PARTEA TEORETIC

INTRODUCERE
Derivaii tioureei sunt cunoscui n terapeutic pentru proprietile lor antimicrobiene (Noxitiolin, Sulfatiouree, MC 02331), antimicotice (Loflucarban, AHR- 1911), antiparazitare (Tiofanat, Metiltiofanat, Imcambofos, Uredofos), antimicobacteriacee (Benzoiltiouree, Etocarlid, Tiocarlid, Tiocarbanidin, Butomelid, Alocupreid, JDD 46), antileproase (Tiambutosin), antivirale (Trovirdin, HI- 240, HI- 236, HI- 346, HI- 445, LY 73497), antineoplazice i imunomodulatoare (BAY 38-3441, NSC 56054), antihipertensive (U- 19451A), cardioselective (Clamikalant), hipolipemiante (SDZ-HDL 376), antiulceroase (Tiaburimamida, Burimamida, Metiamida, Dimaprid), antihistaminice (Imetit, Clobenpropit), analgezice, antiinflamatoare, antireumatice (Tisocarbamida, Ag37). Literatura de specialitate prezint numeroase studii referitoare la obinerea unor noi derivai ai tioureei cu proprieti antibacteriene, antifungice, antimicobacteriacee, antileproase, antihelmintice, antimalarice, antitumorale, analgezice, antiinflamatoare, antidiabetice, antitiroidiene, antivirale, insecticide, fungicide i ierbicide. Avnd n vedere importana terapeutic a unor astfel de derivai, n aceast lucrare de licen, sunt prezentai n partea teoretic derivai ai tioureei cu aciune antimicrobian, antiviral, analgezic- antiinflamatoare i antitumoral. Partea experimental cuprinde sinteza i dovedirea de structur a doi noi compui, tioureide ale acidului 2-(4-metilfenoximetil)-benzoic, cu potenial aciune biologic.

1. DERIVAI AI TIOUREEI CU PROPRIETI ANTIMICROBIENE

A. Saeed i col. prezint sinteza, caracterizarea i activitatea antimicrobian a unor noi derivai ai 1-florobenzoil-3-fluorofenil-tioureei. Cercettorii au pornit de la premiza c substituirea hidrogenului cu fluor reprezint o bun strategie n dezvoltarea unor noi compui. Moleculele fluorurate se obin prin nlocuirea izosteric a hidrogenului cu fluor, care n general, se fixeaz pe situsul de recunoatere biologic. Includerea fluorului ntr-o molecul organic poate s determine creterea lipofilicitii i astfel s mreasc rata de penetrare a celulei i transportul compusului ctre situsurile active. Polarizabilitatea ridicat a legturii C-F poate s creeze noi posibiliti de legare de receptor. Compuii fluorurai sunt mai rezisteni la metabolizare, datorit energiei de legtur mari n formarea legturilor H-O i C-O, fa de aceea a legturii F-O. Fluorurarea are o importan mare cu aplicaii n medicin i n agrochimie. Substituia cu fluor n diverse poziii ntr-o molecul organic poate influena nu numai proprietile farmacocinetice, cum sunt absorbia, distribuia tisular, calea i rata biotransformrii, dar i farmacodinamia, toxicologia i eficiena biologic. Schema de sintez care conduce la obinerea derivailor 1-florobenzoil-3-fluorofeniltioureei este:

HOOC

1. + SOCl2 2. + NCSK (acetona anh.) R'

+ H2N
S=C=N-C

R'

(acetona anh.)

H N

H N

R
S

R' O

R'= 2-Cl, 3-Cl, 2-F, 4-F, 3,4,5-tri-OCH 3, 3-F-C6H5 R= 2-F, 3-F, 4-F

Pentru sintez, o soluie acetonic de clorur de fluorobenzoil substituit, se adaug n pictur, la temperatura camerei, peste o suspensie de tiocianat de potasiu n aceton. Amestecul de reacie se refluxeaz 30 de minute i apoi se rcete la temperatura camerei. Se adaug n pictur, o soluie de anilin fluorurat n aceton anhidr i se refluxeaz 2- 3 ore. Amestecul se toarn n ap rece, iar precipitatul rezultat se filtreaz, se usuc i se recristalizeaz din metanol. Dovedirea structurii a fost fcut cu ajutorul analizei spectrale IR, RMN, al spectrelor de mas i al analizei elementale. Toi compuii au fost testai pentru activitatea antibacterian i antifungic. Activitatea antibacterian a fost determinat pe bacterii grampozitive (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis), bacterii gramnegative (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), iar concentraia minim inhiditorie a fost determinat la compuii cei mai activi. Activitatea antifungic a fost determinat pe Rhizopus oryzae, Aspergillus tereus, Fusarium oxysporum, Aspergillus niger i Aspergillus fumigatus. n general, activitatea antifungic a fost mai bun dect cea antibacterian. Poziia fluorului pe radicalii aroil i aril are au importan semnificativ pentru activitatea antimicrobian [1]. N.B. Patel i col. au preparat fluorochinolone care au n molecul un fragment tioureidic.

Fluorochinolonele sunt folosite n terapeutic de la mijlocul anilor 80, n tratamentul unor variate infecii bacteriene ale tractului respirator, urinar, ale pielii, precum i n tratamentul bolilor cu transmitere sexual. Ele au fost investigate ca inhibitori ai AND- girazei (enzima topoizomeraza IV). Pentru legarea de ADN- giraz este esenial prezena n molecul a grupei carboxil sau al unei grupe care s genereze la hidroliz aceast grup (ester, amid). Prezena unei grupe cu caracte bazic la C-7 influeneaz activitatea antibacterian i proprietile farmacinetice. Ele au fost cercetate intensiv i pentru aciune antidiabetic, antitumoral, antiviral, antifilarial, anti-HIV. Pe de alt parte este bine cunoscut activitatea antimicrobial, antiviral, antidiabetic, anti-HIV a derivailor de feniltiouree. Din aceste motive s-a urmrit introducerea n molecula fluorochinolonelor a fragmentului tioureidic. Schema de sintez a nolilor compui este urmtoarea:
O F Cl N HN - SO2 SOCl2 - HCl benzen, 5-6h O F Cl N HN S refluxare in piridina 8h H2N-C-NH - HCl O F Cl N O NH S NH refluxare in DMSO,Et3N - HCl R R= H, 2-CH3, 3-CH3, 4-CH3, 2-NO2, 3-NO2, 4-NO2, 2-OCH3, 4-OCH3, 3-Cl, 4-Cl, 4-COOH
HN N-(CH2)2-OH

O COOH
HN NH

O NH

F N N

NH

R O
HN N-CH3

COCl

O NH

F N N

NH

R O F N HN N O NH S

NH

Clorura acidului 7-cloro-1-ciclopropil-6-fluoro-4-oxo-1,4-dihidro-chinolin-3-carboxilic a fost preparat prin refluxare n benzen timp de 5- 6 ore cu clorur de tionil. Pentru prepararea 1-(7-cloro-1-ciclopropil-6fluoro-4-oxo-1,4-dihidro-chinolin-3carbonil)-3-feniltioureei R-substituit, peste derivatul ariltioureei dizolvat n piridin anhidr se adaug n pictur, cu agitare la 0- 5C, soluia n piridin a clorurii de acid menionat anterior. Amestecul de reacie se refluxeaz apoi 8 ore, dup care se toarn cu agitare n ap rece acidulat. Solidul format se filtreaz i se spal cu soluie apoas de hidrogenocarbonat de sodiu. Purificarea se face din amestec 1: 2 de etanol: DMSO. Compusul a fost caracterizat prin analiz spectral IR i RMN. Derivaii de 1-fenil-3-(1-ciclopropil-6-fluoro-7-piperazin-1-il-1,4-dihidro-chinolin-3carbonil)-tiouree au fost preparai din 1-(7-cloro-1-ciclopropil-6fluoro-4-oxo-1,4-dihidro-chinolin3-carbonil)-3-feniltiouree R-substituit, piperazin, acetonitril, DMSO i trietilamin, prin refluxare la 135C, timp de 14 ore i apoi rcire la temperatura camerei. Amestecul a fost turnat n ap rece i neutralizat cu acid clorhidric 50%. Produsul solid a fost filtrat, uscat i recristalizat din alcool absolut: DMSO (1: 2). Derivaii de 1-fenil-3-[1-ciclopropil-6-fluoro-7-(4-metil-piperazin-1-il)-4-oxo-1,4dihidro-chinolin-3-carbonil]-tiouree i cei de 1-fenil-3-{1-ciclopropil-6-fluoro-7-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]-4-oxo-1,4-dihidro-chinolin-3-carbonil}-tiouree au fost preparai n mod asemntor, folosind derivaii de piperazin corespunztori. Toi compuii au fost testai pentru activitatea antimicrobian pe Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli i Pseudomonas aeruginosa, comparativ cu ciprofloxacin. Aceti compui au prezentat aciune superioar fluorochinolonelor care au la C-3 grup amidic sau ester, preparate anterior de aceiai autori [2]. D. Dogruer i col. au sintetizat 16 noi derivai ai piridazinei care au n poziia 3 un fragment de uree, tiouree sau de sulfonamid, cu scopul de a investiga activitatea lor antibacterian i antifungic.

