MODULUL 4: VIRUSOLOGIE C1. Virusologia (Inframicrobiologia) 1.

Generalitati:

Microbiologia este ramura biologiei care studiaz caracterele generale ale microbi lor, forma, structura, activitatea fiziologic i biologia acestora. Microbii sunt organisme foarte mici, dimensiunea lor fiind exprimat n micron i: 1 micron = 1000 mm ;1 milimicron = 1 000 000 000 mm (nm) Microbii se clasifica in: - Microbi patogeni care produc mbolnviri - Microbi nepatogeni (saprofii) care nu produc boala dect ocazion al Ramurile microbiologiei: Virusologia studiaz virusurile Bacteriologia studiaz bacteriile Micologia studiaz ciupercile microscopice parazite Parazitologia studiaz paraziii microscopici nceputurile microbiologiei coincid cu inventarea microscopului de catre ol andezul Antonie Van Leeuwenhock (1632-1732). Microscopul mrea de 300 de ori i a ob servat organisme vii denumite initial animalicule.

ntemeietorul microbiologiei trebuie considerat chimistul francez Louis Past eur (1822-1895), care a demonstrat rolul microorganismelor n fermentaia alcoolic i l actic; El a introdus n practic vaccinul antirabic, anticrbunos i tehnica de steriliz are prin pasteutizare. Robert Koch (1843-1910), medic german, a descoperit agenii etiologici ai t uberculozei, antraxului i holerei.El a utilizat pentru prima data medii de cultur solide. Virusologia sau virologia este tiin a ce se ocup cu studierea tipurilor de virus i ac iunea lor asupra organismelor vii. Unele studii asupra viruilor existau nc n antichitate, cnd oamenii nu numai c tiau de existen a unor mici fpturi care puteau provoca aa maladii ca variola sau poliomel ita, dar unii chiar ncercau s gseasc un antidot contra acestor maladii. De exemplu, n China era foarte rspndit variola, i unii medici tiau c oamenii care au mai fost bolna vi de aceast maladie nu se mai mbolnveau, aa c ei fceau antidoturi pe baza crustelor p ielii celor imuni. Adevrata imunizare a fost descoperit de Edward Jenner n 1796. 1.1 Caractere generale ale virusurilor:

Definitie: Virusurile reprezinta o categorie specifica de agenti infectiosi, str uctural si fiziologic fundamental diferiti de oricare dintre microorganismele cu noscute (Zarnea G., 1983). Prezinta urmatoarele caractere: Sunt parazii strict intracelular: utilizeaz resursele energetice ale unei gazde. Posed un singur tip de acid nucleic: ADN sau ARN Virusurile pot parazita orice tip de celul ce apartine la: bacterii, plan te, animale sau om. Ele ptrund n celul i ii modifica metabolismul pentru a - i fol osi resursele energetice, in scopul sintezei de particule virale. Folosesc celul a pentru propria replicare. Datorita dimensiunilor submicroscopice (18-400nm), virusurile se vd numai la microscopul electronic. Virusurile sunt foarte puini evoluae, avand o organiz are rudimentar: Sunt lipsite de enzime proprii, multiplicarea lor este legat de parazi tarea obligatorie a celulelor vii. Virusurile sunt ultrafiltrabile, nu sunt reinute de filtre de bacterii, s

e gsesc n filtrate acelulare. Sunt entitati specifice, fiecare virus provocand o anumit boal Fiecare virus prezint o structur anitigenic specific (omul i animalele inf ectate cu un virus produc anticopri specifici, iar imunitatea dobndit este solid i d e lung durat) Virusurile sunt insensibile la antibioticele uzuale Bacteriofagii sunt virui care infecteaz bacterii Multiplicarea se face printr-un ciclu replicativ viral, n care acidul nu cleic al unui virus servete ca matri pentru sinteza unor copii identice de acizi nu cleici ce vor constitui baza unor noi virioni (Replicare conservativ) Nu cresc pe medii artificiale ci doar pe celule vii Medii de cretere: Oul de gin embrionat Animalul de laborator Culturile de celule 1.2 Clasificarea virusurilor

In functie de materialul lor genetic, virusurile sunt grupate in doua categorii: a. dezoxiribovirusuri, la care materialul genetic este reprezentat de ADN b. ribovirusuri, la care materialul genetic este reprezentat de ARN 1.3 Morfologia si structura virusurilor

