Contrle microbiologique des denres alimentaires, des boissons et des produits pharmaceutiques

Introduction

La mthode avec membrane filtrante

Dans de trs nombreux domaines, le contrle microbiologique des produits constitue soit un impratif de scurit comme dans les domaines pharmaceutiques, mdicaux ou hospitaliers, soit plus simplement, un critre de qualit. Les tablissements hospitaliers sont tenus de contrler rgulirement la contamination microbiologique de leur eau ou de lair. Ils peuvent aussi tre amens effectuer des analyses microbiologiques de liquides biologiques. De mme, dans lindustrie pharmaceutique, la scurit de la production impose de multiples contrles bactriologiques dans les diffrents sites de production, de stockage ainsi que sur les matires premires et les produits finis. Les industries alimentaires doivent aussi faire face aux exigences toujours croissantes du consommateur en matire de qualit et de conservation des denres alimentaires et des boissons. Ces branches de lindustrie ne peuvent pas se limiter un contrle du produit final, cest--dire de la boisson en bouteille ou du plat cuisin ; au contraire, elles doivent, si elles veulent viter les pertes financires et les rclamations, soumettre les matires premires un contrle constant et surveiller lensemble du processus de production. Les examens microbiologiques et hyginiques jouent alors un rle prpondrant. Les exigences auxquelles sont soumises les mthodes dexamens microbiologiques ont pour rsultat une excellente reproductibilit des analyses concernant la prsence et le dnombrement des germes recherchs ainsi que loptimisation des moyens mis en uvre en routine. La mthode de dnombrement au moyen de membranes filtrantes satisfait totalement ces exigences. Cette mthode a pour principe la concentration des micro-organismes partir de volumes dchantillons importants sur la surface de la membrane filtrante. La culture des germes seffectue sur des milieux de culture sur carton (NKS) ou sur agar nutritif.

Description Une membrane filtrante de seuil de rtention connu est pose dans lappareil de filtration puis lchantillon est filtr. Les micro-organismes prsents sont rcuprs sur la surface de la membrane par le phnomne du tamisage. Les substances inhibant ou retardant la croissance peuvent tre limines en rinant le filtre avec de leau strile. Puis la membrane filtrante est pose sur un milieu de culture et mise incuber. Il peut y avoir change entre substances nutritives et produits du mtabolisme grce au systme poreux de la membrane filtrante. Les colonies qui se sont dveloppes sur la surface de la membrane sont comptes et leur valuation se fait en fonction du volume de lchantillon filtr. Les avantages : Comparativement la mthode directe, de plus grands volumes dchantillons peuvent tre analyss. Leffet de concentration augmente lexactitude du dnombrement. La membrane filtrante sur laquelle se sont dveloppes les colonies constitue un document que vous pouvez archiver, puis consulter tout moment. Il est possible dvaluer les colonies qui se sont dveloppes directement en fonction du volume. Les rsultats sont quantitatifs. Pas dinhibiteurs Les inhibiteurs tels que les huiles essentielles ou les dsinfectants peuvent tre rincs de la membrane filtrante aprs la filtration. Qualit BPF Les membranes filtrantes Sartorius sont fabriques conformment aux conditions BPF, ce qui permet de garantir une qualit constante et une reproductibilit leve lot aprs lot et lintrieur mme dun lot.

Les milieux de culture Les contaminations microbiennes peuvent tre analyses par diffrents procds. Les mthodes de dnombrement microscopique ou aprs culture permettent leur mise en vidence et les mthodes biochimiques et srologiques servent caractriser prcisment la nature des micro-organismes. Pour la mise en vidence par la culture, on se sert de milieux de culture liquides ou solides dans ou sur lesquels les micro-organismes se multiplient, jusqu former des colonies visibles. On ne peut faire dapprciation quantitative quavec un milieu de culture solide car on peut alors compter les colonies qui se dveloppent. Pour la croissance de la colonie, on peut utiliser les milieux de culture suivants : Les milieux de culture sur carton : Ils sont dcrits la page suivante et offrent certainement la manire la plus facile dappliquer la mthode avec membranes filtrantes. Les milieux de culture sur carton permettent une utilisation optimale de la mthode avec membrane filtrante. Ils rationnalisent et standardisent les procds de recherche microbiologique. Ils rduisent et facilitent le travail en laboratoire. Ils permettent les gains de temps et dargent. Les disques de carton imbiber avec un milieu de culture liquide. Les milieux de culture avec agar ou glatine comme solidifiant, bouillon nutritif.

Mthodes de dnombrement des germes

Mthodes de dnombrement des germes

Mthode directe
Lchantillon analyser est mis dans une bote de Ptri avec une pipette

Mthode avec membrane filtrante

Lchantillon analyser est filtr travers une membrane filtrante.

puis il est mlang avec le milieu de culture et mis incuber.

Mthode avec membrane filtrante standard La membrane filtrante est rince, pose sur un milieu de culture (a, b ou c) et mise incuber.

