Bombas

de Protones
Adalberto Benavides Mendoza
Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro, correo electrnico: abenmen@uaaan.mx

1. INTRODUCCIN Para su funcionamiento las clulas requieren de energa bioqumica (ATP) y de una fuente de potencial reductor (NADPH2 NADH2). El uso intensivo de ambas permite obtener el gran nivel de organizacin y estructura que caracteriza a los organismos. La sntesis de ATP y potencial reductor se acopla al metabolismo energtico de las clulas, es decir, depende de la fotosntesis y la respiracin. En particular la generacin de ATP requiere de la actividad de una clase especial de protenas asociadas a membranas llamadas bombas de protones, cuya funcin es transportar protones (H+) hacia volmenes especficos de las clulas. Esta actividad crea un gradiente de concentracin de H+ lo bastante extenso como para establecer un diferencial de potencial que produce energa libre capaz de desarrollar trabajo. 2. ENERGA LIBRE PARA EL FUNCIONAMIENTO DE LAS CLULAS La fuente de energa para los organismos aerobios, como las plantas, animales y humanos, es el establecimiento de un diferencial de potencial qumico. Se entiende como diferencial de potencial el implemento de un sistema capaz de desarrollar trabajo a travs del uso de energa libre. Como ejemplo de un sistema fsico: la energa solar al evaporar el agua del ocano eleva el vapor de agua en la atmsfera hasta que forma nubes. Si las nubes descargan la precipitacin pluvial en las montaas el agua acumulada en los ros o presas puede utilizarse para la induccin de energa elctrica en una turbina. La fuente de energa para la induccin elctrica es la diferencia de potencial obtenido de la altura a la cual se tiene el agua en la presa y la altura, siempre menor, del rotor de la turbina. La energa potencial proviene finalmente de la inversin inicial de energa solar que permiti mover la masa de agua, desde su estado basal al nivel del mar, hacia las tierras altas en donde adquiere capacidad de realizar trabajo al encontrarse a mayor altura. En el caso de los organismos fotosintticos aerobios el diferencial de potencial qumico se obtiene al acumular protones en volmenes celulares especficos (cloroplastos, mitocondrias u otros organelos) para luego usar el gradiente de concentracin de H+ para fabricar ATP o energizar actividades como el transporte de iones o metabolitos. La energa libre para el funcionamiento celular se obtiene entonces de la accin de bombas de protones (Figura 1).

 Figura 1. Membranas para la transduccin energtica en bacterias, mitocondrias y cloroplastos. Por convencin se le llama N al volumen de donde se extraen los protones y P al volumen en donde se acumulan. Se aprecian las bombas de protones primarias que mueven H+ usando la energa de la luz o de un proceso oxidativo en la respiracin. Las bombas de protones secundarias consumen ATP para bombear protones o bien transforman un gradiente de protones en ATP (Modificado de Nicholls y Ferguson, 2002). Las bombas de protones pueden ser primarias o secundarias. Las bombas primarias de los cloroplastos utilizan la energa contenida en la radiacin electromagntica para bombear protones hacia el lumen de las membranas tilacoides. En cambio, las bombas de protones primarias de las mitocondrias bombean protones hacia el espacio intermembrana, usando como fuente de energa la transferencia de electrones desde substratos reducidos con alto potencial qumico (como los azcares) hacia aceptores oxidados con bajo potencial qumico (como el O2). En ambos casos se da lugar a un gradiente de protones (pH), derivado de la diferencia de concentracin de H+ en los dos lados de la membrana, as como un potencial de membrana () derivado de las diferencias de potencial elctrico entre los dos lados de la membrana. Si se convierte el diferencial de potencial a unidades de potencial elctrico, la energa efectiva obtenida por esta

compartimentacin de los protones se expresa en milivoltios (mV) y se le llama potencial protonmotriz (). Esta es la energa libre necesaria para que la clula realice trabajo (Figura 2).

