Moscas transgnicas de laboratorio Introduccin Bienvenido al Laboratorio Virtual de moscas transgnicas.

El laboratorio le permitir familiarizarse con la ciencia y las tcnicas utilizadas para hacer las moscas transgnicas. Los organismos transgnicos, que contienen ADN que se inserta experimentalmente, se utilizan para estudiar muchos procesos biolgicos. En este laboratorio, se crear una mosca transgnica para estudiar los ritmos circadianos. (Haga clic aqu para ms informacin sobre el diseo experimental.) Se ilumina slo cuando la mosca un gen involucrado en los ritmos circadianos se activa. Despus de hacer la mosca brillante, que va a utilizar para explorar los principios bsicos de la biologa circadiana y la gentica. Maestros: Haga clic aqu para obtener ms informacin acerca de cmo este ejercicio se puede utilizar en sus clases. Pasos bsicos 1. Haga moscas transgnicas. Preparar ADN que se incorporarn en el genoma de la mosca. Preparar embriones de la mosca. Inyectar vuelan embriones con ADN. Las moscas de la raza. Seleccione progenie transgnica. Examine la salida de luz de los adultos transgnicos. El gen de la poca es un componente clave del reloj molecular de la mosca (Bargiello, et al, 1984;. Darlington et al 1998;. Apuesta-Smith, y Kay, 2000; Young 2000). El perodo (o por) la transcripcin y traduccin del gen de oscilar en un patrn regular que tiene un perodo de 24 horas. Una mutacin en este gen da lugar a una mosca con un perodo alterada; el perodo nombre fue dado por lo tanto, para este gen (Konopka y Benzer 1971). (Haga clic aqu para ms informacin sobre el descubrimiento del gen de la poca.) Este patrn predecible es aprovechada en los experimentos aqu para proporcionar una ventana a cmo las molculas del reloj cambiar. En concreto, parte del gen perodo est relacionada con el gen de luciferasa (por-LUC) de tal manera que cada vez que el gen perodo es "activado", la luz se produce en las clulas donde transcripcin perodo gen est ocurriendo (Brandes et al. 1996). Este elegante modelo que nos permite observar los cambios en los genes simplemente mirando el resplandor de estas moscas transgnicas.

2. Use moscas transgnicas para estudiar los ritmos circadianos y la gentica. Mida por la expresin del gen luc (es decir, la emisin de luz) bajo diferentes condiciones de luz-oscuridad. Examinar diferentes partes del cuerpo de la mosca por Luc expresin.

Objetivos de Aprendizaje Comprender cmo la tecnologa del ADN recombinante se utiliza para producir moscas transgnicas. Use la produccin de luz como un marcador externo de internos eventos moleculares. Explora la relacin entre los genes y el comportamiento. Entender cmo los organismos transgnicos se puede utilizar para explorar los procesos biolgicos complejos. Aprender que todos los organismos contienen un reloj interno molecular que regula los ritmos diarios. A lo largo de cada ejercicio, esta ventana mostrar informacin que explique lo que est haciendo. Todas las interacciones, sin embargo, se llevar a cabo dentro de la ventana interactiva a la izquierda. La pequea caja gris debajo de la ventana interactiva le dar instrucciones especficas sobre lo que hacer clic en los objetos. Ms informacin acerca de cmo este ejercicio se puede utilizar en sus clases Este ejercicio de laboratorio virtual se puede utilizar como un suplemento a su plan de estudios existente o como un pre-laboratorio para experimentos relacionados con los que se ilustran en el laboratorio. Hay preguntas de la prueba incrustados en el laboratorio. Estas pruebas, diseado para promover la comprensin del usuario, puede utilizarse de varias maneras. Los estudiantes pueden optar por presentar respuestas a los cuestionarios, o puede pasar por alto las preguntas. Si usted, el maestro, quisiera asegurar que las preguntas del examen han sido contestadas, usted puede pedir a sus estudiantes para imprimir sus respuestas. El laboratorio se centra en la produccin de moscas transgnicas que contienen el promotor perodo adyacente al gen informador de luciferasa. Sin embargo, las tcnicas ilustradas en este laboratorio virtual puede ser utilizado para insertar diferentes tipos de construcciones de ADN. Usted puede optar por ampliar el laboratorio por tener a sus alumnos simular la produccin de otros tipos de moscas transgnicas. Usted puede investigar otros genes implicados en los ritmos circadianos, como el gen de la eterna para el que Tim-luc construcciones se han hecho (Stanewsky et al., 1998). Los estudiantes pueden comparar los datos de tim-luc con la de los datos per-luc. Los maestros tambin se puede adaptar este laboratorio para estudiar los genes importantes en una amplia gama de funciones biolgicas. Los investigadores utilizan regularmente las bases de datos de secuencias moleculares de biologa para muchos propsitos, incluyendo el diseo de las construcciones utilizadas en la creacin de organismos transgnicos. Incrustado en el laboratorio (Parte 1: Preparar ADN) es un breve tutorial sobre el uso de algunos recursos clave disponibles a travs del Centro Nacional de Informacin Biotecnolgica (NCBI) en el Instituto Nacional de Salud (NIH). Los estudiantes utilizan estos recursos en el contexto de este laboratorio virtual para confirmar que la secuencia en la construccin que se utiliza es de hecho a partir del promotor por. Es posible que desee ampliar sus exploraciones de los estudiantes de biologa molecular de los recursos siguiendo los enlaces a los sitios de educacin NCBI.

