APLICACIN DE BIOINFORMTICA EN EL ESTUDIO DEL CITOCROMO C DE Saccharomyces cerevisiae

Zulema Bustamante*, Roxana Garcia, Gabina Martnez, Carmen Luca Paz *Facultad de Bioqumica y Farmacia-UMSS. 2002 RESUMEN En el presente trabajo se utilizaron diferente programas de bioinformtica para la caracterizacin de la protena del citocromo C de Saccharomyces cerevisiae, determinando que tiene una funcin como transportadora de electrones en la mitocondria, la protena tiene 108 aminocidos y en comparacin con los citocromos c de otros organismos, realizando matching de secuencias, se ha observado que presenta un alto porcentaje de identidad de 84% a 64%, considerando 11 organismos diferentes; en el alineamiento mltiple se determin que en todas las protenas revisadas (11) existen regiones conservadas con una correspondencia idnticas de aminocidos. En relacin a la filogenia se observa una mayor cercana entre organismos taxonomicamente relacionados. En la visualizacin estructural de la protena se determin que es una protena compacta con algunas hlices alfa y bucles, y con un tomo de hierro unido al grupo hemo , ubicado en el interior de la molcula. En relacin a las vas metablicas se observ que el citocromo c participa en el transporte de electrones, proceso acoplado a la fosforilacin oxidativa, existiendo algunas enzimas especficas de Saccharomyces cerevisiae en esta va. Tambin se realiz la bsqueda del gen que codifica para el citocromo C iso 1,que cuenta con 330 nucletidos y se encuentra localizado en el cromosoma 10 de esta levadura.
INTRODUCCION La levadura Saccharomyces cerevisiae
Levadura es un nombre genrico que agrupa a una variedad de hongos, incluyendo tanto especies patgenas para plantas y animales, como especies no solamente inocuas sino de gran utilidad, algunas especies de levaduras del gnero Saccharomyces son capaces de llevar a cabo el proceso de fermentacin, propiedad que se ha explotado desde hace muchos aos en la produccin de pan y de bebidas alcohlicas. Desde el punto de vista cientfico, La levadura Saccharomyces cerevisiae se ha contituido en un modelo de estudio desde hace ms de cien aos, que se caracteriza porque posee un ciclo de vida que permite realizar estudios que requiere la gentica actual, tiene un genoma pequeo, unas cuantas veces mayor que el de Escherichia coli y 200 veces menor que el de clulas de mamfero, as durante aos se obtuvieron mutantes, se describieron vas metablicas, se maperon genes, y se hicieron estudios de microscopia antes que en ningn otro microorganismo.

El anlisis funcional del genoma de la levadura provee nuevas herramientas para el estudio de la genmica
Uno de los paradigmas ms importantes de la biologa, es el que establece que el ADN se transcribe a ARN, el cual se traduce, generndose todas las protenas que estn presentes en los diferentes momentos del ciclo celular. Son las

protenas las responsables de mantener el funcionamiento de la clula, y es por ello que el estudio simultneo de todo el juego de protenas presentes en los diferentes momentos de la clula ha resultado de gran inters (1) Las protenas que son sintetizadas por las levaduras participan en un gran nmero de procesos metablicos y energticos como el transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa.