N N HN X X= O, S n= 1,2 R sauR'= H, Cl, CH3, OCH3 H N

R

N N HN X H N (CH2)n HN O

N N S O R'

n ciuda multor progrese semnificative realizate n terapia antimicrobian, bolile infecioase cauzate de bacterii i fungi rmn o problem major pe plan mondial, datorit rezistenei pe care o dezvolt agenii infecioi la medicamentele antimicrobiene existente. Cu alte cuvinte, utilizarea crescut i ntrebuinarea greit a medicamentelor antimicrobiene existente, a avut ca rezultat dezvoltarea unor ageni patogeni rezisteni. Astfel, s-a evideniat existena unor rate de rezisten foarte nalte, cu pattern-uri de rezisten cunoscute, de importanta epidemiologica (S. aureus meticilino-rezistent, E. coli productoare de beta-lactamaze de spectru larg- ESBL, Streptococcus pneumoniae rezistent la penicilin, Enterococcus faecium/ faecalis rezistent la vancomicin), dar i incidena crescut a unor tulpini cu pattern-uri noi de rezisten la antibioticele beta-lactamice (tulpini de E. coli izolate din infectii invazive, care nu produc beta-lactamaze de spectru larg, dar care sunt rezistente la CG3 prin mecanisme ne-enzimatice). n anii 90, rezistena fungic a devenit o problema la pacienii cu infecii cronice cu HIV, M. tuberculosis i cu alte bacterii. S-a nregistrat o cretere a incidenei infeciilor fungice, n special datorit alterrii strii imunitare asociat cu SIDA i chimioterapie antineoplazic sau imunosupresiei asociat cu transplantul, deoarece tulpinile rezistente, saprobionte la un individ sntos, devin patogene la persoanele imunocompromise. De aici se impune proiectarea unor noi ageni antibacterieni i antifungici cu activitate mbuntit i cu toxicitate sczut. Muli cercettori, inclusiv autorii acestui studiu, au fost interesai de diversele activiti biologice ale derivailor piridazinici, inclusiv de activitatea antimicrobian, antioxidant, 6

analgezic sau antiinflamatoare, precum i de activitile antimicrobian, antiviral, anti-SIDA, antitumoral ale derivailor de uree i tiouree. Autorii au sintetizat molecule hibride care reunesc diferite grupe farmacofore ntr-o singur structur, n scopul de a obine compui cu aciune antibacterian i antifungic superioar. Pentru obinerea derivailor ureei sau tioureei, izocianatul sau izotiocianatul corespunztor se adaug peste o soluie de 3-amino-6-fenilpiridazin n toluen. Amestecul rezultat se nclzete la microunde la 120oC, timp de 20 minute. Dup ndeprtarea solventului, derivatul de tiouree se usuc i se purific din butanol.
R X=O R= H, Cl, CH3, OCH3 N=C=X Cl N PhB(OH)2, Pd(PPh3)4 N Na2CO3 2 M, toluen NH2 N N HN N N NH2 (CH2)n-N=C=X N N HN X H N (CH2)n X= O, S n= 1,2 X H N X= S R= H, Cl, CH3, OCH3
R

Compuii sintetizai au fost testai pentru activitatea antibacterian pe germeni gramnegativi Escherichia coli productoare de beta-lactamaz de spectru larg i Pseudomonas aeruginosa, pe germeni gram- pozitivi Staphylococcus aureus meticilino-rezistent, Enterococcus faecalis, precum i pentru activitate antifungic pe Candida albicans i pe Candida parapsilosis. Sa folosit ca antibacterian sau antifungic de referin ampicilina, respectiv fluconazolul. Compuii au prezentat un spectru larg de activitate cu o concentraie minim inhibitorie cuprins ntre 2- 128 g/ mL pe bacterii gram- pozitive i gram- negative. n general, compuii au fost mai activi pe germeni gram- pozitivi. n afar de Escherichia coli izolat, compuii nu au fost activi pe alte tulpini izolate din clinici. Dintre bacteriile gram- pozitive testate, S. aureus a prezentat 7

o sensibilitate mai mare fa de compui. Toi compuii au prezentat activitate antifungic cu o valoare a CMI de 8 g/ mL pe ambele tulpini testate, deci diferenele structurale dintre aceti compui nu joac un rol important n activitatea antifungic [3]. Literatura de specialitate prezint diferii derivai 1,3-disubstituii ai tioureei obinui prin diverse ci de sintez i care prezint un spectru larg de bioactivitate. Astfel, N,N-dialchil-Naroil-tiourea este un ligand eficient pentru separarea metalelor din grupa platinei. Derivaii 1,3dialchil sau diaril-tioureei prezint o activitate antifungic semnificativ pe fungii patogeni ai plantelor Pyricularia oryzae i Drechslera oryzae. Derivaii N-4-benzil-N-ter-butilbenzil-tioureei care au radicalul benzil divers substituit, sunt liganzi ai receptorilor vaniloidici. Aceti compui acioneaz la nivelul neuronilor ganglionilor rdcinilor dorsale la obolani. Compuii au fost preparai folosind derivai substituii ai acidului benzoic care au fost transformai n clorurile corespunztoare la tratare cu clorur de tionil. Aroilclorurile au fost tratate cu tiocianat de potasiu n aceton, rezultnd izotiocianaii corespunztori care nu au fost izolai. La acetia, a fost adugat o cantitate echimolecular de aniline substituite n aceton, formndu-se derivaii de 1-aroil-3-ariltiouree.
H2N HOOC

1. SOCl2 2. NaSCN (acetona anh.)

R2
S=C=N-CO

R1

H N O

H N S

R2

R1 R1= H, 2-Cl, 2-Br, 3-CH3 R2= H, 3-Cl, 2-O-CH3, 2-CH3, 3-CH3 Derivaii de tiouree sunt caracterizai cu ajutorul spectrelor IR, prin benzile de adsorbie de la 3350 cm-1, 3200 cm-1 pentru grupul NH liber sau asociat, prin prezena grupei carbonil la 1660- 1670 cm-1 i prin grupa tiocarbonil la 1230- 1250 cm-1. n spectrele 1H-RMN i 8

13

C-RMN sunt caracteristice singletele lite de la 9.0 i 12.0 ppm pentru NH (1) i NH (3) i n metoda disc- difuzimetric Kirby- Bauer, care const n testri calitative in vitro pe

picurile de la 170 ppm i 179 ppm, pentru carbonul grupei carbonil i al grupei tiocarbonil. diverse tulpini bacteriene i fungice, unii dintre acti compui au prezentat o bun aciune pe Escherichia coli rezistent la antibioticele standard [4]. Prin tratarea anilinelor substituite cu tiocianat de potasiu i brom, n acid acetic, au fost obinui derivai ai 2-aminobenzotiazolului. Tratarea cu aroil izotiocianai, obinui in situ prin reacia aroil clorurilor corespunztoare cu tiocianat de potasiu n aceton, a condus la obinerea derivailor substituii ai 1-aroil-3-(2-benzotiazolil)tioureei. Structura noilor compui a fost confirmat prin analize fizice, spectre IR, RMN i de mas, iar testarea aciunii antimicrobiene s-a fcut in vitro, pe bacterii gram-pozitive i gram-negative, unii dintre compui prezentnd aciune moderat sau chiar puternic, n comparaie cu antibiotice standard. Derivaii 1,3-disubstituii ai tioureei se utilizeaz cu succes n sinteza unor diveri heterociclici. De exemplu, derivaii 1-aroil-3-ariltioureei se pot utiliza n sinteza 1-aroil-3-arilimidazol-2-tione 4-substituite, 2-(aroilimino)-3-aril-4-metil-1,3-tiazoline, benzotiazolil-4chinazolinone, pirimidin-2-tione i 2-iminobenztiazolotriazin-4-one. Derivaii heterociclici ai tioureei sunt cunoscui pentru diversele aciuni biologice, cum ar fi antiviral, antituberculoas, fungicid i ierbicid. Derivaii de indolil-halopiridil-tiouree prezint aciune antialergic, iar piridil-tioureele i ciclohexenil-tioureele anti-HIV. Benzotiazoltioureele se utilizeaz ca anestezice locale i sunt poteniali ageni hipoglicemici i antibacterieni. Derivaii benzoxazol-tioureei sunt activi pe Mycobacterium tuberculosis, aceeai activitate avnd-o i 1-[3-(4-benzotriazolil-3-fluorofenil)-2-oxo-oxazolidin-5-il-metil]-tiourea 3-substituit. 2-Aminobenzotiazolii sunt utilizai cu succes n tratarea diabetului, epilepsiei, inflamaiilor, tuberculozei i infeciilor virale. Benzotiazolii fenil substituii prezint activitate intens antitumoral, activitate antiviral. Derivaii substituii ai 2-benzotiazolaminei au fost sintetizai prin tratarea unor derivai ai anilinei cu tiocianogen, (SCN)2, preparat n reacia bromului cu un tiocianat alcalin n mediu de acid acetic. Derivaii 1-aroil-3-(2-benzotiazolil)tioureei au fost sintetizai folosind aroilcloruri, derivate de la acizii corespunztori, cu tiocianat de potasiu n aceton, urmat de reacia cu derivaii substituii ai 2-benzotiazolaminei. 9 iar pirimido[2,1-b]benzotiazolii i benzotiazolo[2,3-b]quinazolinelor

COOH R'

1. SOCl2/ 2h reflux 2. KSCN/ aceton

CO-N=C=S R'

R NH2

KSCN Br2/ HOAc

S R N NH2 aceton/ 1- 2h reflux/N2

S R N

R'

NH-C-NH-C

R= H, 6-Br, 6-CH3, 6-O-CH3, 5,6-diCl R= 2-O-CH3, 4-CH3, 3-Cl, 2-F, 2-Br, 2,4-diCl Spectrul IR prezint picuri la 3150- 3382 cm-1 (N-H), 1627- 1720 cm-1 i 1230- 1250 cm-1 pentru grupele carbonil i tiocarbonil, 1235- 1278 cm-1 (C-N), 1211- 1173 cm-1 (C=N), precum i la 1517- 1558 cm-1 (C=C). n spectrul 1H-RMN se disting dou singlete caracteristice pentru protonii grupelor NH la 11,38 i 10,09 ppm. Activitatea antibacterian a fost evaluat in vitro prin metoda disc difuzimetric (metoda Kirby- Bauer) pe diferite tulpini bacteriene. Activitatea a fost determinat prin msurarea diametrului de inhibiie, compuii testai prezentnd bune proprieti antibacteriene pe microorganisme rezistente la medicamentele cunoscute [5].

