Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
\
|
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|
=
Salic Acetil Ac g Salic Acetil Ac g
Salic Acetil Ac mol
Salic Acetil Ac g
Salic Ac mol
Salic Acetil Ac mol
Salic Ac g
Salic Ac mol
Salic Ac g Salic Acetil Ac g
. .. . 04 . 0 . .. .
. .. . 1
. .. . 180
. . 1
. .. . 1
. . 138
. . 1
. . 03 . 0 . .. .
=
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
=
LABORATORIO N:4
FABRICACIN DEL JABN
I. OBJETIVO
Identificar los esteres de cidos grasos
Obtener el jabn a partir de aceite de oliva
Aprender la reaccin de saponificacin
II. FUNDAMENTO
La reaccin entre un acido carboxlico y un alcohol para formar Ester ms agua,
se reconoce con el nombre de reaccin de esterificacin de Fischer.
Las grasas y los aceites son esteres mixtos naturales de los cidos grasos de peso
molecular elevado. Generalmente un aceite o grasa por saponificacin
proporciona una mezcla de cuatro o ms cidos grasos, los cuales tienen puntos
de ebullicin elevados y cercanos entre s, lo que hace ms difcil su
preparacin, en algunos casos es posible separarlos, en forma de sus esteres
metlicos o como complejos de urea.
Las sales de los cidos grasos se denominan jabones, las de sodio y potasio y se
utilizan como detergentes y las de metales pesados como lubricantes.
grasas pertenecen a la familia de los esteres, las grasas solidas como el cebo,
consisten principalmente en una mezcla de esteres de la glicerina con cidos
carboxlicos saturados de peso molecular elevado. Los esteres glicridos de los
cidos carboxlicos no saturados son lquidos a la temperatura ordinaria y
aunque todos ellos son grasas generalmente reciben el nombre de aceites.
En la hidrlisis alcalina de una grasa se forman glicerina y un jabn, por esto los
trminos hidrlisis alcalina y saponificacin son sinnimos (saponificacin es
convertir un cuerpo graso en jabn).
III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Vasos de precipitacin de 50 ml
Varilla de agitacin
Estufa elctrica
Papel filtro
Embudo
Reactivos
Grasa vegetal o animal
etanol
NaOH
NH4Cl
NaCl
I. PROCEDIMIENTO
Mezclar el ester o grasa ms el etanol y llevar a bao Maria.
Remover ester o grasa que esta mezclado con etanol constantemente, esta solucin debe
de estar a 80C, tambin es necesario estar agregndole el NaOH de 2 a 3 gotas hasta la
desaparicin de las ultimas gotas de aceite, sin olvidarse haberle agragado el catalizador
en un principio.
Se aade 10 ml de agua destilada cuando la mezcla obtenida esta en reposo para luego
filtrar con la ayuda de una varilla. El residuo que queda en el papel filtro es el jabn que
se deja secar para su posterior uso.
II. CLCULO
Se debe obtener los 5 g de jabn por la cual hacemos los respectivos clculos.
gNaOH
NaOH mol
NaOH g
jabn mol
NaOH mol
jabn g
jabn mol
jabn g 65 . 0
. 1
. 40
. 1
. 3
. 918
. 1
. 5 =
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
Ester g
Ester mol
Ester g
jabn mol
Ester mol
jabn g
jabn mol
jabn g . 85 . 4
. 1
. 890
. 1
. 1
. 918
. 1
. 5 =
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
O mlH
2
10
------------------------
gNaOH 2
x ------------------------
gNaOH 65 . 0
O mlH x
2
3 . 3 =
III. RESULTADOS
Para obtener los 5 g de jabn se necesito
gNaOH 65 . 0
,
Ester g. 85 . 4
LABORATORIO N:5
FABRICACIN DE LA ANILINA
Introduccin.
La anilina es una de los reactivos por medio del cual se puede obtener una variedad de
sustancias como, iodo benceno, fenol, sulfato de anilina, acetanilida, metilanilina,
difenilanilina, c. sulfanlico, fenilhidrazina,difenilurea, quinona, benzanilida, c. N
fenilantranlico.
