Utilizao da espectroscopia Raman na verificao da citotoxidade de Tabebuia avellanedae em clulas Caco-2 in vivo

NDICE

1. INTRODUO E DESENVOLVIMENTO............................................... 1 2. OBJETIVOS............................................................................................3 2.1. Objetivo Geral.......................................................................... 3 2.2. Objetivos Especficos............................................................ 3 3. REVISO DA LITERATURA.................................................................. 4 4. METODOLOGIA E AVALIAO........................................................... 10 4.1. Cultura celular......................................................................... 10 4.2. Aquisio das imagens das clulas...................................... 10 4.3. Caractersticas farmacolgicas............................................. 11 4.4. Cultura celular para Espectroscopia Raman........................ 12 4.5. Cultura celular para MTT........................................................ 13 4.6. 4.7. Sistema de Espectroscopia Raman Dispersivo................13 Processamento dos espectros .......................................... 14

5. CRONOGRAMA DE EXECUO.......................................................... 15 6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.......................................................17

1. INTRODUO E DESENVOLVIMENTO
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O termo cncer utilizado genericamente para representar um conjunto de maisde 100 doenas, incluindo tumores malignos de diferentes localizaes. Importante causa de doena e morte no Brasil, desde 2003, as neoplasias malignas constituem-se na segunda causa de morte na populao, representando quase 17% dos bitos de causa conhecida, notificados em 2007 no Sistema de Informaes sobre Mortalidade. Compreender e controlar as doenas malignas requer conhecimentos cientficos e experincias que vo desde o conhecimento dos complexos mecanismos de regulao molecular intracelular s escolhas individuais do estilo de vida. Tambm se exige uma gesto competente e o melhor uso dos recursos disponveis para o planejamento, execuo e avaliao das estratgias de controle da doena. A preveno e o controle de cncer esto entre os mais importantes desafios, cientficos e de sade pblica, da nossa poca (BRASIL, 2009). A espectroscopia Raman manipula uma mudana na freqncia quando a luz espalhada por molculas ou tomos absorvidos no substrato. Portanto, ela prov a identidade molecular ou digital, informao sobre a estrutura molecular, interao intermolecular e dinmica inerente (LORINCZ et al., 2004; HOSSAIN et al., 2009). uma tcnica no destrutiva e no invasiva, incluindo anlises de amostras biolgicas in situ e in vivo (HOSSAIN et al., 2009; OWEN et al., 2006). A espectroscopia Raman pode ser levada sob uma larga gama de condies de temperatura, presso, etc (HOSSAIN et al., 2009). O Ip-Roxo (Tabebuia avellanedae Lorentz & Grizebach Goett) tido como um poderoso auxiliar no combate a determinados tipos de tumores cancergenos. usado tambm como analgsico e como auxiliar no tratamento de doenas estomacais e da pele. No passado, foi largamente utilizado no tratamento da sfilis. A rvore do Ip-roxo alta e tem como caracterstica as flores tubulares arroxeadas. Os estudos ainda no comprovaram suas propriedades anticancergenas. A substncia com propriedades teraputicas encontrada na principalmente na casca, e folhas. O presente trabalho visa sanar a carncia de dados a cerca do funcionamento da ao de citotoxidade do extrato vegetal de Tabebuia
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avellanedae em clulas Caco-2 e possibilitar a investigao de novos frmacos.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo Geral O objetivo deste estudo ser avaliar a eficcia teraputica e o uso das concentraes adequadas no combate s clulas Caco-2 por meio da Espectroscopia Raman Dispersiva. 2.2. Objetivos Especficos - Avaliar a ao do extrato vegetal de Tabebuia avellanedae Lorentz & Grizebach Goett in vitro como antineoplsico em adenocarcinoma de clon para utilizao teraputica em Medicina; - Avaliar se a Espectroscopia Raman Dispersiva (830nm) poderia ser usada para determinar a eficincia antineoplsica do extrato de T. avellanedae nas concentraes de D3 (0,1 g/mL), D6 (0,1 ng/mL), D9 (0,1x10-3 ng/mL), D12 (0,1x10-6 ng/mL) e D30 (0,1x10-24 ng/mL) em cultura de clulas Caco-2; - Comparar os espectros Raman da suspenso das clulas obtidas aps a inoculao do extrato vegetal na cultura das mesmas, obtendo-se, assim, a correlao e a viabilidade atravs da mensurao da atividade mitocondrial, fornecida pelo teste do ensaio de MTT Assay.

