual alimentaron durante siete das a patos, gallinas ponedoras, codornices y pollos broiler con dietas que contenan 3 ppm de aflatoxina B1 (AFB1). Las aves
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fueron sacrificadas entre el octavo y decimoprimer da de alimentacin con AFB1. Las aflatoxinas y sus metabolitos fueron determinados por HPLC. Los niveles de AFB1 en los tejidos de codornices fueron ms altos que en las otras aves. En todas las especies estudiadas, las aflatoxinas y sus metabolitos fueron 10 veces ms altas en el hgado que en el msculo (6). En nuestro pas, el consumo de vsceras de ave tiene gran aceptacin en diferentes presentaciones culinarias; por lo que el objetivo de este trabajo fue detectar residuos de aflatoxinas en hgado de pollos que se expenden en Lima, para lo cual se obtuvo muestras procedentes de mercados formales de los diferentes distritos. PARTE EXPERIMENTAL Plan de muestreo.- Las muestras de hgado de pollo se adquirieron en 16 mercados de abastos de Lima, distribuidos entre los diferentes sectores socioeconmicos, en los distritos: Miraflores, La Molina, San Borja, Magdalena, Jess Mara, Lince, Brea, Surquillo, San Martn de Porras, Lima Metropolitana (Mercado Central), Rimac, Cercado de Lima (La Aurora), La Victoria, San Juan de Miraflores, Villa El Salvador y Villa Mara del Triunfo. Preparacin de la muestra.- En el Laboratorio de Bioqumica, Nutricin y Alimentacin Animal se procedi al diagnstico para discriminar hgados normales y aparentemente sospechosos de cada mercado, obtenindose un total de 32 muestras para la deteccin de aflatoxinas. El tamao de la muestra fue de 500 gramos, divididos en porciones de 50 g, de hgados normales y 50 g. de aparentemente sospechosos.
Deteccin y cuantificacin de aflatoxinas totales

Extraccin de la toxina.- Los 50 g de cada una de las muestras se maceraron con 6 g de cloruro de sodio, luego se licuaron con 100 mL de metanol al 70% con Phosphate Buffered Salina (PBS) y 50 mL de n-hexano durante tres minutos. La masa heterognea se filtr por papel de filtracin rpida, se dej en reposo, y la segunda filtracin se realiz por papel Wathman N 4. Los extractos se pasaron por las columnas de inmunoafinidad (04/08)(7). Se utiliz el mtodo de ELISA, que cuenta con la aprobacin de Research Institute of AOAC (1995) empleando el kit cuantitativo Veratox Alta Sensiblidad de la Corporacin NEOGEN USA (8). El ensayo emplea un ELISA de tipo competitivo directo cuya sensibilidad es de 0,5 ppb, realizndose todas las pruebas por duplicado.
Deteccin de residuos de aflatoxinas en hgado de pollo Tabla 1. Concentracin de aflatoxinas HS en ppb (*) Estandar ppb 1 2 4 8 0 Densidad ptica 0,609 0,517 0,413 0,316 0,741
MATERIALES Y MTODOS 48 micropozos de mezclados marcados con una lnea de color rojo. 40 micropozos cubiertos con anticuerpo monoclonal. Controles de aflatoxinas de 1 a 8 ppb Conjugado: aflatoxina HRP Sustrato TMB: Tetrametil benzidina Solucin de deteccin de la reaccin
ppb 1,0 2,1 4,2 7,6
0,0
Procedimiento:
Se transfiri 100 l del conjugado a los pozos de mezclados Se transfiri 100 l del control y de la muestra problema en cada pozo. Se transfiri 100 l del conjugado a los pozos sin marca. Se incubar por 10 minutos. Se descart el lquido de los pozos con anticuerpos. Se lav 5 veces con agua desionizada. Se golpe los pozos contra papel absorbente. Se adicion 100 l de sustrato a los pozos. Se incubar por 10 minutos. Se aadi 100 l de la solucin de deteccin de la reaccin a todos los pozos. El color desarrollado se cuantific en el lector Biotek EL-301 para pozos, espectrofotmetro que mide la densidad ptica (OD650) de cada pozo utilizado en la prueba. Los resultados analticos se procesaron en el programa Neogen para computadora. Se determin los niveles de aflatoxinas en cada muestra en trminos de absorbancia transfirindose a ppb (g/kg). RESULTADOS Y DISCUSIN Realizadas las lecturas de las absorbancias de los controles y muestras problemas se obtuvo los resultados analticos que se detallan en la Tabla 1. No teniendo resultados positivos en las muestras problemas, se asume que el aspecto de los hgados sospechosos tendra origen en otra alteracin metablica. El sndrome de hgado graso est considerado como una enfermedad metablica y espordica de aves obesas enjauladas y explotadas en climas calurosos; se registra en aves de alta produccin, alimentadas con raciones elevadas de energa, que presentan exceso de tejido adiposo en la cavidad abdominal, hgado y rin, aumentan su volumen, se tornan plidos, friables y de color amarillo graso (9).
*Aflatoxinas de alta sensibilidad en partes por billn (ppb).
El tratamiento de los alimentos de la industria avcola, generalmente con secuestrantes de aflatoxinas, tendra un buen rendimiento. Los especialistas en avicultura tienen la certeza del impacto negativo de las micotoxinas en la productividad; debido a esto, el uso de los adsorbentes de micotoxinas se ha generalizado en la industria avcola. Muchos tipos de aluminosilicatos comerciales, cuando son incluidos en la dieta, ofrecen gran proteccin contra las aflatoxinas, ms no contra las dems micotoxinas; en este caso la alternativa ms viable es el retiro del alimento contaminado. Diversos trabajos de investigacin concluyen que el uso de adsorbentes es una ayuda efectiva a la solucin de problemas de productividad y alimentos contaminados (10). CONCLUSIN En las 32 muestras de hgado de pollos analizadas procedentes de 16 mercados de abastos de Lima no se detect presencia de aflatoxinas. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Arbaiza T. Riesgos de la contaminacin con aflatoxina en man (Arachis hipogea) de produccin nacional. Tesis de Magister en Bromatologa. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima - Per. 1998. 62 p. Baslico JC. 1995. Micotoxinas en alimentos. Centro de Publicaciones Universidad Nacional Del Litoral. Santa Fe - Argentina. Pag: 8-9. FAO. DIGESA, 2004. Taller Nacional Sobre Criterios del CODEX para el Establecimiento de lmites mximos permitidos para aditivos, contaminantes, residuos de plaguicidas y medicamentos de uso veterinario en alimentos. Lima Per. 3-6. Febrero del 2004. Revisado el 25 de Marzo 2009. Disponible en htpp://www.rlc.fao.org/ prior/comagric/codex/rla2904/pdf/lmpper.pdf. Gimeno A and Martins M L. Mycotoxins and Mycotoxicosis in Animals and Human Special Nutrition Inc. USA. Ed. Mxico 2006. pp 1-127.
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Agradecimiento
Al M.V. Juan Carlos Flores LAPROVET EIRL, a la Dra. Amanda Chvez de Garca Facultad de Medicina Veterinaria UNMSM, a la Srta. Lourdes Lagos P. y al Sr. Armando Arbaiza F. por su apoyo en la ejecucin del proyecto. Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el:07/01/2010
Correspondencia:
Dra. Arbaiza Fernndez Teresa Sebastiana Direccin: Av. Javier Mariategui 538 Jess Mara Correo electrnico: tarbaiza@yahoo.es
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ISSN 1561-0861
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE CUATRO PLANTAS DEL NOR-ORIENTE PERUANO

