Adjuvants and Antibody Production: Dispelling the Myths Associated with Freunds Complete and Other Adjuvants

Harold F. Stills, Jr.

ABSTRACT Adjuvants have been used for more than 70 yr to enhance the immune response of the host animal to an antigen.Among the mechanisms that adjuvants use to enhance the immune response are the depot effect, antigen presentation, antigen targeting, immune activation/modulation, and cytotoxic lymphocyte induction. The immunostimulatory properties of adjuvants result in inflammation, tissue destruction, and the potential for resulting pain and distress in the host animal. The inflammatory lesions produced by adjuvants such as Freunds complete adjuvant (FCA) have led some to conclude that pain and distress are present, even in cases where the scientific evidence fails to support this conclusion. Recommendations and regulations in the literature, based on available scientific evidence, provide guidance on total adjuvant volumes, volumes per site, routes of injection, booster injections, and adjuvants used for antibody production. Among the numerous adjuvants that are used for experimental antibody production reviewed in this article, many claim to be less inflammatory, tissue destructive, and painful than FCA while producing equal or superior antibody responses. Although no adjuvant surpasses FCA for experimental antibody production against a wide range of antigenic molecules, many produce excellent antibody responses with less inflammation and tissue destruction. Balancing the requisite degree of immunostimulation and the extent of inflammation, necrosis, and potential pain and distress requires consideration of the nature of the antigen, the host immune responsiveness, the adjuvants mechanisms of action, and the desired end-product. In cases where the antigen is a weak immunogen or has a very limited availability, the type and role of adjuvant becomes a critical component in producing an acceptable immune response and humoral antibody response. Key Words: adjuvant; adverse effects; antibody formation; antigen; Freunds adjuvant; immunization; immunostimulant; antibody production
Harold F. Stills, Jr., D.V.M., is Director of Laboratory Animal Resources and Professor of Pathology in the School of Medicine, Wright State University, Dayton, Ohio.

Introduction Adjuvants are substances injected along with an antigen that are intended to enhance the humoral and/or cell-mediated immune response to the antigen. Adjuvants generally permit the use of a smaller antigen dose and may modulate the immune response to the antigen. More than 100 adjuvant preparations have been described (Vogel and Powell 1995) although many of these adjuvants are used only rarely due to complexity of preparation, expense, or toxic effects (Stewart-Tull 2000). Adjuvants may be divided arbitrarily into those used for prophylactic purposes, primarily to create therapeutic vaccines that provide protection from infectious organisms or toxins, and those used for experimental purposes, to produce antibodies for further study. Prophylactic adjuvants must induce a protective immune response against an infectious agent with minimal short- or long-term side effects. Protection may require a humoral antibody response, an activated CD4 cellmediated response, or a CD8 cytotoxic lymphocyte (CTL1) response, depending on the agent. Prophylactic adjuvants should direct antigen presentation and modulate the cytokine network to induce the appropriate protective responses. Adjuvants may produce a number of adverse consequences, both locally at the injection site and systemically (Edelman 2000), and these reactions must be minimized in therapeutic vaccines. Finally, to be useful in clinical human or veterinary medicine, therapeutic vaccines must be economical, stable, and easy to administer. An evaluation of the multitude of therapeutic vaccines is beyond the scope of this paper, and the reader is referred to several excellent books on vaccine development (Hincal and Kas 1998; OHagan 2000; Robinson et al. 2003).Adjuvants that are used for experimental purposes are used to produce antibodies for use in other experimental or diagnostic procedures. The primary goal in experimental
1Abbreviations used in this article: BSA, bovine serum albumin; CTL, cytotoxic lymphocyte; CWS, cell wall skeleton; DDA, dioctadecylammonium chloride; FCA, Freunds complete adjuvant; FIA, Freunds incomplete adjuvant; GMDP, N-acetyl-glucosaminyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-Disoglutamine; IACUC, institutional animal care and use committee; IL, interleukin; IOE, immune-stimulating oil emulsion; ISA, incomplete Seppic adjuvant; ISCOM, immune-stimulating complex; LPS, lipopolysaccharide; MDP, muramyl dipeptide; SAF, Syntex Adjuvant Formulation; t-MDP, threonyl muramyl dipeptide; TDM, trehalose 6,6_-dimycolate; TLR, toll-like receptor; TNF, tumor necrosis factor.

Adjuvant dan Produksi Antibodi: Guna menepis Mitos Terkait dengan Freund Lengkap dan Adjuvant Lain

Harold F. Stills, Jr.