3. REVISO DA LITERATURA Segundo recente relatrio da Agncia Internacional para Pesquisa em Cncer (IARC)/OMS (World Cancer Report, 2008), o impacto global do cncer mais que dobrou em 30 anos. Estimou-se que, no ano de 2008, ocorreriam cerca de 12 milhes de casos novos de cncer e 7 milhes de bitos. O contnuo crescimento populacional, bem como seu envelhecimento, afetar de forma significativa o impacto do cncer no mundo. Esse impacto recair principalmente sobre os pases de mdio e baixo desenvolvimento. A IARC/OMS estimou que, em 2008, metade dos casos novos e cerca de dois teros dos bitos por cncer ocorrero nessas localidades O cncer uma doena gentica em mamferos, aves e plantas, resultado da alterao da dupla fita do DNA sofrida por um grupo de clulas, que lhes confere independncia no controle proliferativo. Porm, hoje se sabe que a patognese do cncer tem incidncia de fatores ambientais somados s mutaes herdadas que alteram o genoma das clulas tumorais. Quando isso ocorre desencadeia trs fatores importantes: ativao da oncognese; alteraes nos genes reguladores; e apoptose e inativao de genes supressores do cncer (LOPES, 2008). uma das doenas mais srias prejudicando a sade e a vida humana e a sua influncia est crescendo. Devido a patogenia do cncer e de algumas doenas correlatas no terem sido encontradas e o diagnstico efetivo e a terapia completa no poderem ser levadas a cabo no presente, impossvel controlar o progresso do estado da enfermidade para o cncer em pacientes em estgio terminal. muito difcil diagnosticar cncer em modalidades porque os primeiros sintomas do cncer no so evidentes e eles no tm diferenas distintas das de algumas outras doenas (YAN et al., 2005). necessrio conhecer a biologia da clula cancergena para que, atravs do mecanismo de atividade funcional, se possa chegar o mais prximo da deteco pela espectroscopia Raman (LOPES, 2008). Apesar de progressos significativos terem sido feitos tanto no entendimento quanto no tratamento do cncer durante os ltimos trinta anos, ele ainda permanece sendo a segunda maior causa de morte nos Estados
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Unidos. Deteco no invasiva do cncer em seus estgios iniciais de grande interesse desde a sua diagnose precoce, e em combinao com terapias precisas contra o cncer, poderiam significantemente aumentar a taxa de sobrevivncia de pacientes (YAN et al., 2005; XIAO et al., 2009). A nanomedicina, uma rea emergente de pesquisa que integra nanomateriais e biomedicina, tem o potencial de prover novas ferramentas diagnsticas para deteco de cnceres primrios em seus estgios mais precoces, e prover melhora nos protocolos teraputicos. Pesquisa em nanomedicina liderar tambm o entendimento dos intricados mecanismos dos nanomateriais (XIAO et al., 2009). A espectroscopia o estudo do espectro obtido pela interao da radiao eletromagntica com a matria, cujo principal objetivo a determinao dos nveis de energia dos tomos ou molculas. Nesta tcnica utiliza-se a radiao eletromagntica para testar o comportamento vibracional de molculas, observando-se o espalhamento ou absoro dessa radiao (SALA, 1996 in LOPES, 2008). Inicialmente, o efeito Raman foi previsto teoricamente por A. Smekal, em 1923, que utilizou a teoria quntica para este fim (SMEKAL, 1923). Contudo, somente em 1928 que a observao experimental do fenmeno bem como sua explicao foi dada pelo indiano Chandrasekhara Venkata Raman durante um encontro da Associao de Cincias do Sul da ndia (RAMAN, 1928). Num sistema Raman dispersivo um espectro Raman obtido quando a luz monocromtica de um laser incide sobre a amostra que se deseja estudar. A luz espalhada em todas as direes, quase que isotropicamente, mas s possvel coletar aqueles ftons que atingirem a abertura do espectrgrafo. Em seguida a luz dispersa por uma rede de difrao dentro do espectrgrafo e seus componentes so recolhidos em um detector que converte a intensidade da luz sinais eltricos que so interpretados em um computador na forma de um espectro Raman (FLORES, 2008). A espectroscopia Raman manipula uma mudana na freqncia quando a luz espalhada por molculas ou tomos absorvidos no substrato. Portanto, ela prov a identidade molecular ou digital, informao sobre a estrutura molecular, interao intermolecular e dinmica inerente (LORINCZ et al., 2004; HOSSAIN et al., 2009). uma tcnica no destrutiva e no invasiva, incluindo
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anlises de amostras biolgicas in situ e in vivo (HOSSAIN et al., 2009; OWEN et al., 2006). A espectroscopia Raman pode ser levada sob uma larga gama de condies de temperatura, presso, etc (HOSSAIN et al., 2009). Quando uma amostra irradiada, uma troca de energia ocorre entre a luz de excitao e as molculas da amostra, que resulta em uma mudana mensurvel do comprimento de onda da luz incidente do laser. O espectro Raman resultante uma digital bioqumica, contendo bandas representando os modos normais de vibrao de todas as molculas dentro da regio da amostra interrogada. Como as caractersticas moleculares de todos os biopolmeros celulares so simultaneamente investigados, h muita informao contida no espectro Raman. O acoplamento do espectrmetro Raman a um microscpio tico, conhecido como microespectroscopia Raman, facilita a coleta de espectros de volumes < 1 m3, habilitando a analise de caractersticas em microescala de amostras biolgicas (SWAIN et al., 2007). Protenas, cidos nuclicos, polissacardeos e carotenides tm seu prprio grupo de bandas caractersticas. Isso importante, contudo, para reconhecer que h uma superposio considervel entre as bandas dos diferentes componentes do tecido; por