Antimicrobial activity of four plants from Peruvian north-east
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Instituto en Qumica Biolgica, Microbiologa y Biotecnologa Marco Antonio Garrido Malo Facultad de Farmacia y Bioqumica, UNMSM.
Julio R. Ruiz Q.1, Mirtha Roque A.1
RESUMEN
Se investig la actividad antimicrobiana in vitro de los extractos metanlicos, etanlicos e hidroalcohlicos de cuatro plantas del nor-oriente peruano: Cassia reticulata (planta entera), Ilex guayusa Loes (hojas), Piper lineatum (hojas), y Terminalia catappa (hojas). Las especies fueron recolectadas en el departamento de Cajamarca, excepto Terminalia catappa (Amazonas). La actividad antimicrobiana se evalu mediante el mtodo de difusin en agar. Los microorganismos utilizados fueron las bacterias Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis y Escherichia coli; y los hongos Candida albicans, Aspergillus niger y Microsporum canis. De doce extractos investigados, ocho (67%) presentaron actividad antimicrobiana significativa frente a Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis y uno (8%) frente a Escherichia coli. De doce extractos investigados, diez (83%) presentaron actividad significativa frente a Candida albicans, y seis (50%) contra Microsporum canis. Los extractos con la mejor actividad actimicrobiana fueron los tres extractos del Piper lineatum; el extracto hidroalcohlico de Cassia reticulata y el hidroalcohlico de Terminalia catappa. Palabras clave: Piper lineatum, Cassia reticulata, Terminalia catappa, actividad antimicrobiana, plantas peruanas.
SUMMARY
The present work investigated the in vitro antimicrobial activities of ethanolic, methonolic and hydroalcoholic extracts corresponding to four plants of north easter of Peru; Cassia reticulata (whole plant), Ilex guayusa Loes (leaves), Piper lineatum (leaves), y Terminalia catappa (leaves). The plants were collected in the department of Cajamarca, except Terminalia catappa (Amazonas). The antimicrobial activity was determinated by the method of agar diffusion. The used microorganisms were the bacteria Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis and Escherichia coli; and the fungals Candida albicans, Aspergillus niger and Microsporum canis. Of twelve investigated extracts, eight (67%) presented significant antimicrobial activity against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis and one (8%) against Escherichia coli. Of twelve investigated extracts, ten (83%) presented significant activity against Candida albicans, and six (50%) against Microsporum canis. The extracts with the greatest antimicrobial activity were the three extracts of Piper lineatum, the hydroalcoholic extract of Cassia reticulata and the hydroalcoholic extract of Terminalia catappa. Key words: Piper lineatum, Cassia reticulata, Terminalia catappa, antimicrobial activity, peruvian plants.
INTRODUCCIN
n el Per, como en otros pases en vas de desarrollo, las plantas medicinales representan an la principal herramienta teraputica en medicina tradicional. La flora peruana ofrece grandes posibilidades para el descubrimiento de nuevos compuestos con actividad antifngica. Se calcula que el Per posee unas 25 000 especies de plantas conocidas, con 17 144 especies de plantas con flores (Angiospermas y Gimnospermas), de las cuales 5 354 (31,3%) son especies nativas (1). En los ltimos aos, despus de un perodo en que la industria farmacutica se dedic exclusivamente a la fabricacin de frmacos de sntesis, dejando atrs las antiguas medicinas que tenan como base los extractos
de plantas medicinales, hay un cambio cualitativo en los programas industriales con dedicacin a la bsqueda de nuevos medicamentos de origen herbario. Estos cambios se han sustentado, por una parte, en una filosofa de la vuelta a la naturaleza que impregna el modo de vivir de los pases industrializados y, por otra, en necesidades de salud pblica, ya que se ha tornado urgente la bsqueda de molculas para la fabricacin de medicamentos antitumorales y anti-SIDA (2). El avance de la Fitoterapia como disciplina mdica (3) es cada vez mayor, esto se evidencia en que las plantas medicinales representan casi el 25% del total de las prescripciones mdicas en pases industrializados; en los pases en desarrollo la participacin de las plantas medicinales en el arsenal teraputico alcanza el 80% (4).
41
Ruiz J., Roque M.
En los ltimos aos hay un incremento en la incidencia de enfermedades infecciosas, destacando las fngicas (5) debido al aumento considerable de pacientes inmunocomprometidos, con quimioterapia, con nutricin parenteral, sometidos a ciruga de transplante y el uso de agentes antimicrobianos de amplio espectro, agregados a la presencia de SIDA, lo que da lugar a verdaderas placas Petri vivientes individuales, quienes son altamente susceptibles a las infecciones oportunistas. Las infecciones fngicas sistmicas y drmicas son causas de alta morbi-mortalidad en este tipo de pacientes, siendo las dermatomicosis problemas serios para nios de las naciones del tercer mundo como consecuencia del deficiente cuidado sanitario (6). Los frmacos disponibles tienen una toxicidad importante, producen recurrencia o causan resistencia, razn por lo cual se est procurando el uso de nuevos agentes antifngicos ms potentes pero sobretodo ms seguros que los existentes. Desafortunadamente, las clulas fngicas y humanas no son diferentes, comparten gran parte de las vas del metabolismo intermediario, utilizan enzimas muy similares y no es fcil encontrar blancos que ofrezcan la selectividad requerida para obtener un antifngico seguro (7). En tal sentido, se escogieron cuatro plantas del nor-oriente peruano, basando su seleccin en criterios etnomedicinales y quimiotaxonmicos. El presente trabajo fue realizado en el Instituto de Investigacin de Qumica Biolgica, Microbiologa y Biotecnologa Marco Antonio Garrido Malo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. El objetivo del trabajo de investigacin fue determinar la actividad antimicrobiana de los extractos etanlicos, metanlicos e hidroalcohlicos de alguna(s) parte(s) o de la planta entera segn corresponda, de las especies seleccionadas mediante la prueba de difusin en agar. MATERIAL Y MTODOS
Preparacin de los extractos