REACCIN GENERAL
Objetivos particulares
a) Reconocer en cada paso de la reaccin la funcin que cumple cada reactivo
b) Aplicar los conceptos de xido-reduccin
c) Dar el tratamiento correspondiente a las sustancias de desecho
d) Reafirmar los conocimientos del proceso de purificacin de las sustancias
e) Manejar adecuadamente tanto el material como las sustancias utilizadas y la obtenida
f) Participar en el proceso de la obtencin de la sustancia
g) Estar conciente de vigilar la seguridad personal y colectiva.
REACTIVOS: MATERIAL
50 g. de nitrobenceno
1 Matraz de boca Esmerilada de 100 ml
19/23 71 g de estao granulado
1 Refrigerante de boca esmerilada de 19/23
300 cm
3
c. Clorhdrico industrial
1 Canasta de calentamiento
300 cm3 de sosa al 30% 2 Mangueras de ltex
100 a 150 cm3 de ter 1 Contenedor acuoso
150 g de sal comn 1 Bomba para re circular agua
5-10 g de potasa custica 1 Termmetro
2-3 g de Zn en polvo 1 Adaptador para termmetro
2 Vasos de precipitados de 100 ml
1 Probeta de 20 ml
1 Probeta de 20 ml
1 Embudo de adicin
1 Conexin de vidrio para destilacin con vapor
1 Matraz Erlemeyer de
1000 ml
1 Matraz de destilacin con salida lateral
1 Parrilla de calentamiento
1 Matraz Erlenmeyer de 200 ml
1 Vaso de precipitados de 600 ml
PROCEDIMIENTO
En un matraz redondo, de 100 ml, Se ponen 3 ml de nitrobenceno y
7.4 g de estao. En una probeta se miden 14.8 ml de HCl, unos cuantos ml de ste se
adicionan en el matraz que contiene el estao y el nitrobenceno. En seguida comienza una
reaccin exotrmica, si es necesario, el matraz se debe enfriar exteriormente con agua fra
para evitar prdidas del producto por evaporacin. Tambin se debe evitar un exceso de
refrigeracin, puesto que la reduccin transcurre ms rpidamente a alta que a baja
temperatura. Se debe procurar que el contenido del matraz este caliente pero sin llegar a
hervir. Tan pronto como disminuye la velocidad de la reaccin, se aade otra porcin de
HCl, se agita el matraz y se enfra lo necesario para evitar la ebullicin. La adicin del cido
se contina de esta manera con constante agitacin del matraz, hasta que se ha agregado
todo el HCI. Despus el matraz se coloca en reflujo durante 20 minutos agitando
frecuentemente.
Durante este tiempo, se prepara la solucin de NaOH. En un vaso se pesan 6.6 g de NaOH,
se agrega 33 ml de agua y la solucin resultante se enfra a unos 30 C aproximadamente.
El matraz de reaccin se quita de reflujo y se refrigera con agua fra hasta que su contenido
alcance una temperatura inferior a 50 C. Entonces se aade una pequea cantidad de
solucin de NaOH, se agita el matraz y se enfra para que no se escapen vapores.
Sucesivamente se van aadiendo pequeas cantidades de lcali, enfriando exteriormente el
matraz cuando sea necesario, hasta que se haya agregado toda la solucin de NaOH.
Se agita el matraz y con un agitador, se toma una gota del lquido, que se deposita sobre
papel tornasol. Si da reaccin alcalina se debe agregar ms NaOH. A continuacin el
contenido del matraz se somete a una destilacin en corriente de vapor. Al principio en el
colector se recogen gotas de anilina, pero a medida que avanza la destilacin, las pequeas
cantidades de anilina que destilan pasan disueltas en agua. Se recogen unos 39 ml de
destilado, se adiciona 7.3 g de cloruro de sodio y la mezcla se agita hasta que se disuelva la
sal.
