PRUEBAS BIOQUIMICAS

Prueba SIM Fundamento El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteina, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Ehrlich para originar un compuesto rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor dela la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medios se mantenga a un pH mayor a 7.2 Resultados

H 2S

Inmvil

Mvil

MIO

La movilidad se demuestra por enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas haya de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la Ornitina esta dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire a amarillo. La presencia de acidez otorga condiciones optimas para la actividad de la enzima Ornitina descarboxilasa, la cual decarboxila la Ornitina presente. Por decarboxilacin se alcaliniza el medio, con el Indol(+) consecuente viraje del indicador a prpura. El indol es producido a partir del triptfano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Ehrlich, indica un resultado positivo

Indol (-)

Descarboxilasa (+)

Descarboxilasa (-)

UREA

Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa pueden utilizar el nitrgeno proveniente de la urea ., la hidrolizan liberando amoniaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo de fenol del amarillo al rojo.

FAD

Esta prueba determina la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina en cido fenilpirvico por su actividad enzimtica, con la siguiente acidez resultante. El aminocido aromtico fenilalanina sufre una desaminacin oxidativa catalizada por un aminocido oxidasa para producir el cido cetnico. La desaminacin oxidativa da como resultado la extraccin del grupo amino del aminocido para formar un doble enlace alfacetocido. Y libre de amoniaco. Como la fenilalanina se encuentra desaminada el color producido como consecuencia del agregado de cloruro frrico al 10% se debe a la formacin de un cetocido, el cido fenilpirvico. La reaccin positiva con este reactivo se debe a la formacin de una hidrazona. El cloruro frrico acta como un agente quelante actuando con el cido fenilpirvico para formar un color verde. Cuando se expone al oxigeno atmosfrico un tubo de cultivo con fenilalanina despus de agregar el cloruro frrico aumenta la produccin y la intensidad de la reaccin positiva.

CITRATO

El medio es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente oxalacetato y piruvato. Este ltimo en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonato y bicarbonatos alcalinos .El medio vira a azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

(-)

(+)

(+)

(+)

(+)

LIA

MR-VP

Por decarboxilacin la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo, pero a las 24 hrs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrogeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro. Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxigeno forma un color rojizo en la superficie del medio. En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser

TSI

reconocida por la adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros. Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro de color negro . El rojo de fenol es el indicador de pH y cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Pro fermentacin de azucares se producen cidos, que se detectan por medio del indicador, el cual vira a color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrogeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.