Las partes de las plantas elegidas y secas, se pulverizaron. La extraccin se realiz por maceracin a temperatura ambiente con etanol al 95%, metanol y solucin hidro-alcohlica. Luego el solvente fue evaporado a sequedad en rotavapor a temperatura menor a 40 OC (8) . Para el bioensayo, los extractos fueron resuspendidos en dimetilsulfxido (DMSO), a una concentracin de 25 mg/mL.
Microorganismos
Las bacterias y hongos fueron suministradas por el Instituto en Qumica Biolgica, Microbiologa y Biotecnologa Marco Antonio Garrido Malo Facultad de Farmacia y Bioqumica, UNMSM. Se trabaj con las siguientes bacterias: Staphylococcus aureus ATCC 25933, Staphylococcus epidermidis cepa clnica, Bacillus subtilis cepa ambiental, Escherichia coli cepa clnica y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Adems se trabajaron con los siguientes hongos Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus niger ATCC 16404 y Microsporum canis cepa clnica.
Actividad antimicrobiana
Se realiz mediante la prueba de difusin en agar . Esta prueba se basa en la inhibicin del crecimiento fngico, mediante la difusin de sustancias activas en un medio slido, y posteriormente se evidencia por la formacin de halos claros. El medio usado fue agar Mller Hinton (Merck) para las bacterias, agar dextrosa Sabouraud (Merck) para Candida albicans y Aspergillus niger, y agar selectivo para dermatofitos segn Taplin (Merck), para Microsporum canis. A 20 mL del agar especfico fundido (45OC) se le mezcl aspticamente, de un lado con 100 L de una suspensin bacteriana (3 x 108 UFC/mL) o con 1 mL de suspensin fngica (1 x 104 UFC/ml) y vertidas en placas Petri estriles. Una vez que el agar solidific se hicieron hoyos con la ayuda de un sacabocado de 11 mm de dimetro externo, se agregaron 100 L de los diferentes extractos (25 mg/mL) a los pozos y las placas fueron incubadas por 24 h a 37OC para bacterias y 24-72 h a temperatura ambiente para hongos, usndose como controles positivos oxacilina (1 g/disco), norfloxacino (10 g/disco) y cloranfenicol (30 g/disco) para las bacterias, nistatina y ketoconazol para los hongos a una concentracin de 0,2 mg/mL disueltos en DMSO. Los ensayos se llevaron a cabo por triplicado. La actividad antimicrobiana fue medida como el dimetro (mm) del halo de inhibicin del crecimiento bacteriano.
(8)
Recoleccin de la muestra
Las plantas Cassia reticulata, Ilex guayusa Loes y Piper lineatum, fueron recolectadas en la Provincia de San Ignacio, Regin de Cajamarca, entre los 900 y 1400 msnm, y la Terminalia catappa en el Regin de Amazonas, Provincia de Luya a 1200 msnm. La recoleccin e identificacin de las especies botnicas fue realizada por el Bilogo Jorge Campos. Los datos etnobotnicos y de recoleccin se resumen en la Tabla 1.
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Evaluacin fitoqumica preliminar