Adems de aprender sobre los recursos disponibles NCBI, sus estudiantes pueden aprender sobre el gen en los seres humanos por los humanos y las relaciones de los trastornos circadianos biologa (ver http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Class/MLACourse/Modules/cover_circadian_exercises. html). Este ejercicio gua a los estudiantes a travs del desarrollo y el anlisis de los problemas de investigacin basados en hiptesis. Los estudiantes seleccionan y poner a prueba una hiptesis mediante la realizacin de experimentos virtuales y anlisis de datos. Las tablas de datos se han completado y puede ser impreso y entregado a un instructor. Tras el anlisis de los datos, los estudiantes se les hace preguntas acerca de sus resultados y les pidi que evaluaran su hiptesis. Los ejercicios enfatizan la importancia del anlisis y la interpretacin, aun cuando la hiptesis resulta ser incorrecta. El laboratorio tambin puede ser un punto de partida para discutir temas relacionados con la biotecnologa. Qu normas son los investigadores deben seguir cuando la produccin de organismos genticamente modificados? Debera haber normas menos o ms? Qu pasara si una de las moscas brillantes fue liberado accidentalmente en la naturaleza? Especialmente cuando el laboratorio virtual se utiliza como un ejercicio que precede experimentos reales de laboratorio, diferentes pasos puede ser discutido con ms detalle. Por ejemplo, en la parte 5, cuando las moscas estn siendo ordenados, unas cuantas moscas despertar y volar lejos de la platina del microscopio. Qu podra hacerse para mantener las moscas anestesiadas por un perodo ms largo? Un anestsico diferente, tal como ter, podra ser utilizado. O bien, el escenario podra ser re-diseado de manera que los flujos de CO2 en un compartimiento debajo de la etapa de clasificacin, espantaba las moscas anestesiadas. Parte 1: Preparar ADN que se incorporarn en el genoma de la mosca Paso 1: ADN Una gran cantidad de investigacin y experimentacin se requieren para preparar correctamente el ADN que se inyecta en la Drosophila (mosca de la fruta) embriones. En este laboratorio, un colega ya ha utilizado las tcnicas de biologa molecular para disear la construccin de ADN. Pequeos segmentos de ADN, cada uno con una funcin crtica, se empalman entre s para formar la construccin de ADN.

Haga clic aqu para obtener ms informacin sobre los detalles tcnicos de la preparacin de ADN y los requisitos para una adecuada integracin del ADN en el genoma de Drosophila. Haga clic aqu para realizar un anlisis de la secuencia de la construccin de ADN para confirmar que contiene la secuencia promotora por.

Paso 2: Vidrio de relleno aguja de inyeccin Ahora, la solucin de ADN deben ser cuidadosamente insertado en una aguja de vidrio. La fabricacin de esta aguja es en realidad un paso crtico en el xito o el fracaso del experimento. Haga clic aqu para obtener ms informacin sobre la fabricacin de una aguja de vidrio. La aguja que contiene la solucin de ADN se une a un tubo conectado a una bomba. La bomba regula cuidadosamente cuando la solucin de ADN se expulsa en el embrin. La aguja se fija en un micromanipulador con controles que le permitirn mover la aguja en incrementos muy pequeos en la posicin correcta. Construir y transposasa fuentes de ADN Las enzimas de restriccin se utilizan para cortar la mosca fuego secuencia de ADN que codifica para la luciferasa (LUC) enzima, resultando en una secuencia de ADN de 2,7 kb luciferasa enzima. Ms informacin sobre la LUC El promotor por (PER) se asla y corte de Drosophila (mosca no fuego) de ADN, resultando en un segmento de 4,2 kb de la secuencia de promotor por. Ms informacin sobre PER La secuencia de ADN mini-blanco se corta a partir de un segmento diferente de Drosophila ADN. Ms informacin sobre la mini blanco Drosophila ADN (elemento P) se corta y se separa en la enzima transposasa ayudante y dos segmentos cortos de ADN (P) que facilitan la integracin de este constructo artificial en el genoma de la mosca. Ms informacin sobre los elementos P Reordenamiento: Los segmentos de ADN se reordenan en el orden correcto, se ligaron juntos, y se inserta en un vector de plsmido circular. Tenga en cuenta que su PER es de aguas arriba (a la izquierda) de la LUC. PER (el promotor) se regulan la expresin de LUC. ADN transposasa tambin se lig en un vector de plsmido circular. Ms informacin sobre los detalles tcnicos de la preparacin de ADN y los requisitos para una adecuada integracin del ADN en el genoma de Drosophila PER y LUC Todo el ADN est contenido dentro de un vector de ADN circularizado. La secuencia del promotor del gen perodo es adyacente a la secuencia de ADN que codifica para el gen de la luciferasa. En la celda de la derecha y en el momento correcto, la activacin de la secuencia promotora se traducir en la transcripcin y la traduccin de la protena