M. Struga i col. prezint sinteza unor noi compui care conin un fragment de tiouree ataat unei imide policiclice, anume ai derivai ai 1,7,8,9-tetrametil-3,5-dioxo-4azatriciclo[5.2.1.02,6]dec-8-en-4-il-tioureei, 1,7,8,9,10-pentametil-3,5-dioxo-4-azatriciclo

[5.2.1.02,6]dec-8-en-4-il-tioureei, ai 10-izopropil-8-metil-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.2.02,6] undec-8en-4-il-tioureei i ai 1-izopropil-7-metil-3,5-dioxo-4-azatriciclo[5.2.2.02,6] undec-8-en-4-il-tioureei. 10

N-amino imidele sunt intermediarii de baz i au fost obinute din imide i hidrat de hidrazin. Ele reacioneaz cu izotiocianai, n scopul obinerii derivailor de tiouree. Structurile compuilor sintetizai sunt: O Br (o,m,p) N O NH-C-NH S

O Br (o,m,p) N O NH-C-NH S

O Br (o,m,p) N O NH-C-NH S

O Br (o,m,p) N O NH-C-NH S

Aceti compui finali au fost testai pentru activitatea antibacterian pe coci grampozitivi i pe bacili gram- negativi i pentru activitatea antifungic. S-au folosit 10 tulpini standard i 20 de tulpini izolate din clinic i s-au aplicat metodele disc difuzimetric i concentraiei minime inhibitori. S-a constatat faptul c activitatea depinde numai de substituentul de pe nucleul

11

benzenic, nu i de parte de imid triciclic. Compuii prezint o activitate mai bun pe coci grampozitivi. Deoarece unii dintre agenii anti-HIV, cum ar fi inhibitorii nucleozid revers transcriptazei (TIBO, trovirdin), au n structur un fragment de tiouree, noii derivai sintetizai au fost testai pentru activitatea anti- HIV pe celule MT-4, dar nu au prezentat aceast proprietate [6]. Cu ajutorul concentraiei minime inhibitorii, a fost evaluat activitatea antimicrobian, pe zece microorganisme, a ase N-fenil- i paisprezece N-benzoil-tiouree. Majoritatea compuilor au prezentat activitate selectiv, de inhibare, pe fungi i pe bacterii gram- pozitive. Cercetarea a fost completat cu relaii ntre structur i activitate i cu metoda difraciei cu raze X. Cercetri anterioare pe derivaii menionai au pus n eviden toxicitatea sczut a acestora i posibilitatea utilizrii lor ca poteniale antibiotice. Cercettorii au sintetizat dou serii de derivai N1, N2-disubstituii ai tiouree, prin reacia unor amine primare sau secundare cu izotiocianat de fenil sau izotiocianat de benzoil, rezultnd derivai ai N-feniltioureei i ai N-benzoiltioureei:
S Ph N H N R2 R1 Ph-N=C=S R1 H N

O Ph-C-N=C=S R2 Ph

O N H

S N R2 R1

derivati ai N-feniltioureei R1= H R2= -C6H5-OCH3, -C6H5, -C6H11, -C5H4N

derivati ai N-benzoiltioureei R1= H R2=-C6H4-NH2 (p), C6H4-OCH3 (p), -C6H4-CH3 (p), -C6H4-Cl (o), -C6H4-NO2 (p), -C6H11, -C5H4N

R1, R2= -CH2C6H5, -C6H5 R1R2=

N O

12

Pentru obinerea derivatului N1-benzoil-N2-benzamidotiourea, se trateaz benzoatul de etil cu hidrazin, iar hidrazida obinut reacioneaz apoi cu izotiocianat de benzoil, iar pentru a sintetiza benzaldehid-4-feniltiosemicarbazona se condenseaz 4-feniltiosemicarbazida cu benzaldehida. S Ph N H N H N Ph H

O N H

S N H

H N O

Ph

Toi compuii sintetizai au prezentat activitate antimicrobian n anumite concentraii.

13

Aceti derivai au prezentat o aciune mai pronunat pe bacterii gram-pozitive (Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus). S-a constatat faptul c derivaii benzoiltioureei au aciune mai bun dect ceilali compui testai. S-a mai constatat faptul c M. luteus a fost cea mai sensibil tulpin bacterian, n special la derivaii benzoiltioureei parasubstituii pe nucleul aromatic, iar substituia cu o grup alifatic determin intensificarea activitii. Compuii care conin n molecul un fragment de amin secundar s-au dovedit a fi mai activi pe B. subtillis. Derivaii benzoiltioureei s-au dovedit a fi cei mai activi i pe fungii testai, n special pe Cladosporium cladosporioides [7]. Au fost sintetizai noi derivai ai benzoiltioureei, anume, (E)-N-[(2-benzamidometilenamino)etilcarbamotioil]benzamida, benzamida i N-(1-(3-benzoiltioureido)propan-2-ilcarbamotioil)Structurile (E)-N-[4-(benzamidometilenamino)fenilcarbamotioil]benzamida.

compuilor au fost identificate prin tehnici spectroscopice. Compusul (E)-N-[4-(benzamidometilenamino)fenilcarbamotioil]benzamida a prezentat o activitate antimicrobian bun. (E)-N-[(2-benzamidometilenamino)etilcarbamotioil]benzamida a fost preparat prin adugarea benzoilizotiocianatului la o soluie de etilendiamin n aceton anhidr. Amestecul de reacie se refluxeaz ase ore. Se adaug n final, la 100C, o soluie de acid clorhidric 1 M. Precipitatul format de filtreaz i se spal cu dietileter. Compusul se recristalizeaz dintr-un amestec de etanol i diclorometan: O 2 NCS + H2N NH2 acetona; 6 h HCl; pH 5-9; -H2S

S HN O N H N

H N O

14

N-(1-(3-benzoiltioureido)propan-2-ilcarbamotioil)benzamida a fost preparat

prin

adugarea benzoilizotiocianatului la o soluie de 1,2-diaminopropan n aceton anhidr. Amestecul de reacie se refluxeaz timp de ase ore, iar n final, dup rcire, se adaug o soluie de acid clorhidric 1 M. Precipitatul galben format de filtreaz, se spal ci dietileter i se purific dintr-un amestec de etanol i diclorometan: O 2 NCS + H3C

NH2 NH2 acetona; 6 h HCl; pH 5-9

S HN O N H

CH3

O H N S NH

Pentru a sintetiza (E)-N-[4-(benzamidometilenamino)fenilcarbamotioil]benzamida, benzoil-izotiocianatul se adaug la o soluie de para-fenilendiamin n aceton anhidr. Amestecul de reacie se refluxeaz timp de ase ore. n final, se adaug la 100C, o soluie 1 M de acid clorhidric. Precipitatul format se izoleaz prin filtrare i se spal cu dietileter. Compusul se recristalizeaz dintr-un amestec de etanol i diclorometan:

15

O 2 NCS +

NH2 acetona; 6 h HCl; pH 5-9; -H2S NH2 O H N HN O N S NH

n spectrul FTIR, grupa C=O apare la 1677 cm-1 ca o band intens. Aceast valoare mai sczut dect valoarea la care apare de obicei grupa carbonil, poate fi explicat ca rezultat al formrii legturii de hidrogen intramoleculare. Vibraiile de ntindere datorate grupei NH apar n intervalul 3350- 3100 cm-1. Vibraiile de ntindere caracteristice pentru C-N apar la 1554- 1250 cm1

, iar cle ale grupei C=S la 1190- 1150 cm-1. Tautomeria tion- tion a acestor liganzi care conin o

grup funcional tioamid NH-C=S, poate fi examinat n spectrul IR. n spectrul IR exist o band care apare la 2400- 2500 cm-1 i care indic prezena unei grupe S-H. n spectrele 1H-RMN, nregistrate la 400MHz, protonul unei grupe NH apare ntre 12,6- 11 ppm, iar cellalt poton, datorit legturii de hidrogen, apare la valori mai mici, 9- 8 ppm [8].

16

2. DERIVAI AI TIOUREEI CU PROPRIETI ANTIVIRALE

Compusul cu structura chimic urmtoare are o bun activitate de inhibare a reverstranscriptazei [9]: S N H N O-CH3 Br N O NH

O O C HN O HO-H2C C

N-[2-(2-tiofen)etil]-N-[2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-443) a fos testat pe 31 de tulpini de HIV-1 izolate din clinic, fiind un potenial agent anti-HIV [10]. Pentru a identifica noi compui cu proprieti antivirale, au fost investigai derivai ai tioureei cu structur de 1H-izoindol-1,3(2H)dion [11]. Compuii cu structura general urmtoare, derivai ai benzimidazolului, sunt activi pe virusul Epstein- Barr [12]: R-NH-C-NH S

N N CH3 R= alchil, fenil substituit

CH2-C6H5

17

Derivaii 3,4-dimetoxifeniletil-1,3,5-triazinil-tioureei au fost testai pentru aciunea antivirala pe HIV i pentru aciunea antibacterian [13]. N-Monocarbamoil derivaii diaminelor simetrice au activitate antiviral pe virusul Herpes simplex i au fost preparai din amine simetrice i izotiocianai. Ca amine simetrice s-au folosit: 2,6-diaminopiridina, (1R,2R)-1,2-diaminociclohexanul, mezo-1,2-diaminociclohexanul sau (1R,2R)-1,2-difeniletilendiamina [14] Derivaii tioureei cu formula general urmtoare, pot fi utilizai n tratamentul hepatitei C: S R
1

N R2

N R3

A1

(X) x

[ ]
m

(Y) y

[ ]

(Z)

A2 z

R1- R3= H, alchil, cicloalchil R1 si R2= formeaza un heterociclu cu azot R2 si R3= formeaza un hereroclu cu 2 atomi de azot A1, A2= (hetero)aril X, Y, Z= O, S, S(O), SO2 m,n= 1- 5 x, y, z= 0, 1

Plecnd de la 3-nitrofenol i (5-bromopentil)benzen, s-a obinut urmtorul compus cu citotoxicitate sczut [15]:

S H2N N H O C6H5
18

Derivaii N-alchil/ aril- N-{4-[4-alchil/ aril-5-tioxo-4,5-dihidro-1H-1,2,4-triazol-3il]metoxi]fenil}tioureei au fost testai pentru aciunea antiviral pe HIV, precum i pentru aciunea tuberculostatic, cel mai activ compus pe M. tuberculosis H37 Rv fiind [16]: H N N S N H N H CH2 O N S

Derivaii pirazolo[3,4-b]piridin-3-ilfeniltioureei au fost testai pentru aciunea antiviral pe virusul Herpex simplex (HSV-1) i pe virusul hepatitei A, tulpina MBB (HAV-MBB) [17]. n reacia 6-amino-1(3H)izobenzofuranonei cu 1-bromo-3-izotiocianatobenzen, au fost obinui derivai ai tioureei cu aciune antiviral i formula general [18]:

