Sunteți pe pagina 1din 10

CURS 4 Mecanismele activrii LT

Mecanismele activrii LT
Activarea LT, care reprezint momentul central al majoritii rspunsurilor imune fa de Ag timodependente NU se realizeaz n orice ipostaz, ci doar dac sunt strict ndeplinite anumite condiii ce sunt diferite in vivo/in vitro. Condiii in vivo 1. LT sunt activate NUMAI de Ag timodependente 2. Activarea LT se realizeaz strict n organele limfoide secundare (ganglioni, splin), doar n conditiile unei cooperri celulare la care este absolut necesar prezena i activarea APC

- Ag timodependente native NU pot stimula direct LT pentru c LT NU dispun pe membrana lor de receptori de captare Ag. - LT NU expun receptori pentru complement si IgG - Exist alte celule (APC) care prezint pe mebrana lor din abunden receptori de captare Ag. Ele le capteaz, endociteaz, scindeaz => epitopi. Unii sunt ulterior prezentai n complex cu moleculele MHC. Ei sunt apoi recunoscui de LT prin TCR+CD3 3. Cooperarea i activarea care rezult pentru a conduce la un rspuns imun eficient trebuie s fie bidirecional (APC i LT trebuie s se stimuleze reciproc una pe cealalt) Distingem n cadrul cooperrii 2 tipuri de activare: a. activarea anterograd - se desfoar dinspre APC spre LT i la finele ei se realizeaz activarea LT. Se numete activare anterograd pentru c ea se exercit n acelai sens cu prezentarea i respectiv recunoaterea antigenic - prin transmiterea unor semnale ctre LT pe 2 ci principale: primul semnal e transmis pe calea principal (TCR CD3). El ia natere ca urmare a recunoaterii de LT a epitopului prezentat. El are 2 roluri foarte importante: 1. conduce la activarea metabolic a LT

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT 2. contribuie la declanarea diviziunii mitotice a LT => crete numrul de limfocite T per clon activat => 2 modificri clonale: activarea clonal i expansiunea clonal cale accesorie: implic activarea receptorului CD28 prezent pe suprafaa LT. El e activat dac angajeaz legturi cu un contraligand prezent pe APC proliferate (CD80). n CD28 => semnale transmise ctre limfocit. Ele: 1. contribuie la activarea diviziunii mitotice a LT 2. contribuie la maturarea funcional a LT 3. contribuie la maturarea funcional a clonei clona sufer 3 modificri foarte avantajoase: 1. activare 2. expansiune 3. maturare Cu o asemenea clon => va declana un RI eficient

b. -

activarea retrograd dinspre LT deja activate ctre APC la finele ei => activarea total, definitiv, maxim a APC ea se exercit n sens opus prezentrii i recunoaterii Ag se realizeaz prin eliberarea de ctre LT activate a unor IL cu rol activator pentru APC (IFN, IL-4). Ele stimuleaz producia i expresia pe membrana APC a moleculelor MHC II (n special) => creterea prezentabilitii Ag => activarea suplimentar a LT LT activate suplimentar activeaz suplimentar APC, etc Ele se activeaz reciproc pn n momentul n care este atins i depit valoarea prag a declanrii RI Valoarea prag a declanrii RI = atingerea i depirea cnd clona sufer cele 3 modificri: e activat, expansionat i maturat Activarea anterograd trece ntotdeauna prin 2 etape: 1. Etapa Ag nespecific a activrii LT n cursul ei se realizeaz legtura ntre membranele APC i LT prin cuplurile de adeziune intercelulare primele legturi se realizez pe seama cuplului de adeziune de linia I (CD2 pe LT i LFA-3 CD58 pe APC). Aceste legturi sunt stabile pentru lungi perioade de timp. Numrul lor este imens de la bun nceput (sute de mii de asemenea legturi) apoi se stabilesc legturi de linia a II-a, ntre LFA-1 (pe LT) i ICAM. Ele apar mai trziu datorit faptului c cei 2 liganzi au o afinitate n general mic. Ele sunt instabile i iniial numrul lor este mic.