luciferasa, y la enzima luciferasa activo se producir. (La secuencia codificante del gen perodo-que produce perodo no ARNm-est presente en el vector.) Pero cmo puede obtener estas secuencias en los genes de la mosca? P elementos Fly los genetistas descubrieron que ciertas secuencias de ADN llamados elementos P puede "saltar" en el genoma de la mosca (Spradling y Rubin, 1982). Y si los elementos de P estn en los extremos de una secuencia de ADN, la secuencia va a llegar para el paseo y salto con los elementos P en una localizacin cromosmica aleatoria. La construccin de ADN, por lo tanto, tiene dos secuencias ms esenciales: elementos P se encuentran en cada extremo del promotor por / secuencias luciferasa. Cada uno de estos segmentos de ADN se unen en el laboratorio utilizando enzimas de restriccin que son las principales herramientas de la biologa molecular de cortar y pegar. mini blanco La construccin de ADN incluye un dispositivo ms inteligente. Cmo sabremos si el ADN se ha hecho insertado en el genoma de la mosca? Otro segmento de ADN est incluido en la construccin de ADN. Esta secuencia contiene un gen que confiere el rasgo de ojos rojos. Los embriones utilizados para la inyeccin normalmente se desarrollan los ojos en blanco. Sin embargo, si estos embriones incorporan el nuevo ADN y pasar el gen a sus descendientes, los descendientes tengan los ojos rojos. En la siguiente generacin, el ADN se inyecta en realidad se traducir en un cambio en el aspecto exterior de los ojos de la mosca. Por lo tanto, la inclusin de este gen, denominado mini-blanco, nos permite comprobar el color de ojos para determinar si el nuevo gen se ha incorporado. Al igual que muchos genes, el gen es en realidad el nombre de la mutacin que permiti el descubrimiento del gen. El mutante tiene ojos blancos, con lo que el gen se denomina el gen blanco. La secuencia que utilizamos es una secuencia abreviada, de ah el nombre de mini-blanco. El gen de mini-blanco contiene los elementos clave del gen blanco, pero en una forma condensada para que quepa en un plsmido. La construccin de ADN final contiene las siguientes secuencias en este orden:

Transposasa Una ltima dificultad tcnica sigue siendo. Los elementos P slo se integran en el genoma en la presencia de la transposasa enzima es decir, los elementos P son el ADN diana para la enzima transposasa. Las moscas utilizadas en estos experimentos no tienen esta enzima. Un vector transposasa separado contiene el gen que codifica para esta enzima. El ARNm transposasa se transcribe a partir de ADN contenido en el vector transposasa, y traducirse en transposasa. La enzima transposasa permitir la construccin de vector para integrarse en el genoma de la mosca. Sin embargo, el gen de transposasa no est flanqueado por los elementos P, por lo que no se integra en el genoma de la mosca. Se hace su trabajo de produccin de transposasa, pero no se volvi a ver en las generaciones futuras (Engels, 1996;. Fujioka et al 2000).

Parte 1: Preparar ADN que se incorporarn en el genoma de la mosca Paso 1: ADN Una gran cantidad de investigacin y experimentacin se requieren para preparar correctamente el ADN que se inyecta en la Drosophila (mosca de la fruta) embriones. En este laboratorio, un colega ya ha utilizado las tcnicas de biologa molecular para disear la construccin de ADN. Pequeos segmentos de ADN, cada uno con una funcin crtica, se empalman entre s para formar la construccin de ADN.

Haga clic aqu para obtener ms informacin sobre los detalles tcnicos de la preparacin de ADN y los requisitos para una adecuada integracin del ADN en el genoma de Drosophila. Haga clic aqu para realizar un anlisis de la secuencia de la construccin de ADN para confirmar que contiene la secuencia promotora por.

Paso 2: Vidrio de relleno aguja de inyeccin Ahora, la solucin de ADN deben ser cuidadosamente insertado en una aguja de vidrio. La fabricacin de esta aguja es en realidad un paso crtico en el xito o el fracaso del experimento. Haga clic aqu para obtener ms informacin sobre la fabricacin de una aguja de vidrio. La aguja que contiene la solucin de ADN se une a un tubo conectado a una bomba. La bomba regula cuidadosamente cuando la solucin de ADN se expulsa en el embrin. La aguja se fija en un micromanipulador con controles que le permitirn mover la aguja en incrementos muy pequeos en la posicin correcta.

Ms informacin sobre los detalles tcnicos de la preparacin de ADN y los requisitos para una adecuada integracin del ADN en el genoma de Drosophila Todo el ADN experimental para ser integrado en el genoma de la mosca est contenida dentro de un vector de ADN circularizado. La secuencia del promotor del gen perodo es adyacente a la secuencia de ADN que codifica para el gen de la luciferasa. En la celda de la derecha y en el momento correcto, la activacin de la secuencia promotora se traducir en la transcripcin y la traduccin de la protena luciferasa, y la enzima luciferasa activo se producir. (La secuencia codificante del gen perodo-que produce perodo no ARNmest presente en el vector). Pero, cmo puede entrar en estas secuencias de genes de la mosca?