H N R4 R3 S

H N

O O

R2

R1- R4= H, halogen, OH, alchil

n reacia izotiocianatului de 2,3,4,6-tetra-O-acetil--D-glucopiranozil cu derivai ai benzotiazolaminei, se obin derivai de N-(2-benzotiazolil)-N-(2,3,4,6-tetra-O-acetil--Dglucopiranozil)tiouree. Aceti compui au fost investigai pentru activitatea antiviral pe virusul HIV-1 i al gripei, precum i ca inhibitor al enzimei de conversie (angiotensin- converting enzymeACE) [19]. 19

Azabenzofuranii derivai ai tioureei sunt inhibitori ai recaptrii virale, fiind utili n tratamentul hepatitei C [20]:
R5 O S A4 O N

A2 A3

A1

R6 R7

N V Ar

V= alchil C1- C4 sau lipseste A1= N sau CR1 A2= N sau CR2 A3= N sau CR3 A4= N sau CR4 unde numai unul din A 1, A2, A3, A4 este N unul din R1- R4 este: H, halo, alchil C1- C6, alcoxi C1- C6 si mono- si di-(alchil C1- C6)amino, ceilalti R1- R4 sunt H R5= H, alcoxi C1- C4 R6, R7= independent, H, alchil C 1- C6 Ar= aril, heteroaril fiecare substituit cu 0- 5 substituenti: halo, OH, CN, NO 2, oxo, haloalchil C1, C2, haloalcoxi C1, C2, alchil C1- C4, alcoxi C1- C4, di-(alchil C1- C4)amino, fenil

20

3. DERIVAI AI TIOUREEI CU ACIUNE ANALGEZIC I ANTIINFLAMATOARE

n ncercarea de a descoperi o nou clas de analgezice, au fost investigai ca liganzi ai receptorilor vaniloidici o nou serie de derivai ai N-(3-aciloxi-2-benzilpropil)-N-(4-hidroxi-3metoxibenzil)tioureei. Modelul farmacofor propus a fost resiniferatoxina, o diterpen triciclic, izolat din Euphorbia resinifera, privit ca un puternic analog al capsaicinei, care include n structura sa un fragment de acid homovanilic la C20, C3 implicat ntr-o grup carbonil, precum i o grup ortoesteric la ciclul benzenic. Acestea au fost grupele cheie farmacofore utilizate n drug-design-ul noilor compui. Pe de alt parte, relaiile structur- aciune stabilite anterior pe analogi ai capsaicinei cu diverse structuri, care au un fragment de tiouree, au artat faptul c fragentul de tiouree confer acestora o aciune mai puternic, datorit implicrii n multiple legturi de hidrogen cu receptorii. Compuii au fost obinui n mai multe etape, folosind ca materie prim malonatul de dietil i au fost evaluai in vitro prin metoda legrii de receptor i prin metoda canalelor activate de capsaicin. De asemenea, a fost evaluai i pentru aciunea analgezic i antiinflamatoare, folosind modele animale. Compuii sintetizai au urmtoarea formul general: R1 OH R
2

O O

H N S

H N

O-CH3

R1= H, 3,4-di-CH3; 4-Cl; 4-t-Bu. R2= -C(CH3)3; -CH(CH3)2; CH3(CH2)4-; CH3(CH2)16-; C6H5-; (3,4-diCH3)Ph; (CH3)3C-.

21

Aceti derivai ai 3-aciloxi-2-benzilpropiltioureei au fost preparai pornind de la malonatul de dietil, care a fost monoalchilat cu diverse halogenuri de benzil, n prezena hidrurii de sodiu. A urmat reducerea cu hidrur de litiu i aluminiu, cu obinerea diolilor corespunztori. Diolii respectivi au fost monoacetilai cu ortoacetat de trimetil, iar apoi tratai cu ap, pentru a obine blocarea unei grupe hidroxil sub form de ester. n urmtoarea etap, grupa hidroxil alcoolic rmas liber, reacioneaz cu clorura acidului metansulfonic, n prezena trietilaminei, folosind ca mediu de reacie diclorometanul, iar mesilatul intermediar obinut, este tratat cu azida de sodiu, mediul de reacie fiind dimetilformamida. Urmeaz etapa de eliberare a grupei hidroxil implicat n legatura esteric, prin tratare cu carbonat de sodiu n metanol, cu obinerea 3-azido-2-benzil-1propanolilor corespunztori. Acilarea cu diverse halogenuri de acil conduce la obinerea esterilor corespunztori, ca fixator de protoni folosindu-se trietilamina, iar ca mediu de reacie diclorometanul. Intermediarii rezultai sunt supui reaciei de reducere a grupei azido i tratrii cu izotiocianatul de 4-metoximetiloxi-3-metoxibenzil i n final izotiocianaii sunt hidrolizai la compuii doriti, derivai ai 3-aciloxi-2-benzilpropil-tioureei.
R1 COOC2H5 H2C COOC2H5 R1 1. MsCl, NEt3 AcO-CH2 2. NaN3 CH2-OH AcO-CH2 ArCH2X NaH H5C2OOC COOC2H5 R1 K2CO3, MeOH CH2-N3 HO-CH2 HO-H2C LiAlH4 R1 . + 1. CH3C(OCH3)3 H 2. H2O CH2-OH R1 RCOCl

CH2-N3

R1

1. reducere 2. S=C=N-H2C 3. hidroliza

OH O-CH3

R1 OH R-COO-H2C
2

H N S

H N

R-COO-H2C
2

CH2-N3

O-CH3

R1= H, 3,4-di-CH3; 4-Cl; 4-t-Bu. R2= -C(CH3)3; -CH(CH3)2; CH3(CH2)4-; CH3(CH2)16-; C6H5-; (3,4-diCH3)Ph; (CH3)3C-. 22

Ca analgezici, cei mai activi compui ai seriei s-au dovedit a fi cei la care R1= 3,4-diCH3 i 4-t-Bu, iar R2= -C(CH3)3 [21]. Receptorul vaniloidic tip 1 (VR1) este n prezent una dintre cele mai atractive inte n descoperirea de noi medicamente analgezice. El este un canal cationic, neselectiv, cu preferin pentru Ca2+, activat n jurul temperaturii de 42C. Este exprimat ntr-o populaie de neuroni peptidergici din ganglionii trigeminali i spinali, dar i n alte tipuri de celule. Este activat i de stimuli chimici nocivi sau iritani: pH acid, compui vaniloidici (capsaicin, resiniferatoxin), camfor, alicin (compusul activ din usturoi), oxidul nitric, toxine din veninul de pianjen, sau compui endogeni derivai ai acidului arahidonic. Activitatea acestui receptor este potenat de etanol, mediatori inflamatori sau neurotrofine i este modulat de cationi extracelulari. Este inhibat de capsazepin. Are rol n semnalizarea durerii, n hiperalgezia inflamatorie, n funciile tactului gastrointestinal, este important pentru detecia stimulilor mecanici n urotelium, semnalizarea substanelor toxice la nivelul tractului respirator, etc. Odat cu descoperirea primului antagonist competitiv al VR1, capsazepina, ncercat descoperirea unor noi astfel de antagoniti cu proprieti analgezice ideale. Tiourea se regsete n stuctura unor modulatori ai VR 1, cum ar fi capsazepina, SDZ249482, MK056, SC0030: s-a

HO N HO S capsazepina H N Cl

23

S H3C-O H2N-H2C-H2C-O SDZ249482 N H N H

S X H3C-SO2-NH X= H (MK056) X= F (SC0030) N H N H

C.H. Ryu i col. au continuat cercetrile n clasa derivailor tioureei cu lan ramificat, n scopul identificrii izomerului optic cel mai activ, precum i al stabilirii efectului substituentului de pe nucleul benzenic. Astfel, prin condensare ntr-o singur etap, a unor amine chirale cu izotiocianat de 4-ter-butilbenzil, n prezena trietilaminei i n mediu de diclorometan, au fost obinui compuii:

X NH2 CH3 (R) sau (S)

S=C=N

X H N CH3 S H N

X= H (S), H (R), Me (R), t-Bu (R), NO 2 (R), NO2 (S)

24

n schema de sintez urmtoare este prezentat obinerea unor 1,3-dibenziltiouree cu lan ramificat i care au n structura lor un fragment de acetamid sau de metansulfonamid. Astfel, se pleac de la o amin chiral cu grup nitro, a crei grup amino este protejat cu di-terbutildicarbonat. Intermediarul obinut este supus unei reacii de reducere catalitic, cnd grupa nitro este transformat n grup amino, care apoi este acetilat sau mesilat cu anhidrid acetic sau cu anhidrid metansulfonic. Compusul obinut este apoi supus unei reacii cu acid trifluoroacetic, n scopul deprotejrii grupei amino blocat la tratare cu di-ter-butildicarbonat. Amina rezultat este condensat apoi cu izotiocianat de 4-ter-butilbenzil.
O O O O

O2 N NH2 . HCl CH3

O2 N H N CH3 YHN O

H2/ Pd-C; MeOH 95%

H2N H N CH3 O

(CH3CO)2O sau (CH3SO2)2O (piridina, CH2Cl2)

H N CH3

CF3COOH O

Y= CH3CO, CH3SO2

YHN NH2 CH3

S=C=N

YNH H N CH3 S H N

trietilamina, CH2Cl2

Schema de sintez urmtoare prezint obinerea unor derivai racemici alchil ramificai ai metansulfonamidei. S-a plecat de la un derivat al metansulfonamidei, care a fost supus unei acilri Friedel- Crafts, urmat de aminare reductiv cu obinerea unui intermediar oxim i apoi a unei amine, care este condensat n final cu izotiocianatul de 4-ter-butilbenzil:

25

H3C-SO2-NH

H3C-SO2-NH (RCO)2O AlCl3, ClCH2CH2Cl H3C-SO2-NH R NH2 H3C-SO2-NH H N R S H N O

H3C-SO2-NH R NH2OH R N-OH

H2, Pd/C, MeOH

S=C=N

THF

R= Me, Et, i-Pr, Pr, Ph

ntr-o alt metod de sintez a unor astfel de derivai, se pleac de la (R)-(+)-1fenilpropilamin care este formilat cu acid formic i anhidrid acetic, urmat de nitrare, hidrogenare cu H2 pe Pd/ C, deprotejarea grupei amino cu hidroxid de potasiu, cnd se obine diamina corespunztoare. Aceasta este tratat cu cu izotiocianatul de 4-ter-butilbenzil la -40C i apoi mesilat cu anhidrid metansulfonic:
HNO3, H2SO4, -200C NHCHO Et H2N NHCHO Et Et KOH, MeOH, reflux O2N NHCHO Et

HCOOH, (CH3CO)2O NH2 Et H2, Pd/C, MeOH

H2N

S=C=N

NH2

THF

H2N H N Et S H N

H3C-SO2-HN (CH3SO2)2O Et H N S H N

26

Aceti derivai ai 1,3-dibenziltioureei au fost evaluai ca agoniti i antagoniti n metoda influxului de ioni de Ca2+, utiliznd culturi de neuroni spinali senzoriali de obolani nounscui. S-a constatat c enantiomerul R este mai activ dect cel S. De asemenea, substituia pe radicalul fenil al derivailor de 1,3-dibenziltiouree are un efect important n intensitatea i selectivitatea aciunii. Substituia n poziia 4 cu grupa metansulfonamido schimb legarea de receptori de la modul agonist la cel antagonist. Pn la aceste studii, aceasta era singura cale pentru ca derivaii de 1,3-dibenziltiouree s-i exercite aciunea antagonist. Prin aceste studii s-a demonstrat faptul c derivaii de 1,3-dibenziltiouree cu lan ramificat i-ar putea pstra activitatea antagonist chiar i fr prezena n molecul a grupei metansulfonamidice. Majoritatea compuilor cu lan ramificat folosii n acest studiu, prezint activitate antagonist. Chiar i fr substitueni polari (grupa nitro), compuii sintetizai au prezentat activitate antagonist. Cel mai activ compus, cu o activitate comparabil cu cea a capsazepinei, a prezentat ca substituent pe nucleul benzenic, grupa metil n poziia 4. Astfel, prezena lanului alchilic ramificat pare s fie o bun strategie pentru dezvoltarea unor noi antagoniti ai receptorului vaniloidic de tip 1 [22]. Au fost preparate noi 2-metiltio-chinazolin-4-(3H)one 3-substituite prin reacia esterului metilic al acidului (2-metiltio-4-oxo-3H-chinazolin-3-il)ditiocarbamic cu diferite amine. Pentru obinerea ditiocarbamatului s-a folosit antranilatul de metil. Noii compui obinui au fost investigai pentru aciunile analgezic, antiinflamatoare i antibacterian. Infeciile bacteriene produc adesea durere i inflamaie. n practic se prescriu simultan dou grupe de medicamente (chimioterapice i analgezice- antiinflamatoare). Compui care s reuneasc aceste trei proprieti nu sunt frecvent ntlnii. Chinazolinele i chinazolinele condensate prezint aciuni antimicrobian, analgezic, antiinflamatoare i anticonvulsivant. Din acest motiv, dar i pentru faptul c n studii anterioare autorii au obinut 2-fenil-chinazoline 3-substituite, chinazoline 2,3-disubstituite i 2-metil-chinazolin-4-(3H)-one 3-substituite cu bune proprieti analgezice i antiinflamatoare, s-a urmrit sinteza unor 2-metiltio-chinazolin-4-(3H)one 3substituite. Acestea au fost obinute prin substituia nucleofilic a esterului metilic al acidului (2metiltio-4-oxo-3H-chinazolin-3-il)ditiocarbamic cu diferite amine. Esterul metilic al acidului (2-metiltio-4-oxo-3H-chinazolin-3-il)ditiocarbamic a fost sintetizat prin reacia grupei amino a 3-amino-2-metiltiochinazolin-4-(3H)onei cu sulfur de carbon i apoi cu sulfat de dimetil. 27

3-Amino-2-metiltiochinazolin-4-(3H)ona de metil.

fost

obinut

din

3-amino-2-

mercaptochinazolin-4(3H)-ona n hidroxid de sodiu, iar aceasta din urm, pornind de la antranilat La tratarea antranilatului de metil n dimetilsulfoxid, la temperatura camerei, cu disulfur de carbon n soluie apoas de hidroxid de sodiu, se obine un intermediar care reacioneaz mai apoi cu sulfatul de dimetil. Se obine N-(2-metoxicarbonilfenil)ditiocarbamatul de metil care se trateaz cu hidrat de hidrazin cnd rezult 3-amino-2-mercaptochinazolin-4(3H)-ona.
COOCH3 + CS2 + NaOH NH2 COOCH3 NH-C-SNa S O H2N-NH2. H2O COOCH3 NH-C-NH-NH2 S O CS2/ NaOH N N SCH3 S NH-C N N SCH3 R S NH-C-SNa (CH3)2SO4 N O amine O N S NH-C-S-CH3 SCH3 N N NH2 NaOH SH (CH3)2SO4 N O N NH2 SCH3 COOCH3 NH-C-SCH3 S

DMSO

(CH3)2SO4

R= -NHCH3, -N(CH3)2, -N(C2H5)2,

O,

NH ,

N H

O-CH3 ,

N H

NO2 ,

N H

Cl , -N(C6H5)2 ,

N H

28

Toii compuii au prezentat activitate analgezic, cea mai pronunat avnd-o compusul cu R= dietilamino, activitatea fiind mai bun dect aceea a diclofenacului sodic. n ceea ce privete aciunea antiinflamatoare, compusul cu R= pirolidinil a prezentat o aciune mai puternic dect diclofenacul sodic. Aciunea antibacterian a acestor compui pe B. subtilis, S. paratyphi B, E. tarda, P. aeruginosa, S. typhimurium, P. vulgaris i pe K. pneumoniae fost slab [23]. Tratarea inflamaiei la mamifere a fost abordat i n contextul utilizrii derivailor 1aril-3-(2-hidroxietil)-tioureei. Compuii au fost obinui prin tratarea cu etanolamin a unor arilizotiocianai i se ncadreaz n formula general: Aril-NH-C(=S)-NH-CH2CH2OH Aril poate fi 2,4-dimetilfenil, 4-metilfenil, 3,5-dimetilfenil, 2,6-dimetilfenil, 3metilfenil, 2,5-dimetilfenil, 2,4-dimetilfenil, 3,4-dimetoxifenil, 4-metoxi-2-metilfenil, 6-metoxi-3metilfenil, 2-fluorofenil, 3-fluorofenil, 2,6-difluorofenil, 2,5-difluorofenil, 4-clorofenil, 2,4diclorofenil, 2-clorofenil, 2,4,6-triclorofenil, 3-cloro-2-metoxifenil, 5-cloro-6-metoxifenil, 2-cloro5metoxifenil i 3-cloro-4-fluorofenil Brevetul amintetei de alte proprieti ale derivailor tioureei, cum ar fi cele antituberculare, antitiroidiene, hipnotice, anestezice, antihelmintice, antibacteriene, antifenoloxidazice, insecticide i rodenticide. Activitatea antiinflamatoare a fost determinat ntr-o metod care folosete inducerea edemului prin injectarea unei suspensii apoase de caragenin n suprafaa plantar a labei posterioare drepte la obolani. Volumul labei a fost msurat imediat dup injectare i apoi la trei ore. Diferena dinte cele dou msurtori indic cretere datorat umflturi cauzate de lichidul edematos. Laba de obolan a fost msurat cu ajutorul pletismografului. Cu o or nainte de injectarea carageninului, animalelor li se administreaz ingredientele de testat, suspendate sau dizolvate n carboximetilceluloz i ap [24].

29

4. DERIVAI AI TIOUREEI CU ACIUNE ANTITUMORAL

n scopul investigrii proprietilor anticanceroase ale unor derivai ai carboniltioureei, au fost ntreprinse studii pe linii celulare tumorale MCF-7. Derivaii tioureidici folosii n determinarea citotoxicitii, a permeabilitii membranare i a apoptozei, au fost: - acidul 2[3-(2-metilbenzoil)tioureido]-3-fenilpropionic - acidul 3-mercapto-2[3-(2-metilbenzoil)tioureido]propionic - acidul 2[3-(2-metilbenzoil)tioureido]acetic - acidul 2[3-(4-metilbenzoil)tioureido]acetic Compuii au prezentat aciune moderat pe liniile celulare ale cancerului de sn, celulele pierzndu-i integritatea membranar, doi dintre ei producnd apoptoz [25]. Au fost preparai derivai ai 1-[4-[[2-[(4-fenil substituit)metilen]hidrazino]-

carbonil]fenil]-tioureei 3-substituii prin adiia la hidrazida acidului 4-amino-N-[[4-fluoro/ 4(trifluorometil)-fenil]metilen]-benzoic a unor arilizotiocianai. Derivaii hidrazidici au fost obinui prin condensarea hidrazidei acidului 4-aminobenzoic cu 4-fluorobenzaldehida sau 4(trifluorometil)-benzaldehida. Hidrazida acidului 4-aminobenzoic a rezultat n reacia 4-aminobenzoatului de etil cu hidrat de hidrazin. Activitatea anticanceroas i screening-ul citotoxicitii au fost determinate pe linii celulare A 549 i L 929. Toi compuii sintetizai au fost evaluai in vitro pentru activitatea anti-HIV pe linii celulare MT-4, precum i pentru aciune pe virusul herpes simplex de tip 1 i 2 (HSV-1, HSV-2), virusurile Coxsackie, virusul Sindbis, citomegalovirusul uman i pe virusul varicela- zoster, utiliznd linii celulare HeLa, Vero sau HEL. A fost evaluat de asemenea i activitatea antimicobacterian pe Mycobacterium tuberculosis H37 Rv. Noii compui au fost sintetizai conform urmtoarei scheme de reacie:

30

O H2N O

CH3

H2N-NH2 H2O/ C2H5OH reflux

H2N

NH-NH2 O

R1-C6H4-CH=O

H N N H2N O

R1 R2-C6H4-NCS acetonitril anh./ reflux

H N R2

H N S

H N N O

R1

R1= -F, -CF3 R2= -C6H5, -C6H4-OCH3, -CH2C6H5, -C6H4-Br, -C6H4-Cl, -C6H5-F, -C6H4-CH3

Nici unul dintre compuii testai nu au prezentat activitate antiviral, antituberculoas i nu au fost gsite diferene semnificative ntre activitatea anticanceroas i citotoxic [26]. Derivaii tioureei joac un rol important ca ageni anticanceroi, datorit unei bune activiti inhibitoare a receptorilor tirozin- kinazici, a protein- tirozin kinazei i a NADH oxidazei, cu rol critic n multe aspecte legate de geneza tumorilor. Derivaii pirazolului sunt cunoscui n literatura de specialitate ca avnd numeroase aciuni biologice, printre care i aciune antitumoral. Lv i col. au sintetizat o serie de derivai ai pirazolului care conin o structur- schelet de tiouree, n scopul testrii activitii inhibitorii pe receptorul pentru factorul de cretere epidermic (EGFR). Specialitii au constatat c unii dintre aceti compui testai sunt inhibitori puternici ai EGFR.