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

Funciile acestei etape: Prin formarea cuplurilor de adeziune membranar APC i LT vin n contact intim pe suprafee foarte mari Conteaz pentru pregtirea activrii LT. n momentul n care se stabilesc legturi CD2 LFA-3, PLC, care n cazul LT e poziionat mai interior, vine n contact cu CD2 => migreaz la suprafa, unde poate fi activat ea are loc permanent. Legturile NU au loc NUMAI n situaia n care APC prezint un Ag, dar el NU a fost nc recunoscut. Ea are loc i n situaia n care APC NU expune epitopi (moleculele MHC ale APC sunt goale) faptul c LT stabilesc contacte continue cu APC => LT controleaz permanent APC dac expun sau NU Ag => supraveghere imunologic 2. Etapa Ag specific a activrii LT e ocazionat de prezentarea i recunoaterea Ag epitopii sunt recunoscui de TCR la TCR se asociaz laurile CD3 , i i la ele se asocialz cel mai frecvent 2 lanuri lungi, identice ntre ele, lanurile . Apoi se mai asociaz, tot prin puni disulfurice, CD45 2 coreceptori: CD4, dac e TH CD8, dac e TC/TS CD4/CD8 se afl n citoplasm n contact cu o enzim, PTK (varietatea p56 LCK). n centrul catalitic exist o timozin, n poziia 505, cu rol reglator pentru PTK

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT Activarea LT e rezultatul declanrii n succesiune a 2 categorii de stimuli: 1. Apare pe calea CD4/CD8. El e generat n momentul n care CD4/CD8 angajeaz legturi cu domeniul monomorf al moleculei MHC => stimul ce se transmite prin CD4/CD8, el fiind un stimul inhibitor. El se transmite prin segmentul intracitoplasmatic al CD4/CD8 ctre PTK. Primind stimulul, PTK sufer modificri conformaionale => exteriorizarea Tyr din poziia 505. Exteriorizat, ea se autofosforileaz spontan, ceea ce duce la inhibiia TOTAL a PTK. Inhibiia are rolul unui mecanism de protecie, prin care este mpiedicat activarea LT n situaia n care APC NU prezint nici un epitop (moleculele MHC sunt goale). Dac NU ar exista, LT ar reaciona fa de MHC i ar exista anse ca LT s distrug APC. Dac MHC NU sunt vide, atunci e declanat un al 2-lea semnal 2. apare pe calea TCR CD3. El e un semnal activator i se transmite din lan n lan de la TCR prin toate lanurile CD3. atinge lanurile => urmeaz 2 ci: una scurat (a) i una lung (b) a. de la lanurile ctre CD45. cd 45 se activeaz i ncepe s funcioneze ca o PTP (fosfataz). CD45 preia (P) de pe Tyr din poziia 505 => o defosforilare a PTK p56lck. Acum ea se activeaz. Ea fosforileaz enzime => activarea metabolismului intermediar al LT. n al doilea rnd, ea fosforileaz secvenele ITAM. Fosforilndu-le, ele se activeaz i devin capabile s fosforileze alte enzime (kinaze). Cea mai important e kinaza ZAP-70. ea se fixeaz de lanurile (ZAP = Protein asociat lanurilor , are GM de 70 kda). Stimulii sunt trimii pe calea b. b. De-a lungul lanurilor i n final au acces la ZAP-70, care tocmai s-a fixat. ZAP-70 se activeaz i fosforileaz prelund fosfatul de pe CD45 i l trimite la PLC, care fiind fosforilat, se activeaz. n mare, activarea declaneaz cascada fosfatidil-inozitolilor. PLC hidrolizeaz PIP2 (fosfatidil inozitol disfosfat) => Inozitol trifosfat (IP3) i diacilglicerol (DAG)