Figura 2. Sistemas metablicos energizados con la produccin de potencial protonmotriz obtenido de la operacin de bombas de protones (Modificado de Nicholls y Ferguson, 2002). Una vez que se acumula la suficiente cantidad de H+ en el sitio especfico, sea de un cloroplasto o una mitocondria, entonces puede operar una bomba de protones secundaria. Esta usa el del gradiente de protones establecido por la bomba primaria y los mueve en la direccin contraria a la originalmente usada por la bomba de protones primaria. El originalmente creado por la bomba primaria es explotado por la bomba de protones secundaria para llevar a cabo el trabajo de sintetizar ATP a partir de ADP y fosforo inorgnico (Pi). La bomba de protones secundaria se llama ATP-sintasa FoF1-ATPasa. El acoplamiento entre procesos primario y secundario se muestra en la Figura 3.

 Figura 3. (a) En presencia de ATP una ATP-sintasa bombea protones al lumen de un sistema de membranas. (b) Sin intervencin de otro sistema el proceso alcanza un equilibrio en donde la entrada y salida de H+ se balancea con la sntesis e hidrlisis de ATP. Esto no permite la obtencin neta de energa libre. (c) El funcionamiento de un proceso continuo de sntesis de ATP se obtiene al acoplar un complejo enzimtico primario cuya energa depende de una fuente externa, ya sea la radiacin electromagntica o la oxidacin de metabolitos. Esto permite la obtencin efectiva y continua de ATP (Modificado de Nicholls y Ferguson, 2002). En un caso hipottico de una ATP-sintasa aislada experimentalmente y ubicada en un sistema artificial de membranas sera capaz de hidrolizar ATP, generando energa, ADP y Pi pero adems bombea protones en la direccin de una bomba primaria (como se muestra en la Figura 2). Este es el comportamiento observado en otro grupo de bombas de protones secundarias, como las ATPasas vacuolares (V-ATPasas) (Figura 4), encargadas del flujo de protones para acidificar la vacuola, las ATPasas de la membrana plasmtica (E-ATPasas PM-ATPasas) encargadas de movilizar protones asociados a la absorcin de metabolitos y iones as como las protn- pirofosfatasas (H+-PPasas) responsables en parte de la acidificacin de la vacuola y al parecer de la activacin de otras ATP-asas durante eventos de crecimiento y de adaptacin al estrs.

 Figura 4. Modelo de una ATP-asa de la vacuola (Gaxiola et al., 2007). 3. TRANSPORTE DE NUTRIMENTOS Y METABOLITOS Con propsitos didcticos, obviando las complejidades del sistema integral, los eventos de transporte a travs de membranas pueden apreciarse en la Figura 5.

 Figura 5. Clasificacin de sistemas de transporte de iones y metabolitos. Como ejemplo el transporte de iones es mediado por protenas integrales, puede ser pasivo o directamente acoplado al metabolismo, usa sistemas de uniporte, simporte o antiporte y puede ser electroneutral o elctrico (Modificado de Nicholls y Ferguson, 2002).

 La operacin de bombas de protones en las clulas vegetales permite la absorcin, transporte e intercambio interno de cationes y aniones de la solucin de agua del suelo a la raz y de all a los tallos, hojas, semillas y frutos. Por otro lado, otros procesos naturales como la acidificacin del suelo con H+ cidos orgnicos (Figura 6) para elevar la eficiencia de absorcin de metales, el control de apertura y cierre de estomas, la acumulacin y almacenamiento de iones y metabolitos en las vacuolas, el transporte de fotosintatos (sacarosa) de los tejidos fotosintticos a los de reserva, etc., todos ellos son actividades dependientes del bombeo y acumulacin de protones para generar potenciales electroqumicos a los cuales acoplarlas.