Fly los genetistas descubrieron que ciertas secuencias de ADN llamados elementos P puede "saltar" en el genoma de la mosca (Spradling y Rubin, 1982). Y si los elementos de P estn en los extremos de una secuencia de ADN, la secuencia va a llegar para el paseo y salto con los elementos P en una localizacin cromosmica aleatoria. La construccin de ADN, por lo tanto, tiene dos secuencias ms esenciales: elementos P se encuentran en cada extremo del promotor por / secuencias luciferasa. Cada uno de estos segmentos de ADN se unen en el laboratorio utilizando enzimas de restriccin y ligasas que son las principales herramientas de la biologa molecular de cortar y pegar. La construccin de ADN incluye un dispositivo ms inteligente. Cmo sabremos si el ADN se ha hecho insertado en el genoma de la mosca? Otro segmento de ADN est incluido en la construccin de ADN. Esta secuencia contiene un gen que confiere el rasgo de ojos rojos. Los embriones utilizados para la inyeccin normalmente se desarrollan los ojos en blanco. Sin embargo, si estos embriones incorporan el nuevo ADN y pasar el gen a sus descendientes, los descendientes tengan los ojos rojos. En la siguiente generacin, el ADN se inyecta en realidad se traducir en un cambio en el aspecto exterior de los ojos de la mosca. Por lo tanto, la inclusin de este gen, denominado mini-blanco, nos permite comprobar el color de ojos para determinar si el nuevo gen se ha incorporado. Al igual que muchos genes, el gen es en realidad el nombre de la mutacin que permiti el descubrimiento del gen. El mutante tiene ojos blancos, con lo que el gen se denomina el gen blanco. La secuencia que utilizamos es una secuencia abreviada, de ah el nombre de mini-blanco. El gen de mini-blanco contiene los elementos clave del gen blanco, pero en una forma condensada para que quepa en un plsmido. La construccin de ADN final contiene las siguientes secuencias en este orden:

Una ltima dificultad tcnica sigue siendo. Los elementos P slo se integran en el genoma en la presencia de la enzima transposasa, es decir, los elementos P son el ADN diana para la enzima transposasa. Las moscas utilizadas en estos experimentos no tienen esta enzima. Un vector transposasa separado contiene el gen que codifica para esta enzima. El ARNm transposasa se transcribe a partir de ADN contenido en el vector transposasa y traducida a transposasa. La enzima transposasa permitir la construccin de vector para integrarse en el genoma de la mosca. Sin embargo, el gen de transposasa no est flanqueado por los elementos P, por lo que no se integra en el genoma de la mosca. Se hace su trabajo de produccin de transposasa, pero no se volvi a ver en las generaciones futuras. (Engels, 1996;. Fujioka et al 2000).
Perform a sequence analysis of the construct DNA to confirm that it contains the per promoter sequence
You realize the importance of confirming that the construct DNA that your colleague has given you does indeed contain the correct sequence of the per promoter. The success of this

experiment and all follow-up experiments depends on the original construct DNA containing the correct sequences. You request that a commercial laboratory sequence the construct DNA. Two days later, the laboratory sends you an e-mail that contains the following sequence. Click here to view part of the lab's results. The National Center for Biotechnology Information (NCBI) collects sequence data from researchers around the world. Tools that allow researchers to search these databases can be accessed at this site. The genomes of many organisms, including Drosophila melanogaster (fruit fly), have been completely sequenced, and maps of the entire genomes are available. Follow the steps below to confirm that the sequence (above) in the construct DNA is from the per promoter. In addition, use the Map Viewer tool to graphically display the per promoter sequence at the 5' end of the Drosophila per gene.

A. Confirm that the construct DNA sequence is from the per gene. 1. Click here to go to the NCBI homepage. 2. In the blue menu bar at the top of the page, click on BLAST, a tool that compares a sequence to a large database of other sequences. 3. At the BLAST homepage under the section "Basic Blast" select "nucleotide blast" (or click here). 4. Copy the sequence (PC: ctrl-c; Mac: cmd-c). 5. Paste your data (ctrl-v on the PC or cmd-v on the Mac) in the box labeled "Enter accession number, gi, or FASTA sequence," in the "Enter Query Sequence" near the top of the page. In the "Choose Search Set" section, Database: "Others (nr etc.)," "Nucleotide collection (nr/nt)". In the "Program Selection" section, select "Somewhat similar sequences (blastn)" 6. Click BLAST! (If you have difficulty obtaining results, click here to see an abbreviated list of results from this BLAST search.) Results show a list of many sequences that researchers and sequencing centers have submitted that contain the sequence in the construct DNA used in this lab. The graphic represents our 4200 bases long construct DNA sequence as a horizontal map. Any sequence in the database that shows a match to our construct DNA is represented as a colored horizontal line. Red means a good match, green a moderate match and black a poor match. The lengths and the horizontal positions of the lines represents where the matches occur to our construct DNA. For example, the first red horizontal line that spans the entire length of our construct DNA is AE014298.4 "Drosophila melanogaster chromosome X, complete sequence". It is at the top of the list, and was submitted by a large sequencing center as part of the effort to sequence the entire Drosophila genome. It contains the "Drosophila melanogaster chromosome X section 9 of 74 of the complete sequence," which includes the promoter region of the Drosophila period gene. Further down the list are sequences that were submitted to GenBank by individual research laboratories. Notice record M30114.1 "D.melanogaster biological clock protein (per) gene, complete cds." Graphically, it is represented as a short red line in the far right section of the graphic, six lines down. This sequence, M30114.1 "D.melanogaster biological clock protein (per) gene, complete cds," contains the complete coding sequence (cds) of the per gene (Citri et al. 1987). It has a lower matching score than AE014298.4, but that is because there is only a small overlap between our construct DNA and M30114.1. The parts that overlap (a small region of the promoter) match very well, represented by the red color. M30114.1 Scrolling down the BLAST results page to the alignment view for M30114.1 note that the last 178 bases of the 4.2 kb promoter region overlap with the first 178 bases of the per gene sequence. B. Use Map Viewer to graphically see that the construct DNA sequence is at the 5' end (promoter region) of the per gene.