isso, necessrio olhar para todas as muitas bandas de um dado tipo de molcula. Contudo, a espectroscopia Raman prov informao detalhada acerca da composio biomolecular dos tecidos, o que deve ser usado para distinguir entre tecido normal, intermedirio ou maligno (LORINCZ et al., 2004; CREELY et al., 2005). A espectroscopia por espalhamento Raman prov informao similar ao que fornece a espectroscopia por absoro no FT-IR (Fourier-transform Infrared). Contudo, a forte absoro da gua na mensurao do FT-IR impede a anlise de amostras biolgicas hidratadas. Ao contrrio, a espectroscopia Raman se encaixa melhor no estudo de clulas vivas, j que os espectros de meios aquosos demonstraram somente uma mnima interferncia da gua. A espectroscopia Raman ainda pode oferecer resoluo espacial superior que a da FT-IR devido ao laser de onda mais curta usado para a excitao (SWAIN et al., 2007). Anexando anticorpos ou outro agente elucidante (como receptores ligantes) superfcie de nanocarregadores para atingir alvos especficos de clulas cancerosas uma modalidade promissora para terapia e diagnstico
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oncolgico (PEER et al., 2007). A melhora da eficcia teraputica dos nanocarregadores marcados tem sido estabelecida em mltiplos modelos de cncer animais e atualmente mais de 120 testes clnicos esto em andamento com vrias formulaes de nanocarregadores contendo anticorpos (SAPRA, et al., 2003). Os mais comumente explorados nanocarregadores incluem conjugados de polmeros, nanopartculas polimricas, carregadores baseados em lipdios como os lipossomos e as micelas e dendrmeros (PEER et al., 2007). Avanos recentes em nanotecnologia desenvolveram uma cadeia de novos nanomateriais inorgnicos como as nanoclulas metlicas e nanotubos de carbono, oferecendo propriedades opto-eletrnicas nicas comparadas com os convencionais nanocarregadores orgnicos (HIRSH et al., 2006; YANG et al., 2007). Desde a descoberta de nanotubos de carbono, pesquisadores tm explorado seu potencial em aplicaes biolgicas e biomdicas. A recente expanso e disponibilidade de modificaes qumicas e mtodos de biofuncionalizaes tem tornado possvel gerar uma nova classe de nanotubos bioativos que so conjugados com protenas, carboidratos ou cidos nuclicos (YANG et al., 2007). Com a investigao de fontes promissoras para o desenvolvimento e produo de novos frmacos voltados ao combate de clulas cancerosas, possvel isolar o princpio ativo dessa fonte e faz-lo ser transportado atravs de nanocarregadores, sem perdas, s clulas alvo, de forma que haja total aproveitamento da ao do frmaco e menos probabilidade de incitar a resistncia ao frmaco por parte das clulas alvo. JEES et al. (2007) aplicaram a espectroscopia Raman em culturas de clulas vivas e fixadas para discriminar entre tipos de clulas definidas. O espectro Raman foi adquirido de queratincitos primrios humano (PHK), PHK expressando p gene E7 do HPV (Papiloma Vrus Humano) 16 (PHKE7) e clulas CaSki, uma linhagem de clulas contendo HPV16 derivada de carcinoma cervical. O espectro Raman mostrou variaes, principalmente nos picos originados do DNA e das protenas, consistente com as mudanas associadas expresso gnica e celular do HPV com neoplasia, em ambas clulas vivas e fixadas. A componente principal da anlise produziu boa discriminao entre os tipos celulares acima de 100% para a comparao de
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PHK fixada e CaSki. Esses resultados demonstram a habilidade da espectroscopia Raman em discriminar entre tipos de clulas representando diferentes estgios de neoplasia cervical (JESS et al., 2007; OWEN et al., 2006). O Ip-Roxo (Tabebuia avellanedae Lorentz & Grizebach Goett) tido como um poderoso auxiliar no combate a determinados tipos de tumores cancergenos. usado tambm como analgsico e como auxiliar no tratamento de doenas estomacais e da pele. No passado, foi largamente utilizado no tratamento da sfilis. A rvore do Ip-roxo alta e tem como caracterstica as flores tubulares arroxeadas. Os estudos ainda no comprovaram suas propriedades anticancergenas. A substncia com propriedades teraputicas encontrada na principalmente na casca, e folhas. Tabebuia avellanedae possui em sua constituio qumica cido tnico, cido lapchico, antraquinonas, carboidratos, desoxilapachol, flavonides, fibras, gorduras, lapachol, naftoquinonas, protenas, sais minerais, sais alcalinos, saponinas, vitaminas. A -lapachona (C15H14O3, MM 242,3), conhecida quimicamente por 3,4-diidro-2,2-dimetil-2H-naftol[1,2-b]pirano-5,6-diona, uma ortonaftoquinona de ocorrncia natural isolada do ip-roxo, ou paudarco roxo (Tabebuia avellandae Lor), da famlia Bignoneaceae, que cresce principalmente no Brasil (ALVES et al., 2008). um produto vegetal simples que tem demonstrado excelente potencial antineoplsico, agindo por um mecanismo particular de apoptose contra diversos tipos de cncer, em especial algumas linhagens de prstata refratrias aos tratamentos convencionais (ALVES et al., 2008; BOOTHMAN et al., 1989). Est sendo desenvolvido pelo Laboratrio Farmacutico do Estado de Pernambuco LAFEPE, como parte integrante de seu elenco oncolgico, um medicamento base de -lapachona na forma farmacutica cpsula gelatinosa mole. Para isso, de suma importncia a caracterizao fsico-qumica do princpio ativo, pois, dessa forma, se estabelece a carta de identidade do produto, possibilitando sua padronizao e avaliao de sua pureza, tornando-o adequado para a realizao de estudos de pr-formulao (ALVES et al., 2008). Em estudos de BOVERIS et al. (1978) ficou comprovado a ao inibitria de -lapachona no crescimento em meio lquido de Trypanosoma cruzi. 10

