Cromatografa de intercambio inico

Historia
Los mtodos inicos han sido utilizados desde 1850, cuando H. Thompson y J. T. Way, investigadores de Inglaterra, trataron diversas arcillas con sulfato de amonio o carbonato en solucin para extraer el amonaco y liberar calcio. En 1927, la primera columna de zeolita mineral fue utilizada para eliminar iones de calcio y magnesio que interferan en la solucin, para determinar el contenido de sulfato de agua. La versin moderna de la IEC se desarroll durante la poca de la guerra del Proyecto Manhattan. Era necesaria una tcnica para separar y concentrar los elementos radiactivos necesarios para hacer la bomba atmica. Los investigadores eligieron absorbentes que pudieran cerrarse sobre elementos transurnidos cargados, y que pudieran ser eliminados diferencialmente. ltimamente, una vez desclasificado, estas tcnicas pueden utilizar nuevas resinas IE para desarrollar los sistemas que se utilizan a menudo hoy en da para la purificacin especfica de productos biolgicos y de sustancias inorgnicas. A principios de los '70, la cromatografa inica, fue desarrollada por Hamish Small y sus compaeros de trabajo en Dow Chemical Company como un novedoso mtodo de IEC utilizables en el anlisis automatizado. CI utiliza resinas inicas ms dbiles para su fase estacionaria y una nueva neutralizacin de stripper, o supresor de la columna para eliminar los iones quitados que se depositan en el fondo. Es una poderosa tcnica para determinar bajas concentraciones de iones y es especialmente til en estudios sobre el medio ambiente y la calidad del agua, entre otras aplicaciones.

Tcnica
La realizacin de esta tcnica se hace utilizando columnas rellenas de un denominado intercambiador ionico (sustancia que contiene grupos cargados con iones mviles de signo contrario). Los intercambiadores pueden ser anionicos (intercambian aniones con el medio) o catinicos (intercambian cationes con el medio). A travs de la columna hacemos pasar una disolucin de sustancias ioniadas. A su paso por la columna, las diferentes sustancias quedan unidas al intercambiador ionico merced a fuerzas electrostticas. Despus hacemos pasar por la columna tampones de diferente pH, que provoca cambios en las fuerzas electrostticas. Por cada tampn utilizado conseguimos la separacin de la columna, por elucin, de una determinada sustancia ionizada.

Equipo para cromatografa de intercambio inico.

Instrumentacin: Un equipo para anlisis mediante cromatografa de intercambio inico (C.I.I.) est constituido bsicamente por los componentes siguientes: Un inyector Una vlvula para la inyeccin Un compartimiento para la columna Una o varias columnas Una bomba un sistema de deteccin conductimtrico Un sistema de registro o de integracin Un auto muestreador Un microprocesador para automatizar operaciones Un computador para manejar y almacenar informacin.

El diseo de un equipo con estas caractersticas, permite aplicaciones analticas cualitativas y cuantitativas rpidas, selectivas y simultneas principalmente de especies inicas inorgnicas en el rango de microgramos por litro en muestras de aguas, contaminantes ambientales, industria de alimentos, bebidas, productos farmacuticos, recubrimientos, productos agrcolas, laboratorios clnicos, laboratorios de control de calidad y anlisis en general. Las determinaciones de aniones y cationes ms frecuentes son: Cloruros, bromuros, fluoruros, nitritos, 23nitratos , sulfatos, fosfatos, boratos, sulfocianuro, silicatos, litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, estroncio, bario, zinc, cobalto, manganeso, amonio, cidos carboxlicos (tartratos, lactato, acetato) y aminas (metil amina, dimetil amina, trimetil amina).

ELEMENTOS BASICOS: Fase estacionaria ( Fija )

Fase Estacionaria: Insoluble, lleva en la superficie cargas electrostticas fijas que retienen contraiones mviles que pueden intercambiarse por iones de la fase mvil. La fase estacionaria es normalmente una resina de intercambio inico que contiene grupos funcionales cargados que interaccionan con grupos cargados de signo opuesto del compuesto que se quiere retener. Puede ser: 1. Intercambiador de iones cargado positivamente (intercambiador de aniones), que interacciona con aniones 2. Intercambiador de iones cargado negativamente (intercambiador de cationes), que interacciona con cationes

Resinas I. Resinas de poliestireno entrecruzadas II. Resinas basadas en Carbohidratos- (Carbohidratos Polimricos, Agarosa, dextrano, celulosa) Especialmente usados en la separacin de biomoleculas. III. Soportes basados en la Slice

Tipo de resinas usadas

Fase mvil ( Se desplaza )

Fase Mvil: Disolucin acuosa con cantidades moderadas de metanol u otro disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies inicas en forma, generalmente de buffer. Los iones de la fase mvil compiten con los anlitos por los sitios activos de la fase estacionaria. Tampones Para estos intercambiadores se suelen usar. Histidina (pKa 6,15), imidazol (7,0), trietanolamina (7,77), Tris (8,16), dietanolamina (8,8) y otros. Por la misma razn, para la cr. i. catinico se debe usar un tampn aninico, como actico (pKa 4,76), ctrico (4,76), Mes (6,15), fosfato (7,2), Hepes (7,55) y otros.