Transporte de electrones y fosforilacion oxidativa

La mayor parte de la energa libre que se produce durante la oxidacin de la glucosa a CO2 es retenida en las coenzimas reducidas FADH 2 y NADH generadas en la gluclisis y el ciclo del cido ctrico, estas durante la respiracin liberan electrones, que irn pasando por una serie de transportadores en la membrana interna mitocondrial, formando 4 complejos: (2) 1.-Complejo I.- De la NADH deshidrogenasa a la ubiquinona 2.-Complejo II .-De la Succinato deshidrogenasa a la ubiquinona. 3.-Complejo III.-Citocromo reductasa.De la ubiquinona al citocromo C . 4.-complejo IV.-Citocromo C oxidasa, que acepta electrones del citocromo C y los cede al oxgeno. La citocromo oxidasa, dmero (hierro y cobre) cataliza de forma eficiente la reduccin del oxgeno.(3) 3). La clula puede utilizar el oxgeno para la respiracin solo porque la citocromo oxidasa sita al oxgeno en un centro bimetlico especial, donde se mantiene unida entre un tomo de hierro ligado a un grupo hemo y a un tomo de cobre, hasta que se capte un total de 4 electrones; solo entonces los 2 tomos de la molcula de oxgeno sern liberados como 2 molculas de agua sin ningn peligro (4) La energa resultante es usada para el bombeo de los protones hacia fuera de la membrana interna mitocondria y provoca un gradiente electroqumico que es positivo - acdico y negativo-alcalino en la matriz mitocondrial. La ATPsintasa es la enzima que cataliza la fosforilacin, posee una zona esfrica llamada factor I dirigida haca la matriz mitocondrial, y por otra parte el factor Fo integrado a la membrana. Dado que la membrana es bsicamente impermeable a los protones, por lo tanto el gradiente no se desarma por una constante reentrada de los mismos, y teniendo en cuenta que la ATP sintasa ( conocido como complejo F1, ATP asa mitocondrial) contiene el nico canal para la entrada de protones, por lo tanto a medida que los protones pasan por el canal, se produce la siguiente reaccin (5) ADP + Pi ATP El acoplamiento de los dos procesos se realiza a travs del gradiente de potencial electroqumico de protones que es generado por la cadena respiratoria durante la transferencia de electrones desde los sustratos hasta el oxigeno. Una de las protenas esenciales para el transporte de electrones es el citocromo C, que se caracteriza porque recibe los electrones del complejo ubiquinona citocromo C1 y transfiere al complejo citocromo oxidasa (2). Esta protena ha sido extrada de la membrana interna mitocondrial y ha sido purificada y cristalizada, la protena es esfrica de aproximadamente 104 a 113 residuos de aminocidos y un grupo hemo unido covalentemente, el carcter hidrfbico del entorno del grupo hemo hace que el potencial redox del citocromo C sea ms positivo. El citocromo C es una protena que esta presente en todos los organismos que contienen una cadena respiratoria mitocondrial, plantas, animales y microorganismos. Este transportador evoluciono hace ms de mil millones de aos, la funcin de la protena se ha mantenido vigente durante todo este tiempo. La secuencia de ms de 80 especies eucariotas ha sido determinada por Emil Smith y Col., el hallazgo ms importante es que 26 de los 104 aminocidos han permanecido inalterables durante ms de 1500 millones de aos, algunos ligandos como metionina e histidina son invariantes, en algunas regiones la secuencia es casi invariable en todas las molculas de citocromo C, el arrollamiento compacto de la protena requiere la presencia de glicina en sitios determinados, varios residuos invariantes de Lisina y Arginina estn localizados en los centros cargados positivamente en la superficie de la molcula.(6) Por todas las caractersticas mencionadas y siendo el citocromo C una protena esencial para la cadena respiratoria, en este trabajo se utilizaran diferentes herramientas de la bioinformtica para estudiar algunas caractersticas estructurales del citocromo C de la levadura y su relacin con los citocromos C de otros organismos, as mismo su filogenia, su similitud o diferencia con otros citocromos C, tambin se determinar la importancia de su participacin

en el transporte de electrones y en la fosforilacin oxidativa, por otra parte se buscara en la base de datos la secuencia de nucletidos que corresponde al gen que codifica esta protena (3).

METODOLOGA
Para el cumplimiento del objetivo del trabajo, se utilizaron diferentes herramientas de bioinformtica, que a continuacin se describirn:

Herramientas de bioinformtica utilizadas

1. Para la bsqueda de las protenas correspondientes al citocromo c, se utiliz una base datos, que fue el SRS (EMBL/EBI) http://srs.ebi.ac.uk, donde primero se investigo el nombre del gen del citocromo C que correspondi a CYC, esta base de datos se utiliz como punto de partida para la utilizacin de otros programas requeridos para el trabajo. 2. El matching de las secuencias de citocromo C de diferentes organismos se realiz utilizando el FastA 3. Tambin para el alineamiento se utiliz la base de datos ENTREZ,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez/ y el NCBI BLAST SERVER. 4. Se realiz el alineamiento mltiple de 11 citocromos C de inters, que fueron los de levaduras, hongos (Saccharomyces cerevisiae(2), Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces lactis, Neurospora crassa) y algunos vertebrados (humano, conejo, ratn, caballo, bovino y pigion domstico) utilizando el programa CLUSTAL X, instalado localmente ftp://ftp-igbmc.u-strasbg.fr/pub/ClustalX/ Para la determinacin de la filogenia del citocromo C se utilizo el TREE VIEW. http://taxonomy.zoology.gla.ac.uk/rod/treeview.html 5. Para la Visualizacin y caracterizacin estructural de la protena se utilizo el programa RASMOL 6. Para el alineamiento de cadenas, se utiliz el programa CE SERVE 7. Para el estudio de la regulacin de las vas metablicas se utiliz el programa KEGG. 8. Tambin como una actividad complementaria y para estudiar el gen del citocromo C de Saccharomyces cerevisiae, se utilizo YEAST MICROARRAY GLOBAL VIEWER.

