Gene: a unidade da informao hereditria.

. um segmento de DNA com informao para sintetizar uma determinada protena (o que determina uma dada caracterstica). Genoma: conjunto de genes existente num indivduo, abrange a totalidade da sua informao gentica. Existe uma cpia do genoma em cada uma das clulas do organismo. Histonas: protenas associadas ao DNA. Cromatina: a designao para o agrupamento de cada poro da DNA com as histonas. Cromossoma: filamentos de cromatina condensados, curtos e espessos. Nucleossoma: associao da histona ao DNA. Caritipo: conjunto de todos os cromossomas presentes numa clula de determinada espcie. DNA dos procariontes uma s molcula, no associada a protenas, dispersa no citoplasma. DNA dos eucariontes vrias molculas, associadas a protenas, histonas. Encontra-se no ncleo. Tambm existe DNA extracelular em mitocndrias e cloroplastos.

Determinao gentica do sexo

Os genes so responsveis pelas caractersticas dos indivduos e que se localizam nos cromossomas, a determinao do sexo dos indivduos no exceo e radica no tipo ou nmero de cromossomas que estes possuem. Na maioria dos casos, a determinao do sexo envolve diferenas ao nvel dos heterossomas (cromossomas sexuais), no entanto, em alguns animais a determinao feita com base no nmero total de cromossomas que cada indivduo possui. Humanos Embora os cromossomas X e Y sejam diferentes, em termos de composio e estrutura, no entanto, durante a meiose estes cromossomas comportam-se como homlogos. Cada gmeta masculino transporta 22 autossomas e 1 heterossoma, com igual probabilidade de ser X ou Y. Cada gmeta feminino transporta 22 autossomas e 1 heterossoma, no entanto este s transporta heterossomas do tipo X, sendo assim o sexo de um novo ser determinado pelo espermatozoide.

O cromossoma Y tem um papel decisivo na determinao do sexo, foi identificada uma regio do cromossoma Y, chamada SRY, que determina a masculinidade. At s 6 semanas de gestao, no se manifestam diferenas sexuais nos embries, a partir dessa altura, um gene da regio SRY seja ativado nos rapazes e se inicie a produo de hormonas sexuais que vo atuar no sentido de estimularem a diferenciao dos rgos sexuais. A ausncia destas hormonas conduz diferenciao de rgos sexuais femininos.

Regulao/ expresso Gentica

Em cada clula, apenas uma parte do seu genoma est a ser expresso, determinando as suas caractersticas. Esse conjunto de genes que se expressa varia consoante o tipo de clula, sendo esta a causa primeira da diferenciao celular;

Este fenmeno resultado da regulao da expresso dos genes. Nos organismos mais simples, como procariontes, a regulao gnica condiciona a eficincia energtica e o consumo de recursos disponveis, permitindo que estes organismos ajustem o seu metabolismo s modificaes que ocorrem no meio, algo fundamental para a sua sobrevivncia. Jacob e Monod Metabolismo da lactose Opero Lac

Os genes responsveis pela sntese destas trs enzimas, utlizadas na produo da lactose, so os genes estruturais, que por sua vez, so controlados por outros genes prximos. Opero: conjunto dos genes estruturais com funes relacionadas e dos genes que os controlam.

Constituio do opero lac: 3 genes estruturais, lacZ, lax Y, lac A, codificam as enzimas necessrias ao metabolismo da lactose; Promotor: regio onde a enzima RNA polimerase, responsvel pela transcrio dos genes estruturais, se liga; Operador: controla o acesso da enzima, RNA polimerase, aos genes estruturais.

Lactose Ausente Quando no existe lactose no meio, um repressor est ligado ao operador, bloqueando a transcrio dos genes estruturais. Esta protena repressora codificada por um gene que se situa fora do opero designado gene repressor ou gene regulador, constantemente transcrito e traduzido. Assim, a bactria produz continuamente pequenas quantidades de protena repressora. Lactose Presente Quando existe lactose no meio, esta molcula liga-se ao repressor, altera a sua conformao de tal forma que este se torna inativo, desligando-se do operador. Assim, o operador fica livre, permitindo que os genes estruturais sejam transcritos e, posteriormente, traduzidos, formando-se enzimas necessrias ao metabolismo da lactose.

A lactose funciona como um indutor, pois a sua presena permite ativar o opero. O opero da lactose designado por opero indutvel. Quando a concentrao da lactose comea a baixar drasticamente, devido ao catalticas (reaes catablicas) das enzimas, a lactose desliga-se do repressor, que, ao voltar a ficar ativo, liga-se ao operador, bloqueando a transcrio do opero. Desta forma, garante-se uma poupana de recursos devido aos fenmenos de autorregulao acima descritos. Ausncia de Lactose O gene regulador determina a sntese de um repressor; O repressor bloqueia o gene promotor ao ligar-se ao operador; A RNA polimerase no se liga ao promotor; Os genes estruturais no so transcritos; No ocorre a sntese das trs enzimas. Presena de Lactose A lactose liga-se ao repressor, inativando-o; O gene operador fica desbloqueado; A enzima RNA polimerase liga-se ao promotor; Os genes estruturais so transcritos; D-se a sntese das enzimas. 3

Opero Trp Constituio do opero trp: 5 genes estruturais; Promotor; Operador. Triptofano ausente Quando a concentrao intracelular de triptofano est baixa, as enzimas necessrias sua sntese so produzidas por transcrio dos enes estruturais, conduzindo a um aumento da concentrao do aminocido. Existe tambm uma molcula repressora codificada pelo gene regulador, no entanto esta molcula sintetizada sob a forma inativa, no se podendo ligar ao operador e bloquear o opero. Triptofano presente Quando a concentrao de triptofano atinge nveis elevados, algumas molculas do aminocido, ligam-se ao repressor, alterando a sua conformao, tornando-o ativo, o triptofano atua como co repressor. O repressor liga-se ao operador, bloqueando a transcrio dos genes estruturais do opero.

