Curso Microbiologa II

Dominio Bacteria Clase III Bacilli Orden II Lactobacillales Familia I Lactobacillaceae II Aerococcaceae III Canobacteriaceae IV Enterococcaceae (pag 197) V Paenibacillaceae
(pag 200)

VI Streptococcaceae

Los microorganismos son Cocos grampositivos Catalasa negativa Tienden a desarrollarse, en pares y cadenas.

Caractersticas generales del gnero

Presentan forma esfrica u ovoidea. Son anaerobios facultativos hasta capnoflicas (su

requerimiento requiere dixido de carbono)

Son de 0.5 a 1.0 m Son inmviles.

Presentan metabolismo fermentativo. Son CATALASA (-) Son OXIDASA (-). Fueron descritos por primera vez por Billroth en 1874 en exudados de erisipela y heridas infectadas. El esquema de clasificacin serolgica fue desarrollado por Lancefield en 1933, para diferenciar las cepas hemliticas patgenas

En medios lquidos se presentan en cadenas. La proliferacin de los estreptococos se produce por elongacin del eje paralelo a la cadena

Los Streptococcus son parsitos de los vertebrados y habitantes de la boca y tracto respiratorio. Algunas especies son patgenas para el hombre y los animales.

ESPECIES: 1) Streptococcus beta-hemolticos Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis Streptococcus equi subsp. equi Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Streptococcus canis Grupo: Streptococcus anginosus Streptococcus constellatus subsp. pharyngis Streptococcus porcinus Streptococcus iniae Streptococcus phocae Streptococcus didelphis

2) Streptococcus no beta-hemolticos Streptococcus pneumoniae Grupo Streptococcus bovis S. bovis S. equinus S. gallolyticus S. infantarius S. pasteurianus S. lutetiensis Streptococcus suis Streptococcus vridans Grupo Streptococcus mutans Grupo Streptococcus salivarius Grupo Streptococcus anginosus Grupo Streptococcus sanguinis Grupo Streptococcus mitis

3) Otros cocos en cadenas Streptococcus acidominimis Streptococcus pluranimalium Streptococcus thoraltensis Streptococcus uberis Streptococcus parauberis Streptococcus urinalis Dolosicoccus paucivorans Facklamia y Ignavigranum ruoffiae Globicatella sanguinis

Especie Tipo Streptococcus pyogenes

Generalidades
Hbitat Mecanismos de patogenicidad Modo de transmisin Patologas Resistencia Tratamiento

Hbitat Muchos de los estreptococos son saprfitos que se encuentran en el medio ambiente. Otros se hallan como residentes en la boca, tracto respiratorio, piel y mucosas del hombre y de los animales. Algunos tienen la caracterstica de ser muy patgenos.

Mecanismos de patogenicidad
Varan segn las especies.

Estreptolisina O Estreptolisina S Proteina M Acido lipoteicico Cpsula Fibrinolisina (estreptocinasa) Hialuronidasa Estreptodornasa (desoxiribonucleasa) Toxina eritrognica

Mecanismos de patogenicidad
Hemolisinas Estreptolisina O dos enzimas

protena de PM 60.000, que se inactiva en presencia de oxgeno que cuando se determina y aparece un ttulo de antiestreptolisina O mayor a 160-200 unidades nos sugiere infeccin reciente por estreptococos
Estreptolisina S

protena que permanece estable en presencia de oxgeno. Su produccin es inducida por el suero y es el agente causal de las zonas hemolticas alrededor de las colonias.

Mecanismos de patogenicidad

Proteina M Es una molcula fibrilar con propiedades antifagocticas que se encuentra localizada en la superficie de los estreptococos del grupo A (existen ms de 80 serotipos diferentes). Esta protena interfiere sobre el depsito de C3 del Sistema Complemento, en la superficie de la bacteria.

Mecanismos de patogenicidad Acido lipoteicico Componente celular que acta mediando la adhesin de los estreptococos del grupo A en las clulas epiteliales.

Mecanismos de patogenicidad Cpsula Algunos estreptococos pueden formarla, variando su composicin qumica segn la especie (GAS: cido hialurnico) Otorga propiedades antifagocticas.

Mecanismos de patogenicidad Fibrinolisina (estreptocinasa) Esta sustancia transforma el plasmingeno del plasma humano en plasmina, una enzima proteoltica activa que digiere la fibrina y otras protenas. De esta manera pueden interferirse a los inhibidores inespecficos del suero.

Mecanismos de patogenicidad Hialuronidasa Enzima que desdobla el cido hialurnico, componente importante del tejido conectivo, permitiendo la propagacin de los microorganismos.