1. Click here to go to BLAST. In this case, only the Drosophila melanogaster sequence database will be used. 2. Copy the sequence (PC: ctrl-c; Mac: cmd-c) 3. Paste (PC: ctrl-v; Mac: cmd-v) the sequence in the box labeled "Enter an accession, gi, or a sequence in FASTA format:" 4. Click the "Begin Search" button. 5. On the Format Request page, click the "View Report" button. 6. On the Results of BLAST page, click the "Genome View" button to see a map of this portion of the X chromosome of Drosophila melanogaster. 7. Click on the "X" beneath the X chromosome. 8. The Map View is a representation of a small part of the X chromosome. On the left, the horizontal line in the ideogram represents where you are. Click on "Maps & Options" button to adjust the view as follows. From the "Maps Displayed" box select "[ ] Ab initio" and click the "<<REMOVE" button then select "[ ] RefSeq Transcripts" and click the "<<REMOVE" button. 9. Then select "[ ] Gene" and click on "Make Master/Move to Bottom" button. Click "Apply" to activate these changes. 10. If the window does not automatically close, click the "Close" button. 11. On the Map View page, adjust the numbers in the "Region Shown" boxes (in left sidebar) to 2575K to 2585K, then click "Go." The Map View shows a linear representation of the X chromosome DNA as vertical lines. In the picture on the left labeled "Ideogram," the horizontal line shows the location of the current section of DNA on the chromosome. On the map, the left vertical line with the label "Contig" on top, shows the sequence we have just submitted as a red line. The right vertical line is a gene map of the region. Towards the bottom, you can see the per gene. To the right of label "per," the Map Viewer shows an arrow pointing downward, indicating the 5' end of the gene is at the top of the per gene schematic while the 3' end is at the bottom. Observe that the sequence used in the construct (and used in the BLAST search: red line), is just upstream of the 5' end of the per gene.

Ms en la fabricacin de una aguja de vidrio La mayora de los cientficos a explicar que hacer una aguja de cristal es ms un arte que una ciencia. Un pequeo tubo capilar de vidrio se coloca en un extractor de aguja. El extractor de aguja se calienta el tubo capilar, mientras que simultneamente tirando del tubo termina en direcciones opuestas. Extremadamente delgado, consejos vidrio filoso resultado. La punta est biselada entonces en una mquina especial que se asemeja a un reproductor de discos, ms afilado de la punta de la aguja.

Parte 1: Prueba 1. En este experimento, el gen reportero una. dice que el experimentador exactamente la cantidad de la protena nativa fue producido b. cambia el color de los ojos de las moscas c. debe ser del mismo tipo de organismo como el organismo en el que est siendo transferido

d. est diseado para ser fcilmente detectado y reflejan la actividad del gen nativo

2. Despus de la incorporacin con xito en el genoma de una mosca, la construccin de ADN se una. cambiar las funciones del gen nativo por b. hace que los ojos de color blanco c. reflejan la actividad transcripcional sin interferir con las funciones d. alterar el reloj biolgico

3. Ambos lucirnagas y por Luc Drosophila transgnica una. se puede ver al aire libre, que brillan intensamente en la oscuridad b. producir la enzima luciferasa c. utilizar su brillo para atraer a compaeros d. son producidos experimentalmente

4. Cul de los siguientes secuencias de ADN no se encuentra en la "construccin de ADN?" una. transposasa b. luciferasa c. periodo promotor del gen d. elemento P

Parte 1: respuestas al cuestionario, 1. En este experimento, el gen reportero una. dice que el experimentador exactamente la cantidad de la protena nativa fue producido b. cambia el color de los ojos de las moscas c. debe ser del mismo tipo de organismo como el organismo en el que est siendo transferido d. est diseado para ser fcilmente detectado y reflejan la actividad del gen nativo

Corrija! Su respuesta: D

una. INCORRECTO. Los niveles de protena nativa (en este caso, la protena endgena perodo) no se inform por el gen reportero. b. INCORRECTO. El gen reportero en este experimento es luciferasa, que produce la luz en cantidades proporcionales a la actividad transcripcional del promotor por. El gen marcador mini-blanco es responsable del color de ojos rojos en las moscas que han incorporado el constructo de ADN. c. INCORRECTO. Reportero genes pueden provenir de muchas fuentes. Por ejemplo, el gen de la luciferasa de lucirnaga se ha insertado en las plantas, y el gen para la protena medusa fluorescente verde se ha insertado en ratones. d. CORREGIR. Reportero genes estn diseados para ser fciles de medir y cuantificar, ya sea visualmente o por las mquinas.

2. Despus de la incorporacin con xito en el genoma de una mosca, la construccin de ADN se una. cambiar las funciones del gen nativo por b. hace que los ojos de color blanco c. reflejan la actividad transcripcional sin interferir con las funciones d. alterar el reloj biolgico

Corrija! Su respuesta: C

c. CORREGIR. La mosca transgnica se espera que tenga la actividad normal del gen, y por un reloj biolgico normal. Dos diferencias se producen como resultado de la incorporacin: la mosca transgnica tiene ojos rojos y por la actividad transcripcional se informa como emisiones de luz. a, b, y d. INCORRECTO. La mosca transgnica se espera que tenga la actividad normal del gen, y por un reloj biolgico normal. Dos diferencias se producen como resultado de la incorporacin: la mosca transgnica tiene ojos rojos y por la actividad transcripcional se informa como emisiones de luz.