ABSTRAK Adjuvan telah digunakan selama lebih dari 70 tahun untuk meningkatkan respon kekebalan hewan inang terhadap antigen.Di antara mekanisme yang adjuvant digunakan untuk meningkatkan respon imun adalah "depot" efek, presentasi antigen,antigen penargetan, aktivasi kekebalan / modulasi, dan sitotoksik limfosit induksi. imunostimulan sifat hasil adjuvant dalam peradangan, kerusakan jaringan,dan potensi untuk sakit yang dihasilkan dan stress dalam hewan inang. The inflamasi lesi yang dihasilkan oleh adjuvant seperti adjuvant lengkap Freund (FCA) telah menyebabkan beberapa menyimpulkan bahwa rasa sakit dan penderitaan yang hadir, bahkan dalam kasus di mana bukti ilmiah gagal untuk mendukung kesimpulan. Rekomendasi dan peraturan dalam literatur,berdasarkan bukti-bukti ilmiah yang tersedia, memberikan bimbingan pada volume ajuvan total, volume per situs, rute injeksi, suntikan booster, dan adjuvant digunakan untuk antibodi produksi. Di antara adjuvant banyak yang digunakan untuk produksi antibodi eksperimental ditinjau dalam artikel ini, banyak yang mengklaim menjadi kurang inflamasi, jaringan destruktif, dan menyakitkan daripada FCA sambil menghasilkan sama atau superior antibodi tanggapan. Meskipun tidak ada adjuvant melampaui FCA untuk produksi antibodi eksperimental terhadap berbagai molekul antigen, banyak menghasilkan baik antibodi tanggapan dengan radang kurang dan jaringan kehancuran. Menyeimbangkan syarat tingkat imunostimulasi dan sejauh mana peradangan, nekrosis, dan nyeri potensi dan kesusahan membutuhkan pertimbangan sifat antigen, respon kekebalan tubuh inang, ajuvan ini mekanisme aksi, dan diinginkan tersebut produk akhir. Dalam kasus-kasus dimana antigen adalah imunogen lemah atau memiliki ketersediaan yang sangat terbatas, jenis dan peran dari adjuvant menjadi komponen penting dalam memproduksi respon imun humoral diterima dan antibodi respon.
Kata kunci : adjuvant, efek samping, pembentukan antibodi; antigen, adjuvan Freund, imunisasi; imunostimulan; produksi antibodi

Perkenalan
Adjuvan adalah zat disuntikkan bersama dengan antigen yang dimaksudkan untuk meningkatkan humoral dan / atau diperantarai sel respon imun terhadap antigen. Adjuvant umumnya memungkinkan penggunaan dosis antigen yang lebih kecil dan mungkin memodulasi respon kekebalan terhadap antigen.Lebih dari 100 persiapan adjuvant telah diuraikan (Vogel dan Powell 1995) meskipun banyak dari adjuvant digunakan jarang karena kompleksitas persiapan, biaya,atau beracun efek (Stewart-Tull 2000). adjuvant mungkin dibagi menjadi sewenangwenang yang digunakan untuk tujuan profilaksis, terutama untuk membuat vaksin terapi yang menyediakan perlindungan dari organisme infeksi atau racun, dan mereka digunakan untuk tujuan eksperimental, untuk memproduksi antibodi untuk studi lebih lanjut.Adjuvant profilaksis harus menginduksi kekebalan pelindung respon terhadap agen menular dengan minimal pendek atau jangka panjang efek samping. Perlindungan mungkin memerlukan antibodi humoral respon, sebuah CD4 diaktifkan diperantarai sel respon, atau CD8 limfosit sitotoksik (CTL1) respon, tergantung pada agen. Adjuvant profilaksis harus mengarahkan antigen presentasi dan memodulasi jaringan sitokin untuk menginduksi respon pelindung yang sesuai. Adjuvant dapat menghasilkan sejumlah konsekuensi yang merugikan, baik lokal di tempat suntikan dan sistemik (Edelman 2000), dan reaksi ini harus diminimalkan dalam vaksin terapeutik. Akhirnya, untuk menjadi berguna dalam klinis pada manusia atau hewan obat-obatan, vaksin terapi harus ekonomis, stabil, dan mudah untuk mengelola. Evaluasi dari banyak vaksin terapeutik berada di luar cakupan makalah ini, dan pembaca disebut buku beberapa sangat baik pada vaksin pengembangan (Hincal dan Kas 1998; O'Hagan 2000; Robinson et al. 2003).Adjuvant yang digunakan untuk tujuan eksperimen digunakan untuk memproduksi antibodi untuk digunakan dalam eksperimen lain atau prosedur diagnostik. Tujuan utama dalam percobaan.

1Abbreviations yang digunakan dalam artikel ini: BSA, bovine serum albumin; CTL, sitotoksik limfosit, CWS, dinding sel kerangka, DDA, dioctadecylammonium klorida, FCA, ajuvan Freund lengkap, FIA, tidak lengkap Freund ajuvan, GMDP, N-asetil-glucosaminyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-Disoglutamine; IACUC, perawatan hewan institusional dan komite penggunaan, IL, interleukin, IOE, merangsang kekebalan emulsi minyak, ISA, Seppic lengkap ajuvan, ISCOM, merangsang kekebalan kompleks, LPS, lipopolisakarida; MDP, muramyl dipeptida, SAF, Syntex Adjuvant Formulasi; t-MDP, threonyl muramyl dipeptida, TDM, trehalosa 6,6-dimycolate?; TLR, toll-like receptor, TNF, tumor necrosis factor.