Virusurile pot avea diferite forme: sferica: v.gripal, v.herpetic, adenovirus, v. poliomielitei cilindrica, de bastona: v. mozaicului tutunului, fagi paralelipipedica: v. variolic, v. vaccinia de cartu v. rabic filamentoasa v. Ebola sferica cu coad, ex. bacteriofagii 1.4. Forme de existenta a virusurilor:

Virusurile pot exista in natura sub trei forme biologice distincte, fiecare repr ezentand cate o etapa din circuitul lor in natura. - Virusul vegetativ este o particula viral aflat n celula-gazda, lipsita de capsid. In aceasta stare, virusul este lipsit de structura proprie, materialul viral fi ind dispersat in citoplasma celulei gazd. In interiorul celulei, virusul vegeta tiv se transforma in final in virus complet prin asamblarea componentelor virale sintetizate cu ajutorul celulei-gazda. - Provirusul este genomul viral integrat n cromozomul , multiplicndu-se sincron cu acesta. Acidul nucleic viral se fixeaza in genomul celulei gazd, unde se compo rta ca un fragment de material genetic propriu celulei . Aceasta forma de existen ta a virusului este cunoscuta la bacteriofagi si la virusurile oncogene. Genomul viral poate ramane ancorat in cromozomul celulei gazd un timp nedefinit, dar sub influenta unor factori favorizanti se poate transform in virus vegetativ. Unitatea morfofunctionala a virusurilor este virionul (virus infectios m atur) Particula virala matura (virionul) este alcatuita din doua componente esen tiale: genomul viral si capsida, precum si un constituient accesoriu, invelisul extern (anvelopa sau peplos).

a. Genomul viral este reprezentat in mod obisnuit printr-o molecula de a cid nucleic (ADN sau ARN, niciodata ambele). Genomul viral poarta informatia gen etica necesara replicarii in sensul sintezei constituientilor virali si a precu rsorilor lor. b. Capsida virala (gr. 'Kapsa' = cutie), acopera genomul fiind alcatuita din subunitati proteice denumite capsomere. Capsomerele sunt constituite din m olecule proteice asezate in mod regulat, formand in ansamblu structura specifica a virusului. Capsida protejeaza materialul genetic. Capsida si genomul viral formeaza nucleocapsida. La unele virusuri nucle ocapsida este acoperita de o alta structura numita invelisul extern sau peplosul (gr. peplos = manta). Sunt virusuri a caror capsida se asambleaz dup simetrie icosaiedric i ca re asigur volum maxim pentru o suprafa ct mai mic. Exist si virusuri cu simetrie helic oidal

c. Invelisul viral, peplos, anvelop, are o structur mult mai complex: de natura gl icolipidoproteic. Seamn cu membrana celular prin care trec o serie de prelungiri gli coproteice; lipidele provin din celula gazd. Glicoproteinele servesc la ataarea de diferitele structuri ale celulei gazd. Functiile genomului: - Conine ntreaga informaie genetic necesar replicrii - Asigur infectivitatea viral - Este capabil de autoreplicare n absena celorlali constitueni virali Functiile capsidei: - Protejeaz genomul viral de aciunea factorilor externi, de nucleazele celulare; asigur forma virionului; - Fixeaz virionii nuzi de receptorii celulari specifici; Rolul invelisului viral: - Protejeaz nucleocapsida; - Intervine n iniierea ciclului infectant prin recunoaterea i ataarea virusului de receptorii celulari; - Intervine n procesul de asamblare a noilor particule virale; - Intervine n activiti specific virale (hemaglutinare, hemadsorbie, hemoliz, fuziunea membranelor celulare)

Structura unui virus anvelopat sau invelit 1.5. Compozitia chimica a virusurilor Virusurile contin elementele de baz: Proteine Glucide Lipide Ac. nucleici ( ADN sau ARN)