Mthode avec membrane filtrante avec Biosart 100

Aprs la filtration, ajouter le milieu de culture par le haut et faire brivement le vide (< 1 sec.). Fermer le fond du Biosart 100 avec le bouchon livr avec lunit. Enlever lentonnoir et assembler le couvercle et le fond pour former une bote de Ptri.

c) Sur un milieu a) Sur un milieu b) Sur un de culture de culture sur disque de carton (NKS) carton imbib avec agar. humidifi avec avec un de leau strile. milieu de culture liquide.

Les milieux de culture sur carton (NKS)

Les milieux de culture sur carton, aussi appels NKS, sont utiliss avec succs depuis 20 ans dans la mthode avec membranes filtrantes. Ils simplifient et facilitent de nombreux procds dexamen microbiologique grce leur manipulation particulirement aise. Les NKS sont des milieux striles dshydrats. Pour les utiliser immdiatement, il suffit de les humidifier avec 33,5 ml deau strile et dminralise. Le taux dhumidit est optimal lorsquun excdent deau est visible autour du milieu de culture. Tous les types de NKS sont vendus avec les membranes filtrantes correspondantes qui sont galement striles et emballes individuellement. Les membranes filtrantes, conues pour rpondre aux exigences spcifiques de la mise en vidence des germes, ont un diamtre de 47 ou 50 mm. Le paquet standard comprend 100 milieux de culture sur carton (dix ranges de dix boites de Ptri contenant chacune un NKS strile) et 100 membranes filtrantes striles en emballage individuel.

Les avantages pour lutilisateur

Economie Finies les prparations de milieux de culture (strilisation, nettoyage, etc) longues et compliques. Manipulation aise Les NKS peuvent tre utiliss dans les laboratoires qui ne possdent pas dquipement microbiologique complet. Leau strile pour lhumiditication est disponible sous forme dunidoses prtes lemploi. Qualit constante Au cours de la fabrication, les proprits favorisant la croissance de chaque lot de milieu de culture sur carton sont compares lagar correspondant. Cette procdure garantit une qualit constante et des rsultats reproductibles. Stockage Les milieux de culture sur carton peuvent tre stocks pendant une priode de 9 24 mois temprature ambiante et dans un endroit sec et sans lumire. Flexibilit Les milieux de culture sur carton peuvent tre modifis par des additifs mlangs la solution dimprgnation utilise ; par exemple, des NKS mot ou srum lorange imprgns avec 5% dthanol favorisent la croissance de bactries actiques. Souplesse dutilisation. Pas de gaspillage. Les NKS sont valids. Par rapport lagar dont la quantit et la hauteur peuvent varier, les NKS fournissent toujours des rsultats constants. Nimporte quel oprateur peut utiliser les NKS. Une fois humidifis avec 3,5 ml deau distille, les NKS sont immdiatement prts lemploi.

Conseils dutilisation

Procdure gnrale Afin dobtenir des rsultats fiables lors des contrles microbiologiques, il est ncessaire de travailler dans des conditions excluant toute contamination provoque par des micro-organismes susceptibles de fausser les rsultats. Cest pourquoi vous devez travailler prs de la flamme dun bec Bunsen dans une pice protge des courants dair. Avant de commencer travailler, il faut nettoyer la surface de travail avec une solution dsinfectante (par ex. alcool 70). Avant lemploi, il est ncessaire de striliser les appareils de filtration, les pincettes et les ciseaux selon une des mthodes standard, par exemple la flamme pour des travaux de routine.

Manipulation des micro-organismes Les cultures de micro-organismes doivent toujours tre manipules avec extrmement de prcautions. Lutilisateur doit toujours partir du principe quelles peuvent tre pathognes. La manipulation de micro-organismes nest pas dangereuse si lon observe les rgles de scurit suivantes : Bien se laver les mains avant et aprs avoir travaill dans un laboratoire. Ne pas manger ni boire dans un laboratoire. Ne pas toucher les matires bactriennes avec les mains. Ne jamais pipetter les suspensions bactriennes la bouche. Toujours utiliser des aides mcaniques (par ex. poire daspiration en caoutchouc).

Avant et aprs usage, il faut striliser la flamme les ensemenceurs et les aiguilles dinoculation jusqu ce quils soient chauffs au rouge. Tous les instruments de laboratoire qui ont t en contact avec des bactries doivent tre striliss. Afin de protger les personnes et les animaux contre des maladies contagieuses ou des intoxications, il faut dtruire les cultures vivantes avant de nettoyer ou de jeter les rcipients. Il est par exemple possible de les recouvrir de produits dsinfectants ou de les autoclaver dans des rcipients appropris.

Conseils dutilisation des milieux de culture sur carton

Dsinfecter la surface de travail.

Dcouper le sachet pour louvrir et prendre le nombre de milieux de culture ncessaire.

Humidifier les NKS avec 3,5 ml deau strile et distille ou dminralise.

Striliser la flamme lentonnoir en acier inoxydable.

Striliser le fritt la flamme.

Striliser le couvercle et lintrieur de lentonnoir.

Striliser les pincettes la flamme et les laisser lgrement refroidir.

Retirer la membrane de son emballage.

Mettre le filtre sur le fritt du support de filtre et jeter le papier jaune (pas reprsent ici).

Filtrer lchantillon. Ensuite, rincer lintrieur du support de filtre avec de leau strile ou de leau sale physiologique.