3. Ambos lucirnagas y por Luc Drosophila transgnica

una. se puede ver al aire libre, que brillan intensamente en la oscuridad b. producir la enzima luciferasa c. utilizar su brillo para atraer a compaeros d. son producidos experimentalmente

Corrija! Su respuesta: B

una. INCORRECTO. Incluso uno se escap transgnico Drosophila no brillara lo suficiente como para ser visible a simple vista. b. CORREGIR. Ambos producen la enzima luciferasa. El brillo natural de las lucirnagas es visible a los seres humanos. Sin embargo, el brillo transgnico Drosophila slo cuando el producto qumico luciferina, el sustrato para la luciferasa, se proporciona en su dieta. c. INCORRECTO. Lucirnagas utilizar su brillo para atraer a compaeros, pero no lo hacen de forma natural Drosophila resplandor. d. INCORRECTO. Drosophila puede ser diseado en el laboratorio a brillar. Lucirnagas tienen la capacidad natural para brillar. Algunos laboratorios de investigacin hacen las lucirnagas de estudio para comprender los procesos qumicos responsables de la bioluminiscencia.

4. Cul de los siguientes secuencias de ADN no se encuentra en la "construccin de ADN?" una. transposasa b. luciferasa c. periodo promotor del gen d. Elemento P

Corrija! Su respuesta: una

una. CORREGIR. Transposasa se encuentra en el vector de ADN transposasa no, en la construccin de ADN. b, c, y d. INCORRECTO. Todos se encuentran en el vector de ADN constructo

Parte 2: Preparacin de embriones para la inyeccin Otro paso crtico en la fabricacin de moscas transgnicas es que el ADN debe ser inyectado en embriones que tienen menos de 30 minutos de edad. Por qu? Las clulas que se convertirn en clulas germinales en la parte posterior del embrin de la mosca an no estn diferenciadas y pueden incorporar un nuevo ADN. Haga clic aqu para conocer ms acerca del desarrollo de la mosca temprano. El macho adulto y de la fruta hembra vuela su compaero con regularidad, y las hembras ponen los huevos en el fondo de los frascos cilndricos. Se va a recoger estos embriones muy jvenes y, utilizando un microscopio de diseccin, orientarlos sobre un portaobjetos de manera que el extremo posterior de todos los puntos de embriones en la misma direccin Una clula germinal es una clula destinada a convertirse en un espermatozoide o un vulo. Las clulas germinales se encuentran en la regin posterior del embrin de la mosca. El ADN inyectado se integra aleatoriamente en el ADN de todas las clulas de la mosca. Para aumentar las posibilidades de integracin en las clulas germinales, la construccin de ADN se inyecta en la regin posterior del embrin. Si hay xito de la integracin del ADN en las clulas germinales, a continuacin, cuando el embrin inyectado crece en un adulto, tendr clulas germinales que contienen la construccin de ADN. Despus del apareamiento, esta mosca puede producir una progenie resultante de las clulas germinales que contienen la construccin de ADN. Estos progenie contendr la construccin de ADN en todas las clulas

Parte 2: Preparacin de embriones para la inyeccin Otro paso crtico en la fabricacin de moscas transgnicas es que el ADN debe ser inyectado en embriones que tienen menos de 30 minutos de edad. Por qu? Las clulas que se convertirn en clulas germinales en la parte posterior del embrin de la mosca an no estn diferenciadas y pueden incorporar un nuevo ADN. Haga clic aqu para conocer ms acerca del desarrollo de la mosca temprano. El macho adulto y de la fruta hembra vuela su compaero con regularidad, y las hembras ponen los huevos en el fondo de los frascos cilndricos. Se va a recoger estos embriones muy jvenes y, utilizando un microscopio de diseccin, orientarlos sobre un portaobjetos de manera que el extremo posterior de todos los puntos de embriones en la misma direccin.

. Por qu es importante controlar la edad de los embriones de la mosca? una. Las membranas celulares se forman alrededor de cada ncleo en la masa de clulas multi-nucleadas embrionario en aproximadamente 30-60 minutos. b. Las clulas germinales pueden incorporar ADN antes de la diferenciacin, que comienza cuando el embrin es de aproximadamente 30-60 minutos de vida. c. Los embriones mayores de 30-60 minutos no incorporan el ADN y se diluye el nmero de moscas con xito inyectados. d. Todo lo anterior.

2. Un experimental til por-luc mosca transgnica se produce una. cuando el embrin de la mosca inyectado se convierte en un adulto b. en toda la descendencia de un embrin inyectado que ha crecido hasta la edad adulta c. en slo unos pocos de los descendientes de una inyeccin de clulas embrionarias germinales que contienen que han incorporado el ADN inyectado d. Ninguna de las anteriores.