Mecanismos de patogenicidad Estreptodornasa (desoxiribonucleasa)

Enzima que despolimeriza el DNA presente en los exudados purulentos y que origina la viscosidad del pus.

Mecanismos de patogenicidad

Toxina eritrognica Incluye a las exotoxinas pirgenas denominadas A, B y C antignicamente diferentes y exclusivas de los estreptococos del grupo A.

Modos de transmisin

Cada sp. de Streptococcus tiene un sitio preferencial. En Amigdala y/o tonsilas habita S pyogenes en humanos, S equi en caballos, S. suis en cerdo. En el tracto genital habita S. zooepidemicus en yeguas, S. canis en perros.

Modos de transmisin Cada sp. de Streptococcus tiene un sitio preferencial. La glndula mamaria bovina es el nico sitio para S. agalacitae, mientras S. uberis y S. dysgalacitiae pueden encontrarse tambin en piel o en el tracto intestinal. En el Intestino delgado habita Streptococos fecalis, S. bovis, S fecum, y S. equinus,.

Patologas La mayor parte de los estreptococos patgenos de los animales y del hombre son hemolticos

Suelen estar asociados a enfermedades supurativas: abscesos, afecciones del tracto reproductor y respiratorio, lesiones de piel, entre otras

Patologas Lisogenia Todas las especies de estreptococos pueden presentar esta caracterstica, donde el rol de los bacterifagos suele desempear un papel importante para la sntesis de enzimas o toxinas. S. Pyogenes exotoxina A, denominada eritrognica (vinculada con la fiebre escarlatina y con el sndrome de choque txico estreptoccico) S. equi que elabora una hialuronidasa que hidroliza su cpsula.

Resistencia Resistencia a los agentes fsicos Son microorganismos muy sensibles a las variaciones de temperatura. Con materia orgnica pueden permanecer viables pocas horas a temperatura ambiente. Generalmente todas las especies mueren a 60 C durante 30 min.

Resistencia Resistencia a los agentes qumicos Los estreptococos son sensibles a los compuestos yodados y fenlicos, as como a una gran variedad de antimicrobianos.

Tratamiento Por lo general los estreptococos son sensibles frente a los antibiticos, recomendndose en la actualidad ensayar a penicilina o ampicilina y eritromicina. Algunas cepas son resistentes frente a los betalactmicos, por alteracin de protenas ligadoras de penicilina (PBPs) de la membrana externa bacteriana o produccin de betalactamasa.

Caractersticas
Morfolgicas y composicin qumica Tintoriales Culturales Metablicas

Principales especies en veterinaria

Caractersticas morfolgicas y composicin qumica

Cadenas de largo variable, en funcin de provenir de muestras o medios de cultivo y variando tambin segn la especie. Esta disposicin puede apreciarse mejor a partir de medios lquidos. No forman esporas y todos son inmviles.

Streptococcus spp.

Formacin de cadenas (M/O)

Streptococcus spp. Formacin de cadenas (MEB)

Caractersticas morfolgicas y composicin qumica

Algunas especies presentan cpsula est constituida por hidratos de carbono, variando su composicin qumica de acuerdo a la especie de que se trate. siendo una estructura amorfa unida dbilmente a la pared celular que

Composicin qumica Clasificacin antignica

LANCEFIELD

Streptococcus pyogenes
N-acetilglucosamina y L-ramnosa Grupo serolgico A

Composicin qumica Clasificacin de Lanciefield Basado en el polisacrido C

Clasificacin de R Lancefield Por el antgeno de grupo carbohidrato C o de Lancefield (Pared celular) Grupo A ej S. pyogenes Grupo B ej S agalactiae Existen grupos desde la A a la H y desde la K a la V. Los que carecen de antgeno de grupo se clasifican por pruebas fisiolgicas.

Clasificacin serolgica del gnero Streptococcus

Caractersticas culturales
Los estreptococos tienen requerimientos de crecimiento complejos (incapacidad de generar muchos de los aminocidos y vitaminas). Se utilizan medios de cultivo a los que se les agrega sangre o suero. Otros medios: --antimicrobioanos , con cido nalidxico y gentamicina Todd Hewitt --sustancias reductoras, como el caldo tioglicolato con cistena y tioglicolato, -- inhibidores de los microorganismos Gram negativos, como el agar Parcker con azida sdica

Medios selectivos diferenciales:

- Agar de Edwards
constituido por agar infusin carne con el agregado de esculina, cristal violeta, sulfato de talio y sangre bovina, diferenciando especies a travs de la hidrlisis de la esculina etc.