Dposer le filtre sur le NKS en faisant attention quil ny ait pas de bulles dair.

Laisser les NKS incuber dans des botes de Ptri avec le couvercle vers le haut.

Exemples dapplications

Produit Aliments

Dtection/Dtermination de Bactries msophiles et sporulants thermophiles Germes totaux Entrobactries Levures et moisissures Pseudomonas aeruginosa Salmonelles Staphylocoques Streptocoques

Type de milieu de culture Glucose tryptone Standard TTC, Standard, Caso Endo, Teepol, M-FC, Tergitol TTC, ECD, MacConkey, Chromocult Mot, extrait de malt Ctrimide Sulfite de bismuth Chapman Azide Mot, extrait de malt Lysine VLB-S7-S VLB-S7-S, Srum Orange Weman Standard, Standard TTC Srum Orange Mot, Schaufus-Pottinger, extrait de malt Standard TTC, Standard, R2A, extrait de levure Endo, Tergitol TTC, Teepol, M-FC, ECD Ctrimide Azide Endo Sulfite de bismuth Azide Sabouraud Caso, R2A MacConkey Ctrimide Chapman Azide Weman Glucose tryptone Mot, Schaufus-Pottinger, extrait de malt Mot, Srum Orange, tous les deux imprgns avec de lthanol 3-5% Srum Orange Jus de tomate

Bire

Levures et moisissures Levures sauvages Pdiocoques et lactobacilles

Boissons non alcoolises

Bactries lactiques Bactries favorisant les dpts mucilagineux (leuconostoc) Germes totaux Germes acido-tolrants Levures et moisissures

Eau

Germes totaux E. coli et coliformes Pseudomonas aeruginosa Streptocoques fcaux

Lait

E. coli et coliformes Salmonelles Streptocoques

Produits pharmaceutiques et cosmtiques

Candida albicans Germes totaux Entrobactries Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Streptocoques fcaux

Sucre

Bactries favorisant les dpts mucilagineux (leuconostoc) Bactries msophiles et sporulants thermophiles Levures et moisissures

Vin

Actobacter Bactries lactiques Bactries lactiques (particulirement leuconostoc oenos) Levures et moisissures

Mot, Schaufus-Pottinger, extrait de malt

Description et exemples de rsultats

NKS Standard TTC Rfrence 14055 Milieu lextrait de viande et peptones, modifi par ladjonction de TTC pour la numration des germes totaux, selon Trinkwasser-VO et Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 1998. Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 48 heures 30C. Suivant la nature de lchantillon, le temps dincubation et la temprature peuvent varier. Interprtation Sur ce milieu de culture poussent en majorit des bactries. Les colonies rduisant le TTC sont colores en rouge.

NKS Standard Rfrence 14064 Milieu lextrait de viande et peptones pour la numration des germes totaux, selon Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 1998. Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 48 heures 30C. Suivant la nature de lchantillon, le temps dincubation ainsi que la temprature peuvent varier. Interprtation Sur ce milieu de culture poussent en majorit des bactries qui prsentent des colonies de formes et de couleurs varies.

NKS-Caso Rfrence 14063 Milieu la peptone de casine et soja pour la recherche et le dnombrement des germes totaux selon lUSP.

Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 2472 heures 3037C, suivant lchantillon analys. Interprtation En fonction du but recherch, on pourra changer le milieu de culture en remplaant la solution dimprgnation par une solution 10% de srum sur laquelle se dveloppe toute une gamme de bactries pathognes, par exemple, des bactries de la famille des Pneumococcus, Neisseria, Streptococcus, Corynebacterium, Erysipelothrix et Brucella.

Flore totale

Bacillus subtilis

Escherichia coli

Staphylococcus aureus

Diffrentes colonies dune eau de puits

Diffrentes colonies deau de boisson

Diffrentes colonies dune eau de process

Description et exemples de rsultats

NKS Extrait de levure Rfrence 14090 Milieu lextrait de levure et de peptone pour le dnombrement des germes totaux dans leau, selon Trinkwasser VO et EN ISO 6222.

NKS R2A Rfrence 14084 Milieu pour le dnombrement des germes totaux de micro-organismes htrotrophes et pour la subculture de bactries dans de leau de boisson, selon Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 1998. La croissance optimale pour des bactries qui sont adaptes des conditions ambiantes dans de leau extrmement pauvre en substances nutritives. Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 72 heures 35C ; 5 jours 20C ou 28C Interprtation Sur ce milieu de culture poussent en majorit des colonies de bactries de diffrentes tailles et de diffrentes couleurs, qui sont toutefois surtout blanches ou incolores et dun diamtre infrieur 1 mm.

NKS Chromocult Rfrence 14087 Milieu pour le dnombrement de coliformes totaux et de E. coli dans de leau et des denres alimentaires.

Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 44 4 heures 36 2C ; 68 4 heures 22 2C selon EN ISO 6222 Interprtation Des bactries, des levures et des moisissures peuvent pousser sur ce milieu de culture. Comme il ny a pas de colorant, la plupart des colonies, surtout les bactries, sont incolores.