IP3 substan hidrosolubil difuzeaz n ntreaga citoplasm, pn ajunge la nivelul REN, care prezint receptori specifici pentru IP3 => activarea REN cu eliberarea masiv n citoplasm a Ca2+ (hipercalciie). Efectul ei foarte important e acela ca Ca2+ activeaz calcinemina (o fosfataz calmodulin dependent). Ea influeneaz indirect anumite funcii nucleare. Ea exercit aceste efecte printr-un factor transcripional = NF-AT (factor nuclear al LT activate). NF-AT e un factor polipeptidic prezent n mod continuu n citoplasma LT, dar atta timp ct LT se afl n repaus NF-AT e inactiv pentru c e fosforilat. Activarea NF-AT se face prin defosforilalrea sa sub aciunea calcineminei. Defosforilat, NF-AT trece n nucleu i aici activeaz marea majoritate a genelor pentru IL => o sintez crescut de IL => naturarea LT DAG - substan liposolubil - NU difuzeaz n citoplasm, ci rmne la nivelul membranei

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT Aici DAG activeaz o kinaz (PKC). Ea, indirect, poate activa anumite funcii nucleare prin intermediul unui factor transcripional (NF-KB = factorul nuclear pentru lanurile uoare K ale Ig a LB) - NF-KB a fost evideniat acum 20 de ani, n cazul LB mielomatoase - NF-KB factor polipeptidic prezent n mod continuu n citoplasma LT. Cnd sunt n stare de repaus NF-KB e inactiv, fiind cuplat cu un inhibitor proteic. Activarea se realizeaz sub aciunea PKC, care fosforileaz inhibitorul => desprinderea lui de pe NF-KB. NF-KB devine liber i poate trece n nucleu. Activeaz marea majoritate a genelor pt IL sau CK i n mod cu totul special activeaz foarte intens 2 gene: gena pentru IL-2 ct i gena pentru receptorul IL-2 - LT devine productor de IL-2 i are i cu ce s o recepteze => se activeaz cu prpria IL-2 => o activare autocrin cu IL-2 => activarea metabolismului i maturarea LT Stimularea diviziunii mitotice - rezultatul transmiterii unor semnale pe 2 ci: TCR-CD3 i calea CD28 - factorul cel mai implicat n stimularea mitozelor e MPF (mitosis promoting factor) - MPF-ul e un heterodimer format din 2 molecule de ciclin B, asociate la o component kinazic, reprezentat de P34cdc (cell division cycles). Activarea se realizeaz prin cuplarea unor fosforilri i defosforilri - Defosforilarea sub aciunea CD45, care defosforileaz ciclinele B => ele se desprind de pe kinaz - n paralel kinaza e activat prin defosforilare de o alt PTK, reprezentat de P60src (sarcoma cells). P60src se fixeaz de lanurile scurte ale CD3 - Odat activat MPF sunt activate kinazele ciclin dependente CDK care acioneaz n punctele de restricie ale ciclului mitotic situat ntre faza G2 i faza M => aceste celule au toate ansele sa ptrund n mitoz - n faza G2 ajung ca urmare a transmiterii unor semnale pe calea CD28. ele apar cnd CD28 angajeaz legturi cu CD80 => semnale activatoare n CD28 ce se transmit la o kinaz asociat la CD28 i care se numete fosfatidil inozitol 3 kinaza (PI3K). Ea activeaz cascada MAP kinazelor (proteinkinazele asociate mitozelor). MAPK stimuleaz kinazele ciclindependente responsabile de trecerea celulelor din faza G1 i S a diviziunii mitotice (punctul 2 de restricie) => celulele ajung n faza M Consecinele morfofuncionale ale activrii LT - Activate, LT i modific att aspectul mologic, ct i funcia - LT n stare de repaus - Activat antigenic, trece din faza G0 n faza G1, apoi faza S n faza G2 - LT din G1-S-G2 se afl n interfaz - Ele devin mai mari, cu aspect neregulat i prezint o citoplasm foarte abundent - n citoplasm crete numrul de mitocondrii => activarea metabolic a LT; crete RER => produc IL, CK; se modific i expresia fenotipic: expresia de TCR pe suprafaa lor (capacitate mai mare de a recunoate Ag prezentate), crete expresia de LFA-1 (crete capacitatea de aderare a LT la APC) - n faza M marea majoritate a limfocitelor rezultate n urma diviziunilor devin LT efectorii (TH, producnd IL sau TC, producnd CK) -