Eleccin del tampn y la fuerza inica.

Aparte del pH de la fase movil, en la purificacion de un soluto/proteina hay que tener en cuenta el tipo de tampn que se usa y la fuerza inica o concentracion salina en la que tiene lugar la interaccion con el intercambiador. Respecto al tipo de tampon, la forma cargada del mismo no debe interferir con el proceso de intercambio de iones, por lo que no debe actuar como contraion y competir con la proteina por la union a la f. estacionaria, porque ello desvirtuaria su equilibrio (y ademas se crearia un gradiente de pH en la columna). Para ello, el componente inico del tampn debe de tener la misma carga que la fase estacionaria.

Etapas del proceso cromatografico

1. La protena que contiene en mayor porcentaje cargas negativas, se ve rodeada por iones positivos. Esta protena interaccionar con una matriz que posea cargas positivas. 2. Se producen interacciones electroestticas entre la protena y la matriz, por lo cual se desplazan los iones positivos y negativos que se encontraban interaccionando tanto con la protena como con la matriz. 3. Una vez que la protena es adsorbida en la matriz se lava la columna con un buffer que permita eliminar los contami-nantes que no estn adsorbidos. 4. Posteriormente se eluye la protena adsorbida en forma diferencial mediante cambios: - de fuerza inica - pH de la solucin eluyente 5. Finalmente se reacondiciona la matriz para iniciar un nuevo ciclo. Dependiendo del material se pueden realizar hasta 100 ciclos.

Ventajas/Desventajas
Ventajas: Alta capacidad Alta resolucin. Paso concentrador: Se puede sembrar un gran volumen para luego eluirlo en un menor volumen. Con una misma columna se puede utilizar a diferentes pH y obtener diversos perfiles de elucin.

Desventajas: Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicadas a este tipo de cromatografa

Aplicaciones Como aplicaciones de la cromatografa inica est el anlisis de drogas y sus metabolitos, sueros, conservantes de alimentos, mezclas para vitaminas, azcares, y preparaciones farmacuticas. El intercambio inico se utiliza ampliamente en las industrias de alimentos y bebidas, hidrometalrgica, acabado de metales, qumica y petroqumica, farmacutica, azcar y edulcorantes, agua subterrnea y potable, nuclear, ablandamiento industrial del agua, semiconductores, energa, y otras muchas industrias. En bioqumica es ampliamente utilizado para separar molculas cargadas, tales como protenas. Un rea importante de aplicacin es la extraccin y purificacin de sustancias de origen biolgico, tales como protenas (aminocidos) y ADN/ARN. Un ejemplo muy importante es el proceso PUREX (Plutonium-URanium EXtraction process, proceso de extraccin de plutonio-uranio) que se utiliza para separar el plutonio y eluranio entre los productos presentes en el combustible gastado de un reactor nuclear, y poder eliminar los productos de desecho. De este modo, el plutonio y el uranio estn disponibles para ser empleados como materiales relacionados con la energa nuclear, como nuevo combustible de reactor y armas nucleares. Se utiliza tambin para separar otros conjuntos de elementos qumicos muy similares, tales como circonio y hafnio, que por cierto son tambin muy importantes para la industria nuclear. El circonio es prcticamente transparente a los neutrones libres, y se utiliza en la construccin de reactores, pero el hafnio es un absorbente de neutrones muy fuerte, usado en las barras de control del reactor. Se utilizan en el reprocesamiento del combustible nuclear y el tratamiento de los residuos radiactivos.

Otras aplicaciones En ciencia del suelo, la capacidad de intercambio catinico es la capacidad de intercambio inico de los suelos para los iones de carga positiva. Los suelos pueden ser considerados como intercambiadores naturales de cationes dbiles. En la fabricacin de guas de onda planas, el intercambio inico se utiliza para crear la capa gua de ndice de refraccin superior. Desalcalinizacin, o eliminacin de los iones alcalinos de la superficie de un vidrio. Produccin de Vidrio endurecido qumicamente, producido por el intercambio de iones Na+ por K+ en las superficies de cristal usando KNO3 fundido. Extraccin y purificacin de cidos nucleicos Purificacin de agua Purificacin del fibringeno de la leche Determinacin de anticonvulsantes en el suero despus de la extraccin de la fase slida. Anlisis de antibiticos de poli ter. Determinacin de pesticidas. Identificacin de cidos orgnicos en la fruta y en el jugo. Deteccin de derivacin-fluorescencia post-columna para anlisis para varios tipos de pesticidas agrcolas. Determinacin de metabolitos de Triptfano en el suero umbilical.

Ejemplo