Membrane filtrante Rf. 13706 (0,45 micron ; blanche quadrille noire) Conditions dincubation 24 heures 36 1C ; une dure dincubation plus longue gne le comptage des colonies Interprtation E. coli pousse sous forme de colonies bleu fonc violettes. Les coliformes forment des colonies roses-rouges. Dautres colonies gram ngatif sont incolores, quelques-unes avec une activit bta-glucuronidase sont bleu clair turquoise. Pour confirmer E. coli, il faut ajouter une goutte de ractif dErlich Kovacs sur les colonies bleu fonc violettes. Les colonies E. coli deviennent rouge cerise.

Flore totale

E. coli et Coliformes

Escherichia coli

Escherichia coli

Escherichia coli

Diffrentes colonies deau de rivire

Diffrentes colonies deau de boisson

Diffrentes colonies deau de boisson

Description et exemples de rsultats

NKS Endo Rfrence 14053 Milieu slectif pour la mise en vidence dE. coli et des bactries coliformes selon Trinkwasser-VO du 31.1.1975 et Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 1998. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 24 heures 37C Interprtation E. coli et coliformes se dveloppent sous forme de colonies rouge sombre au contour fortement marqu. E. coli ont un clat mtallique vert chtoyant (reflet de la fuchsine). Au dos de la membrane filtrante, on voit un point rouge violac. Pour un diagnostic parfait, il faudra soumettre les colonies douteuses un examen biochimique plus approfondi.

NKS-M-FC Rfrence 14068 Met en vidence E. coli et les coliformes fcaux (dans des botes de Ptri fermes hermtiquement) daprs Geldreich et al., recommand par Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 1998. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 20 4 heures 37C dans ltuve ou 44,5C au bain-marie Interprtation E. coli et coliformes fcaux poussent en colonies bleues dun diamtre de 12 mm. Les colonies dune autre couleur ne seront pas prises en considration.

NKS-Teepol Rfrence 14067 Mise en vidence dE. coli et coliformes fcaux daprs Burman, N.P. (1967).

Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 1824 heures 37C Interprtation E. coli forme des colonies jaunes de 1 2 mm avec un halo jaune. Les bactries qui ne fermentent pas le lactose ainsi que les germes coliformes se dveloppent sous forme de colonies rouge fonc de diffrents diamtres.

E. coli et Coliformes

Escherichia coli

Escherichia coli

Escherichia coli

E. coli et Coliformes dans une eau de rivire

E. coli et Coliformes dune eau rsiduaire

E. coli et Coliformes dune eau rsiduaire

Description et exemples de rsultats

NKS-ECD Rfrence 14082 Milieu de culture slectif pour la dtection et lidentification de E. coli. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 18 24 heures 37C

NKS-MAC CONKEY Rfrence 14097 Pour lisolement et la diffrenciation des entrobactries daprs le DAB 10, EP II et lUSP XXV et le paragraphe 35 LMBG. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 18 24 heures 37C

NKS Tergitol TTC Rfrence 14056 Met en vidence les bactries coliformes et E. Coli daprs Pollard, modifi Chapman (ISO 9308-1). Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 21 3 heures 36C 2C ou 44 4 heures 36C 2C possibilit dincubation 44C Interprtation Les coliformes forment des colonies rouges avec ou sans halo jaune. Les colonies dE. coli et Enterobacter arognes sont oranges jaunes avec un halo jaune. Ce milieu empche la prolifration des Proteus.

Interprtation Les sels biliaires inhibent la croissance des germes gram positif ou non adapts au milieu intestinal. Les colonies dE. coli fluorescent en bleu clair sous UV. La coloration rouge avec le ractif dErlich Kovacs donne la confirmation (indole +) de la prsence dE. coli.

Interprtation E. coli pousse sous forme de grosses colonies rouges rougetres. Les coliformes apparaissent sous forme de grosses colonies roses et visqueuses. Les entrobactries lactose ngatif sont incolores. La prolifration des germes gram positif est fortement ralentie par la prsence de sels biliaires et de cristal violet.

E. coli et Coliformes

Escherichia coli

Escherichia coli

Escherichia coli

Colonies fluorescentes dE. coli sous lampe UV

E. coli et Coliformes dune eau de rivire

E. coli et Coliformes dune eau rsiduaire

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Description et exemples de rsultats

NKS Mot Rfrence 14058 Permet de mettre en vidence les levures et moisissures selon la pharmacope allemande. Ce milieu pourra tre utilis entre autres pour le contrle de la qualit et de la production dans lindustrie alimentaire, pharmaceutique et cosmtique.

NKS Schaufus-Pottinger a) Rfrence 14070 c) Rfrence 14080 b) Rfrence 14072 d) Rfrence 14083 Permet de mettre en vidence et de dnombrer les levures et moisissures dans les boissons et les sirops, daprs Schaufus et Pottinger. Membrane filtrante a) Rf. 13905 (0,65 micron ; blanche quadrille verte) b) Rf. 13903 (1,2 micron ; blanche quadrille verte) c) Rf. 13004 (0,8 micron ; grise quadrille blanche) d) Rf. 13005 (0,65 micron ; grise quadrille blanche) Conditions dincubation 23 jours 2830C Interprtation Les moisissures se dveloppent sous forme de colonies veloutes ou sous forme de tampon de ouate blanchtre ou verdtre qui, aprs formation de conidies, peuvent prendre diffrentes couleurs. Les levures et les colonies bactriennes ont une surface lisse. La couleur des bactries qui fermentent le sucre et qui favorisent les dpots dacide varie du blanchtre au jauntre. En revanche, la couleur des bactries qui ne favorisent pas les dpots dacide varie du verdtre au bleu verdtre.

