Sunteți pe pagina 1din 10

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

Izolarea i caracterizarea unor gene de rezisten la atacul nematozilor, prezente n genomul vegetal Exist o categorie de nematozi parazii care nu au capacitatea de a se reproduce pe plante gazd ce poart n genomul lor gene majore de rezisten. Pn n prezent, au fost cartate peste 25 de gene majore de rezisten a plantelor la atacul nematozilor. Plantele au un repertoriu al genelor de rezisten care le protejeaz de atacul multor patogeni, printre care se numr virusuri, bacterii, fungi i nematozi. In cele mai multe cazuri, recunoaterea patogenului de ctre gazd se realizeaz prin interacii de tipul gen-pentru-gen, ntre genele majore de rezisten (notate R) prezente la gazd i genele majore pentru avirulen (notate Avr) de la patogen. Recunoaterea R-Avr declaneaz o succesiune de reacii defensive, reacii care includ frecvent i rspunsul de hipersensibilitate (HR), ce const ntr-o necroz localizat la nivelul celulelor de la situl de infecie. Recent, s-a reuit clonarea unor gene R de la cteva specii de plante. Cele mai multe dintre acestea codific proteine care au un motiv structural cu un model repetitiv de 20-30 aminoacizi, numit LRR (leucine-rich-repeat). Genele R ce conin secvene LRR pot s fie subdivizate n 2 clase majore : una n care produsul genic conine o secven LRR

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

la captul amino, cu dispunere extracelular i o secven de ancorare la membrana plasmatic i o a doua clas n care produii genelor R se presupune a avea o localizare citoplasmic. Acetia din urm sunt caracterizai de prezena unei regiuni conservate de aproximativ 260 de aminoacizi, coninnd un sit de legare la nucleotide (NBS) i o regiune LRR la terminalul carboxil. Genele de rezisten la nematozi au fost detectate la cteva varieti ale unor plante de cultur, printre care se numr i tomatele, cartoful, soia i unele cereale. Prima gen de rezisten la nematozi, a crei clonare a reuit, a fost gena desemnat Hs1pro-1, identificat la o rud slbatic a trestiei de zahr. Gena confer rezisten la nematodul Heterodera shachtii care paraziteaz trestia de zahr. In cadrul unor experimente gene, asociat in vitro, ADNc corespunztor acestei cu promotorul

CaMV35S, a fost transferat n rdcinile unei varieti sensibile a acestei plante de cultur, prin transformare cu Agrobacterium rhizogenes. S-a constatat dobndirea rezistenei la infecie. Analiza produsului genei Hs1pro-1 a condus la concluzia c acesta este o protein mic, cu destinaie n membrana plasmatic (are o secven semnal la captul amino). Proteina matur are 282 aminoacizi i conine o regiune LRR la captul amino (Fig.22). Compararea secvenei i a

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

structurii genei Hs1pro-1 cu a altor gene R cunoscute (inclusiv cele de la tomate, care confer rezisten la fungul Cladosporium fulgum) a demonstrat c gena Hs1pro-1 nu este similar cu nici una dintre genele de rezisten cunoscute, n privinta structurii proteinei codificate. Gena Mi-1, izolat de la o specie slbatic de tomate, confer o rezisten mare fa de cteva specii de nematozi productori de noduli (din genul Meloidogyne). Aceast gen a fost introdus la specia cultivat Lycopersicon esculentum, de la ruda sa slbatic L.peruvianum, prin salvarea embrionului n urma unei ncruciri interspecifice.

Fig. 22

Structura proteinelor codificate de 3 dintre genele R izolate de la plante. LR domeniu proteic bogat n resturi de leucin; TM un posibil domeniu transmembranar; LZ fermoarul de leucin; NBS sit de legare la un domeniu nucleotidic (dup Williamson, 1999).