Parte 3: Inyectar embriones de la mosca con el ADN Ahora va a inyectar a los embriones con el ADN que se coloca dentro de la aguja de inyeccin de vidrio. Muchos embriones son inyectados, pero muy pocos sobrevivirn. Con la ayuda de equipo especializado, se inyecta el ADN en el extremo posterior de los embriones. El extremo anterior contiene el aparato respiratorio, llamado la trquea. Se parece a dos antenas. Se requiere habilidad para inyectar a los embriones de forma precisa y eficiente. Los embriones pueden secarse y morir si el procedimiento toma mucho tiempo. Embriones inyectados se colocan cuidadosamente en una "guardera" frasco, donde se convierten en adultos Ms sobre la supervivencia de los embriones de baja y los errores de inyeccin Inyeccin de un embrin es un procedimiento inexacto. La aguja debe ser extremadamente fuerte y delgada para penetrar en el embrin. El ADN debe entrar en el ncleo de las clulas correctas (los precursores de las clulas germinales). Aun cuando la aguja entra en el lugar correcto en el embrin, un dao considerable para el embrin se produce. La membrana embrionaria exterior se rompe y el citoplasma puede salir. La supervivencia del embrin depende de la reparacin de la membrana y la compensacin por la prdida de fluido. Muy poco ADN y hay pocas posibilidades de ADN para ser incorporado; demasiada solucin y el embrin puede explotar. Por otra parte, a pesar de que se trat de obtener embriones de menos de 30 minutos de edad, algunas clulas pueden haber madurado, y el ADN no se han incorporado. Despus de la inyeccin, los investigadores suelen examinar el estado de desarrollo de los embriones inyectados. Si parecen demasiado maduras, son destruidos. En un experimento tpico, alrededor del

10% de las moscas inyectadas tener descendencia que contienen la ". Progenie transformante" ADN-stas se llaman

Parte 3: Prueba 1. Inyectado embriones de la mosca no sobreviven a todas las razones a continuacin, excepto una. lquidos debido a una herida en el sitio de inyeccin de la prdida de b. inyeccin de lquido en exceso, causando embrin a punto de estallar c. embrin es demasiado joven para tolerar la inyeccin d. embrin se convierte en demasiado seco

2. Si la inyeccin de las moscas con la construccin de ADN, cul de los siguientes pasos le ayudar a aumentar las posibilidades de que la progenie transgnica se producen? una. Inyectar un gran volumen de solucin de ADN. b. Inyectar muchos embriones. c. Inyectar en la membrana embrionaria externa. d. Destruye todos los embriones ms viejos

Parte 3: respuestas al cuestionario, 1. Inyectado embriones de la mosca no sobreviven a todas las razones a continuacin, excepto una. lquidos debido a una herida en el sitio de inyeccin de la prdida de b. inyeccin de lquido en exceso, causando embrin a punto de estallar c. embrin es demasiado joven para tolerar la inyeccin d. embrin se convierte en demasiado seco

Incorrecto. Su respuesta: D La respuesta correcta es la C

c. CORREGIR. Los ms pequeos embriones de hecho tolerar el procedimiento mejor que los mayores embriones. a, b, y d. INCORRECTO. Prdida excesiva de lquidos, la inyeccin de solucin de ADN demasiado tal que la clula explota y embriones de secado a cabo todo puede resultar en la muerte del embrin.

2. Si la inyeccin de las moscas con la construccin de ADN, cul de los siguientes pasos le ayudar a aumentar las posibilidades de que la progenie transgnica se producen? una. Inyectar un gran volumen de solucin de ADN. b. Inyectar muchos embriones. c. Inyectar en la membrana embrionaria externa. d. Destruye todos los embriones ms viejos.

Corrija! Su respuesta: B

una. INCORRECTO. Inyectar un volumen demasiado importante de la solucin de ADN har que el embrin a explotar, como se ilustra en la ventana interactiva si el botn del ratn se hace clic en ms de una vez. b. CORREGIR. Inyectando muchos embriones aumentar la probabilidad de que la progenie transgnica se producen. Sin embargo, la inyeccin debe ocurrir en una ventana de tiempo especfico durante el desarrollo embrionario, lo que limita el nmero de embriones que se pueden inyectar a la vez. c. INCORRECTO. La aguja debe penetrar todas las membranas embrionarias y entrar en la regin interior del embrin donde las clulas se transforman en clulas germinales. d. INCORRECTO. El investigador puede destruir a los embriones ms viejos, debido a que estos embriones son demasiado viejos para incorporar el ADN inyectado en sus clulas. Este procedimiento limita el nmero de adultos con las clulas germinales no transgnicos, lo que reduce el nmero de ojos blancos y los no transgnicos para

clasificar en etapas posteriores. Sin embargo, este procedimiento no hace nada para mejorar la probabilidad de obtener progenie transgnica. Parte 4: moscas de la Raza Los embriones inyectados se han convertido ahora en blanco de ojos adultos en el matraz de la guardera. Algunos, pero no todos, de estos adultos tienen clulas germinales que contienen el transgn. Su tarea ahora consiste en acoplarse a estos adultos con los que no inyectados ojos blancos y moscas. Se espera que parte de la progenie resultante ser de transgnicos, es decir, la totalidad de sus clulas contiene el ADN por-luc. Adems, en slo la progenie transgnica, todas las clulas tambin contienen el gen que codifica para la enzima que da como resultado ojos rojos Parte 4: Concurso 1. Despus de completar un experimento de inyeccin transgnica, slo los ojos blancos resultado progenie. Cul de las siguientes situaciones podra explicar el resultado? una. Usted no se inyectan suficientes embriones. b. Usted rompi accidentalmente la aguja de vidrio y tuvo que sustituirlo por uno nuevo en el micromanipulador. Mientras tanto, los embriones continu desarrollndose, y todos eran ms de 60 minutos de edad cuando comenzaron las inyecciones. c. Todas las inyecciones se perdi las clulas germinales en la regin posterior de los embriones. d. Todo lo anterior.