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT O mic parte rmn n rezerv = LT cu memorie. Ele NU mai revin niciodat n faza G0 a ciclului mitotic, ci rmn ntr-o etap intermediar, ntre G0 i G1. Ele rmn n stare preactivat. La un nou contact cu Ag, acestea vor rspunde foarte rapid.

Limfocitele B
Caractere generale - aproximativ 15-20% din totalul limfocitelor circulante - distribuite primar n ariile bursodependente ale organelor limfoide - celule puin recirculante - au durat de via n general scurt (luni de zile) Receptori de suprafa - 3 categorii: Receptori de recunoatere Ag Receptori cu rol accesor n activare (CD45, CD25 sau IL-2R) Receptori de adeziune intercelular (LFA-1) I. Receptori de recunoatere Ag - recunoaterea Ag se realizeaz printr-un complex receptorial, format din 2 componente: BCR (Ig transmembranare IgM form monomeric, IGD, IgG, IgA, IgE). El e format din asocierea a 2 perechi de lanuri ( 2 grele H orientate cu capetele C-terminale n citoplasm). Prin capetele C-terminale se afl n legtur cu o PTK. Lanurile uoare (L) sunt poziionate extramembranar Laura & Daniel 6

CURS 4 Mecanismele activrii LT

- aceste lanuri la capetele N-terminale se vor asocia ntre ele i formeaz 2 caviti = situsuri combinative pentru Ag (SCAg), prin care pot fi recunoscui determianii Ag conformaionali prezeni la suprafaa Ag nativ. - dei are 2 SCAg, ele sunt identice ntre ele => e recunoscut 1 singur determinant Ag => BCR e receptor monospecific Funciile BCR: 1. recunoaterea Ag recunoate de regul Ag native aflate n stare solubil n cazul LB NU e necesar niciodat prezentarea Ag. Ele singure pot s-si capteze Ag prin BCR la care se asociaz receptorul de captare CR i FcR 2. generarea unor stimuli activatori acetia NU pot fi trimii de BCR, de aceea se asociaz nc 2 lanuri cu funcie de transducie a semnalului activator (Ig i Ig) De fapt ele sunt lanuri unice care n segmentul extracelular prezint cte un domeniu poziionat excentric Actualmente Ig = CD79a i Ig = CD79b Ele se asociaz la BCR prin puni disulfurice, ca i la CD45 CR i FcR Activarea LB mult mai complex dect activarea LT activarea se datoreaz trnsmiterii semnalelor activatoare pe 2 ci: 1. scurt de la BCR la PTK activndu-se, PTK preia (P) din citoplasm i l trimite ctre diferite substrate (segmentele intracitoplasmatice ale Ig i Ig, care sufer modificri conformaionale ce permit trecerea unor semnale activatoare pe calea lung 2. lung la CD45, care se activeaz i preia (P) de pe Ig i Ig i l trimite la PLC => activarea PLC i declanarea cascadei fosfatidil-inoyitolilor 7

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT Consecinele morfofuncionale ale activrii LB LB se transform i morfologic, dar mai ales funcional LB trec din faza G0 n faza G1, apoi din S n G2 Ele trec n interfaz, unde devin nite limfoblati B, care sunt mari i cu aspect neregulat i prezint o citoplasm foarte abundent ce nconjoar nucleul n citoplasm gsim mitocondrii abundente i RER Pe membran crete expresia de LFA-1 i expresia de MHC II!!! Ele devin nite APC!!! n faza M ncep s se divid. Cea mai mare parte devin plasmocite (produc Ac). O mic parte rmne n rezerv sub form de LB cu memorie (rmn ntr-o etap ntre G0 i G1). La un nou contact ele vor aciona mai repede (memorie scurt pentru c LB mor repede)