Se realiz mediante pruebas fitoqumicas de caracterizacin (9). Entre los metabolitos secundarios buscados tenemos: quinonas, taninos, compuestos fenlicos, alcaloides, esteroides, y flavonoides. RESULTADOS La Tabla 1 resume los datos etnobotnicos de las plantas seleccionadas. En la Tabla 2, se resume los resultados de la actividad antimicrobiana de los extractos crudos. Los extractos de plantas que mostraron actividad antimicrobiana significativa (definida como una zona clara de inhibicin 18 mm) fueron: extracto hidroalcohlico de Cassia reticulata; extractos etanlico, metanlico e hidroalcohlico de Piper lineatum y extracto hidroalcohlico de Terminalia catappa. Las especies ms susceptibles fueron Candida albicans (83%), Staphylococcus aureus (67%), Staphylococcus epidermidis (67%) y Microsporum canis (50%). Por otro lado solo un extracto fue activo contra Escherichia coli y ninguno contra Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis y Aspergillus niger. La zona de inhibicin ms grande fue desarrollada por el extracto etanlico de las hojas Piper lineatum y por el extracto hidroalcohlico de las hojas de Terminalia catappa, con un halo de 50 mm y ms de 50 mm, respectivamente, contra Microsporum canis. Los solventes usados (etanol, metanol y DMSO) como disolventes para los extractos crudos no mostraron resultados positivos, demostrando que ellos no influyen en la actividad antimicrobiana mostrada por los extractos de las plantas (Tabla 2). El estudio fitoqumico preliminar revela una abundante presencia de compuestos fenlicos seguida de alcaloides. DISCUSIN Las plantas investigadas son usadas de diversa manera en la medicina popular en la zona de recoleccin, tal como se observa en las tablas respectivas; muchas de ellas se usan en problemas drmicos e infecciosos. Los resultados de la prueba de difusin en agar nos demuestran que el 100% de las plantas investigadas tienen actividad antimicrobiana principalmente contra Candida albicans, Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. Esto avala el potencial que tienen estas plantas como antimicrobianos; as como una acertada seleccin basada en gran parte en
su quimiotaxonoma y uso etnomedicinal. Los extractos etanlico, metanlico e hidroalcohlico de la planta entera de Cassia reticulata (retama) mostraron actividad significativa contra Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Candida albicans, excepto el extracto metanlico contra Staphylococcus epidermidis. Los extractos no muestran actividad significativa contra el resto de microorganismos ensayados. Estos resultados son similares a los reportados para Cassia auriculata con respecto a la actividad antibacteriana(10), y contra Candida albicans por Cassia alata y Cassia spectabilis(11,12) y con respecto a la actividad contra dermatofitos se ha reportado actividad del extracto etanlico de la corteza y hojas de Cassia grandis (13) y del extracto acuoso de Cassia grandis y Cassia occidentalis (14). Los extractos metanlico e hidroalcohlico de las hojas de Ilex guayusa Loes mostrarn actividad significativa contra Candida albicans, y slo el hidroalcohlico contra Microsporum canis. El resto de extractos de esta planta no muestran actividad significativa contra los otros microorganismos ensayados. Se ha reportado actividad contra Candida albicans por parte de los triterpenos aislados de las frutas de Ilex integras(15). El anlisis fitoqumico preliminar revel la presencia de taninos, compuestos fenlicos, alcaloides, flavonoides, glicsidos y quinonas. Los extractos etanlico, metanlico e hidroalcohlico de las hojas de Piper lineatum (luto) mostraron actividad significativa contra Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Candida albicans y Microsporum canis. Los extractos no muestran actividad significativa contra el resto de microorganismos ensayados. Es importante destacar la muy buena actividad contra el Microsporum canis con un halo de inhibicin de 50 mm, por parte del extracto hidroalcohlico de las hojas de la Piper lineatum. Para esta especie es la primera vez que se reportan las actividades citadas; sin embargo, este gnero es conocido por su actividad antimicrobiana. As tenemos resultados similares en cuanto a la actividad antibacteriana contra Gram positivos del extracto de las partes areas del Piper aduncum (16), del extracto en acetato de etilo de las hojas de Piper regnellii (17) y del extracto metanlico de Piper solmsianum (18). Con respecto a la actividad antifngica, otras especies del gnero comparten esta actividad, entre ellas tenemos Piper crassinervium Kunth, Piper lanceaefolium HBK, Piper angustifolium, Piper guineense, Piper tuberculatum, Piper arboreum, Piper hispidum, Piper fulvescens, y Piper coruscans (19-28). El anlisis fitoqumico preliminar reve-
43
Ruiz J., Roque M. Tabla 1. Datos Etnobotnicos de las Plantas Investigadas.
Nombre cientfico
Cassia reticulata Ilex guayusa Loes Piper lineatum Terminalia catappa
Aquifoliaceae Combretaceae Piperaceae
Fabaceae
Familia
Nombre comn Guayusa Retama Luto
Planta entera Hojas Hojas Hojas
Parte usada
Sitio de recoleccin* San Ignacio San Ignacio San Ignacio Luya
Tratamiento de la fiebre amarilla, sarna y las manchas blancas de la piel.
Usos populares**
Es estimulante del sistema nervioso, para la infertilidad y para resfrios comunes
* Sitios de resoleccin: San Ignacio, Regin de Cajamarca y Luya, Regin de Amazonas
Tabla 2. Actividad Antimicrobiana de los Extractos Crudos.
Castailla
Desinflamante, cicatrizante de heridas externas y procesos de lceras gstricas; para lavados vaginales en casos de inflamaciones por micosis Como hipotensor, para la diarrea, como hipocolesterolmico
** Basado en los datos obtenidos en los viajes de recoleccin
Especies de plantas
Partes de Tipo de plantas b ensayadasa extracto PA H H H PA PA H H HA HA M E E M E M E
B.s.
16 16 0 0
Cassia reticulata
14
Actividades antibacterianasc
Dimetro de la zona de inhibicin (mm) Actividades antifngicasd
S.a.
18 20 12 16
20
S.e.
16 21 12 12
19
E.c.
14 19 13 13 15 0 12
P.a.
12 14 12 12 11 0 11
13
C.a.
20 23 16 24 25 22 26
21
A.n.
0 0 0 0
M.c.
0 0 0
15
Ilex guayusa Loes
Piper lineatum
Terminalia catappa
H H
Etanol 95% Metanol DMSO Controles
HA M
14 17
16
HA
16 13 0 0 0
15 20
14 13
23
21 13 0 0 0
18 18
17 18
23
20 21 0 0 0
20 20
11
11 0 0 0
13 12
16
13 0 0 0
12 12
23
18 17 0 0 0
0 0
14 32
21
0 0
50 44
0 0 0 0
44
25 17 0 0 0
50
Oxacilina (1 ug/disco) Nistatina (0.2 mg/ml)
Cloranfenicol (30 ug/disco) Norfloxacino (10 ug/disco) Ketoconazol (0,2 mg/ml)
22
20
13
15
35
(a) Partes de plantas ensayadas: PA, partes areas; H, hojas. (b) Tipo de extracto : E, etanlico; M, metanlico; HA, hidroalcohlico (c) Especies de bacterias: B.s., Bacillus subtilis ; S.a., Staphylococcus aureus ; S.e., Staphylococcus epidermidis ; E.c., Escherichia coli ; P.a., Pseudomonas aeruginosa. (d) Hongos: C.a., Candida albicans ; A.n., Aspergillus niger ; M.c., Microsporum canis.
37 26
40 0
44
Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 41-47 Tabla 3. Estudio fitoqumico preliminar de las plantas investigadas.
Tipo de extracto EM EE EHA
Piper lineatum (H)
Terminalia catappa (H) Piper lineatum (H) Ilex guayusa Loes Piper lineatum (H)
Cassia reticulata Wild (PE)
Especie vegetal
Flavonoides
Shinoda
Glicsidos
H2SO4 -naftol
Alcaloides
Dragendorff
Fenlicos
Cl. Frrico
Quinonas
NaOH 5%
Taninos
Gelatina
(+) (+) (+) (+) (-)
Cassia reticulata Wild (PE) Terminalia catappa (H) Terminalia catappa (H) Cassia reticulata Wild (PE)
(+)
(+) (+) (+) (+) (+) (+) (-) *
(++) (++) (++) (+)
(+)
(+++) (++) (++) (+) (+) (+)
(++) (++)
(+)
(+)
Mayer
(++) (++) (++) (+) (+) (+) (+)
(+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++) (+++)
(++)
(+) (+) (+) (+) (+) (-) (-) (-) (-)
(+) (+) (+) (-) (-)
(+++) (++)
(++)
(++) (+) (+) (+) (+)
Partes estudiadas: H, hojas; PE, planta entera * No realizado Tipo de extracto: EM, extracto etanlico; EE, extracto etanlico; EHA, extracto hidroalcohlico
(++)
(++)
la la presencia de taninos y compuestos fenlicos entre sus principales constituyentes, los cuales pueden ser los responsables de la actividad biolgica. En este gnero se han reportado los siguientes compuestos antifngicos: hidroquinonas preniladas y sakuretina, con actividades comparables a los controles (nistatina y miconazol)(20), canfor y canfeno principales constituyentes del aceite esencial de Piper angustifolium (21), numerosas amidas (23-25) , derivados del cido benzoico (26), neolignanos (27, 29) , y derivados ciclopentanodionas (coruscanona A y B) (28) . Todos estos resultados remarcan el gran potencial del gnero en este campo de la investigacin, el cual debe ser profundizado. Los extractos etanlico, metanlico e hidroalcohlico de las hojas de Terminalia catappa (castailla) mostraron actividad significativa contra Staphylococcus epidermidis, Candida albicans y Microsporum canis, excepto por los extractos metanlicos contra Candida albicans y Microsporum canis. El resto de extractos no muestran actividad significativa contra los otros microorganismos ensayados. Es importante destacar la muy buena actividad contra el Microsporum canis con un halo de inhibicin de 50 mm, por parte del extracto hidroalcohlico de las hojas de la Terminalia catappa. Los hallazgos concuerdan con lo reportado en la literatura; as tenemos que se ha reportado que el extracto etanlico de sus hojas tiene actividad contra bacterias Gram positivas y Gram negativas (16,30), al igual que los extractos de la corteza del tallo y la raz de Terminalia brownii (31). La literatura