Virusuri simple: protein + ac. nucleic ex.:v. poliomielitei, este alcatuit dintro Pr+ ARN; bacteriofagii din Pr. + ADN Virusuri complexe: - genom viral, ptura proteica intern, ptura externa lipoproteic Exemplu: v. gripal 1.6. Cultivarea virusurilor Pt. stabilirea diagnosticului unei viroze sunt necesare izolarea i identific area agentului patogen n produse patologice recoltate de la bolnav, sau cadavru . Cultivarea lor e posibil prin inoculare ntr- o gazd receptiv: Animale de laborator Ou embrionate Culturi de celule 1.7. Multiplicarea virusurilor virusurile se autoreproduc folosind mecanismel e celulare din interiorul celulelor vii, de unde iau: hrana, enzimele si energia necesar multiplicrii Etapele multiplicarii virusurilor:

Adsorbia - faza de adeziune i fixare la celula- gazd Ptrunderea virusului n celula-gazd Faza de eclips - v. ptruns n celula se dezintegreaz n acid nucleic i proteine poate fi pus n eviden. Faza de multiplicare activ acidul nucleic i capsida se multiplic separat , pt. c final s se asambleze , formnd particule virale complete. Faza de eliberare .virusurile formate prsesc celula treptat pe msura formrii sau acumuleaz - explozia celulei -gazd, eliberndu-se - infectnd alte celule. Replicarea viral Relaia dintre un virus i o celul int se numeste ciclu replicativ viral Relaia dintre un virus i un macrofag se numeste patogenie Ciclul replicativ viral cuprinde: 1. faza de eclips: dureaza cteva zeci de minute. Un virion numit parental (pri nte) ptrunde n interiorul celulei int. n timp ce are loc penetrarea, infectivitatea v iral este abolit tranzitoriu. Odat ptruns n celula gazd incepe multiplicarea. 2. cretere logaritmic: dintr-un virion parental iau natere componentele ctorva sute de mii de virioni noi ce poart numele progeni. ine 6-8 ore. 3. faza de platou: replicarea viral nceteaz, are loc asamblarea componentelor viruilor pentru creearea virionilor progeni, complet identici cu cei parentali, e i fiind eliminai treptat. Reprezint faza de echilibru n care virionii progeni sunt egali cu cei ce sunt eliminai pentru apariia unor noi cicluri virale. Platoul ine 4 -6 ore. - Faza de eclips 1. adsorbia virusului la celula int: virusul nu afecteaz orice fel de celul. Se ataeaz receptorilor virali: tropism viral-afinitatea virusului pentru un anumit ti p de celul. Receptori virali: imunologici pentru hormoni pentru medicamente pentru factori de cretere molecule de adeziune celular Virusul deturneaz rolul receptorului celular pentru a se folosi de celul. Receptor ii sunt receptori de structur de pe suprafaa virusului liganzi(anti receptori). Ei

se gsesc fie pe suprafaa extern i atunci au forma unor proiecii de obicei glicoprote ine - sau n cazul virusurilor neamvelopate aceti liganzi virali sunt situai n interi orul capsidei virale i au forma unor canioane. Receptori de pe suprafaa celulei limfatice: de nalt afinitate mediaz adsorbia virusului - determin apariia unor schimbri conformaionale n structura unor proteine ce vor continua ciclul replicativ. - de joas afinitate(coreceptor) doar mediaz absorbia virusului. Ex: HIV fixeaz pe c elula int CD4. Reeptorul CD4: - limfocite - monocite - macrofage Iniial se infecteaz monocitele i macrofagele. La ntlnirea limfocitelo r i schimb tropismul pentru acestea. 2. internalizarea virusul ptrunde n interiorul celulei int n dou moduri: a. pentru virusuri anvelopate: prin procesul numit fuziune; pe suprafaa amve lopei virale exist nite proiecii: factori de fuziune ce joac rolul paletei de mixer. Paleta amestec lipide membranare cu cele din amvelopa viral i formeaz un canal ntre virus i celul prin care acidul nucleic viral va ptrunde n citoplasma celulei infecta te. b. Pentru virusuri neanvelopate: endocitoza(viropexie): virusul se leag de r eceptori de pe celula gazd. Atunci se produce redistribuirea tuturor receptorilor de pe celula gazd i se formeaz un fel de vezicul, colin peliculizat ce va ngloba viru ul. Acidul nucleic viral va ptrunde n interiorul celulei n urma mulrii i formarii une i vezicule. 3. decapsidarea separarea fizic a virusului de inveliul proteic, ce vor fi di struse de acidul nucleic viral ce va rmne n interiorul celulei i va da natere de viri oni. E realizat de proteaze celulare ce distrug proteinele virale. Pentru virusu rile ce ptrund prin endocitoz, aceast etap are loc n interiorul veziculei endocitare. O dat format vezicula are loc distrugerea membranei. La virusurile fr fuziune, prot eazele distrug membrana n por. Virusul nsui prezint enzime proprii ce distrug membrana cnd nu mai e nevoie de aceas ta virusurile gripale. mpotriva gripei: medicamente inhibitorii ale decapsidrii; a cidul nucleic viral nu ptrunde n celul. Medicamente: amantadin rimantadin II. Faza de cretere logaritmic 1. sinteza proteinelor virale timpurii 2. sinteza genomurilor progene pe matria unui virus parental 3. sinteza proteinelor virale tardive proteine structurale 1. Sunt enzimele virusului ce vor conduce formarea, nu vor fi coninute de vi rionii formati dar au rol n sintez. inhib metabolismul celulei gazd: sinteza de ADN,ARN,proteine stimuleaz replicarea virusului joac un rol enzimatic att n sinteza acizilor nucleici virali ct i proteinelor virale. alctuiesc nite nie n interiorul celulei gazd unde are loc replicarea viral(inc luzii virale). n orice celul infectat apar incluzii virale. Virusurile ADN dublu catenare spiralate sunt amvelopate. Replicarea lor are loc n nucleul celulei cu excepia virusurilor POX(variolic) a cror replicare are loc n ci toplasm. Genom parental ADN Polimeraz ADN dependent (enzim celul gazd), copiaz acidul nucleic viral ARNm Aici se traduc proteinele virale genomul ADN nou format servete pentru scrierea unui ARNm