NKS Sabouraud Rfrence 14069 Il permet la culture de levures et moisissures, bactries acido-tolrantes et acidophiles. De plus, il met en vidence les levures et moisissures dans les boissons et jus de fruits, lors du contrle de strilit en industrie pharmaceutique, et lors de lisolement des champignons et des levures pathognes de la peau (USP XXV). Membrane filtrante Rf. 13005 (0,65 micron ; grise quadrille blanche)

Membrane filtrante Rf. 13005 (0,65 micron ; grise quadrille blanche)

Conditions dincubation 23 jours 25C Interprtation La plupart des levures forment des colonies lisses blanches ou lgrement teintes. La plupart des moisissures forment des colonies veloutes ou cotonneuses, celles-ci sont blanches au dbut, puis peuvent prendre diffrentes couleurs aprs formation des conidies.

Conditions dincubation 25 jours 2530C Interprtation La plupart des levures forment des colonies lisses, blanches ou colores. La plupart des moisissures forment des colonies veloutes ou cotonneuses.

Levures et moisissures

Saccharomyces cerevisiae

Torula lipolytica

Alternaria humicola

Levures et moisissures des bires dgrades

Diffrentes colonies provenant dune limonade

Levures et moisissures dun sirop pour la toux

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Description et exemples de rsultats

NKS Extrait de malt Rfrence 14086 Milieu pour la dtermination des levures et des moisissures, recommand par lAOAC et lAPHA. Spcialement pour lutilisation dans le secteur des boissons et des denres alimentaires.

NKS Azide Rfrence 14051 Met en vidence les entrocoques daprs Slanetz et Bartley. Les entrocoques sont les germes indicateurs dune contamination dorigine fcale. Du fait quil sont moins sensibles aux produits chimiques quE. coli, ils sont dtectables plus longtemps dans les eaux rsiduaires et les eaux chlores.

NKS Sulfite de bismuth Rfrence 14057 Milieu de culture slectif pour mettre en vidence les salmonelles dans leau, dans les denres alimentaires et dans la nourriture pour animaux daprs Wilson and Blair, recommand par lUSP 25. Si une trs lgre contamination la salmonelle est suspecte, il est conseill de prparer une culture enrichie avec du bouillon au slnite ou au ttrathionate de potassium et ensuite dtaler (stries avec un ensemenceur) lchantillon sur la membrane filtrante du NKS. Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille verte) Conditions dincubation 1848 heures 37C Interprtation La plupart des salmonelles forment des colonies lgrement colores avec un centre marron noir entour dune aurole noire avec un reflet mtallique (il de poisson). Certaines espces de salmonelles se dveloppent uniformment sous forme de colonies marron fonc noires o laurole peut manquer.

Membrane filtrante Rf. 13005 (0,8 micron ; grise quadrille blanche) Conditions dincubation 23 jours 2530C, ou modifi en fonction de la dtermination Interprtation Les levures se dveloppent habituellement sous forme de colonies blanches, rarement colores. Les moisissures forment gnralement au dbut des colonies blanches veloutes ou cotonneuses qui ensuite peuvent prendre diffrentes couleurs aprs formation des conidies. La faible valeur de pH empche la croissance de bactries.

Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 2448 heures 37C Interprtation Les entrocoques apparaissent sous forme de petites colonies (1 mm de diamtre) rouges rouge marron et bord lisse.

Levures et moisissures

Contaminants fcaux

Saccharomyces cerevisiae

Streptococcus faecalis

Salmonella typhosa, stries

Diffrentes colonies de Saccharomyces et de Rhodutorula

Streptocoques dune eau rsiduaire

Salmonelles dune eau rsiduaire

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Description et exemples de rsultats

NKS VLB-S7-S Rfrence 14059 Permet de mettre en vidence les pdiocoques et lactobacilles pour le contrle microbiologique en brasserie daprs Emeis, modifi Rinck et Wackerbauer. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation Anarobie (microarophilie) 23 jours 2528C pour la mise en vidence rapide des microcolonies (dnombrement au microscope), 57 jours pour le dveloppement de colonies macroscopiques. Interprtation Les pdiocoques forment de petites colonies rondes (1 mm de diamtre) contour net et de couleur vert ple. Les lactobacilles se prsentent sous forme de colonies vert clair au dbut puis vert fonc. Leur diamtre est denviron 2 mm. Leur contour est irrgulier et fripp.