31

Compuii testai se obin n dou etape. ntr-o prim etap, calconele au fost obinute prin condensarea direct dintre aldehide aromatice i acetofenona substituit, utiliznd soluie 20% de hidroxid de potasiu n alcool etilic. n urmtoarea etap, calconele au fost ciclizate cu tiosemicarbazid, prin refluxare n alcool etilic, la derivai ai pirazolului ce conin un fragment de tiouree. Prin refluxarea calconelor cu hidrat de hidrazin, la 120C, sub agitare, timp de 24 de ore, folosind ca mediu de reacie acidul acetic, pentru a se obine derivai ai 1-acetil-3,5-difenil-4,5dihidro-(1H)-pirazolului [27].

R1 O R1

R1 O R3

R2

N N

R2 S

N N

R4 O

H2N

H3C

A fost sintetizat i evaluat din punct de vedere al citotoxicitii, o nou serie de derivai ai benzotiazoltioureei i ai benzotiazolureei. Citotoxicitatea s-a efectuat in vitro, pe MCF7- linie celular derivat din cancer de sn. Din aceast serie, N1-(benzotiazol-2-il)-N3morfolinourea a prezentat activitatea citotoxic cea mai ridicat. Aceti compui au fost testai i pentru activitatea antituberculoas pe Mycobacterium tuberculosis H37Rv i antimicrobian pe Staphylococcus aureus, Escherichia coli i pe Candida albicans, compusul menionat anterior prezentnd activitatea cea mai pronunat pe Mycobacterium tuberculosis, n timp ce ceilali compui au activitate asemntoare cu ampicilina pe Staphylococcus aureus i pe Escherichia coli [28].

32

Prin ciclizarea oxidativ, n prezena bromului n cloroform, a derivailor de tiouree optic activi, se obin derivai ai 2-aminobenzotiazolului, a cror structur a fost stabilit cu ajutorul analizei IR, RMN i a spectroscopiei de mas.
Cl F NH-CS-NH-CH

Cl
1

N NH-CH S

R1 R2

R2

Cl F NH-CS-NH

Cl F

N NH S H H O

O H H

Att derivaii tioureei ct i derivaii lor 2-aminobenzotiazolici, au fost activi pe dou linii tumorale celulare MCF-7 i HeLa [29]. A fost sintetizat i analizat din punct de vedere structural i al activitii antiproliferative pe linii celulare HCT-116 i MDA-MB-231, precum i pentru activitatea inhibitorie a fosforilrii factorului de cretere endotelio-vascular (VEGFR) o nou serie de derivai ai diariltioureei, analogi ai sorafenibului (4-[4-[[4-cloro-3-(trifluorometil)fenil] carbamoilamino]fenoxi]-N-metil-piridin-2-carboxamida). Unii compui ai noii serii au prezentat activitate antiproliferativ competitiv cu cea a sorafenibului, folosit ca standard de referin i o bun aciune de inhibare a fosforilrii factorului de cretere endotelio-vascular [30].

33

n scopul dezvoltrii unor noi ageni antivirali i anticanceroi, Karaku i col. au sintetizat o nou serie de derivai ai 1-[4-(metansulfonamido)-3-fenoxifenil]-3-alchil/ aril tioureei, prin reacia izotiocianailor de alchil/ aril cu 4-amino-2-fenoximetansulfonanilide. Aceti derivai au fost caracterizai structural, folosind tehnici spectrale i au fost evaluai pentru activitatea anticanceroas i cea antiviral. Nici unul dintre compuii acestei serii nu au prezentat proprieti anticanceroase semnificative pe linii celulare A549 i L929. Compuii au fost testai i pe virusurile HIV-1 i HIV-2, pe tulpini celulare MT-4, precum i pe alte virusuri, cum ar fi HSV-1, HSV-2, Coxsackie B4, Sindbis i varicela zoster, utiliznd culturi celulare HEL, HeLa i Vero. Unii dintre compui au blocat replicarea virusului HIV [31]. Au fost sintetizate noi pseudonucleozide ce au ncorporat tiourea n structur i care au fost testate pe linii celulare ale tumorilor pulmonare umane (PG). 2-(4-metoxibenzamido)benzoimidazol-1-il-acetil pseudonucleozidele prezint aciune inhibitorie moderat pe aceste tipuri de celule [32]. Factorul de cretere epidermic (EGFR) aparine familiei de receptori tirozin kinazici i este una dintre cele mai importante proteine tirozin kinaz (PTK), blocat de inhibitori ai tirozin kinazei (TKI), care au fost introdui n tratamentul cancerului pulmonar. Tratamentul de ntreinere cu erlotinib sau gefitinib, cei mai utilizai ca inhibitori EGFR, conduce ns la un prognostic rezervat. Noii compui sintetizai de Xiong i col. pot s reprezinte o alternativ la tratarea cancerului pulmonar [33]. n lucrri anterioare, Li i col. au prezentat designul i sinteza unor noi compui din clasa inhibitorilor PTK, ce prezint un schelet de N-(2-oxo-1,2-dihidro-chinolin-3-ilmetil)-tiouree. n acest studiu, este evaluat activitatea antitumoral a acestor compui, pe linii celulare umane de cancer pulmonar. Proliferarea celulelor a fost inhibat, prin inducerea apoptozei. S-a observat i faptul c ciclul celular a fost ntrerupt n faza G0/ G1 [34]. S-a sintetizat o nou serie de derivai 4-(4-R)aroiltioureidici ai podofilotoxinei, n scopul investigrii abilitii lor de a inhiba creterea celulelor canceroase. Unii compui prezint

34

citotoxicitate pe linii celulare HepG2, A549 i HCT-116. Aceti compui induc oprirea ciclului celular n faza G2/ M i inhib ADN-topoizomeraza II. Formarea suprahelicei de ADN i relaxarea ei este condiionat de activitatea unui set de enzime, denumite ADN-topoizomeraze. Topoizomerazele sunt enzime care schimba configuraia spaial a ADN-ului prin ruperea i reunirea catenelor. O topoizomeraz este o nucleaz reversibil, care se leaga covalent la o grupare fosfat a ADN-ului i rupe legatura fosfodiesteric. Deoarece legatura covalent care unete topoizomeraza la o grupare fosfat a ADNului reine energia legturii fosfodiesterice pe care o rupe, reacia este reversibil, adic incizia este urmat de legarea celor doua capete. Legarea este rapid i nu necesit un aport suplimentar de energie. Topoizomerazele de tip II se leag covalent, simultan, de cele dou catene ale dublei helice i produc o rupere bicatenar tranzitorie. Aceste enzime se activeaz la situsurile cromosomale la nivelul crora se ntreptrund dou duble helice. Dupa fixarea topoizomerazei la un astfel de situs, etapele aciunii sale sunt urmtoarele: clivarea uneia dintre cele doua helice duble; enzima determin trecerea celei de a II-a catene, prin deschiderea creat; repar discontinuitatea nainte de a se disocia de ADN.

ADN- giraza (topoizomeraza II) modific configuraia spaial a moleculei de ADN, prin catalizarea suprarsucirii negative a moleculei de ADN, uurnd mpachetarea cromosomului i plasmidelor n spaiul restrns al celulei. Este o enzima alctuit din 4 subuniti (identice 2 cte 2), care utilizeaz energia rezultat prin hidroliza ATP-ului. Este esenial pentru mai multe procese vitale: iniierea, alungirea i terminarea replicrii ADN, transcrierea unor operoni, repararea ADN, recombinarea i transpoziia. ADN- giraza elimin rsucirile suprahelicale pozitive care se acumuleaz naintea bifurcaiei de replicare. Aceste activiti sunt rezultatul secionrii coordonate a ambelor catene ale ADN-ului, trecerea celuilalt segment de ADN prin ni i restabilirea continuitii catenei. Acest mecanism de aciune este caracteristic topoizomerazei II [35, 36]. Derivaii 7-azaindolilor cu urmtoarea structur au fost sintetizai ca o ans n terapia cancerului, fiind inhibitori ai B-Raf kinazei [37]:

35

H N N N R R2 N C2H5 N X

H N

R3

X= S, O R1= H, COOH, COOC2H5 R2= H, Br R3= C6H5, C6H11, CH2C6H5, C6H4-CF3(4) Derivaii tioureei care conin un fragment de tiouree au fost testai pentru activitatea antiproliferativ, pe linii celulare canceroase umane [38]: CH3

S H3C H3C N H N R2 R1= fenil, ciclohexil R2= H R1R2= pirolidino Compuii cu structura general urmtoare au fost preparai ca poteniali ageni n tratamentul cancerului ovarian: R1