Interesant este c plantele transgenice care conin gena Mi-1 au fost detectate a fi rezistente i la afidul cartofului Macrosiphum euphorbiae, indicnd faptul c gena

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

Mi-1 are un spectru mai larg de aciune. Rmne de stabilit dac gena respectiv codific un factor de recunoatere a patogenului, factor care este eficient att pentru recunoaterea nematodului, ct i a afidului. Gena Mi-1 codific o protein cu 1257 de aminoacizi, care este unul dintre membrii unei familii de proteine caracterizate de prezena domeniilor NBS i LRR (Fig.22). Proteinei i lipsete secvena semnal, sugernd c recunoaterea nematodului de ctre gazd, n msura n care este mediat de produsul genei Mi, se realizeaz n citoplasm. Proteina conine secvene care indic faptul c ea intr n interaciuni complexe cu alte proteine. In cazul altor gene de rezisten, exist evidene c regiunea LRR are un rol major n determinarea specificitii de recunoatere a patogenului. Regiunea apoptoz. NBS seamn s-a cu un domeniu demonstrat reglatorii, c ATP-azic mediaz prezent n proteinele care joac roluri reglatoare cheie n Acest domeniu acestor oligomerizarea proteine modificare

necesar n activarea proteazelor apoptotice. In cazul genei Mi i al altor gene de rezisten la plante, o posibil secven LZ precede domeniul NBS. Recent a fost clonat gena Gpa 2, care confer rezisten la unele izolate ale nematodului Globodera pallida parazit la cartof. Analiza secvenei genice i a secvenei

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

proteice dedus din secvena bazelor azotate, a demonstrat c i aceast protein este un potenial membru al familiei proteice NBS-LRR. Gena Gpa 2 conine informaia genetic inclusiv pentru un sector LZ poziionat captului amino al proteinei. Gena Gpa 2 este foarte asemntoare ca secven de aminoacizi codificat, cu gena Rx1 care confer o rezisten foarte mare la virusul X al cartofului. S-a acumulat un numr mare de date care n apropierea

demonstreaz c domeniile NBS-LRR sunt caracteristice proteinelor codificate de genele R de la nematozi. Printre genele care codific astfel de proteine se numr i gena Gro I, care mediaz rezistena fa de atacul nematodului Globodera rostochiensis ; la gru, au fost detectate 3 cpii ale unei gene care codific o protein cu domenii NBS-LRR, avnd o secven genic apropiat de a genei Cre 3, gen care confer rezisten unor cereale la atacul nematozilor productori de chiti. Secvenierea produilor genici ai unor gene care confer rezisten la infecia cu nematozi, a condus la observaia c, n secvena lor de aminoacizi, apare, ntr-o poziie adiacent domeniului de legare la ADN (NBS), un alt domeniu, desemnat Leucine-zipper (LZ). Regiunile LZ sunt regiuni proteice n care 4 sau 5 molecule de leucin apar la

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

intervale regulate n interiorul unui

-helix, astfel nct, ele

se aliniaz pe aceeai parte a helixului (Fig.23). Apariia regulat a leucinelor d natere unei benzi hidrofobe de-a lungul helixului, band care va interaciona cu o structur similar a unei alte proteine.

Fig. 23

Secven proteic cuprinznd resturile de aminoacizi ntre 315 i 359, a factorului de transcriere C/EBP, prezentat sub form helical. Iniialele corespund cte unui aminoacid. Helixul este amfipatic: reziduurile polare sunt distribuite, n cea mai mare parte, pe una din prile helixului; cele hidrofobe se afl pe cealalt parte (dup Darnell et al., 1990, citat de Fosket, 1994)

Datorit acestei structuri particulare LZ astfel de proteine sunt capabile s formeze dimeri (Fig.24).

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

Unii reglatori ai transcrierii genice de la plante sunt proteine care au n constituia lor domenii LZ. Printre acetia, se numr, cum s-a amintit mai sus, i gene de rezisten la atacul nematozilor (exemplu: Gpa 2 i Mi-1). O alt gen Opaque 2 - codific o protein cu domeniu LZ, care este un factor de transcriere a unora dintre genele pentru proteinele stocate n seminele de porumb; o alt protein cu domeniu LZ este implicat n medierea procesului de sintez a acidului abscizic.

Fig.2 Interaciunea a dou proteine, prin 4 intermediul regiunii Leucine Zipper, conduce la formarea unui dimer care permite poziionarea optim a domeniilor lor de asociere la ADN (dup Fosket, 1994).