NKS Srum Orange a) Rfrence 14062 b) Rfrence 14096 (pH 3,2) Met en vidence les germes acido-tolrants, daprs Methods for the Microbiological Examination of Foods (1966) de lAPHA. Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation En arobie ou anarobie (microarophilie), 23 jours 2528C

NKS Lysine Rfrence 14061 Milieu slectif pour la mise en vidence des levures sauvages en brasseries selon Morris et Eddy. Membrane filtrante Rf. 13805 (0,65 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation En arobie, 25 jours 2528C

Interprtation Ce milieu permet de faire une culture spcifique des germes acido-tolrants telle que la microflore des jus de fruits. Les microorganismes les plus frquents sont les lactobacilles, Leuconostoc, Bacillus, levures et moisissures.

Interprtation Seules les levures sauvages dgradant la lysine peuvent se dvelopper sur ce milieu. Elles forment pour la plupart des colonies blanches ou crme.

Contaminants divers

Lactobacillus pastorianus

Rhodotorula spec.

Torulopsis spec.

Lactobacilles et pdiocoques provenant de sdiment, stries

Diffrentes colonies provenant dun jus de fruit

Levures sauvages de bire stocke

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Description et exemples de rsultats

NKS Weman Rfrence 14065 Permet la recherche et le dnombrement des colonies de bactries msophiles favorisant les dpots mucilagineux, selon Wemann, modifi (Lorenz, S., 1961 : Zucker, 14).

NKS Jus de tomate Rfrence 14079 Permet de mettre en vidence les bactries (lactobacilles, leuconostoc, pdiocoques entre autres) causant laltration du vin et des jus de fruits daprs Dubois, Bindan et LafonLafourcade.

NKS Glucose tryptone Rfrence 14066 Permet la recherche et le dnombrement des germes msophiles et thermophiles sporulants dans les denres alimentaires daprs Williams. On utilisera des botes de Petri hermtiquement closes. Ce milieu est recommand par la NCA (National Canners Association, USA 1956) et lICUMSA (International Commission for Uniform Methods of Sugar, 1974). Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; banche quadrille verte) Conditions dincubation Germes msophiles : 23 jours 2830C. Germes thermophiles sporulants : 12 jours 55C

Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation 23 jours 2830C

Membrane filtrante Rf. 13806 (0,45 micron ; verte quadrille vert fonc) Conditions dincubation Microcrophilie 46 jours 2530C (un contrle supplmentaire aprs 10 jours est ncessaire pour pouvoir galement dnombrer les bactries qui se dveloppent plus lentement). Interprtation Les lactobacilles forment des colonies compactes, de couleur blanche jaune ple dun diamtre de 1 3 mm. Les pdiocoques sont lgrement plus petites denviron 1 mm de diamtre, et de couleur blanchtre marron ple. Leuconostoc oenos forme des colonies incolores blanches de diamtre infrieur 1 mm.

Interprtation Une partie des colonies de bactries msophiles favorisant les dpots mucilagineux ont un diamtre suprieur 5 mm, elles sont lisses, rondes et souvent incolores, transparentes ou translucides.

Interprtation Les germes qui fermentent le glucose et forment de lacide, se dveloppent sous forme de colonies jaunes vertes. Les colonies typiques Flat sour (Bacillus coagulans, Bacillus stearothermophilus) ont un diamtre de 25 mm, sont rondes avec un bord lisse, de couleur jaune verdtre avec halo jaune.

Contaminants divers

Leuconostoc mesenteroides

Bactries lactiques, stries

Bacillus coagulans

Diffrentes colonies partir dun sirop de sucre

Leuconostoc oenos provenant de vin

Diffrentes colonies dune conserve de lgumes

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Description et exemples de rsultats

Chapman-NKS Rfrence 14074 Milieu au mannitol-chlorure de sodium-rouge de phnol qui met en vidence les staphylocoques pathognes dans les denres alimentaires et autres produits selon Chapman (1945), modifi. Recommand par lUSP et lAPHA. Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; blanche quadrille verte) Conditions dincubation 48 heures 37C Interprtation Les Staphylococcus aureus forment des colonies dont la couleur varie entre le jaune dor et lorange avec un halo jaune (mannitol positif). Les Staphylococcus epidermidis forment des colonies blanchtres.

NKS Ctrimide Rfrence 14075 Permet la recherche et le dnombrement des Pseudomonas aeruginosa selon Lowbury (1951). Ce milieu suit les recommandations de lUSP et de lAPHA.

Membrane filtrante Rf. 13906 (0,45 micron ; banche quadrille verte) Conditions dincubation 48 heures 37C Interprtation Les Pseudomonas aeruginosa forment en gnral des colonies de couleur bleue de 1 2 mm de diamtre avec un halo bleu. Il arrive quil y ait des colonies bleu gris, jaune vert ou incolores. Dautres Pseudomonas forment des colonies blanchtres.

Contaminants non fcaux

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

Diffrents types de staphylocoques

Diffrents types de Pseudomonas

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Comparaison de croissance

Les erreurs possibles

Une variation trop importante dans la rpartition de la taille des pores peut limiter lapport en substances nutritives.