herpesvirusurile avnd hepatnavirusurile or din

structurale, traducerea loc la nivelul ribozomil celula gazd. proteine virale

2. Virusurile cu genom ARN ribovirusurile cu o singur caten. Pot fi: * simplu spiralate, cu polaritate pozitiv- servete ca ARN mesager. Ex: picorna vir usuri-poliomielitic. Aici genomul parental e ARNm. Pe el se traduc proteine virale timpurii. O anumit protein va servi ca ARN polimeraza ARN dependent ce va copia acidul nuclei c viral de cte ori e nevoie, furniznd genomurile patogene; pe acestea se vor sinte tiza proteine virale structurale.(3) * simplu spiralate, cu polaritate negativ; trebuie sintetizat iniial o caten complem entar de ARN simplu spiralat (+). Aceasta este realizat de o transcriptaz. Ex: orth omixovirusurile 3. n celul avem: genomuri proteine virale Dac virusurile se acoper doar de capsid-> capsomere Daca virusurile sunt amvelopate pe lng capsomere-> peplomere= alcatuiesc amvelopa III. Faza de platou 1. maturarea proteinelor virale 2. asamblarea acizilor nucleici nou formai cu proteine 3. eliberarea noilor virioni formai 1. majoritatea proteinelor virale structurale sunt sintetizate sub form de p oliprotein. Pentru a fi separate n capsomere ele trebuiesc scindate. Aceast scindar e n subuniti funcionale se realizeaz de proteaze codificate de virus. Urmeaz asamblare a subunitilor funcionale n nveliul numit capsid(anmvelop). Aceasta se realizeaz dup proprii(simetrie): helicoidal sau ecosaiedric. n aceast dispunere simetric intervin p roteine enzimatice, ce condiioneaz procesul astfel nct nveliul final s fie asemenea cu cel iniial. Dac proteinele sunt peplomere atunci ele trebuiesc glicozilate, la niv elul aparatului Golgi; glicoproteinele nou formate sunt direcionate spre membrana celular de ctre nite molecule din celula gazd celule chaperon peitori. Ele sunt pro eine semnal. 2. se formeaz un virion ct mai asemntor cu parentalul la un anumit pol al celul ei. 3. virionii nou formai lovesc n acelai loc membrana celular -> se rupe( prin ci toliz) iar celula iniial moare. Eliberarea virionilor se poate face treptat( prin nm ugurire), are loc penetrarea proteinelor virale la nivelul membranei celulare. P roteinele pleac cu o poriune din membrana celular-> amvelop. Ex: prin citoliz: virusurile neamvelopate Prin nmugurire: virusurile amvelopate Sinciiu: celule fusionate, celul gigant, multinucleat.