lapachona foi capaz de estimular a produo de H 2O2, causando alteraes metablicas e ultraestruturais severas em T. cruzi, mostrando ser um trypanocida efetivo. O presente trabalho visa sanar a carncia de dados a cerca do funcionamento da ao de citotoxidade do extrato vegetal de Tabebuia avellanedae em clulas Caco-2 e possibilitar a investigao de novos frmacos.

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4. METODOLOGIA E AVALIAO 4.1. Cultura celular A metodologia adotada est baseada em (LOPES, 2008). As clulas Caco-2 (CR069, Adenocarcinoma de clon) sero obtidas junto ao Banco de clulas do Rio de Janeiro/RJ. A linhagem celular ser cultivada em Meio Mnimo Essencial (MEM), suplementado com 10% de soro fetal bovino, penicilina (100 U/mL), estreptomicina (100 mM/mL), fungizona (0,25 g/mL) e mantida a 37C em atmosfera de 5% de CO2. As clulas Caco-2 so extradas de Adenocarcinoma de clon humano, cultivadas em filtros permeveis e porosos; se diferenciam espontaneamente em entercitos, formando uma membrana composta de clulas em monocamadas aderidas por junes e apresentam como vantagem a rpida multiplicao celular (BALIMANE et al., 2000 in LOPES, 2008). A preparao das clulas da monocamada requer um perodo de cultura de trs semanas. Entretanto, este tempo pode ser reduzido para menos de uma semana por modificaes simultneas no material de revestimento dos filtros e no meio de crescimento. A reduo no perodo de cultura proporciona monocamada funcional com maior produtividade, alm de reduzir a contaminao por fungos/bactrias (CHONG et al., 1997 in LOPES, 2008). Apesar dessas limitaes, este o modelo mais empregado no momento e permite obter importantes informaes para o estudo de novos frmacos. 4.2. Aquisio das imagens das clulas Sero obtidas foto-micrografias de todas as placas das culturas de clulas atravs de um microscpio ptico (L40x0,50) e analisadas com software.