Este demn de semnalat aici faptul c mai muli factori de transcriere genic izolai de la plante, n structura crora intr domenii LZ, prezint o secven de aminoacizi i o conformaie care s-au dovedit a fi foarte similare cu cele ale

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

unor factori proteici specifici celulei animale (i umane), codificai de protooncogene precum myc, myb, erbA, jun i fos. Concluzia este c proteinele cu situri de legare la ADN i cu domenii LZ joac un rol important n reglarea transcrierii genetice la plante. Loci cu omologie cu genele R i care asigur rezisten fa de afide, au mai fost detectai la orz. Cel puin 8 gene R, care dau rezisten fa de nematozii productori de noduli, au fost cartate la specia slbatic de tomate Lycopersicon peruvianum. Ereditatea caracterului de rezisten la atacul nematozilor este, n cazul unor specii de plante, incluznd i soia, complex, fiind determinat att de gene majore, dominante, ct i de gene recesive.

Mecanisme de rezisten la atacul nematozilor La specii diferite, momentul, localizarea, ca i

mecanismul de rspuns declanat de genele de rezisten, variaz considerabil. Spre exemplu, n cazul tomatelor rezistente, nematozii penetreaz rdcinile i migreaz ctre locul de hrnire, la fel ca i n cazul plantelor sensibile. Totui, n cazul plantelor rezistente, nu se mai formeaz celulele gigant caracteristice

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

unei infecii reuite. In schimb, se observ o necroz localizat, sugernd un rspuns de hipersensibilitate (HR), la captul anterior al nematodului, la cteva zile de la producerea infeciei. Rezistena mediat de gena Mi se pierde la temperaturi ridicate, iar experimentele de variere a temperaturii au artat c exprimarea rezistenei n plant apare dup 24-48 de ore de la infectarea rdcinii. Momentul i localizarea rspunsului sugereaz faptul c penetrarea celulei de ctre stiletul nematodului i injectarea secreiilor glandelor esofagiene, sunt evenimentele care induc rspunsul de rezisten. Nu este sigur dac rspunsul de hipersensibilitate este direct responsabil de rezistena indus sau este un rspuns secundar, determinat de instalarea rezistenei, deoarece succesiunea reaciilor declanate de infecie este foarte rapid, n cazul plantelor rezistente. De exemplu, nivelele de activitate ale enzimei phenyl-alanin-amonia-liaza (PAL), ca i ale unei peroxidaze anionice cresc n cazul plantelor de tomate rezistente, n urma infeciei cu nematozi. In cazul altor gene de rezisten, rspunsul gazdei se pare c apare cu o oarecare ntrziere i oarecum diferit localizat, n comparaie cu situaia genei Mi. De exemplu, n cazul genei H1, care determin rezistena cartofului la atacul nematodului Globodera rostochiensis, n urma infectrii unor plante rezistente, locul de hrnire ncepe s se formeze i

________________Gene de rezistenta la atacul nematozilor, prezente in genomul vegetal

nematodul chiar ajunge s se instaleze n rdcin, atingnd stadiul sedentar. Cu toate acestea, locul de hrnire, care se afl n plin proces de constituire, devine nconjurat de esuturi necrotice i, n final, colapseaz. Cei mai muli nematozi care ajung s se dezvolte n plante care au, n genomul lor, gena H1, sunt, n cea mai mare parte masculi, ceea ce reprezint un semn de srcire a resurselor de hran pentru nematod. Rezistena mediat de gena Hs1pro-1 nu pare s implice un rspuns de hipersensibilitate. Nematozii mor n stadiul J2 trziu, din cauza degradrii structurii de hrnire (a sinciiului) din gazd. Structura neobinuit a produsului genei Hs1pro-1, ca i fenotipul rezistent sugereaz c aceast gen face parte dintr-un mecanism de rezisten aparte fa de ceea ce se cunoate pn n prezent. Avnd n vedere complexitatea rspunsurilor defensive ale plantelor la atacul paraziilor, precum i structura particular a genelor de rezisten analizate pn n prezent, este foarte probabil ca aceste gene de rezisten s codifice factori proteici reglatori care, n urma unei semnalizri celulare corespunztoare, declaneaz transcrierea unor seturi ntregi de gene aflate sub controlul lor ; fiecare dintre produii genelor transcrise poate s fac parte dintr-unul sau mai multe mecanisme de aprare specifice plantelor.

10