MEDIOS EN LOS QUE SE PUEDEN DESARROLLAR Peptona cloruro de sodio Extracto de carne Extracto de levadura Sacarosa fosfato de potasio

IDEAL: MEDIO KING A Y B PSEUDOMONAS SP .Introduccin La capacidad para producir pigmentos como pioverdina (fluorescena) ypiocianina es una caracterstica importante para la identificacin deespecies dePseudomonas . Algunas de ellas elaboran slo fluorescena (ej.Ps. fluorescens) y otras ambos pigmentos (ej.Ps. aeruginosa). La piocianinasolamente es producida por Ps. aeruginosa aunque no todas las cepas deesta especie la producen. Se han diseado medios de cultivo que potencianla elaboracin de uno de los pigmentos e inhiben la formacin del otro. Principio El medio King A (o Pseudomonas Agar P) potencia la elaboracin depiocianina mientras que el King B (o Pseudomonas Agar F) potencia la elaboracin de fluorescena e inhibe parcialmente la de piocianina. Estospigmentos son solubles en agua y difunden al medio. La piocianina es unpigmento azul-verde mientras que la fluorescena es amarillo-verdoso yfluoresce cuando es expuesto a la luz UV ( Los medios se reparten en tubos, se esterilizan a 121C durante 15 minutosy se dejan solidificar inclinados. Procedimiento Inocular los tubos por estras. Incubar a 35C durante 24 hs. Interpretacin Observar al UV, la produccin de pigmento azul-verdoso en el medio King Ay la de pigmento amarillo-verdoso, en el King BControles

olor a masa de tortilla y produccin de pigmento azul-verde No hay fermentacin de azcares. Caracterstica de bacterias no fermentadoras

Pseudomonas agar F.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la deteccin y la diferenciacin de especies de Pseudomonas spp. en base a la produccin de fluorescena. Conocido tambin como medio King B.

Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la peptona de carne aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la produccin de pigmentos, la concentracin de fosfatos estimula la produccin de fluorescena e inhibe la produccin de piocianina y piorrubina. Frmula (en gramos por litro) Triptena 10.0 Peptona de carne 10.0 Fosfato dipotsico 1.5 Sulfato de magnesio 1.5 Agar Instrucciones Suspender 38 g del polvo en un litro de agua destilada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar con agitacin constante para homogeneizar el producto. Llevar a ebullicin para que se disuelva por completo. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121 15.0 C. pH final: 7.2 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.

Incubacin
Durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. Si no se observa crecimiento, reincubar a 25-30 C, o dejar a 22 C y observar diariamente hasta 7 das.

Resultados

Examinar las colonias bajo luz ultravioleta, a 260nm. Se considera un resultado positivo la observacin de fluorescena, que es un pigmento de color amarillo, amarillo-verdoso fluorescente que rodea la colonia o que se extiende por todo el medio de cultivo debido a fenmenos de difusin. Produccin de Fluorescena + + + Produccin de Piocianina + -

Cepa P. aeruginosa P. fluorescens P. putida P. mallei P. stutzeri S. maltophilia B. cepacia Escherichia coli

Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno

Limitaciones
Algunas cepas de P. fluorescens y P. putida solo producen fluorescena a temperatura ambiente, y se pueden obtener resultados falsos negativos si el medio se incuba a 30-35 C, por eso, ante la ausencia de crecimiento luego de incubacin a 35-37 C, se recomienda dejar los tubos conteniendo el medio de cultivo a temperatura ambiente.

Caractersticas del medio

Medio preparado color blanco-amarillo transparente

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-211-05 x 500g :Cdigo: B02-211-06