Figura 6. Hiptesis acerca de la acidificacin del suelo por races proteoides en respuesta a la deficiencia de P. El proceso de bombeo de cidos orgnicos (R-COO-) y H+ permite adicionalmente aumentar de forma significativa la absorcin de metales. El bombeo de H+ ocurre por medio de una PM-ATPasa (Modificado de Yan et al., 2002). 4. REGULACIN DE LA ACTIVIDAD Y EXPRESIN DE LAS BOMBAS DE PROTONES Inclusive cambios pequeos en la actividad de bombeo de H+ pueden ser importantes en el crecimiento y desarrollo de una planta. Muchos estudios indican que varias condiciones ambientales, como la salinidad, hormonas y reguladores del crecimiento, patgenos y la irradiancia modifican la actividad de las PM-ATPasas. En particular la acidificacin del citoplasma, que induce la sntesis de fitoalexinas y otros compuestos secundarios, parece jugar un papel crtico en la respuesta frente a algunos patgenos. Por otra parte, se sabe que la actividad de las PM-

ATPasas se ve regulada por la accin de quinasas proteicas y fosforilasas que modifican el estado de fosforilacin de la protena. Las PM-ATPasas se expresan en grandes cantidades en la endodermis de la raz y en los pelos radicales, en donde regulan la absorcin y transporte de elementos como el N (como nitrato y como amonio), P, K, Fe y Ca. Entre los factores ambientales del suelo que parecen inducir una mayor actividad de PM-ATPasas y H+-PPasas de la raz se encuentran las aplicaciones exgenas de AIA y cidos hmicos. Esta respuesta se acompaa de una mayor capacidad de adquisicin de nutrimentos del suelo. Otros compuestos reguladores del crecimiento que se han encontrado asociados a la activacin de bombas de protones de la vacuola son el etileno y el NO. Esta accin promotora se ha descrito en condiciones de exposicin en laboratorio a NaCl. El pH parece tambin jugar un papel importante, ya que a valores de pH menores de 4.0 algunas especies como el maz y el frijol disminuyen de forma significativa la actividad de bombeo de protones de la raz, as como el crecimiento de esta ltima. Algunas PM-ATPasas asociadas al transporte de sacarosa son activadas por el calcio y el boro, se sabe asimismo que el dficit y la toxicidad por boro disminuyen o inhiben la actividad de ATPasas de la raz de girasol y zanahoria. En Arabidopsis se sabe que la familia de protenas de las PM-ATPasas consta de al menos 11 miembros (AHA1-AHA11). Dos de ellas (AHA1 y AHA2) se encuentran en toda la planta, detectndose a AHA1 principalmente en las partes areas, mientras que AHA2 se expresa principalmente en las races. Otros miembros de la familia de protenas se expresan de forma ms especializada, por ejemplo AHA7 y AHA8 se encuentran en el polen, AHA10 en la cubierta de la semilla, etc. Aunque todas estas protenas promueven el bombeo de protones, claramente los resultados mencionados hablan de una gran complejidad relacionada con actividades especficas a ciertos tejidos. Inclusive se sabe que un solo tipo celular (ejemplo, las clulas guarda de los poros estomticos) pueden expresar varias PM-ATPasas, tal como se ha descrito para el tabaco y Arabidopsis. Los experimentos genticos de sobreexpresin de H+-PPasas en Arabidopsis, trigo y tomate resultaron en mayor tolerancia a la salinidad y mayor resistencia al dficit de agua a travs de un sistema radical ms masivo y robusto. Esta respuesta se acompaa de un aumento concomitante en la capacidad de absorcin de nutrimentos minerales del suelo. 5. CONCLUSIN Muchos estudios acerca de la accin de las bombas de protones sealan su gran importancia en todos los procesos de crecimiento y desarrollo de las plantas. Se cuenta con grandes avances en la

comprensin de sus funciones, expresin y regulacin. Sin embargo se requieren mayores esfuerzos para lograr que dichos conocimientos tengan un impacto directo en la nutricin de cultivos. 5. LITERATURA Gaxiola, R.A., M.G. Palmgren, K. Schumacher. 2007. Plant proton pumps. FEBS Letters 581:2204 2214. Nicholls, D. and S. Ferguson. 2002. Bioenergetics 3. Academic Press, London. Yan F., Y. Zhu, C. Mller, C. Zrb, S. Schubert. 2002. Adaptation of H+-pumping and plasma membrane H+-ATPase activity in proteoid roots of white lupin under phosphate deficiency. Plant Physiology 129:50-63. Septiembre del 2009