RESULTADOS
En la bsqueda de las protenas que corresponden al gen CYC, se encontraron 431 entradas correspondientes a diferentes organismos, para el trabajo se seleccionaron en primer lugar los citocromos C de Saccharomyces cerevisiae, las caractersticas encontradas se resumen en el cuadro 1 Nombre del gen CYC1 YJR048W Descripcin Citocromo C iso-1 108 aminocidos Funcin Localizacin Especificidad en tejido subcelular Protena Espacio Es predominante en transportadora de intermembrana de la clulas aerobias en electrones, el grupo mitocondria crecimiento de Saccharomyces hemo de la forma oxidada, puede aceptar electrones del citocromo C1 y trasnferir a la citocromo oxidasa Protena Espacio Es predominante en transportadora de intermembrana de la crecimiento electrones, el grupo mitocondria anaerbico, en hemo de la forma clulas hemo oxidada, puede deficientes. aceptar electrones del citocromo C1 y trasnferir a la citocromo oxidasa

CYC7 CYP3 YEL039C

Citrocromo C iso-2 113 aminocidos

Cuadro 1. Caractersticas del citocromo C en Saccharomyces cervisiae, reportadas en la base de datos SRS. De las 431, se seleccionaron las protenas que correspondan al citocromo C y se realiz un matching, considerando citocromos C de 11 diferentes organismos, utilizando Fast A, los resultados obtenidos se observan en la tabla 1.

FASTA
c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g c d e f g

Top_Score

% de identidad

FASTA:temp_job15_swissprot_1_CYC1_YEAST FASTA:temp_job15_swissprot_2_CYC_KLULA FASTA:temp_job15_swissprot_3_CYC7_YEAST FASTA:temp_job15_swissprot_12_CYC_NEUCR FASTA:temp_job15_swissprot_15_CYC_SCHPO FASTA:temp_job15_swissprot_23_CYC_COLLI FASTA:temp_job15_swissprot_27_CYC_MOUSE FASTA:temp_job15_swissprot_28_CYC_RABIT FASTA:temp_job15_swissprot_29_CYC_BOVIN FASTA:temp_job15_swissprot_31_CYC_HORSE FASTA:temp_job15_swissprot_38_CYC_HUMAN

740 100.000 649 84.906 632 85.849 539 69.231 523 70.192 479 64.356 477 64.356 476 64.356 476 64.356 474 63.366 472 64.356

TABLA 1. Porcentaje de identidad entre el citocromo C iso 1 de Saccahromyces cerevisiae, con el citocromo C de otros organismos. Como se observa en la tabla, existe una mayor similitud entre organismos ms cercanos, como la Neurospora crassa (CYC NEUCR) y Kluyveromyces lactis, (CYC KLULA) existiendo una mayor diferencia con los animales, especialmente vertebrados, como el humano, caballo, ratn y otros. El mismo trabajo se realiz utilizando la base de datos ENTREZ, con NCBI BLAST SERVER y los resultados se encuentran en la Fig 1.

Distribution of 251 Blast Hits on the Query Sequence

Fig. 1. Tamao de la protena y alineamiento del citocromo de la levadura con otros citocromos C Como se puede observar, existe un alto porcentaje de similitud entre los citocromos C de varios organismo, al mismo tiempo se observa que la protena es muy conservada, todos estos resultados estn apoyados por la bibliografa que indica que es una protena que ha cumplido la misma funcin desde hace millones de aos. En la realizacin del alineamiento mltiple utilizando el programa CLUSTALX despus de seleccionar 11 secuencias, se observan regiones que coinciden perfectamente en todas las protenas como las regiones 80 al y 91 (N,P,K,K,Y,I,P,G,T,K.M), la regin 28 al 30 (Q,C,H), tambin las regiones 43 al 45 (L,H.G) y del 46 al 48 (F,G,R), y presencia de GAPS, en los primeros 10 aminocidos en el citocromo C de algunos organismos. Todos estos resultados, estn de acuerdo a la bibliografa que indica que la en la protena del citocromo C existen regiones completamente idnticas entre los diferentes organismos. En relacin a la filogenia del citocromo C se seleccionaron 11 y el resultado se muestra en la Fig 2.

