Determinacin de Lipoperoxidacin por la tcnica de Especies reactivas al cido tiobarbitrico

Autores: Astivia Gonzlez Fabiola, Bentez Pineda Carlos Alejandro, De la Cruz Hernndez Ariana, Meja Romero Mara del Carmen, Suarez Chvez Francisco David, Vieyra Alberto Mayra Carolina. E-mails. faby_aivitsa_glez@hotmail.com, cabp.crash12@gmail.com, azul.ari@live.com.mx, mos.tambito@yahoo.com, devil_spardavid@hotmail.es, caro.vieyra@yahoo.com.mx. Introduccin Hoy en da las actividades antropogenicas son muy importantes para la obtencin de recursos y riquezas econmicas para grandes empresarios. Sin embargo estas mismas actividades han provocado alteraciones; no solo en el ambiente, si no tambin, en las personas cercana. Tal es el caso de las minas de carbn, que bien genera un fuerte ingreso econmico, tambin genera un dao nocivo a los habitantes por la liberacin de plomo al ambiente lo que puede provocar altos niveles de lipoperoxidacin en los individuos.

Antecedentes En situaciones de estrs, el equilibrio entre antioxidantes y oxidantes se altera; los ltimos son los que prevalecen. Este fenmeno genera diferentes grados de citotoxicidad que lesiona al ADN, a las protenas, a los lpidos y a los carbohidratos. Si la severidad del estrs oxidativo es muy grande, todas las estructuras celulares importantes, las macromolculas y las vas metablicas se oxidan, se lesionan y posteriormente son bloqueadas o inhibidas, dando lugar a la muerte celular por necrosis.1 Se puede generar por dos mecanismos, niveles bajos de antioxidantes; provocado por malnutricin, o por excesiva produccin de radicales libres como ocurre por consecuencia del tabaquismo2. Si el estrs oxidativo es severo se producen lesiones celulares o muerte celular. Si es moderado o leve las clulas pueden tolerarlo y el organismo responder incrementando sus defensas2. Cuando la formacin de radicales libres rebasa la capacidad de degradarlos, los

radicales libres del oxgeno reaccionan con los cidos grasos insaturados de los fosfolpidos estructurales de las membranas celulares mediante una reaccin llamada lipoperoxidacin3. Varios factores pueden inducir a la lipoperoxidacin, entre ellos el abuso del alcohol, pero se ha demostrado que el plomo interaccionando con lpidos, bsicamente fosfolpidos de la membranas y particularmente con aquellos que tienen carga negativa provocando la posibilidad de provocar lipoperoxidacin4. La lipoperoxidacin es una reaccin de auto oxidacin que puede ser indicada por los radicales de hidroxilo, los radicales hidroperoxilo, y quizs tambin por el oxgeno singulete. El radical libre indicador remueve un tomo de hidrogeno en un metileno de la cadena de carbono; este hecho deja un electrn desapareado en el tomo de carbono, creado un radical de cido graso3. La lipoperoxidacin de los cidos grasos insaturados de los fosfolpidos daa

severamente a las membranas celulares, produciendo perdida de fluidez, alteracin de las funciones secretoras y de los gradientes inicos transmebranales3. Los productos primarios de la lipoperoxidacin corresponden a dienos conjugados e hidroperxidos lipdicos, mientras que los secundarios corresponden a sustancias reactivas del cido tiobarbitrico (TBARS), alcanos gaseosos e isoprostanos.5 Objetivo Medir la cantidad de lipoperoxidacin (Fig. 1) en muestras de sangre mediante la tcnica de especies reactivas al cido tiobarbitrico. Paralelamente a la determinacin de los TBARS de la muestra, se debe hacer una curva patrn de tetrametoxipropano como se describe en la tabla 1. Mtodo Preparacin de reactivos: cido Tiobarbitrico: 67 mg en 1 ml de DMSO y aadir 9 mL de agua. cido tricloroactico al 10%: en agua. 1,1,3,3-tetrametoxipropano: 4.167L en 1 mL de etanol y aadir 49 mL de Agua (500 L) Concentracin de TBARS De la sangre obtenida de los individuos a estudiar, se le hacen 3 lavados con NaCl al 0.85% en centrifugadora por 1 minuto y despus se elimina el sobrenadante entre cada lavado. Una vez obtenido el paquete globular, se mezclaba 10 L del paquete globular con 200

L de TCA al 10% en tubo, junto con tubo en blanco que nicamente contiene 200 L de TCA al 10%. Ambos tubos se dejan enfriar en bao de hielo por 15 minutos y posteriormente los tubos se centrifugaran a 2000 revoluciones por minuto por un tiempo de 15 minutos a 4C. El sobrenadante obtenido del tubo con el paquete globular se retira y se deposita en el tubo en blanco. Unas vez terminadas esto, se procede al Espectrofotmetro calibrndolo con el tubo en blanco, colocndolo en la posicin 1, y se obtendr la lectura a 532 nm. Conclusiones En la muestra problema en particular que nos toc estudiar, mostraba una coloracin ms tenue al resto de la muestra. Estos nos obviaba a pensar que la observancia de nuestra muestra problema sera mayor a la de las dems muestra. Esto se da porque mientras ms translucida sea, mayor facilidad pasara la luz atreves del lquido. Por falta de tiempo, no se pudo realizar la curva de tetrametoxipropano, por lo que el valor obtenido por el espectrofotmetro no es til, ya que solo representa un valor numrico. No se pudo medir la cantidad de lipoperoxidacin en la muestra problema por la falta de la curva de tetrametoxipropano.

Anexos Figura 1 Reaccin de Lipoperoxidacin.

Tabla 1.Curva de tetrametoxipropano. # tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 Concentracin (L) 0 0.625 1.25 2.5 5 10 50 100 H2O (L) 500 500 500 500 500 800 500 800 Tetrametoxipropano ----------------------------500 L del tubo 3 500 L del tubo 4 500 L del tubo 5 500 L del tubo 6 200 L del tubo 7 500 L del tubo 8 200 L del stock

Bibliografa 1. Montalvo, Esteba. Garca, Marco. Escalante, Tomas. Pea, Julieta. Vzquez, Hctor. Ortega Jos. (2011) Caracterizacin Bioqumica y niveles de lipoperoxidacin en el

preacondicionamiento heptico Cirugas y Cirujanos Volumen 79 pp. 132-140.

2. Mora, Rafael. (2002) Soporte nutricional especial Tercera Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Madrid, Espaa 3. Zentell, Martha. Das, Armando. Rodrguez, Lucelly. Corona, Sergio. (1994) Lipoperoxidacin de Membranas de Eritrocitos como un posible indicador de estrs oxidativo en el paciente alcohlico Revista Mdica del Hospital General de Mxico. Volumen 57. Pp. 25-21

4. Elergomista (sin fecha) Plomo En lnea. http://www.elergonomista.com/saludpublic a/plomo.htm consultado el 23 de ocuttbre del 2012. 5.-Vera, Laura. (2009) Analisis del perfil de expresin gnica en respuesta a la Quimoterapia y su relacin con el estrs oxidativo en el cncer de mama Universidad de Granada. Pp. 182-183.