indica que, el extracto metanlico y acuoso de las partes areas de Terminalia australis mostr efecto contra cepas de Aspergillus y Candida (32). El extracto metanlico de la raz de Terminalia sambesiaca y el extracto metanlico de la raz de Terminalia sericea mostrarn actividad anticandida (33). La planta Terminalia avicennioides es rica en taninos y saponinas, lo que explicara su actividad contra cepas de Candida y dermatofitos (34) . De los extractos de frutos de Terminalia bellirica se aislaron lignanos que poseen actividad antifngica (35) . Terminalia sericea y T. brachystemma originarios de Sudfrica tienen compuestos antifngicos de naturaleza apolar contra Microsporum canis (36). CONCLUSIONES El estudio de la actividad antimicrobiana de las plantas peruanas, seleccionadas en base a su quimiotaxonoma y su uso etnomedicinal, ha provedo varios extractos con fuerte actividad contra microorganismos patgenos. Los resultados de este estudio soportan el uso folklrico de estas especies. De doce extractos investigados, ocho (67%) presentaron actividad antibacteriana significativa frente a Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis y uno (8%) frente a Escherichia coli. De doce extractos investigados, diez (83%) presentaron actividad significativa frente a Candida albicans, y seis (50%) contra Microsporum canis. Los extractos con la mejor actividad actimicrobiana fueron los tres extractos del Piper lineatum; el extracto hidroalcohlico de Cassia reticulata y el hi-
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Ruiz J., Roque M.
droalcohlico de Terminalia catappa. Se desconoce los compuestos responsables de su actividad biolgica, para lo cual son necesarios estudios posteriores. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Manuscrito recibido el: 30/11/2009 Aceptado para su publicacin el:07/01/2010
CORRESPONDENCIA Q.F. Julio Reynaldo Ruiz Quiroz Profesor Auxiliar del Departamento de Microbiologa y Parasitologa Bsica y Aplicada. Facultad de Farmacia y Bioqumica - UNMSM Jr. Puno 1002 -Lima 1 (Per) E-mail: julioruizquiroz@gmail.com
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notas farmaCutiCas
En Pre y Post Grado, en el semestre 2009-I, se emitieron los siguientes Grados, Ttulos y Diplomados: GRADOS Y TTULOS Bachilleres de Pregrado 1. Aime Laura Janet 2. Alhuay Taipe Ismael Ernesto 3. Alvarado Orbegoso Wilson Ostilio 4. Anchayhua Arestegui Tania Lucy 5. Bautista Chavez Liliana 6. Coz Ramn Juana Dora 7. Chumacero Sarmiento Cinthia M. 8. Duran Osctegui Edwin Andrs 9. Galvn Ramos Diego Eduardo 10. Gmez Chuquizuta Marvin Richard 11. Herrera Conislla Mery 12. Lara Miranda Melissa Aym 13. Leyva Minaya Elvis Edisson 14. Neyra Cruz Diana Krystel 15. Quiliano Meza Miguel Angel 16. Ramn Alzamora Elizabeth Lourdes 17. Requena Medina Mara Consuelo 18. Rojas Chacpi Jess Angel 19. Ruiz Jimenez Eddy Yamir 20. Sanchez Maldonado Gustavo Edwin 21. Vargas Chvez Carlos Omar 22. Vega Luglio Llulia Milagros 23. Villavicencio Villanueva Jhonatn N. Ttulo de Qumico Farmacuticos 1. Arias Salce Sheila Amparo 2. Bedriana Arones Yeny Julissa 3. Berrocal Quinto Jorge Cipriano 4. Braez Espinoza Mary Carmen 5. Carbone Rojas Carolina Alexa 6. Crdenas Roca Benjamn Santos 7. Ccasa Yapo Abraham Enoc 8. Cern Hilario Oscar Roberto 9. Chaca Ramos Alex Fernando 10. Chunga de la Cruz Alfonso 11. Dvila Maguia Elizabeth Violeta 12. Flores Espinoza Edwin Robert 13. Gago Cceres Gretell Paola 14. Gonzles Burgos Karim Jalida INGRESOS A LOS ESTUDIOS DE POST GRADO Ante la convocatoria de la Escuela de Post Grado para las Maestras y Doctorado que ofrece la Unidad de Post Grado de nuestra Facultad, se cubrieron las siguientes vacantes: 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 44. Gutirrez Paredes Elmer Eduardo Huayhuameza Valverde Sonia E. Ingaroca Ramos Sergio Inocente Camones Miguel ngel Isla Casapia Patricia Milagros Jorge Rojas Fausto Edgar Jota Altamirano Martha Mabel Machado Honores Doris Melisa Mamani Pampa Alicia Yanet Marmanillo Melndez Eduardo Piero Medina Julca Jessica Amparo Medina Rimache Doris Estela Mena Basalda Yanet Karina Mendoza Barrios Jess Richard Mogrovejo Barrera Elvira Pacfico Bedn Juana Palomino Tinoco Karina Beatriz Pampamallco Manrique Jenny Teresa Prez Bobadilla Javier Eduardo Revollar Verstegui Judith Amalia Salazar Snchez Juan Alberto Snchez Castellanos Claudia Maribel Sandoval Castillo Diana Ins Segura Guerra Giannina Lisset Silvia Acua Cinthya Anabhela Tejada Enrquez Claudia Carolina Unzueta Oriundo Marianela Ventura Yahuana Geraldine Matilde Zamata Chiri Claudia Zanabria Valderrama Mercedes Luisa
Post Grado Magster 1. Cristobal Delgado Ruth Liliana: Microbiologa. 2. Tasayco Yataco Nesquen Jos: Farmacologa, con Mencin en Farmacologa Experimental. Post Grado Doctor 1. Castro Luna Amrico Jorge 2. Garca Ortz Mesas Moiss Diplomado 1. Robles Pittman Vctor Rubn: Asuntos Regulatorios Farmacuticos
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Doctorado en Farmacia y Bioqumica Maestra en Atencin Farmacutica Maestra en Biotecnologa Maestra en Ciencia de los alimentos
: : : :
12 07 09 06 13 09 15 04 06
Maestra en Ciencias Farmacuticas con Mencin en Ciencia : y Tecnologa Cosmtica Maestra en Farmacologa con Mencin en Farmacologa Experimental : Maestra en Microbiologa Maestra en Qumica Clnica Maestra en Recursos Vegetales yTeraputicos : : :
As mismo, siguiendo su lnea de formacin de Especialistas, la Facultad de Farmacia y Bioqumica convoc a concurso para cubrir vacantes de las diferentes especialidades, logrndose los siguientes ingresos: Segunda Especialidad en Farmacia Hospitalaria Segunda Especialidad en Farmacia Clnica : : 15 23
FUNCIONAMIENTO DE NUEVAS ESCUELAS Luego de varios aos de gestiones, se aprob el funcionamiento de las dos nuevas Escuelas Acadmico Profesionales de nuestra Facultad, la de Toxicologa y la de Ciencia de los Alimentos, a travs de la Resolucin Rectoral N. 2058-R-2008, con fecha 21 de mayo 2008 . Por tal motivo, la Universidad convoc a concurso de admisin para el presente ao logrndose admitir 25 alumnos a la Escuela Acadmico Profesional de Toxicologa y 17 a la de Ciencia de los Alimentos; dichos alumnos iniciaron sus actividades acadmicas en los ambientes de nuestra Facultad, compartiendo aulas y laboratorios con los de la Escuela de Farmacia y Bioqumica. Es importante resaltar la labor que vienen desempeando los directores de dichas escuelas, la Dra. Nancy Lozano Reyes y Q.F. Jess Lizano Gutirrez, con la finalidad de lograr un adecuado desarrollo de las actividades lectivas. ADQUISICIN DE NUEVOS EQUIPOS Con la finalidad de mejorar la infraestructura de equipamiento y la calidad de los servicios que brinda nuestra facultad, a travs del CENPROFRAMA, por gestiones del seor Decano y contando con el apoyo del seor Rector se logr adquirir equipos de ltima tecnologa. Como parte de este equipamiento, durante el primer semestre de este ao han ingresado al Centro de Control Analtico un Digestor Micro Kjeldahl; estando a la espera de otros equipos que deben ingresar a nuestra facultad en los prximos meses. CAMINO A LA ACREDITACIN Cumpliendo con la poltica de Acreditacin de la Calidad Educativa dentro de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, nuestra Facultad ha iniciado el proceso de Autoevaluacin como etapa previa a la acreditacin. Por tal motivo, el decanato tom la decisin de nombrar como Jefe de la Oficina de Calidad Acadmica y Acreditacin (OCAA) al Profesor Mg. Luis Rojas Rios, quien ha propuesto el nombramiento del Comit de Autoevaluacin (COA) que ha quedado constituido por los siguientes profesores: Dr. Jos Jurez Eyzaguirre, Q.F. Jos Juregui Maldonado, Dr. Mario Carhuapoma Yance, Q.F. Mara E. Salazar Salvatierra, Q.F. Francisco Ramirez Cruz y la trabajadora administrativa Sra. Elsa Angulo. El COA, viene trabajando en la adaptacin de la Matrz e Indicadores de Autoevaluacin, con la finalidad de iniciar la autoevaluacin a partir del ltimo trimestre del presente ao, para lo cual esperan contar con la colaboracin de los diferentes estamentos de la facultad.
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NORMAS PARA LA PUBLICACIN DE ARTCULOS EN LA REVISTA