swall CYC COLLI

swall CYC HUMAN

swall CYC BOVIN

swall CYC HORSE

swall CYC MOUSE

swall CYC RABIT

swall CYC SCHPO

swall CYC NEUCR

swall CYC7 YEAST

swall CYC KLULA

swall CYC1 YEAST

Fig. 2. Filogenia del citocromo C utilizando el TREE VIEW En la figura se ve que claramente 3 ramas, una correspondiente a los hongos, la otra a los vertebrados y otra al hombre; se observa que existen citocromos C ms cercanos entre diferentes organismos, as, el citocromo del caballo, esta muy cerca del bovino y el citocromo del ratn cerca al del conejo, pero a su vez, estos se encuentran distantes de los citocromos de la levadura Saccharomyces, que a su vez estn filogenticamente cercanos a otras levaduras y hongos como Kluyveromyces lactis, Neurospora y Shizosaccharomyces pombe, un aspecto relevante es que el citocromo C del humano esta ms alejado del resto, sin embargo se observa que todos los citocromos C estn relacionados. Para la visualizacin de la estructura con el programa RASMOL, a partir del SRS, se seleccionaron las protenas con PDB, encontrando 56 entradas, de estas para el estudio y comparacin se seleccionaron 3, el citocromo C iso-1 e iso 2 de Saccharomyces y el del caballo, debido a que se encontraba en la base de datos. La estructura de las molculas de los citocromos C isoforma 1 e isoforma 2, se muestran en la figura 3.

Fig 3. Estructuras de citocromos C: 1YCC iso 1

1YCC citocromo C iso 2

Respecto a la estructura de la citocromo C iso 1, evaluada en este trabajo, se caracteriza porque es una protena compacta, presentando algunas regiones de hlice alfa y bucles, pero no se observa hoja plegada beta, tambin la figura muestra que la protena tiene un tomo de fierro en el grupo hemo, por otra parte se observa que el citocromo C iso 1 e iso 2 presentan una estructura similar. As mismo otra caracterstica estructural, es que aminocidos pequeos hidrofbicos como Alanina, Valina, y Glicina, se encuentran de preferencia en los bucles y los aminocidos cargados cidos y bsicos como Lisina, Arginina y Ac, glutmico se encuentran en la parte externa de las hlice alfa. El nmero de tomo de los diferentes amincidos en el citocromo C iso 1 y de la iso 2 se muestran en el cuadro 2. Citocromo C iso 1- 1YCC Lys Arg 144 33 His 40 Ser 24 Thr 56 Asp Glu 32 64 Asn Gln 56 18 Ala 35 Val 21 Ile 32 Leu Met 64 16 Phe Tyr 44 60 Trp 14 Cys Lys 18 48 Pro 28

Citocromo C iso 2- 1YEA Lys Arg His Ser Thr Asp Glu Asn Gln Ala Val Ile Leu Met Phe Tyr 154 33 30 36 63 40 54 40 21 40 21 40 40 24 44 00 Cuadro 2. Nmero de tomos de aminocidos en citocromos C iso 1 e iso 2 de la levadura

Trp 14

Cys Lys 12 48

Pro 35

Para la realizacin de alineamiento de cadenas de protenas se utiliz el CE SERVER, este alineamiento se realiz entre el citocromo iso1 (1YCC) y el iso 2 (1YEA) de la levadura, tambin se realiz el alineamiento con el citocromo C del caballo (1AKK), los resultados se encuentran en el cuadro 3. 1YEA:_(size=112) vs 1YCC:_(size=108) Structure Alignment 1YEA:_ - CYTOCHROME C (ISO-2, REDUCED STATE) 1YCC:_ - CYTOCHROME C (ISOZYME 1) (REDUCED) 1YEA:_ 1YCC:_ 1YEA:_ 1YCC:_ 6/-3 2/-3 66/58 62/58 GFKPGSAKKGATLFKTRCQQCHTIEEGGPNKVGPNLHGIFGRHSGQVKGYSYTDANINKN EFKAGSAKKGATLFKTRCLQCHTVEKGGPHKVGPNLHGIFGRHSGQAEGYSYTDANIKKN VKWDEDSMSEYLTNPKKYIPGTKMAFAGLKKEKDRNDLITYMTKAAK VLWDENNMSEYLTNPKKYIPGTKMAFGGLKKEKDRNDLITYLKKACE Rmsd = 1.6 Z-Score = 6.0 Sequence identity = 62.1% Aligned/gap positions = 103/0 Rmsd = 0.4 Z-Score = 6.5 Sequence identity = 84.1% Aligned/gap positions = 107/0