Morfologa de las colonias

En medios slidos crecen formando colonias muy pequeas de bordes regulares, convexas, transparentes u opacas, dimetro de 0,5 a 2 mm Las cepas productoras de cpsula suelen dar colonias de tipo mucoide. En medios lquidos forman sedimento y a veces dan turbidez.

Morfologa de las colonias

Desarrollo ptimo: 2 a 3 das 37 C (toleran 10C a 45 C) pH 7,4 7,6

anaerobio facultativo ( favorece tensin reducida de O2 o nivel elevado de CO 2

Crecimiento de Streptococcus spp. en agar sangre

Caractersticas metablicas
Son quimiorganotrofos con metabolismo fermentativo sobre los hidratos de carbono, generalmente homofermentativos (cido lctico) pero sin produccin de gas. Catalasa negativa presutivo

Tolerancia a medios con sales biliares al 40% y con cloruro de sodio al 6,5% negativa definitivo

En medios con sangre (preferentemente de oveja) los estreptococos pueden producir distintos tipos de hemlisis: hemlisis que se caracteriza por una lisis total de los eritrocitos, hemlisis que es la que se manifiesta por una decoloracin parcial alrededor de la colonia y hemlisis que es la ausencia de hemlisis.

Prueba de CAMP

Factor CAMP protena termoestable difusible que potencia la -hemlisis del Staphylococcus aureus (este produce una esfingomielinasa C que puede unirse a las membranas eritrocitarias) En contacto con el factor CAMP las clulas experimentan hemlisis.
PRUEBA DE CAMP (Christie,Atkins, Munch-Peterson)

Identificacin presuntiva de S. agalactiae Prueba de CAMP

rea de hemlisis Staphylococcus aureus

(1)Enterococcus faecalis, (2)Streptococcus salivarius, (3)S. agalactiae (4)E. durans

Streptococcus relacionados con mastitis en bovinos

Especie Prueba
Hemlisis Voges Proskauer CAMP Sorbitol Bilis esculina Esculina Hipurato S.agalactiae + + S.dysgalactiae v S.dysgalactiae - v S.uberis v/ + + +/S.bovis + + + -

Streptococcus relacionados con infecciones en equinos

Especie Prueba
S.Dysgalactiae subespequisimilis S.equi subespequi S.equi subesp.zooepidemicus

Hemlisis Trehalosa Sorbitol Lactosa

+ v

+ +

Streptococcus relacionados con infecciones en pequeos animales

Prueba S. pyogenes Hemlisis Trehalosa Lactosa + PYR + Bacitracina CAMP + + + + -

Especie S. canis +

Diagnstico de laboratorio

Diagntico de laboratorio
Determinacin antignica grupo Especfica Existen kits comerciales (Api 20 STREP BioMerieux, Marcy lEtoile, France) Ac reaccionan con los HdC especficos de grupo de la pared celular de la bacteria.

Diagntico de laboratorio
Observacin microscpica: -cocos Gram + en cadenas Cultivo: -requerimientos fsicos y qumicos complejos -presencia o ausencia de hemlisis -determinaciones bioqumicas orientadas a espedie

Streptococcus -hemoltico

Hemlisis beta

Especie tipo:

Streptococcus pyogenes

Grupo A - -hemoltico

Especie tipo:

Streptococcus pyogenes

Especie ms virulenta del gnero Grupo A, con mecanismo de patogenicidad proteina M

Fenotipicamente , Bacitracina S y Pyr +

Prueba de bacitracina

Especie tipo:

Streptococcus pyogenes
Antibiograma
AMX PIP CTX OXA

AMX: amoxicilina PIP: piperacilina CTX: cefotaxime OXA: oxacilina GEN: gentamicina forte KAN: kanamicina GM: gentamicina SXT: trimetroprima -sulfametazole AN: amikacina E: eritromicina L: lincosamida PT: pristinamicina RA: rifampicina VA: vancomicina TEC: teicoplanina FOS: fosfomicina

GEN

KAN

GM

SXT

AN

PT

RA

VA

TEC

FOS

Streptococcus pneumoniae

Crecimiento en agar sangre

Streptococcus pneumoniae.
Crecimiento en agar sangre

Alfa hemlisis

Sensible a la optoquina

Note la - hemlisis (decoloracin verdosa de los glbulos rojos alrededor de la colonia)

Identificacin de Sterptococcus pneumoniae

Disco de Optoquina

Halo de inhibicin

Prueba de sensibilidad a la optoquina. Sensible

Streptococcus pneumoniae

Prueba Optoquina
(Clorhidrato de etil hidrocuprena):

op

Streptococcus viridans

Prueba de sensibilidad a la optoquina Resistente

Familia Enterococcaceae / gnero Enterococcus Generalidades Microorganismos de forma esfrica u oval Miden entre 0,6 y 2,5 m de dimetro Se agrupan de a pares o en cortas cadenas. Inmviles o mviles por escasos flagelos

no forman esporas algunas especies pueden presentar cpsula

Especies ms importantes del gnero.