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4.3. Caractersticas farmacolgicas O extrato vegetal ser solicitado ao Laboratrio de Fitoqumica da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, localizado na cidade de Campo Grande/MS. Nome cientfico: Tabebuia avellanedae Lorentz & Grizebach Goett. Famlia: Bignoniaceae. Sinnimos botnicos: Bignonia serratifolia, Gelseminum avellanedae, Handroanthus avellanedae, Handroanthus impetiginosus (Mart. & DC.) Mattos, Handroanthus impetiginosus var. lepidotus (Bureau) Mattos, Tabebuia avellanedae Lorenz & Grizebach., Tabebuia dugandii Standl., Tabebuia ipe (Mart.) Standl., Tabebuia ipe var. integra (Sprague) Sandwith, Tabebuia nicaraguensis S. F. Blake, Tabebuia palmeri Rose, Tabebuia schunkevigoi D. R. Simpson, Tecoma adenophylla Bureau & K. Schum., Tecoma avellanedae (Lorentz ex Grizeb.) Speg., Tecoma avellanedae var. alba Lillo, Tecoma impetiginosa Mart. & DC., Tecoma impetiginosa Mart., Tecoma impetiginosa var. lepidota Bureau, Tecoma integra (Sprague) Chodat, Tecoma ipe fo. leucotricha Hassl., Tecoma ipe var. integra Sprague, Tecoma ipe var. integrifolia Hassl. Outros nomes populares: cabro, ip, ip-de-flor-roxa, ip-mirim, ippreto, ip-tabaco, ip-uva-roxa, ipeva-roxa, pau-d'arco-roxo, peva, peva-roxa. Constituintes qumicos: cido tnico, cido lapchico, antraquinonas, carboidratos, desoxilapachol, flavonides, fibras, gorduras, lapachol, naftoquinonas, vitaminas. protenas, sais minerais, sais alcalinos, saponinas,

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Propriedades medicinais: adstringente, analgsico, antiblenorrgica, antimicrobiana (gram +), antiinflamatria, antiinfecciosa, antitumoral, antinevrlgica, anti-sifiltica, antibactericida, antifungo, depurativa, diurtico. Indicaes: alergia, anemia, diabete, diarria, cncer, candidiasis, catarro da uretra, colite, coceira, ovrio, estimulante do sistema imunolgico (preveno de leucemia, diabete, cncer), feridas, fgado, fungo, garganta, inflamaco artrtica, leucemia, lupus, mal de Parkson, malria, osteomielite, problemas respiratrios, psorase, queimaduras, lcera, tero. Partes utilizadas: casca, folhas. Contra-indicaes/cuidados: gravidez, perodo de lactao.