La revista Ciencia e Investigacin de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, publica comunicaciones de carcter cientfico, originales e inditas en el campo de las Ciencias Farmacuticas y Biomdicas. Est dirigido a los profesionales y estudiantes de las Ciencias Farmacuticas, as como a aquellos otros profesionales de las Ciencias de la Salud, interesados en las investigaciones farmacuticas y bioqumicas. Criterios de elegibilidad de los artculos El material propuesto debe cumplir con los siguientes criterios: Claridad y precisin en la escritura: La redaccin del documento debe proporcionar coherencia al contenido y claridad al lector. Originalidad: El documento debe ser original, es decir, producido directamente por su autor, sin imitacin de otros documentos. Objetividad y validez: Las afirmaciones presentadas deben basarse en datos e informacin vlida, con sustento cientfico. Importancia y aportes al conocimiento: El documento hace aportes interesantes al estado del objeto de estudio. La Presentacin debe seguir las pautas siguientes: 1.- La revista Ciencia e Investigacin recibe artculos de estudios realizados por investigadores de la UNMSM y de otros investigadores nacionales y extranjeros. Los artculos pueden ser presentados en idioma espaol o ingls. 2.- Cada artculo debe presentarse con una pgina de inicio, con el ttulo. 3.-El artculo deber ser entregado por triplicado (una de las copias tendr las fotografas originales), con la respectiva versin electrnica, en formato Microsoft Word y los cuadros en Excel. 4.-El texto del artculo debe ser presentado en fuente Times New Roman, 12 puntos, doble espacio en papel Bond A4, con mximo de 15 pginas incluyendo tablas y figuras. 5.-Los artculos originales seguirn el siguiente esquema general: a. Ttulo. En letras maysculas y centradas. Ser conciso pero informativo, en espaol y en ingls, en no ms de doce palabras, fuente 16 y en negrita. b. Nombre de autor (es) o firma de autora segn parmetros internacionales. c. Identificacin o filiacin institucional de los autores en cada colaboracin, nombre(s), apellido(s), lugar adscripcin, pas, telfonos y/o correo electrnico. Se coloca el primer nombre, inicial del 2 nombre; apellido paterno e inicial del apellido materno. d. Resumen y Summary. En un solo prrafo en espaol y en ingls. En no ms de 250 palabras. En este se indicarn antecedentes, propsito del estudio, procedimientos bsicos, hallazgos ms importantes y principales conclusiones. e. Palabras clave y Keywords: De 3 a 6 palabras respectivamente, que ayuden a la clasificacin del artculo. f. Introduccin. Expresa el propsito y justificacin del artculo y resume el fundamento lgico del estudio, sealando los objetivos. g. Material y Mtodos. En la descripcin de la metodologa, mencionar los materiales, motivo del estudio y especificar la forma de seleccin suficiente que permitan reproducir los resultados. Describir los mtodos estadsticos que se emplearon para analizar los resultados. h. Resultados. Se presentan siguiendo una secuencia lgica en tablas y figuras, las que se ordenarn con numeracin arbiga. No debern repetirse en el texto los datos de los cuadros y figuras. Las figuras (fotografas, grficos, mapas o diagramas) deben tener una leyenda explicativa en la parte inferior; no deben tener una extensin mayor a una pagina A4. En los cuadros el ttulo se ubicar en la parte superior, y debe respetarse las normas internacionales en lo que se refiere a: Nomenclaturas, smbolos y unidades de medida. Los nombres cientficos se escriben en letra cursiva. i. Discusin. Explica el significado de los hallazgos y sus limitaciones. Relaciona las observaciones con otros estudios pertinentes. j. Conclusiones. Mencionar las de mayor relevancia. k. Referencias bibliogrficas. Se deber emplear el Sistema Vancouver. Se numerarn las referencias consecutivamente siguiendo el orden en que se mencionan por primera vez en el texto. Las referencias se identificarn en el texto mediante nmeros arbigos entre parntesis y superndice. Las citas de publicacin deben contener: Apellido paterno del autor, seguido de la inicial del nombre, el ttulo de la publicacin, nombre de la revista (de acuerdo a la lista de revistas indicadas en el Index medicus), volumen de la revista, nmero, pginas en las que aparece el artculo, el ao de la publicacin. Ej: Jimnez C, Riao D, Moreno E. Avances en trasplante de rganos abdominales. Madrid: Ed. Acirbia; 2006. Las citas de tesis deben tener el nombre del autor, ttulo, grado o ttulo que se opt por la tesis, la Facultad, la Universidad, la ciudad y ao. A la recepcin del artculo cientfico, el Comit Editorial comunicar al autor la fecha de recibido y, posteriormente, previa evaluacin se comunicar su aceptacin.
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NORMS FOR THE PUBLICATION OF ARTICLES IN THE JOURNAL