Estos microorganismos se encontraban incluidos dentro del Gnero Streptococcus y clasificados segn Lancefield en el serogrupo D o estreptococos aislados del intestino. A su vez este serogrupo estaba subdividido en dos: -incapaces de crecer en condiciones hostiles

(estreptococos-no enterococos).
-capaces de crecer en condiciones hostiles (enterococos) En 1984 Schleifer y Kilpper-Blz (estudios genmicos ) Los estreptococos del grupo enterococo nuevo gnero :

Enterococcus.

Familia Enterococcaceae / gnero Enterococcus Generalidades

Clasificacin antignica

Se encuentran ubicados, segn el esquema de Rebeca Lancefield, dentro del serogrupo D.

El antgeno de este grupo

cido lipoteicoico (poliglicerol)

asociado a la membrana citoplasmtica

Especies ms importantes del gnero.

El gnero comprende 29 especies, de las cuales las de mayor incidencia en patologas son:

Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Enterococcus durans

Generalidades
Hbitat Factores de patogenicidad Modo de transmisin Patologas Resistencia a antimicrobioanos Tratamiento

Hbitat
Los enterococos se hallan ampliamente difundidos en la naturaleza, particularmente en heces de los vertebrados.

En algunos casos dan enfermedades piognicas.

Factores de patogenicidad
Poder patgeno limitado , pudiendo presentar: adhesinas hidrocarbonadas sustancia de agregacin (SA) : protena de aspecto velloso de la membrana citoplasmtica que interviene en la colonizacin al unirse a las clulas epiteliales y puede facilitar adems el intercambio gentico por plsmidos.

Factores de patogenicidad

citolisina que favorece tambin la colonizacin y puede producir -hemlisis en glbulos rojos humanos y de caballo pero no en los de oveja gelatinasa y bacteriocinas: enterocinas

Modo de transmisin
Los enterococos son bacterias ubicuas presentes en tractos intestinal, respiratorio superior, genitourinario y piel de los animales y el hombre. Tambin en agua dulce y salada, en el suelo y vegetales.

Patologa
Histricamente patgenos oportunistas vinculados a individuos inmunosuprimidos. Actualmente en el rea de la clnica veterinaria es frecuente hallarlos a partir de infecciones de la glndula mamaria de bovino, cabra y llamas as como en abscesos y otras infecciones supurativas de perros y gatos.

Resistencia y sensibilidad Enterococcus es capaz de adquirir y/o efectuar intercambio gentico codificador de la resistencia a los antimicrobianos. Posee ms resistencia a la medicacin antimicrobiana. Se destaca en su resistencia a cefalosporinas, aminoglucsidos y vancomicina.

Tratamiento
Sinergismo entre penicilina o ampicilina ms un aminoglucsido o vancomicina sola o combinada con un aminoglucsidoestn indicados para infecciones severas.

Caractersticas
Morfolgicas Tintoriales Culturales Metablicas

Caractersticas morfolgicas y tintoriales

Son cocos, a veces ovales y elongados, pudiendo variar su morfologa segn las condiciones de cultivo. Miden entre 0,6-2 m a 0,6- 2,5 m. Caldo las clulas aparecen ovales y agrupadas en cortas cadenas Medio slido pueden aparecer como cocobacilos y agrupados en pequeos racimos.

Caractersticas morfolgicas y tintoriales

Son Gram positivos. No son esporulados. Se caracterizan por ser inmviles, aunque algunas pocas cepas pueden ser mviles por la presencia de escasos flagelos (E. casseliflavus, E. flavescens, E.gallinarum).

Principales caractersticas culturales

Tienen requerimientos nutricionales mnimos, creciendo bien en medios comunes ( caldo o agar cerebro corazn ) Temperatura de incubacin 18 a 24 h a 37 C. Usualmente los enterococos desarrollan a 10C y a 45 C (toleran 60 C durante 30 minutos)

Principales caractersticas culturales

Son aerobios-anaerobios, aerotolerantes. La incubacin en presencia de dixido de carbono favorece algunas especies, siendo indispensable la otras. Las colonias suelen tener un tamao entre 0,5 a 1 mm de dimetro, opacas o ligeramente blanquecinas. Algunas especies dan colonias con un pigmento amarillo (E. casseliflavus, E. flavescens, E. mundtii) (en agar tripticasa soya, 24 h, a 37 C.