Altas doses causam nuseas, vmitos, diarria, efeito anticoagulativo do sangue; abortivo; no foi evidenciada toxidez heptica ou renal. 4.4. Cultura celular para Espectroscopia Raman As clulas Canco-2 (colo-retal) sero cultivadas em placas de 96 poos, com meio MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino. As clulas sero inoculadas com 100 g/mL de cada uma das concentraes de T. avellanedae (de acordo com os grupos). Para a leitura na espectroscopia Raman ser feita anlise aps 72 horas de inoculao com o extrato, ocorrendo uma nova administrao do produto com intervalo de 24 horas. Grupos: G1 - T. avellanedae D3 + Clulas caco-2 G2 - T. avellanedae D6 + Clulas caco-2 G3 - T. avellanedae D9 + Clulas caco-2 G4 - T. avellanedae D12 + Clulas caco-2 G5 - T. avellanedae D30 + Clulas caco-2
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G6 - Clulas caco-2 4.5. Cultura celular para MTT As culturas celulares incubadas com T. avellanedae nas concentraes D3 (0,1 g/mL), D6 (0,1 ng/mL), D9 (0,1x10-3 ng/mL), D12 (0,1x10-6 ng/mL) e D30 (0,1x10-24 ng/mL), sero analisadas por microscopia ptica, com base nos registros realizados atravs de fotomicrografias que documentam o aspecto das clulas. Para anlise da citotoxidade ser utilizado o teste de MTT (1mg/mL) ((4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), que consiste num mtodo qumico-fsico destinado a verificar a viabilidade celular e citotoxidade do agente em questo Para este teste ser retirado todo o meio de cultura e adicionado 200 L de MTT e incubado a 37C por 1 hora. Aps esse perodo adiciona-se 200 L de DMSO (Dimetil sufxido) com agitao por 30 minutos para diluio dos cristais de formazana. A leitura ser realizada com Espectrofotmetro com filtro de 570 nm. 4.8. Sistema de Espectroscopia Raman Dispersivo O sistema Raman Dispersivo que ser usado para coletar o sinal de Raman est apresentado na Figura 1. composto por uma fonte de excitao, atravs de um laser de diodo em 830 nm, com densidade de potncia aproximadamente de 80 mW. Um espectro Raman obtido quando a luz monocromtica de um laser incide sobre a amostra que se deseja estudar. A luz espalhada em todas as direes, quase que isotropicamente, mas s possvel coletar aqueles ftons que atingirem a cobertura do espectrgrafo e seus componentes so recolhidos em um detector que converte a intensidade da luz em sinais eltricos que so interpretados em um computador na forma de um espectro Raman. Para diminuir o rudo ocasionado pela interferncia vibracional das molculas do prprio equipamento de deteco recorreu-se a refrigerao da cmara CCD (Charged-coupled device) por nitrognio lquido. Este
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dispositivo multicanal, com excepcional sensibilidade e rudo intrnseco muito baixo, melhorou a relao sinal-rudo e a velocidade de aquisio dos dados.
4.9. Processamento dos espectros

O sinal ser coletado por um espectrgrafo e analisado em um detector (CSMA), refrigerao a -95C com nitrognio lquido. Controlada por computador, a abertura da fenda do espectrgrafo ser ajustada em 200 m e a aquisio do sinal ser configurada para realizar uma nica acumulao com 30 segundos para cada espectro. A obteno dos espectros Raman encontra uma das maiores dificuldades na presena da fluorescncia do tecido biolgico. A subtrao computacional foi facilitada atravs de programas que melhoraram crescentemente (KHALIL, 1999 in LOPES, 2008).

Figura 1 Diagrama esquemtico da Espectroscopia Raman Dispersiva a 830 nm e potncia de 80 mW do laser e escala espectral de 800 a 1800 cm-1. Fonte: (SATHAIAH, 1996 in LOPES, 2008).

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5. CRONOGRAMA DE EXECUO ATIVIDADE Reviso bibliogrfica Solicitao de oramentos de equipamentos Solicitao de oramentos de materiais de consumo Solicitao de clulas Caco2 Padronizao dos experimentos Cultura celular Aquisio das imagens das clulas Cultura celular para Espectroscopia Raman Cultura celular para MTT Processamento dos espectros Elaborao de resumos para apresentao em encontros cientficos Compilao dos dados e X X X
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J X X X X