La taille des pores nest pas uniquement un critre significatif. Un essai comparatif de la membrane en nitrate de cellulose avec une membrane en mlange desters rvle des diffrences de croissance significatives. Croissance de Pseudomonas aeruginosa sur NKS ctrimide

De mauvaises manipulations peuvent fausser les rsultats. 1. Pousse inhibe, petites colonies : le disque en carton na pas t suffisamment imbib : le volume deau ncessaire lhumidification du carton est insuffisant. 2. Colonies noyes : carton trop humidifi, film deau sur la membrane. Le volume deau est trop important sur le NKS. Les colonies de germes mobiles (Bacillus, Proteus, etc. ) scoulent souvent, mme avec une humidification correcte. Un enrichissement en NaCl (mulsifiant) empche ce phnomne. 3. Contamination par le bas : pousse des colonies inhibe, trouble de lexcdent deau, changement frquent de couleur du disque en carton : a) Face quadrille pose vers le bas. b) Non strilit de la solution dhumidification.

Croissance de E. coli sur NKS endo

Membrane Sartorius en nitrate de cellulose

Membrane Sartorius en nitrate de cellulose

c) Infection pendant la prparation (infection par lair ou par contact). d) Contamination de la membrane filtrante par des germes qui nont pas t totalement aspirs la fin de la filtration ou cause dune bote de Petri incline. e) Support filtre non strile. f) Pinces brucelles non striles. 4. Pousse partielle : position incline de la bote de Ptri dans lincubateur. 5. Rpartition des germes sur la membrane trop dense ou trop faible (optimum entre 20 et 200 germes par filtre) : mauvaise dilution ou mauvais choix de la quantit filtrer.

Membrane en mlange desters

Membrane en mlange desters

E. coli ne prsente pas de reflet mtallique sur la membrane en mlange desters. Dans ce cas, il est trs difficile de faire la diffrence entre E. coli et des coliformes sans tests supplmentaires. La couleur rouge du filtre montre que les colonies se rpandent. Une conclusion quantitative est difficile.

Les Pseudomonas se dveloppent sous forme de colonies bleues avec un halo bleu facile reconnatre sur la membrane Sartorius en nitrate de cellulose. Sur la membrane en mlange desters, on constate quil y a moins de colonies qui se forment et quen grande partie elles nont pas de halo bleu. Une variation trop importante dans la rpartition de la taille des pores peut limiter lapport en substances nutritives. Cela peut entraner des rsultats faussement ngatifs.

6. Rpartition non uniforme sur la membrane : chantillon de moins de 5 ml filtr sans addition dun diluant ou mlange insuffisant avec le diluant strile.

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Membranes filtrantes pour lutilisation sur milieux nutritifs gloss ou sur NKS

Si, la place des NKS, vous utilisez des milieux gloss ou des disques de carton imbiber avec des milieux de culture liquides, nous vous recommandons de vous servir des types de membranes suivants. Il ne doit videmment pas y avoir de germes sur les membranes que vous utilisez. Vous pourrez donc, soit les faire bouillir, soit les autoclaver. Il est cependant plus facile et plus pratique de se servir de membranes pr-strilises et emballes individuellement (voir le tableau).

Prfiltres en nitrate de cellulose La membrane filtrante blanche Rf. 11301 avec des pores de 8 m sert de prfiltre lors de recherches bactriologiques et est place dans un accessoire spcial (Rf. 16807). Cette membrane filtrante, qui retient les grosses particules, laisse passer les micro-organismes. Ces derniers seront arrts par la membrane filtrante qui se trouve en dessous.

Pour la dtection de bactries dans des milieux contenant des colorants.

Vous obtiendrez un contraste optimal pour les colonies de bactries claires ou transparentes lors du dnombrement des germes.

Mise en vidence de levures et de moisissures.

Taille des pores 0,45 m 0,45 m 0,45 m 0,65 m 0,8 m 8 m

Couleur de la membrane blanche verte verte grise grise blanche

Couleur du quadrillage verte vert fonc blanche blanche blanche

Rfrence des membranes en emballage individuel strile* Paquet de 100 units Paquet de 1000 units 13906-050 ACR** 13806-050 ACN** 13006-050 ACN** 13005-050 ACN** 13004-050 ACN** 11301-050 ACN** 13806-050 ACR** 13006-050 ACR** 13005-050 ACR

* Egalement disponible en emballage, non strile. Rfrence identique. Cependant : pour les paquets de 100, remplacer ACN par N, pour les paquets de 1000, remplacer ACR par R. ** Egalement disponible en diamtre 47 mm.

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Accessoires

Rfrence : 16201 Support de filtre 16692 Pompe vide

Rfrence : 16612 Pompe vide 16610 Flacon de Woulff

Rfrence : 16807 Entonnoir en acier inoxydable avec dispositif de prfiltration

Rfrence : 16842 Rampe 3 postes en acier inoxydable 16401-47-06-K Biosart 100

Rfrence : 16842 Rampe 3 postes en acier inoxydable 1640725-ALK Biosart 250

Rfrence : 16843 Rampe 6 postes en acier inoxydable

Rfrence : FDIEAUSTERI134N Eau strile

Rfrence : 17649 Stylo compteur de colonies

Rfrence : 15410-47-ALR Cartons adsorbants

Rfrence : 16757 MD8 AirPort pour le contrle microbiologique de lair

Rfrence : 16746 MD8 Airscan pour le contrle microbiologique de lair

Rfrence : 16671 Incubateur anarobie

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Guide dachat

Un paquet standard contient 100 milieux de culture sur carton striles, 10 sachets de 10 botes de Ptri, et 100 membranes en emballage individuel strile.