The journal Science and Research at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry at the National University of San Marcos, publishes scientific communications in the field of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, original and unpublished. This aimed at professionals and students of Pharmaceutical Sciences as well as those other professionals of health sciences, interested in pharmaceutical and biochemical research. Criterions of eligibility of the articles The material given consideration of the Publishing Committee it must continue following criterion: Clarity and precision in the writing: The writing of the document must provide coherence to the content and clarity to the reader. Originality: The document must be original, that is to say, produced directly by his author, without imitation of other documents Objectivity and validity: The statements submitted must be based on valid data and information, with scientific sustentation. Importance and contributions to knowledge: The document makes interesting contributions to the state of the art the object of study. The presentation should follow the following Rules: 1. The magazine Science and Research receives articles of studies conducted by researchers at the UNMSM and other national and foreign researchers. Articles may be submitted in English or Spanish language. 2. Each article should be presented with a homepage, including the research title. 3. The article must be delivered in triplicate (one of the copies will have the original photographs), with respective CD, with the text in Microsoft Word and Excel tables. 4. The text of the article must be submitted in letters Times New Roman 12-point, double-spaced, A4 paper Bond, with up to 15 pages including tables and figures. 5. The original articles will continue the following general scheme: a. Title. In capital letters and centered. Be concise but informative, in Spanish and English, in not more than twelve words, 16 and in bold font. b. Name of author (s) or signature of authorship according to international standards. c. Identification or institutional affiliation of authors in each collaboration, name(s), surname(s), place attachment, country, phone and/or email. Place the first name, initial of middle name, last name, initial of mothers maiden name. Resumen and Summary. In a single paragraph in Spanish and English. In no more than 250 words. This stated background, purpose of the study, basic procedures, major findings and main conclusions. Palabras clave and Keywords: 3 to 6 words, respectively, to help classify the article. Introduction. Is the purpose and justification of the article summarizes the rationale of the study, saying the targets. Material and Methods. The description of the methodology, the materials mentioned, reason for study and specify the form of adequate selection of which reflect the results. Describe statistical methods that were used to analyze the results. Results. Are presented in logical sequence in tables and figures, which are pronounced with Arabic numerals. Not be repeated in the text data in tables and figures. Figures (photographs, graphs, maps or diagrams) should be a legend at the bottom, not to have an extension greater than one A4 page. In the tables the title will be located at the top, and should respect international standards in regard to: Nomenclature, symbols and. Scientific names are written in italics. Discussion. Explain the meaning of the findings and limitations. Relate the observations to other relevant studies. Conclusions. Discuss the most important References. It must use the Vancouver system. References should be numbered consecutively following the order they are first mentioned in the text. References are identified in the text by Arabic numerals in parentheses and superscript. Quotations of publication must contain: authors paternal surname, followed by the initial of the name, title of publication, name of the magazine (according to the list of journals listed in Index Medicus), volume magazine, issue, pages where the article appears, the year of publication Eg. Jimenez C, Riao D, Moreno E.Advances in abdominal organ transplantation. Madrid: Ed Acirbia, 2006. Quotations from theses must have the name of the author, title, degree or title that was chosen for the thesis, the Faculty, the University, the city and year.
d.
e. f. g.
h.
i. j. k.
Upon receipt of the scientific paper, the Editorial Committee shall inform the author date of receipt and then be communicated after evaluation of their acceptance.
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Ciencia e Inves 2009-1