El destilado se pasa a un embudo de llave y se separa toda la anilina. La solucin acuosa se
devuelve al embudo y el resto de la anilina se extrae de la solucin con 2.5 ml de cloruro de
metileno. Se separa la capa orgnica y se une a la anilina previamente separada. La solucin
de anilina se pasa a un matraz erlenmeyer, se seca agitndola con unos 0.8 g de NaOH
slido. Una vez preparado el aparato para la destilacin final de anilina (180-186 oC). La
fraccin intermedia se debe fraccionar de nuevo para recuperar una nueva cantidad de
anilina, que se unir a la obtenida en la primera destilacin. La anilina pura recientemente
destilada es casi incolora, pero se obscurece exponindola al sol y al aire. Si la anilina
obtenida presenta un color naranja es seal de que la reduccin del nitrobenceno no ha sido
total. La pasta de xidos se lava con ms agua.
LABORATORIO 6
TINCION DE GRAM
I. OBJETIVO
Conocer la utilidad de la tencin de gram como herramienta para el
diagnostico microbiolgicos de algunos procesos bacterianos.
Conocer el fundamento de la coloracin de gram
Realizar lecturas microscpicas para identificacin bacteriana preliminar.
II. FUNDAMENTO TERICO
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en
microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe
su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se
utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder
realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose
Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria
Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo
microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se vuelve gram
negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retencin o el escape del
colorante. Una posible teora del mecanismo de tincin es la siguiente:
El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca
insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes
de los microorganismos gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera
que la laca no puede atravesar. En las clulas gram negativas, los lpidos de la pared
(ms abundantes que en las clulas gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo
que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan
esta teora, pero es indudable la importancia general de la pared celular.
Varias son las teoras emitidas para explicar el mecanismo de la tincin de Gram. Stearn
(1923) bas la suya en una combinacin qumica entre el colorante y las protenas de las
bacterias, Las protenas y aminocidos son cuerpos anfteros, esto es, tienen la facultad
de reaccionar con cidos y con bases, gracias a sus grupos amino y carboxilo; en
soluciones cidas, reaccionan con los cidos, y en soluciones alcalinas lo hacen con las
bases. De igual manera, comprobaron que la reaccin de tincin de las bacterias
obedece en gran parte a su contenido protenico; estos microorganismos se conducen
como cuerpos anfteros, al combinarse con colorantes cidos en soluciones cidas y con
los bsicos en medio alcalinos. La combinacin con ambos tipos de colorante no se
produce en el punto isoelctrico. Como los microorganismos contienen ms de una
protena, ese punto no tiene un valor preciso y definido, sino que constituye ms bien
una gama o escala que comprende dos o tres unidades de pH. Segn Stern y Stearn, los
microorganismos gram positivos tienen una escala isoelctrica de pH inferior a la de los
microorganismos gram negativos;
III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:
2 vidrios esterilizados,
Cinta maskin
Varilla
Microscopio
Lugol de gram
Alcohol
Fuscina
Cristal violeta violeta de genciana.
PROCEDIMIENTO:
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto
Gram positivas como Gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un
compuesto formado por I
2
(yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual est
presente para solubilizar el yodo, y acta de mordiente, haciendo que el cristal violeta se
fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I
2
entra en las clulas y
forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que
en la misma es soluble el complejo I
2
/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no
se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras
que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una
tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del
protocolo, las Gram positivas se vern azul-violceas y las Gram negativas, se vern
rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en
1884. En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno
de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado.
Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo,
que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el portaobjetos con
alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin
de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o
hasta inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos con un
decolorante, y el color no se modifica al aadir ste; otros pierden con facilidad el
primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos,
y los que pierden la primera coloracin y retienen la segunda, de gramnegativos.
Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos clasificar a los microorganismos en
uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados
dan en la coloracin Gram. Los representantes ms usados de este grupo son violeta de
metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre
atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el nmero de grupos
metilo en la molcula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono ms oscuro es la
hexametil-p-rosanilina (violeta cristal), y el tinte ms ligero, la tetrametil-p-rosanilina
(violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren
al nmero de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B,
tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el
mejor colorante primario para teir por el mtodo de Gram.
La facultad de las clulas para tomar la coloracin Gram no es propia de toda sustancia
viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. As vemos que las
clulas de plantas y animales superiores no conservan la primera coloracin; los mohos
se tien con cierta irregularidad; los grnulos de micelios propenden retener el
colorante. La reaccin de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo
del cultivo y el pH del medio, y quiz por otras causas.