Laboratorio de Farmacologa 1 Practica 5: Determinacin Experimental De La Dosis Efectiva 50 Sedante En Ratones

OBJETIVOS
Determinar la DE50 para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratn, utilizando el modelo del cilindro de Exploracin en ratones. Aplicar los conocimientos que obtuvimos en la primera practica. Calcular la potencia relativa HIPTESIS Si aumentamos la dosis de pentobarbital entonces se observarn menos levantamientos por que el animal se sedar y perder vivacidad e inters por la exploracin. En el caso del etanol, a dosis bajas esperaramos ver una conducta ms viva ya que es estimulante en esas cantidades, as que es probable que los levantamientos aumenten, pero al ir aumentando la dosis se observar un aletargamiento y nuevamente se esperaran observar menos levantamientos. INTRODUCCIN

La ansiedad es una sensacin desagradable de tensin, aprensin o incomodidad, un miedo que parece proceder de un origen desconocido. Los sintomas de la ansiedad grave son similares a los del miedo (como taquicardia, sudacin, temblores y palpitaciones) y conllevan la activacin del sistema simptico. Cuando los sntomas de la ansiedad son graves, crnicos y debilitantes, se requiere terapia con frmacos ansiolticos, con o sin una terapia psicolgica o conductal en forma concomitante. Debido a que todos los frmacos ansiolticos causan cierta sedacin, los mismos agentes se emplean para inducir el sueo (hipnticos). El pentobarbital usado en la prctica pertenece a la familia de los barbitricos que constituyeron el tratamiento bsico para sedacin, as como para induccin y mantenimiento del sueo. Los barbitricos son depresores no selectivos del sistema nervioso central con efectos que oscilan entre la sedacin y la reduccin de la ansiedad a la inconsciencia y la muerte por insuficiencia respiratoria y cardiovascular. Por tanto, son peligrosos en caso de sobredosis. Actan en parte potenciando la accin del GABA para permitir la entrada de cloro a la neurona, el flujo de iones de cloro hacia el interior de la clula provoca hiperpolarizacin leve que aleja al potencial postsinptico de su umbral de emisin e inhibe la formacin de potenciales de accin. El etanol tiene acciones ansiolticas y sedantes pero su potencial de toxicidad sobrepasa estos beneficios, no pertenece a la familia de los barbitricos. Los principales efectos del etanol se ejercen en el SNC, donde sus acciones depresoras son similares a las de los anestsicos voltiles. En las clulas, el efecto del etanol es puramente depresor, aunque aumenta la actividad de los impulsos (probablemente por deshinibicin) en algunas partes del SNC.

El etanol potencia la accin del GABA, actuando sobre los receptores GABAA de manera semejante a las benzodiacepinas y barbitricos. Sin embargo, su efecto es menor y menos constante que el de estas sustancias txicas y no se ha demostrado que ejerza un efecto claro en la transmisin sinptica inhibidora en el SNC. El principal efecto cardiovascular del etanol es la vasodilatacin cutnea, de origen central, que produce una sensacin de calor, pero que en realidad aumenta la prdida de calor. El etanol incrementa la secrecin salival y gstrica, en parte como efecto reflejo producido por el sabor y la accin irritante del alcohol. La diuresis es un conocido efecto del etanol, debida a la inhibicin de la secrecin de hormona antidiurtica; la tolerancia aparece con rapidez, por lo que este incremento de diuresis no se mantiene. Los grandes bebedores sufren una degeneracin neurolgica con demencia y neuropatas perifricas, su consumo produce a largo plazo una hepatopata que progresa a la cirrosis y la insuficiencia heptica. El etanol se metaboliza fundamentalmente en el hgado, primero por accin de la alcohol deshidrogenasa, que lo transforma en acetaldehdo, y despus por la aldehdo deshidrogenasa, que lo transforma en acetato. Los anlisis biolgicos se disean para medir la potencia relativa de dos preparaciones, normalmente una estndar de referencia y otra desconocida. Por supuesto, el patrn de referencia idneo es la sustancia pura, pero a menudo hay que establecer preparaciones estndar de distintas hormonas, productos naturales y antisueros frente a los que se pueden calibrar las muestras de laboratorio, an cuando las preparaciones estndar no son qumicamente puras. Segn el modelo de los dos estados, la eficacia refleja la afinidad relativa del compuesto por los receptores en reposo y activados. Los agonistas son selectivos por el estado activado; los antagonistas no muestran selectividad alguna.
DIAGRAMA DE FLUJO

A) Efecto sedante de pentobarbital.