Les milieux de culture sur carton sont des milieux de culture dshydrats striles dun diamtre de 50 mm. Ds quils sont humidifis avec 33,5 ml deau strile dminralise ou distille, ils sont prts lemploi.

Les membranes filtrantes sont conues pour rpondre aux exigences particulires de la dtection microbiologique. Elles sont disponibles avec un diamtre de 50 mm (voir tableau ci-dessous) ou de 47 mm (mme rfrence que pour 50 mm, mais remplacer 50N par 47N). Rfrences

Type de NKS

Rfrence

Pour la dtermination de

Azide Caso Ctrimide Chapman Chromocult ECD Endo Extrait de levure Extrait de malt Glucose tryptone Jus de tomate Lysine Mac Conkey Mot M-FC Srum lorange Srum lorange pH 3,2 R2A Sabouraud Schaufus Pottinger

14051-47 N 14063-47 N 14075-47 N 14074-47 N 14087-47 N 14082-47 N 14053-47 N 14790-47 N 14086-47 N 14066-47 N 14079-47 N 14061-47 N 14097-47 N 14058-47 N 14068-47 N 14062-47 N 14096-47 N 14084-47 N 14069-47 N 14070-47 N 14072-47 N 14080-50 N 14083-47 N 14064-47 N 14055-47 N 14057-47 N 14067-47 N 14056-47 N 14059-47 N 14065-47 N

Standard Standard TTC Sulfite de bismuth Teepol Tergitol TTC VLB-S7-S Weman

Entrocoques Dnombrement des germes totaux Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureaus E. coli et bactries coliformes Escherichia coli Escherichia coli et coliformes Dnombrement des germes totaux Levures et moisissures Bactries msophiles et bactries thermophiles sporulantes Bactries causant une altration Levures sauvages Entrobactries Levures et moisissures E. coli et bactries coliformes Micro-organismes acido-tolrants Micro-organismes acido-tolrants Dnombrement des germes totaux Levures et moisissures Levures et moisissures Levures et moisissures Levures et moisissures Levures et moisissures Dnombrement des germes totaux Dnombrement des germes totaux Salmonelles E. coli et bactries coliformes E. coli et bactries coliformes Lactobacilles et pdiocoques Bactries mucilagineuses

Types de membrane (Seuil de rtention, Couleur/quadrillage) 0,45 m, vert/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, blanc/noir 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, vert/vert 0,8 m, gris/blanc 0,45 m, blanc/vert 0,45 m vert/vert 0,65 m, vert/vert 0,45 m, blanc/vert 0,65 m, gris/blanc 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, vert/vert 0,65 m, gris/blanc 0,65 m, blanc/vert 1,2 m, blanc/vert 0,8 m, gris/blanc 0,65 m, gris/blanc 0,45 m, vert/vert 0,45 m vert/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, blanc/vert 0,45 m, vert/vert 0,45 m, vert/vert

*3, 20 *2, 3, 5, 9, 10, 12, 18, 19, 20 *5, 6, 9, 10, 19, 20 *3, 10, 19 *3, 6, 15, 18 *3, 14, 18 *3 *2, 3, 13 *2, 11, 13

*2, 3, 5, 9, 15, 18, 19 *3, 10, 14, 18 *3, 13, 17 *3, 9 *3, 9, 19, 20 *19 *19 *19 *19 *3 *3 *1, 2, 3, 6, 10, 12, 14, 18, 19, 20 *1, 2, 4, 8, 10, 14, 18, 19 *14, 20 *7, 16 *11

Rfrences NKS
* 1 = AFNOR Association Franaise de Normalisation 2 = AOAC Association of Official Analytical Chemists 3 = APHA American Public Health Association 4 = BS British Standards 5 = DAB Deutsches Arzneibuch 6 = DIN Deutsches Institut fr Normung 7 = EBC European Brewery Community 8 = EPA Environmental Protection Agency 9 = EP European Pharmacopeia 10 = FDA Federal Drug Administration 11 = ICUMSA International Commission for Uniform Methods of Sugar Analysis 12 = IDF International Dairy Federation 13 = IFU 14 = ISO International Standards Organisation 15 = LMBG Lebensmittel- und Bedarfsgegenstndegesetz der Bundesrepublik Deutschland, Bundesgesundheitsamt 16 = MEBAK Mitteleuropische Brauereitechnische Analysenkommission 17 = SMWW Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 18 = USDA US Department of Agriculture 19 = USP US Pharmacopeia 20 = TVO Verordnung ber Trinkwasser und ber Wasser fr Lebensmittelbetriebe

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Sartorius S.A. 4, rue Emile Baudot 91127 Palaiseau, France Phone +33.1.69192100 Fax +33.1.69200922 www.sartorius.com

Sous rserve de modifications techniques. Imprim en Allemagne sur papier non blanchi au chlore. W/sart-119a G N de publication : SM-4017-f03111 Rfrence : 85030-519-46