36

H N X

H N NO2

R4

R3= CH3, C2H5, OC2H5 R3= H R3= H

R4= H

X= O,S X= O m= 2,3

R4= S(CH2)mCH3, SCH(CH3)(CH2)2CH(CH3)2 R4= C2H5, OC2H5 X= O, S X= O, S n= 3, 4

R3R4= (CH2)n

Ei au fost preparai prin condensarea unor amine aromatice cu izocianat sau izotiocianat de 4-nitrofenil n THF anhidru, sub azot, la 00C. Amestecul de reacie a fost agitat 24 de ore, la temperatura camerei i apoi produsul solid a fost recristalizat [39]. Derivaii de piridopirazin urmtori pot fi utilizai ca medicamente, n special n tratamentul bolilor maligne, precum i a altor boli bazate pe patologia proliferrii celulelor: R5 R
2

N N N

R4 R3

R1

R3, R4= independent, NH2 si derivati, H, alchil, cicloalchil R1, R2, R5= independent, H, alchil, cicloalchil, heterociclil

Astfel, prin substituia 1-(6-cloropirido[2,3-b]pirazin-3-il)-3-etilureei cu p-toluidin, se obine compusul cu structura chimic urmtoare [40]:

37

H3C N H N

N N N H

O N H C2H5

Inhibitorii proteinkinazei cu structura urmtoare, sunt utili n tratamentul cancerului [41]:

L1Y1L2Y2 A N N R3 R Q =
1 1

A= Q1- Q3 X= NH, S, O Z= CH, N R1, R2= H, OH, halo, CN, NO2, NH2, R, OR, SCH3, COOR R= alchil substituit R3= H, NH2, alchil, CN, NO2, L3Y3 L3= legatura, S, NH Y1- Y3= carbociclil substituit, heterociclil L1= legatura, NR', OC(S)NH R'= H, alchil Q =
3

R2

R Q =
2 2

R1 R

R2

L2= legatura, C(S)NH, NHC(S)NH, CONH, (CH2)n, NH(CH2)n, NH(CH)nNHSO2, SO2NH n= 1-4

38

Derivaii tioureei cu formula general urmtoare, sunt modulatori ai receptorilor de calciu:

R R Z= CH, C=CH, N R1, R2 independent= aril, heteroaril, Z z sau R1R2= A p= 1- 3 q= 0- 2 R3= H, alchilen-COOH, alchilen-C(O)O-alchil, alchilen-NH2 R5= H, alchil, alcoxi, hidroxialchil, alchiltio, tioalchil R6= aril sau heteroaril, (ne)substituit, doua cicluri legate, sisteme biciclice sau triciclice A= simpla legatura, metilen, dimetilen, O, N, S R3 Z-(CH2)p-N-Q-NH-(CHR5)q-R6
1 2

Compuii sunt foarte activi n tratamentul i prevenia cancerului, bolilor neurodegenerative i al bolilor metabolice articulare i osoase [42]. Derivaii 3-[1-etil-4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-3-il]fenilfenil-tioureei R1 NH-C-NH-[C]m B R2 R3

urmtori au fost testai pentru activitatea inhibitorie a B- Raf tirozin kinazei [43]:

N HN R4 R5

N N

R1= S, O C2H5 m= 0,1 B= cicloalchil, alchil R2, R3= H, alcoxi, haloalchil R4= H, CO2H, CO2C2H5

39

PARTEA EXPERIMENTAL

1. Sinteza noilor tioureide ale acidului 2-(4-metilfenoximetil)-benzoic

La baza alegerii acestei teme a stat importana farmacologic deosebit a derivailor de tiouree, dintre care se remarc derivaii N-acilai ai acesteia. Partea experimental a lucrrii de licen cuprinde sinteza i dovedirea structurii a doi noi compui, anume: 2-((4-metilfenoxi)metil)-n-(1-naftilcarbamotioil)benzamida 2-((4-metilfenoxi)metil)-n-(2-naftilcarbamotioil)benzamida sau sau N-[2-(4N-[2-(4etilfenoximetil)-benzoil]-N-(1-naftil)-tiourea i etilfenoximetil)-benzoil]-N-(2-naftil)-tiourea Etapele sintezei noilor tioureide sunt: 1. 2. 3. sinteza acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic; obinerea clorurii acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic; prepararea noilor tioureide.

1.1. Sinteza acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic Sinteza acidului menionat folosete reacia ftalidei (I) cu p-crezolatul de potasiu. p-Crezolatul de potasiu necesar reaciei cu ftalida (I), a fost obinut din p-crezol i hidroxid de potasiu n xilen; ndeprtarea apei rezultate din reacie s-a efectuat prin distilare azeotrop. Reacia ftalidei (I) cu p-crezolatul de potasiu folosete ca mediu de reacie tot xilenul, izolarea acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (II) realizndu-se uor, deoarece sarea sa de potasiu (III), cu o bun solubilitate n ap, permite separarea de xilen, precipitarea acidului avnd loc la tratare cu o soluie de acid mineral. 40

41

1.2. Obinerea clorurii acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic Clorura acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (IV) a fost obinut prin refluxarea acidului II corespunztor cu clorur de tionil n exces (cel mai favorabil fiind de 25 %), timp de 2 ore, dar aceasta se poate obine folosind i diveri solveni anhidri drept mediu de reacie, cum ar fi dicloretanul, cnd timpul de reacie este de 3 ore. Dup expirarea timpului de reacie, excesul de clorur de tionil sau amestecul de clorur de tionil- dicloretan, se elimin prin distilare la presiune sczut. Randamentul de obinere este bun (85- 87 %), clorura acidului se poate purifica, prin extracii repetate la cald n hexan, urmat de ndepartarea solventului, dar se poate lucra cu aceasta i n stare brut. 3. Prepararea noilor tioureide Clorura acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (IV) reacioneaz cu tiocianatul de amoniu n prealabil uscat la 1000C i formeaz izotiocianatul de 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoil (V). Amestecul de reacie este refluxat o or n aceton anhidr. Acetona a fost anhidrizat pe carbonat de potasiu i apoi distilat. Pentru urmtoarea faz a sintezei, acilizotiocianatul nu a mai fost izolat, tioureidele rezultnd la adugarea aminelor respective n amestecul de reacie i refluxarea acestuia o jumtate de or. Dup expirarea timpului de reacie, amestecul de reacie se rcete i se toarn n ap. Precipit tioureida brut, care se esoreaz i se purific dup uscare. Purificarea acestora s-a realizat prin recristalizare din izopropanol i decolorare cu carbune. Compuii noi sintetizai sunt solubili la rece n aceton i cloroform i la cald n alcooli inferiori, benzen, toluen, xilen. Schema general de sintez a noilor tioureide ale acidului 2-(4-metilfenoximetil)benzoic (VI) este urmtoarea:

42

HO O O I KOH

CH3

CH - O 2 - + COO K III CH3

HCl - KCl

CH2-O COOH II CH3

SOCl2

CH -O 2 COCl IV

NH4SCN CH3

CH2-O C N=C=S O V CH3

+ H2N

CH2-O C-NH-C-NH O S VI R

CH3

R= 1-naftil (VIa), 2-naftil (VIb)

43

1.4. Metode practice de sintez PREPARAREA ACIDULUI 2-(4-METIL-FENOXIMETIL)-BENZOIC O CH3

CH2 COOH

Mr = 242,26 Substane necesare:

C15H14O3

p-Crezol (Mr= 108,134)........................................5,4 g (0,05 moli) Hidroxid de potasiu (Mr= 56,11)...................3,10 g (0,055 moli) Ftalid (Mr= 134,14).........................................6,7 g (0,05 moli) Xilen..............................................................30 mL Hidroxid de potasiu soluie 10%...........................100 mL Acid clorhidric soluie 1 N.................................q.s. Tehnica de lucru: ntr-un balon prevzut cu un dispozitiv pentru ndeprtarea apei (tip ASTM), se dizolv 5,4 g (0,05 moli) p-crezol (Mr= 108,134), n 30 mL xilen i se adaug apoi 3,10 g (0,055 moli) hidroxid de potasiu (Mr= 56,11). Se nclzete amestecul de reacie la reflux pn nu se mai ndeprteaz ap (se atinge temperatura de 138-1410C), iar n balon precipit p-crezolatul de potasiu. Se adaug 6,7 g (0,05 moli) ftalid (Mr= 134,14) i se refluxeaz pn ce amestecul se prinde n mas (cca o or). Se solubilizeaz apoi precipitatul n soluie 10 % de hidroxid de potasiu (daca este cazul, se incalzeste la 40-500C) i se dilueaz cu 50 mL ap. Cu ajutorul unei plnii de separare se separ stratul apos, care se aciduleaz apoi cu soluie 1 N de acid clorhidric, pn la pH 3, cnd are loc precipitarea total a acidului 2-(4-metilfenoximetil)-benzoic. Acidul format se separ prin esorare i se purific din etanol: ap (1: 1) sau se 44

purific prin solubilizare la nclzire n hidrogenocarbonat de sodiu i reprecipitare cu soluie apoas 10 % de acid clorhidric. Se obin 7 g acid 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (Mr = 242,26) cu temperatura de topire 126- 1290 C (gsit 122- 1250C), randament 57,9 % (fa de ftalid). Mersul reactiei si puritatea acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic s-au urmarit prin cromatografie in strat subtire (CSS); s-a lucrat pe placute Merck, suport solid silicagel F256, eluent cloroform : metanol = 4 : 1, revelare UV si vapori de iod. In aceste conditii acidul 2-(4-metilfenoximetil)-benzoic are Rf = 0,80.

45

PREPARAREA CLORURII ACIDULUI 2-(4-METIL-FENOXIMETIL)-BENZOIC

CH2 COCl

O CH3

Mr = 260,707 Substane necesare:

C15H13O2Cl

Acid 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (Mr= 242,26)..4,85 g (0,02 moli) Clorur de tionil (Mr= 119; d420= 1,638)........5 g (3 mL) (0,042 moli) Dicloretan anhidru........................................ .30 mL Tehnica de lucru: ntr-un balon prevzut cu refrigerent cu tub de clorur de calciu se introduc 0,02 moli acid 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (4,85 g), 30 mL dicloretan anhidrizat pe clorur de calciu i apoi distilat i 5 g (3 mL) (0,042 moli) clorur de tionil (Mr= 119, d420= 1,638). Se nclzete la reflux 3 ore, dup care se elimin prin distilare la presiune sczut dicloretanul i excesul de clorur de tionil. n faza urmtoare am lucrat cu clorura de 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoil n stare brut.