Principales caractersticas culturales

Especie tipo:

Enterococcus faecalis

Crecimiento en agar sangre

Principales caractersticas metablicas

Especie tipo Enterococcus faecalis

Principales caractersticas metablicas

Desarrollan en medios de cultivo con el agregado de bilis al 40% Hidrolizan la esculina.

Cuando se utiliza medio bilis-esculina o medio bilis-esculina-azida, las colonias de los enterococos se acompaan con un ennegrecimiento del medio. Estas caractersticas son utilizadas para la diferenciacin y el diagnstico presuntivo entre los enterococos y los estreptococos.

Principales caractersticas metablicas

Especie tipo:

Enterococcus faecalis

Agar bilis esculina: Enterococcus faecalis crece en el agar bilis e hidroliza la esculina

Principales caractersticas metablicas

Tincin fluorescente Enterococcus fecalis, color verde Otros Enterococcus, color rojo

Medio bilis y esculina

Principales caractersticas metablicas

Crecen en caldo con cloruro de sodio al 6,5% aunque existen especies que no (E. avium, E. columbae y E. cecorum). Prueba de tolerancia a NaCl al 6.5% en caldo soya tripticasa: Si hay desarrollo (turbiedad) es positivo. Si permanece transparente es negativo.

Principales caractersticas metablicas

Agar con Bilis y Esculina Extracto de carne Peptona de carne Bilis de buey Esculina Citrato frrico Agar pH final: 6.6 0.2 Medio con NaCl al 6,5% Caldo Infusin Cerebro Corazn Glucosa Cloruro de sodio Prpura de bromocresol pH final: 7.4 0.2

Principales caractersticas metablicas

Especie tipo:

Enterococcus faecalis

Caldo SF sin sembrar. El color del indicador de pH es violeta a Ph neutro

Caldo SF:

Crecimiento de Enterococcus faecalis en el caldo SF . El color marrn amarillento indica acidz

Enterococcus faecalis crece en presencia de acida sdica hallada en el medio. Cuando crece forma cido al fermentar la destroxa cambiando el color del indicador de pH de violeta a marrn-

Principales caractersticas metablicas

Son quimiorganotrofos con metabolismo fermentativo sobre los hidratos de carbono

Principales caractersticas metablicas

La actividad sobre la Pyr (pyrroglutamil aminopeptidasa) es una determinacin que suele utilizarse para la identificacin de los enterococos siendo positiva para la mayora de las especies.
Resultados Positivo: observacin de color rosa-rojo en el disco. Negativo: la suspensin y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.

Principales caractersticas metablicas

Pyr - A - Enterococos
Fundamento Los discos contienen el sustrato: prueba consiste en determinar la presencia de la
Siembra A partir de un cultivo puro, hacer una suspensin densa en 50 l de solucin fisiolgica estril, y agregar un disco de PYR-A-ENTEROCOCOS .

Incubacin Durante 30 minutos a 35-37 C, en aerobiosis. -Agregar una gota de reactivo revelador . -Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.

Especie tipo:

Enterococcus faecalis
Antibiograma
AMX: amoxicilina PIP : piperacilina CTX : cefotaxima OXA : oxacilina GM: gentamicina KAN : kanamycina forte GEN : gentamicina forte SXT : trimetoprima -sulfametoxazole E : eritromicina L : lincosamida PT : pristinamicina RA : rifampicina VA : vancomicina TEC : teicoplanina FOS : fosfomicina

AMX

PIP

CTX

OXA

GM

KAN

GEN

SXT

PT

RA

VA

TEC

FOS

Resumen

Cocos G+ Catalasa + Staphylococcus

Streptococcus Enterococcus

Hemlisis

Bacitracina

Optoqun

Bilis esculina

(S. pyogenes) + Grupo B

S Grupo A

R CAMP

S.pneumoniae

R Bilis esculina

+ 6.5%NaCl

Streptococcus No hemolticos

(S. agalactiae)

Bilis esculina

+ 6.5%NaCl

Grupo Viridans

Enterococcus spp.

Grupo D

+ 6.5%NaCl

Streptococcus No A, B o D

Enterococcus spp.

Grupo D

Enterococcus spp.

Grupo D