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

DIRECTORES DE LOS INSTITUTOS Y CENTROS DE INVESTIGACIN

Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera

Dra. Aurora Marrou Roldn

Marco Antonio Garrido Malo

Dra. Arilm Gorriti Gutirrez

CENTRO LATINOAMERICANO DE ENSEANzA E INVESTIGACIN EN BACTERIOLOGA ALIMENTARIA - CLEIBA

Mg. Gloria Gordillo Rocha

Dr. Pablo Enrique Bonilla Rivera

DIRECTOR DE LA UNIDAD DE INVESTIGACIN

CONSEJO CONSULTIVO Dra. Bertha Pareja Pareja

Dr. Amrico Jorge Castro Luna

Dr. Fernando Quevedo Ganoza

Dr. Jos Roger Jurez Eyzaguirre

Dr. Jos Amiel Prez

Dr. Benito del Castillo Garca

Dr. Antonio Monge Vega

Dr. Manuel Machuca Gonzales

William Gabriel Castro Ramos Mnica Rosa Chvez Aguedo

Cinthya Valeria Bringas Ruiz

Ciencia e Investigacin y el investigador .................................................................................

Actividad antioxidante e inmunolgica de flavonoides aislados de hojas de Smallanthus sonchifolius (yacn)

Deteccin de residuos de aflatoxinas en hgado de pollo en mercados de Lima

Actividad antimicrobiana de cuatro plantas del nor-oriente peruano

Science and research and the researcher ................................................................................

Schinus molle L. molle in front to

Alex Alba G., Pablo Bonilla R.., Jorge Arroyo A. ..............................................................................................................................

Detection of aflatoxin residues in chiken liver in lima markets

Antimicrobial activity of four plants from Peruvian north-east

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1)

CIENCIA e INVESTIGACIN y EL INVESTIGADOR

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1)

Dr. Amrico Castro Luna

Qumico Farmacutica; 2Facultad de Farmacia y Bioqumica-UNMSM

Coral M., Jurez J., Bravo G.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14

aos 2002 -2006.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14

Calidad de productos farmacuticos y afines pesquisados por DIGEMID

35% 988 65% 1855

Ao 197 172 56 29 10 7 6 2 1 5 280 139 19 60 39 13 568 17 17 11 21 75 9 1 5 5 7

Figura 1. Resultados de las Pesquisas

2006 214 20 66 67 16 787 Otros 1 2 0 0 4 1 10 1 1 6

Total 1261 847 289 256 35 52 10 24 7 62

Producto Biolgico Producto Sanitario Total Ao

2843 Total 529 485 2843 568 787 474

Coral M., Jurez J., Bravo G.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14

13,72 4,45 3 787

Sin R.S. ** 474

* Forma de presentacin no autorizada

2005 Conforme 167 S 211 6 No 113 3 68

2006 Conforme 203 S 342 14 No 147 7 74

Total 1112 1652 75

Calidad de productos farmacuticos y afines pesquisados por DIGEMID

Procedencia de los productos evaluados

Coral M., Jurez J., Bravo G.

Ciencia e Investigacin 2009; 12(1): 9-14

Manuscrito recibido el: 13/11/2009 Aceptado para su publicacin el: 07/01/2010

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE E INMUNOLGICA DE FLAVONOIDES AISLADOS DE HOJAS DE Smallanthus sonchifolius (YACN)