2. Todos los embriones inyectados, que han crecido hasta la edad adulta tienen los ojos blancos. Ellos se acoplan con las moscas de tipo salvaje que tambin tienen los ojos blancos. Como es posible que algunos progenie tendr los ojos rojos? una. Moscas de ojos rojos contaminar el experimento. b. Hijos con los ojos rojos son el resultado de cruzamientos en los que la clula germinal de un padre contiene el transgn. c. Se produce una mutacin que produce enrojecimiento de los ojos. d. Hijos con ojos rojos se producen en las moscas se plantean en una oscuridad constante

Parte 4: respuestas al cuestionario, 1. Despus de completar un experimento de inyeccin transgnica, slo los ojos blancos resultado progenie. Cul de las siguientes situaciones podra explicar el resultado? una. Usted no se inyectan suficientes embriones. b. Usted rompi accidentalmente la aguja de vidrio y tuvo que sustituirlo por uno nuevo en el micromanipulador. Mientras tanto, los embriones continu desarrollndose, y todos eran ms de 60 minutos de edad cuando comenzaron las inyecciones.

c. Todas las inyecciones se perdi las clulas germinales en la regin posterior de los embriones. d. Todo lo anterior.

Corrija! Su respuesta: D

d. CORREGIR. Todo lo anterior. una. INCORRECTO. Incluso si se inyecta unos pocos embriones correctamente, todos estos embriones pueden morir. Una segunda posibilidad es que los embriones sobrevivientes pudieron haber sido inyectados con construccin de ADN, pero que el ADN no puede haber integrado en el ADN de los embriones. Ambas posibilidades podran resultar solamente en los ojos blancos descendientes. Por lo tanto, es importante para inyectar correctamente embriones tantos como sea posible. b. INCORRECTO. Todos los reactivos e insumos deben estar preparados de antemano para que los embriones pueden ser inyectada inmediatamente cuando son menos de 30 minutos de edad. c. INCORRECTO. Para obtener moscas de ojos rojos, el ADN debe ser inyectado en las clulas que se convertirn en clulas germinales, ubicado en el extremo posterior del embrin.

2. Todos los embriones inyectados, que han crecido hasta la edad adulta tienen los ojos blancos. Ellos se acoplan con las moscas de tipo salvaje que tambin tienen los ojos blancos. Como es posible que algunos progenie tendr los ojos rojos? una. Moscas de ojos rojos contaminar el experimento. b. Hijos con los ojos rojos son el resultado de cruzamientos en los que la clula germinal de un padre contiene el transgn. c. Se produce una mutacin que produce enrojecimiento de los ojos. d. Hijos con ojos rojos se producen en las moscas se plantean en una oscuridad constante.

Incorrecto. Su respuesta: una La respuesta correcta es la B

b. CORREGIR. Hijos con los ojos rojos son el resultado de cruzamientos en los que la clula germinal de un padre contiene el transgn. una. INCORRECTO. Estos experimentos se llevan a cabo bajo condiciones cuidadosamente controladas de tal manera que no es posible contaminacin. c. INCORRECTO. Una mutacin sera extremadamente raro. d. INCORRECTO. Condiciones de luz y oscuridad no influyen en el color de ojos

Parte 5: Seleccionar la progenie transgnica Los ojos rojos son la marca visible que le permite seleccionar las moscas transgnicas. Va a anestesiar a la progenie e identificar las moscas de ojos rojos y blancos de ojos. Durante casi un mes, este es el momento en que has estado esperando. Funcion el experimento? Si usted recibe cualquier moscas con ojos rojos, la respuesta es s. Si usted no tiene las moscas de ojos rojos, entonces el experimento ha fracasado, pero usted puede evaluar sus procedimientos y el experimento de nuevo.

Parte 6: Examine la salida de luz de los adultos transgnicos Conclusiones Ha creado las moscas que contienen un gen nuevo! Se han superado una serie de obstculos tcnicos y han aprendido a solucionar los experimentos para corregir errores. Felicitaciones! Los datos del anlisis grfico de las emisiones de luz demostrar que el pico de emisin de luz (y por lo tanto, la actividad transcripcional del promotor perodo) est en la mitad de la noche. La artesa, o nivel ms bajo, de las emisiones de luz se aproxima al final de da. Estas son las tendencias esperadas. Ahora, usted puede pasar a la siguiente parte de este proyecto de investigacin. Usted puede utilizar estas moscas genticamente modificadas para responder a las preguntas clave acerca de los relojes biolgicos

Experimento 1: Medida por Luc de expresin gnica, manteniendo las luces apagadas En la seccin anterior, se demostr que por luc moscas transgnicas tienen un patrn predecible de las emisiones de luz que refleja la actividad del gen de la cpita. Sin embargo, es posible que las oscilaciones en la expresin gnica se producen porque las moscas estn respondiendo al ciclo 12-hours-light/12-hours-dark que impone? No moscas y otros organismos dependen de fuentes externas de luz para mantener estos ritmos? Vamos a probar a estas preguntas. Su hiptesis Diarias de emisin de luz oscilaciones no ser detectado de las moscas mantienen en constante oscuridad. Mtodos 1. Durante 5 das, tenga en cuenta las emisiones de luz durante el ciclo de 12-hourslight/12-hours-dark normal (luces encendidas: 6:00 am a 6:00 pm, luces apagadas: 6:00 pm a 6:00 am). 2. El da 6, apagar las luces. 3. Medir las emisiones de luz en la oscuridad constante durante 5 das. Medio de los datos a partir de 20 moscas.