Preparacin de las disoluciones de pentobarbital sdico Rotulamos seis frascos viales con las siguientes leyendas 0, 2.5, 5, 10, 15 y 30 mg/kg. Agregamos la cantidad indicada del cuadro que viene en el manual de la disolucin de pentobarbital de 3mg/ml y de disolucin salina al 0.9 % (p/v).

Cada grupo de trabajo recibi seis ratones. Marcamos a nuestros animales con el marcador de tinta indeleble en la base de la cola, los pesamos Desarrollo del experimeto y registramos el peso de cada animal. 1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio estuviera seco y limpio. 2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel balnco mayor al dimetro del cilindro 3)Treinta minutos despus de haber administrado el frmaco o la solucin salina introducimos al animal en el cilindro de exploracin. 4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el nmero de levantamientos que realiz el animal en un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific esta conducta para que fueran analizados bajo el mismo criterio. 5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el interior del cilindro y cambiamos el papel.

INICI O

Pesado y marcaje de animales.

Administracin del frmaco Asignamos aleatoriamente las dosis que recibi cada ratn. Administramos por va intraperitoneal 0.1 ml de la disolucin correspondiente del frmaco o de la disolucin salina por cada 10 g de peso del animal y registramos el tiempo al que

FIN

B) Efecto sedante de etanol

Pesado y marcaje de animales. Preparacin de las soluciones de etanol absoluto. Rotulamos seis matraces aforados de 10 ml con las siguientes leyendas 0, 500, 1000, 2000, 2500 y 3000 mg/kg. Agregamos la cantidad indicada en el cuadro del manual de etanol absoluto y

INICI O

Cada grupo de trabajo recibi seis ratones. Marcamos a nuestros animales con el marcador de tinta indeleble en la base de la cola, los pesamos y registramos el peso de cada animal.

Desarrollo del experimeto 1) Nos cercioramos de que el cilindro de vidrio estuviera seco y limpio. 2) Colocamos el cilindro sobre un trozo de papel balnco mayor al dimetro del cilindro 3)Treinta minutos despus de haber administrado el frmaco o la solucin salina introducimos al animal en el cilindro de exploracin. 4)Pusimos a funcionar el cronmetro y registramos el nmero de levantamientos que realiz el animal en un perodo de 5 minutos. Solo una persona cuantific esta conducta para que fueran analizados bajo el mismo criterio. 5)Limpiamos con una solucin hidroalcohlica el interior del cilindro y cambiamos el papel.

Administracin del frmaco Asignamos aleatoriamente las dosis que recibi cada ratn. Administramos por va intraperitoneal 0.1 ml de la disolucin correspondiente del frmaco o de la disolucin salina por cada 10 g de peso del animal y registramos el tiempo al que

FIN

RESULTADOS

Pentobarbital sdico
Dosis (mg/Kg) 0 2.5 levantamie ntos 27 20

Algoritmo de clculo 20 1 = 0.259 27

efecto 0 0.259259 26 %efecto 0 25.92592 59

calculo de DE50 0.5 0.1174 = 13.4718mg / Kg 0.0284

0.296296 29.62962 3 96 0.370370 37.03703 10 17 37 7 0.629629 62.96296 15 10 63 3 0.925925 92.59259 30 2 93 3 Tabla1. pentobarbitol sdico: modelo lineal 5 19

Pentobarbitol Sdico: modelo lineal

efecto (decimales) 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 10 20 Dosis (mg/Kg) 30 40 efecto Lineal (efecto ) y = 0.0284x + 0.1174 R2 = 0.9414

Grafica 1, pentobarbitol sdico: modelo lineal log D (mg/Kg) Efecto 0.397940009 0.25925926 0.698970004 0.2962963 1 0.37037037 1.176091259 0.62962963 1.477121255 0.92592593 Tabla 2. pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico

Pentobarbitol Sdico: modelo lineal logartmico

1 Efecto (decimales) 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.5 1 Dosis (m g/Kg) 1.5 2 y = 0.6169x - 0.0898 R2 = 0.8464 Serie1 Lineal (Serie1)

calculo de DE50
DS 50 = 10^ 0.6169 = 6.460 mg / Kg
0.5 0.0

Grafica 2 pentobarbitol sdico: modelo lineal logartmico log D (mg/Kg) log efecto 0.397940009 -0.58626572 0.698970004 -0.52827378 1 -0.43136376 1.176091259 -0.20091484 1.477121255 -0.03342376 Tabla 3. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo.

Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo

0 lo g E (decimales) -0.1 0 -0.2 -0.3 -0.4 -0.5 -0.6 -0.7 log D (mg/Kg) y = 0.5316x - 0.861 R2 = 0.9127 Serie1 Lineal (Serie1) 0.5 1 1.5 2

calculo de DS50

D E50 = 1 0 b = 100.861 = 7.2610 g/ K g m

Grafica 3. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo. log D (mg/Kg) log efecto 0.397940009 -0.58626572 0.698970004 -0.52827378 1 -0.43136376 1.176091259 -0.20091484 1.477121255 -0.03342376 Tabla 4. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo sigmoideo

Pentobarbitol Sdico: modelo del efecto mximo sigmoide

0 -0.2 -0.4 -0.6 -0.8 log D (m g/Kg) y = 0.5316x - 0.861 R2 = 0.9127 0 0.5 1 1.5 2 Serie1 Lineal (Serie1)

calculo de DS50 DE 50 = 10 b / m = 10 0.861 / 0.5316 = 1.6196 mg / Kg

Grafica 4. pentobarbitol sdico: modelo del efecto mximo sigmoideo. Etanol

Dosis (mg/Kg) 0 500 1000 2000 2500 3000 levantamie ntos efecto %efecto 21 -0.14285714 24 0.19047619 -14.2857143 17 0.33333333 19.047619 14 0.95238095 33.3333333 1 0.95238095 95.2380952 1 0.95238095 95.2380952

log E (decimales)

Tabla 5. etanol: modelo lineal

Etanol: modelo lineal
1.2 Efecto (decimales) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 1000 2000 Dosis(m g/Kg) 3000 4000 y = 0.0004x - 0.3007 R2 = 0.8199 Serie1 Lineal (Serie1)

Algoritmo de calculo 17 1 = 0..333333 21 calculo de DS50 0.5 0.3007 = 2001.75mg / Kg 0.0004

Grafica 5. etanol: modelo lineal log D (mg/Kg) -2.698970004 3 3.301029996 3.397940009

Efecto 0.25925926 0.2962963 0.37037037 0.62962963

0.95238095

Tabla 6. etanol: modelo lineal logartmico

Etanol: mode line logartmico lo al

Efecto (decimales) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 2.8 3 3.2 Log D (mg/Kg) 3.4 3.6 y = 1.6792x - 4.9242 R 2 = 0.7575 Serie1 Lineal (Serie1)

Algoritmo de calculo calculo de DS50 DS 50 = 10^ 1.6792 = 1.9850 mg / Kg

0.5 0.0

Grafica 6. etanol: modelo lineal logartmico log D (mg/Kg)

2.698970004 3 3.301029996 3.397940009 2.698970004

log efecto
-0.14285714 0.19047619 0.33333333 0.95238095 0.95238095

Tabla 7. etanol: modelo del efecto mximo.

M odelo del efecto mximo: etanol

Log Efecto (decimales) 2.5 2 1.5 1 0.5 0 2.8 3 3.2 3.4 Log D (mg/Kg) 3.6 y = 1.5465x - 3.4042 R2 = 0.862 S erie1 Lineal (S erie1)

Algoritmo de calculo calculo de DS50

DE 50 = 10 B = 103.4042 = 25.14mg / Kg

Grafica 7. etanol: modelo del efecto mximo. log D (mg/Kg)

2.698970004 3 3.301029996 3.397940009 2.698970004

log efecto
-0.14285714 0.19047619 0.33333333 0.95238095 0.95238095

Tabla 8. etanol: modelo del efecto mximo sigmoideo

Mode de e cto mximo sigmoide e lo l fe o: tanol

Lo g Efecto (decimales)

calculo de DS50
2.5 2 1.5 1 0.5 0 2.8 3 3.2 Log D(mg/Kg) 3.4 3.6 y = 1.5465x - 3.4042 R2 = 0.862 Serie1 Lineal (Serie1)

DE 50 = 10 b / m = 10 3.4042 / 1.5665 = 158.94mg / Kg

Grafica 8. etanol: modelo del efecto mximo sigmoideo Clculo de la potencia relativa del Etanol:

Pr EtOH =

DE50 petobarbital 13.4718mg / Kg = = 0.00673 DE50 E tan ol 2001 .75mg / Kg

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

Para calcular el efecto sedante del Pentobarbital, se us el modelo lineal pues fue el modelo con el que obtuvimos mejor correlacin y por lo tanto la DE50= 13.4718 mg/kg; en cambio, para el Etanol, se utiliz el modelo del efecto mximo sigmoide, obteniendo una DE50= 2001.75 mg/kg, lo cual nos indica que el Pentobarbital es ms potente y por lo tanto ms peligroso que el Etanol, ya que con una menor dosis se obtiene la DE50. Tambin pudimos observar que al realizar la determinacin de las DE50 del etanol, en la primer dosis administrada (500 mg/kg) no se observ el efecto que esperbamos (efecto sedante de los depresores del Sistema Nervioso Central) sino el contrario, ya que hubo mayor nmero de levantamientos del ratn al estar dentro del cilindro de vidrio, esto sucedi, porque el etanol, a bajas concentraciones tiene efecto estimulante, no inhibitorio, pues produce efecto estimulante sobre el receptor serotonrgico y por lo tanto libera neurotransmisores como la dopamina, el cual es precursor en la sntesis de catecolaminas (como la adrenalina y noradrenalina), esto quiere decir, que dicho efecto del aumento del nmero de levantamiento fue un efecto normal. Pero posteriormente con mayores dosis, si se present la respuesta esperada como desde un principio con el Pentobarbital, pues facilita la interaccn del GABA con los receptores GABAA lo cual causa depresin del SNC, e igualmente se aumenta el tiempo de apertura de los canales de Cloro lo cual causa una hiperpolarizacin y no es poible la transmisin de potenciales de accin causando

mayor inhibicin del SNC. El pentobarbital es ms potente que el Etanol porque deja los canales de Cloro mayor tiempo abiertos. La potencia relativa del Etanol= 0.00673, el clculo se realiz comparndolo con la potencia del Pentobarbital, el valor obtenido es un nmero muy pequeo, lo cual nos indica que la potencia del Etanol es mucho menor comparada con la del Pentobarbital, lo cual pudimos comprobar al calcular la DE50 para cada uno.
CONCLUSIONES

Se comprob que a mayor dosis de pentobarbital menos levantamientos del ratn, por tanto mayor sedacin del animal y como consecuencia mayor depresin del sistema nervioso central. Tambin se pudo comprobar el efecto estimulante del etanol al observar en un principio que con dosis bajas de dicho alcohol el ratn presentaba mayor nmero de levantamientos y a dosis altas se present el efecto sedante, observando en este caso un menor nmero de levantamientos del ratn. La determinacin de la DE50 nos permite saber la toxicidad que pueda tener un frmaco puesto que a menor DE50 ms rpido se produce el efecto teraputico deseado y por tanto el frmaco es ms potente. En esta prctica el pentobarbital es ms potente que el etanol puesto que tiene una DE50 menor.

La potencia relativa entre dos sustancias nos ayuda a saber cul de estas es ms potente. Los mecanismos de accin del etanol y del pentobarbital son parecidos puesto que potencian la accin del GABA y tienen como funcin inhibir algunas partes del SNC, sin embargo el efecto del etanol es menor y menos constante puesto que el pentobarbital deja los canales de cloro ms tiempo abiertos. En la eleccin de un modelo para determinar la DE50 se considera el mejor el que tenga una regresin lineal ms cercana a 1. BIBLIOGRAFA
Rang y Dale, Farmacologa, 6 edicin, Ed.elsevier, 2008 http://library.thinkquest.org/C0115926/drugs/Morphine_2D_Structure_3526.gif Carrasco Jimnez, Paz Cruz, Tratado de emergencias medicas, Editorial ediciones Aran, Primera edicin, volumen 2, paginas 1514-1520. Hardman, Joel Y Limbird, Lee, .Goodman & Gilman. Las Bases Farmacolgicas De La Teraputica, Mcgraw Hill Interamericana, 11 Edicin, Volumen 1, Mxico 1996, Pgs., 448-455, 580-585. Aschenbrenner, D., Venable, S., Drug Theraphy In Nursing, Editorial, Lippincott Williams & Wilkins, 3 Edicin, Pgs, 346-356