46

PREPARAREA NOILOR TIOUREIDE

PREPARAREA 2-((4-METILFENOXI)METIL)-N-(1NAFTILCARBAMOTIOIL)BENZAMIDEI

CH2 C O

O NH C S NH

CH3

Substane necesare: Clorura acidului 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoic (Mr= 260,707)2,607 g (0,01 moli) Tiocianat de amoniu (Mr = 76,13)................................0,76 g (0,01 moli) Anilin (Mr= 93,12; d2020= 1,022).....0,9312 g (0,911 mL) (0,01 moli) Aceton anhidr...............................................................................15 mL Tehnica de lucru: Clorura acidului obinut n stare brut se solubilizeaz n 10 mL aceton anhidr. Separat, 0,76 g (0,01 moli) tiocianat de amoniu, uscat n prealabil la 1000C, se solubilizeaz n 5 mL aceton anhidr. Soluia de tiocianat de amoniu n aceton se toarn peste soluia acetonic a clorurii acidului; se constat c amestecul de reacie se tulbur i apoi apare un precipitat abundent de izotiocianat de 2-(4-metil-fenoximetil)-benzoil. Amestecul de reacie se refluxeaz sub agitare o jumtate de or, ntr-un balon cu fund rotund, prevzut cu refrigerent ascendent cu tub de clorur de calciu. 47

Dup rcire, se adaug amina (solubilizat n aceton anhidr), n mici poriuni i sub agitare i se refluxeaz nc o or. Dup rcire, amestecul de reacie se toarn n 500 mL ap, cnd precipit produsul brut. Purificarea se face din alcool izopropilic, n prezena crbunelui animal. Se obine un compus cristalizat cu p.t. 194- 1960C (randament 81 % fa de clorura acidului).

48

PREPARAREA 2-((4-METILFENOXI)METIL)-N-(2NAFTILCARBAMOTIOIL)BENZAMIDEI
14 4 5 6 7 3 2 13 12 15 9 10 16 11

CH2 C O
1

O NH

CH3
17 18 19 20 21 26 25 24 23 22

C S

NH

Substane necesare: Clorura acidului 2-(p-metilfenoximetil)benzoic (Mr= 260,707) .2,607g (0,01 moli) Tiocianat de amoniu (Mr= 76,13) ....0,761g (0,01 moli) 2-Metilanilina (Mr= 107,16; d420= 0,998) ,071g (1,073mL) (0,01 moli) Aceton anhidr15mL Tehnica de lucru: Se lucreaz conform tehnicii descrise la obinerea primului compus, lund n lucru cantitile corespunztoare. Purificarea se face din alcool izopropilic, n prezena crbunelui animal. Se obine un compus cristalizat alb, cu temperatura de topire 169- 1710 C, randamentul n produs pur fiind 75 % fa de clorura acidului.

49

2. Analiza fizico-chimic a noilor tioureide

Aceasta a constat n : caracterizarea fizico- chimica a noilor tioureide i n stabilirea cu certitudine a structurii i a puritii compuilor sintetizai, intermediari i tioureide cu ajutorul caracterizrii spectrale 1H-RMN i 13C-RMN, FT-IR. Noile tioureide sunt solide, cristalizate albe sau slab glbui, solubile la rece n aceton i cloroform i la cald n alcooli inferiori, benzen, toluen i xilen, insolubile n ap. Mersul reactiei de obinere a tioureidelor i puritatea produilor obinui s-a urmarit prin cromatografie in strat subtire (CSS) utilizand placute Merck silicagel 60F254; eluent cloroform ; acetat de etil = 4 : 6 si developare la UV ( = 254 nm) i vapori de iod. Temperaturile de topire ale compuilor au fost prezentate anterior i au fost inregistrate cu un aparat Electrothermal 9100, nefiind corectate. Analiza elemental s-a realizat cu un aparat Perkin Elmer CHNS/O Analyser Series II 2400. Tabelul nr. 1 prezint analiza elemental a compuilor sintetizai: Tabelul nr. 1. Analiza elemental a noilor compui

CH2

CH3

C-NH-C-NH-R O C%
c. 73,21 e. 73,57

S
H% c. 5,20 e. 5,26 c. 6,57 N% e. 6,63 c. 7,52 S% e. 7,54

Nr. Comp. 1.

2.

73,21

73,49

5,20

5,22

6,57

6,52

7,52

7,54

c= calculat;e= experimental

50

Spectrele RMN s-au efectuat pe trei instrumente Varian, i anume Gemini 300BB (ce opereaz la frecvena de 300 MHz proton i 75 MHz pentru carbon i prevzut cu cap de prob multinuclear de 5 mm), Unity 400 (cu cap de prob multinuclear de 5 mm, ce opereaz la frecvena de 400 MHz pentru proton i 100 MHz pentru carbon) i Unity Inova 400 cu cap de prob dual cu gradieni de cmp AutoSwichable SW-400 ce poate funciona automat n mod direct detection sau indirect detection. Pentru elucidarea unor structuri s-au folosit tehnici de corelare bidimensional n prezena gradienilor cum ar fi: Gcosy, Ghsqc i Ghmbc. Spectrele vibraionale de absorbie n infrarou s-au efectuat pe un instrument Bruker Vertex 70 cu optic de diamant n tehnica ATR, deoarece probele analizate au fost solide cristaline. Prezentarea datelor experimentale Solventul folosit a fost dimetilsulfoxidul perdeuterat cu puritate izotopic de min. 98% Ca referin, att n cazul spectrelor de proton ct i a celor de carbon, s-a folosit semnalul TMS dizolvat n prob i aflat la = 0 ppm. Temperatura de lucru n timpul nregistrrii spectrelor a fost de 30 C 1. Deplasrile chimice n scara s-au exprimat cu dou zecimale att n cazul spectrelor de proton ct i a celor de carbon. Constantele de cuplare au fost msurate i exprimate n Hertzi. Pentru atribuirea corect i neechivoc a semnalelor s-au folosit tehnici de simplificare a spectrelor, decuplarea homonuclear i deuterarea specific. In unele cazuri au fost realizate spectrele APT i de corelare bidimensional de tip COSY, att n variant homo- ct i heteronuclear. In multe cazuri s-au realizat experimente de corelare bidimensionale cu gradieni de cmp prin indirect detection. Intensitatea relativ a benzilor de absorbie a fost redat prin simbolistica cunoscut din literatur, astfel w band slab; m band medie; s band intens; vs band foarte intens; sh shoulder (umr).

51

2-((4-METILFENOXI)METIL)-N-(1-NAFTILCARBAMOTIOIL)BENZAMIDA
14 4 5 6 7 3 2 13 12 15 9 10 16 11

CH2 C O
1

O NH

CH3
18 17 26 25 24 23 19 20 21 22

C S

NH

H-NMR(DMSO-d6, ppm, J Hz): 12.57(s, 1H, NH); 12.02(bs, 1H, NH); 7.99(bd, 1H, H-N, 8.2);

7.91(bd, 1H, HN, 8.2); 7.77(bd, 1H, H-N, 8.0); 7.76(t, 1H, H-N, 7.8); 7.63- 7.54(m, 4H, H-4, H-5, H-7, H-naphtyl); 7.50(td, 1H, H-N, 7.2, 2.0); 7.46(td, 1H, H-6, 1.4, 7.5); 7.09(d, 2H, H-11, H-13, 8.4); 6.94(d, 2H, H-10, H-14, 8.4); 5.33(s, 2H, H-8); 2.22(s, 3H, H-15).
13

C-NMR(DMSO-d6, ppm): 181.47(C-16); 171.06(C-1); 156.69(C-9); 136.29(Cq); 134.56(Cq);

134.21(Cq); 134.08(Cq); 131.47(C-5); 130.40(C-11, C-13); 130.19(Cq); 129.11(CH); 129.07(Cq); 129.05(CH); 128.83(CH); 128.33(C-4); 127.82(C-7); 127.11(C-6); 126.79(CH); 125.92(CH); 125.00(CH); 122.56(CH); 115.04(C-10, C-14); 68.16(C-8); 20.72(C-15). FT-IR(ATR in solid, cm-1): 3148m; 3051m; 1673m; 1597w; 1506vs; 1460m; 1381m; 1329w; 298w; 1263m; 1240s; 1173s; 1157s; 1072w; 1046w; 1021m; 877w; 856w; 812m; 767m; 741m; 730m; 689w; 669w; 646w; 608w; 576w.

52

2-((4-METILFENOXI)METIL)-N-(1-NAFTILCARBAMOTIOIL)BENZAMIDA

14 4 5 6 7 3 2

13 12 15

CH2 C O
1

O NH

9 10 16 11

CH3
17 26 25 24 23 22

C S

NH

18 19 20 21

H-NMR(DMSO-d6, ppm, J Hz): 12.60(s, 1H, NH); 11.89(bs, 1H, NH); 8.21(bs, 1H, H-17);

7.957.88(m, 3H, H-2-naphtyl); 7.69- 7.53(m, 5H, H-4, H-5, H-7, 2H-naphtyl); 7.47(td, 1H, H-6, 1.4, 7.5); 7.07(d, 2H, H-11, H-13, 8.5); 6.90(d, 2H, H-10, H-14, 8.5); 5.29(s, 2H, H-8); 2.20(s, 3H, H-15).
13

C-NMR(DMSO-d6, ppm): 179.48(C-16); 170.72(C-1); 156.65(C-9); 136.36(Cq); 13597(Cq);

133.82(Cq); 134.34(Cq); 131.79(Cq); 131.55(C-5); 130.34(C-11, C-13); 130.19(Cq); 129.04(CH); 128.89(CH); 128.60(CH); 128.27(C-4); 128.18(CH); 128.05(C-7); 127.08(C-6); 126.54(CH); 124.28(CH); 121.96(C-17); 115.09(C-10, C- 14); 68.02(C-8); 20.59(C-15). FT-IR(ATR in solid, cm-1): 3318m; 3136w; 3023m; 2926w; 1671m; 1556s; 1502vs; 1383m; 1329s; 1221s; 1120s; 1019m; 886w; 855w; 813m; 738m; 675m; 602w; 512w; 468w.

53