1AKK:_(size=104) vs 1YCC:_(size=108) Structure Alignment

1AKK:_ - MOL_ID: 1; MOLECULE: CYTOCHROME C; CHAIN: NULL 1YCC:_ - CYTOCHROME C (ISOZYME 1) (REDUCED) 1AKK:_ 1YCC:_ 1AKK:_ 1YCC:_ 1/2 6/2 61/62 66/62 GDVEKGKKIFVQKCAQCHTVEKGGKHKTGPNLHGLFGRKTGQAPGFTYTDANKNKGITWK GSAKKGATLFKTRCLQCHTVEKGGPHKVGPNLHGIFGRHSGQAEGYSYTDANIKKNVLWD EETLMEYLENPKKYIPGTKMIFAGIKKKTEREDLIAYLKKATN ENNMSEYLTNPKKYIPGTKMAFGGLKKEKDRNDLITYLKKACE

Cuadro 3. Alineamiento de cadenas de citocromo C iso 1 e iso 2 y alineamiento de citocromo C iso 1 con Citocromo C de Caballo. Realizando una comparacin entre el citocromo C iso 1 e iso 2, se ha concluido que existe una diferencia de 15 aminocidos entre ambas protenas, con una secuencia de identidad de 84,1% con este programa. Cuando se analiza la estructura del citocromo C de la levadura con el citocromo C del caballo, se observa una diferencia de 37 aminocidos con un porcentaje de identidad de 62,1% El resultado grfico de este ltimo alineamiento se muestra en la figura siguiente:

Fig 4. Alineamiento estructural del citocromo c iso1 de la levadura con el citocromo C del caballo Como se observa en la figura existen regiones que se superponen muy bien y otras no, debido a que existe una diferencia de un 37,9%. Para el estudio de las vas metablicas se utiliz el programa KEGG, en primer lugar se busco la fosforilacin oxidativa de Saccharomyces cerevisiae, encontrando algunas enzimas especficas para esta levadura, el resultado se encuentra en la figura 5.

Fig. 5. Fosforilacin oxidativa de Saccharomyces cerevisiae obtenida del programa KEGG.

Para la determinacin de la regulacin de vas metablicas se utiliz el programa KEGG, se selecciono 11 genes del banco de genes de Saccharomyces cerevisiae DBGET, que se encuentra en el mismo programa, los mismos que participan en la sntesis de ATP, los resultados se muestran en el cuadro 4. Pathway Search Result

Following EC/Compound/Gene(s) was/were not found

YDR406W YDR497C YEL015W YER036C YKR104W YPL224C sce00190 Oxidative phosphorylation Q0080 ATP8; F-type H+-transporting ATPase subunit 8 [EC:3.6.3.14] [SP:ATP8_YEAST Q0130ATP9; F-type H+-transporting ATPase subunit c [EC:3.6.3.14] [SP:ATP9_YEAST] YBL099W ATP1; F-type H+-transporting ATPase alpha chain [EC:3.6.3.14] [SP:ATPA_YEAST] YPL036W PMA2; H+-transporting ATPase [EC:3.6.3.6] [SP:PMA2_YEAST]

YPL078C ATP4; F-type H+-transporting ATPase subunit b [EC:3.6.3.14] [SP:ATPF_YEAST]

Cuadro 4. Algunos genes de enzimas de Saccharomyces cerevisiae que participan en la fosforilacin oxidativa Como se observa en el cuadro, de los 11 genes seleccionados solo 5 participan en la fosforilacin oxidativa en la levadura de Saccharomyces, y todos estn relacionados al transporte de hidrgenos, no se encontr la participacin en esta va metablica de los otro 6 genes seleccionados, Utilizando el programa KEGG se realiz una comparacin del mapa gentico de ambos microorganismos, encontrando lo resultados siguientes, en el cuadro 5.

Homologous Gene Cluster Search Result Computed at GenomeNet Kyoto Center on Sun Sep 22

6: 7:19 JST 19102

Organisms: eco versus sce Number of genes eco : 4405 sce : 6719 Number of hits: 869 double-best hits: 869 Number of gene clusters: 2 double-best hits: 5 Cuadro 5. Comparacin de genes de Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae. Como se observa en los resultados existe una amplia diferencia entre el nmero de genes de Escherichia coli y de Sacharomyces cerevisiae presentando est ultima un nmero mayor de genes. Para conocer la secuencia del gen de citocromo C de Saccharomyces cerevisiae, se utilizo el programa YEAST MICROARRAY GLOBAL VIEWER y el resultado fue el siguiente.