Organizarea sistemului imun


Distingem 2 componente: 1. componenta central 2. componenta periferic

Componenta central
reprezint sectoarele de repartiie primar a tuturor clonelor limfocitare reprezint sectorul tranzitat n mod continuu de APC reprezint sectorul n care poate avea loc cooperarea APC limfocite reprezint sectorul n care limfocitele pot fi i activate a. Splina 8

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT 2 zone: pulpa roie (fr funcie imunologic) i pulpa alb (funcie imunologic) Pulpa alb: dispus sub forma a 3 manoane, dispuse n jurul unei arteriole centrale - Primul manon (PALS intern) zon timodependent, populat de LT dispuse omogen - Al 2-lea manon (PALS extern) zon bursodependent, populat de LB prezente n aglomerri celulare = foliculi limfoizi - A 3-a = zona marginata, populat mai ales de Mcf Funcii Genereaz RI fa de Ag circulante, fa de care pot apare RIU, care se desfoar integral n splin, sau RIC, care sunt doar iniiate n splin i se desfoar n esutul Ag Etapele desfurrii RIU intrasplenice - declanate de Ag circulante care pot fi prezente n circulaie ca Ag solubil sau Ag transportat - Ag ajunge sub ambele forme n pulpa alb 1. Ag solubil - mai repede ajunge sub form de Ag solubil i ptrunde n toate cele 3 zone, declannd RI doar n zona bursodependent (Mcf NU au capacitatea de a capta Ag solubile, LT NU pot capta Ag) - Ag e recunoscut de LB, ele se activeaz i se transform n limfoblati B. Dup activare celula ncepe s se ndeprteze de contactul antigenic, rmnnd n PALS extern 2. Ag transportat de CDS - CDS se afl n PALS intern, unde se transform n IDC - prezint Ag LT prezente aici - dac Ag e recunoscut, LT se activeaz i se transform n limfoblati T. Dup un anumit interval de timp, celula se desprindede la locul cooperrii i migreaz, ns migrarea e foarte pronunat i de regul limfoblatii T ajung n PALS extern, unde vin n contact cu limfoblatii B i ncep s coopereze - consecine: activarea complet a limfoblatilor B, care se transform n plasmocite. Dup un interval de timp ele migreaz i la distan mare de cooperare => Ac ce sunt eliberai b. Ganglionii limfatici - 3 zone n parechim: Corticala (Cx) bursodependent LB distribuite n aglomerri celulare = foliculi limfoizi. Care NU sunt stimulate => foliculi lifoizi primari Paracorticala (Pc) LT distribuite omogen Medulara celularitate mixt (LT, LB, Mcf, Plasmocite, etc) Funcii: Locul generrii unor RI fa de Ag tisulare => 2 rspunsuri: RIU integral n ggl RIC doar iniiat n ggl, n rest se desfoar n esutul Ag Etapele intraganglionare ale RIU: - declanat ca urmare a drenrii prin limfaticele aferente a unor Ag tisulare. Ele stimuleaz LB din foliculi, care i modific aspectul, devenind foliculi limfoizi Laura & Daniel 9 -

CURS 4 Mecanismele activrii LT secundari (au dimensiuni mari, enorme i avanseaz ctre Pc). Modificrile se datoreaz faptului c LB stimulate se activeaz i se divid, iar pe de alt parte migreaz. Foliculul are 3 zone: Subcapsular (cap) format din LB mici (neactivate) Central, format din puine LB (zona clar). Ele sunt LB mici. Sunt puine pt c LB stimulate au migrat de aici i au trecut n paracortical Zona dens, format din limfoblati (Pc). Limfoblatii din Pc rmn n contact cu LT de aici i coopereaz => se transform n plasmocite, care migreaz, ajungnd cel mai frecvent n medular, unde elibereaz Ac.

Laura & Daniel