F X X X X

M X X X

A X

M X

2010 J J X X

A X

S X

O X

N X

D X

J X

F X

M X

A X

M X

2011 J J X X

A X

S X

O X

N X

D X

X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

elaborao de artigos Elaborao e apresentao de relatrio final

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6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ALVES, G. M. C.; ROLIM, L. A.; NETO, P. J. R; LEITE, A. C. L.; BRONDANI, D. J. Purificao e caracterizao da -lapachona e estudo de estabilidade dos cristais em diferentes condies de armazenamento Quim. Nova, v. 31, n. 2, p. 413-416, 2008. BOOTHMAN, D. A.; PARDEE, A. B. Inhibition of radiation-induced neoplastic transformation by -lapachone Proc. Nati. Acad. Sci. USA, v. 86, p. 4963-4967,1989. BOVERIS, A.; DOCAMPO, R.; TURRENS, J. F.; STOPPANI, A. O. M. Effect of P-Lapachone on Superoxide Anion and Hydrogen Peroxide Production in Trypanosoma cruzi. Biochem. J., v. 175, p. 431-439, 1978. BRASIL. MINISTRIO DA SADE. Instituto Nacional de Cncer (INCA). Estimativa 2010: incidncia de cncer no Brasil/Instituto Nacional de Cncer. Rio de Janeiro: INCA, 2009. Disponvel em: http://bvsms.saude.gov.br/bvs/controle_cancer Acessado em 02/12/2009. CREELY, C. M.; SINGH, G. P.; VOLPE, G.; PETROV, D. V. Raman Spectroscopy on Floating Cells. Biophotonics, 2005. JESS, P. R. T.; SMITH, D. D. W.; MAZILU, M.; DHOLAKIA, K.; RICHES, A. C.; HERRINGTON, C. S. Early detection of cervical neoplasia by Raman spectroscopy. Int. J. Cancer, v. 121, p. 27232728, 2007. LOPES, D. F. Utilizao da espectroscopia Raman na verificao da citotoxidade de Viscum album em clulas Caco-2 in vivo. Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento, Universidade do Vale do Paraba, 2008, 66 p. Dissertao de Mestrado.

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Disponvel em: http://www.ihb.org.br/dpub/docs/dissertacoes/Daniela_Franco_Lopes_2008.pdf Acessado em 30/11/2009. LORINCZ, A.; HADDAD, D.; NAIK, R.; NAIK, V.; FUNG, A.; CAO, A.; MANDA, P.; PANDYA, A.; RABAH, G. A. R.; LANGENBURG, S. E.; KLEIN, M. D. Raman Spectroscopy for Neoplastic Tissue Differentiation: A Pilot Study. Journal of Pediatric Surgery, v. 39, n. 6, p. 953-956, 2004. HIRSCH, L.R.; GOBIN, A.M.; LOWERY, A.R.; TAM, F.; DREZEK, R.A.; HALAS, N.J.; WEST, J.L. Metal nanoshells. Ann. Biomed. Eng., v. 34, p.15-22, 2006. HOSSAIN, M. K.; OZAKI, Y. Surface-enhanced Raman scattering: facts and inline trends. Current Science, v. 97, n. 2, 2009. OWEN, C. A.; NOTINGHER, I.; HILL, R.; STEVENS, M.; HENCH, L. L. Progress in Raman spectroscopy in the fields of tissue engineering, diagnostics and toxicological testing J. Mater. Sci.: Mater Med, v. 17, p. 10191023, 2006. PEER, D.; KARP, J.M.; HONG, S.; FAROKHZAD, O.C.; MARGALIT, R.; LANGER, R. Nanocarriersas an emerging platform for cancer therapy. Nat. Nanotechnol, v. 2, p. 751-760, 2007. RAMAN, C. V. Indian J. Phys., v. 2, p. 387, 1928. SAPRA, P.; ALLEN, T.M. Ligand-targeted liposomal anticancer drugs. Prog. Lipid. Res., v. 42, p. 439-462, 2003. SMEKAL, A. Naturwiss, v. 1, p. 873, 1923. SWAIN, R. J.; STEVENS, M. M. Raman microspectroscopy for non-invasive biochemical analysis of single cells Biochemical Society Transactions, v. 35, part 3, 2007. WORLD HEALTH ORGANIZATION. World Cancer Report, 2008. International Agency for Research on Cancer, Lyon. 2009.
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YAN, X.; DONG, R.; ZHANG, L.; ZHANG, X.; ZHANG, Z. Raman spectra of single cell from gastrointestinal cancer patients. World J. Gastroenterol v. 11(21), p. 3290-3292, 2005. YANG, W.; THORDARSON, P.; GOODING, J.J.; RINGER, S.P.; BRAET, F. Carbon nanotubes for biological and biomedical applications. Nanotechnology, v. 18:412001, 2007. XIAO, Y.; GAO, X.;TARATULA, O.; TREADO, S.;URBAS, A.; HOLBROOK, R.D.; CAVICCHI, R. E; AVEDISIAN, C. T.; MITRA, S.; SAVLA, R.; WAGNER, P. D.; SRIVASTAVA, S.; HE, H. Anti-HER2 IgY antibody-functionalized single-walled carbon nanotubes for detection and selective destruction of breast cancer cells. BMC Cancer , 9:351, 2009.

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