>YJR048W

Chr 10

ATGACTGAATTCAAGGCCGGTTCTGCTAAGAAAGGTGCTACACTTTTCAAGACTAGATGT CTACAATGCCACACCGTGGAAAAGGGTGGCCCACATAAGGTTGGTCCAAACTTGCATGGT ATCTTTGGCAGACACTCTGGTCAAGCTGAAGGGTATTCGTACACAGATGCCAATATCAAG AAAAACGTGTTGTGGGACGAAAATAACATGTCAGAGTACTTGACTAACCCAAAGAAATAT ATTCCTGGTACCAAGATGGCCTTTGGTGGGTTGAAGAAGGAAAAAGACAGAAACGACTTA ATTACCTACTTGAAAAAAGCCTGTGAGTAA Cuadro 6. Secuencia de nuclotidos del gen CYC1 /YJRO48 del citocromo C Como se observa este gen presenta 330 nucletidos y se ubica en el cromosoma 10 de Saccharomyces cerevisiae En la regin 520 a 540.

Fig. 5. Posicin del gen del citocromo C en el cromosoma 10 de Saccharomyces CONCLUSIONES En este trabajo se utiliz diferentes herramientas de la bioinformtica para estudiar algunas caractersticas de la protena del citocromo C de Saccharomyces cerevisiae, llegando a las siguientes conclusiones, que provienen de toda la bsqueda realizada en los diferentes servidores y programas de bioinformtica. -Las diferentes bases de datos nos permitieron conocer el nombre del gen, su funcin , la secuencia de los aminocidos y la localizacin subcelular, el citocromo C es una protena transportadora de electrones que se encuentra en el espacio intermembrana mitocondrial y la isoforma 1 tiene un total de 108 aminocidos. -En los alinemientos realizados se ha podido observar en los diferentes citocromos C de varios organismos, existen regiones muy bien conservadas con una correspondencia idntica de aminocidos, aspecto que indica la importancia de est protena en la respiracin y transporte de electrones. Los diferentes citocromos alineados en este trabajo tienen una similitud de un 84% a 64% . -Respecto a la estructura todas las caractersticas observadas en la visualizacin coinciden perfectamente con la referencia bibliogrfica en relacin a la posicin de los aminocidos en la cadena de la protena, existiendo regiones que presentan una estructura secundaria de hlice alfa en varias regiones y bucles en otras, con un grupo hemo y un tomo de Fe en el interior de la molcula. -En el alineamiento de cadenas de la protena del citocromo C del caballo y de la levadura se observ que existe regiones que estructuralmente se superponen muy bien, existiendo otras que son diferentes.

-Respecto a la filogenia se vio que los citocromos C ms cercanos corresponden a la cercana taxonmica de lo diferentes organismos. -En el estudio de la regulacin de las vas metablicas se determin la participacin del citocromo C en el transporte de electrones, proceso acoplado a la fosforilacin oxidativa, tambin se observo la participacin de algunas enzimas especficas de Saccharomyces en este proceso metablico. -Tambin se determino que los genes seleccionados de la sntesis de ATP, participan en la fosforilacin oxidativa . -En la comparacin del nmero de genes entre Saccharomyces cerevisiae y Escherichia coli , la levadura presenta un mayor nmero de genes. -En la bsqueda del gen que codifica para el citodromo C iso 1 de la levadura, se determino que tiene 330 nucletidos y se encuentra ubicado en el cromosoma 10. -Finalmente se pudo verificar la importancia de la bioinformtica y el apoyo que brinda para el estudio y nuevas investigaciones dentro el campo de la biologa molecular, el uso adecuado de estas herramientas bioinformticas permitirn avances cientficos muy importantes para nuestro pas y de esta manera contribuir al desarrollo de las ciencias bioqumicas. AGRADECIMIENTO Agradecemos al profesor Jacques van Helden, por su apoyo y gua para la elaboracin de este trabajo. DIRECCIN Maestra en Bioqumica y Biologa molecular y celular. Fac. de Bioqumica y Farmacia. Universidad Mayor de San Simn. Cochabamba- Bolivia. Email: z.bustamante@bio.umss.edu.bo

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