Ausncia de Triptofano O gene regulador produz um repressor, inativo; O gene operador est livre; A RNA polimerase pode ligar-se ao promotor; D-se a transcrio; Ocorre a sntese das enzimas. Presena de Triptofano O triptofano liga-se ao repressor, ativando-o; O Repressor liga-se ao operador; A RNA polimerase no pode ligar-se ao gene promotor; Os genes estruturais no so transcritos; No se sintetizam as enzimas.

Regulo Nos casos dos operes lac e trp cada um controlado por um regulador diferente; Em alguns casos, existe um grupo de operes que controlado por um nico tipo de regulador, este grupo de operes toma a designao regulo; Por exemplo, operes com interveno no catabolismo de glcidos so controlados em simultneo pelo mesmo regulador, tornando mais eficaz e rpida a converso de glcidos em glicose.

Mutaes
Cromossmicas - envolvem a estrutura ouo nmero de cromossomas. Afetam pores de cromossomas completos ou at conjuntos de cromossomas.

Gnicas - envolvem uma alterao pontual ao nvel do nucletidos de um gene.

O fentipo dos indivduos resulta de interaes que se estabelecem entre fatores ambientais e genoma; A clula tem capacidade para reparar anomalias que afetam o DNA mas algumas persistem e alteram o genoma; O genoma dos indivduos, em circunstncias diversas, sofre alteraes chamadas mutaes; As mutaes ocorrem frequentemente de fora espontnea, como resultado de ao de agentes mutagnicos internos ou externos a organismo.

Estruturais

Numricas

Mutaes Gnicas Uma alterao a nvel dos genes, deve-se substituio de nucletidos (exemplos: anemia falciforme e fenilcetonria); Noutros casos a molcula de DNA perde (deleo) ou ganha (insero) um nucletido, alterando-se por completo a mensagem a partir do codo onde ocorreu a mutao.

Tipos de Mutaes

Efeitos das mutaes O efeito de uma mutao imprevisvel ; Pode ser benfica se conduzir a uma caracterstica vantajosa. Noutros casos prejudicial, alterando o funcionamento da clula conduzido sua morte;

Frequentemente, o seu efeito neutro, dada a redundncia do cdigo gentico, no provocando modificaes na sequncia de aminocidos da protena (mutao silenciosa); O novo aminocido pode apresentar propriedades similares do aminocido substitudo ou, ainda, a substituio ocorrer numa zona da protena no determinante para a sua funo.

Causas das mutaes As mutaes podem ocorrer espontaneamente na Natureza ou serem induzidas, por exposio a determinadas radiaes (X, gama, csmicos, UV, radioatividade) ou substncia qumicas (nitrosaminas, colquicina, gs mostarda); Na superfcie do planeta existem fontes naturais de radiao (raios solares, raios csmicos e a radioactividade dos minerais) da baixa intensidade; No DNA mitocondrial e em bactrias e vrus no h mecanismos de reparao pelo que a taxa de mtao muito superior.

Mutaes relacionadas com a descendncia Em clulas somticas a mutao pode originar um clone de clulas mutantes, com possveis efeitos na vida do individuo, mas no afeta a sua descendncia por no ser transmitida sexualmente. Em clulas gamticas a mutao pode ser transmitida aos descendentes estando presente em todas as suas clulas.

Mutaes cromossmicas Podem ocorrer quer em autossomas quer em cromossomas sexuais, desencadeando um conjunto de sintomas, globalmente designado por sndroma.

Mutaes cromossmicas estruturais

Deleo perda de material cromossmico, originando falta de genes no centro ou na extremidade do cromossoma.

Duplicao Adio de um segmento cromossmico resultante de cromossoma homlogo. Desta forma, um conjunto de genes 7 surge em duplicado.

Inverso Inverso da ordem dos genes resultante da soldadura em posio invertida de um segmento cromossmico.

Translocao simples transferncia de material de um cromossoma para outro no homlogo.

Translocao recproca troca de segmentos entre dois cromossomas no homlogos.

Translocao Simples

sobretudo a rutura da estrutura linear dos cromossomas, durante ao crossing over, seguida de uma reparao deficiente, que determina o aparecimento de alteraes estruturais.

Mutaes cromossmicas numricas Euploidia o caritipo apresenta o nmero normal de cromossomas; Aneuploidia o caritipo, num determinado par de homlogos, apresenta anomalias, por excesso ou or defeito, no nmero de cromossomas: o Trissomia o individuo apresenta no um par de homlogos mos trs cromossomas (2n+1); o Monossomia para um determinado par, o indivduo possui apenas um cromossoma (2n-1); o Nulissomia em casos muito raros pode no existir nenhum cromossoma de um determinado (2n-2). Poliploidia todo o conjunto de cromossomas fica multiplicado. Durante a meiose pode ocorrer quer uma no disjuno de homlogos na diviso I, quer uma no disjuno de cromatdeos na diviso II; De ambos os casos resultam clulas com excesso ou com dfice de cromossomas; Grande parte dos embries que resultam de gmetas com anomalias cromossmicas numricas aborta espontaneamente. Outros sobrevivem.

Aneuploidias heterossmicas (cromossomas sexuais)

Poliploidias As mutaes cromossmicas numricas conduzem frequentemente ao aparecimento de indivduos poliploides (3n, 4n, ); Nestes indivduos existe um nmero de conjuntos completos de cromossomas que mltiplo do nmero haploide primitivo existente nos gmetas.

Aparecimento de poliploides

Causas da poliploidia: No disjuno de cromossomas durante a mitose ou meiose; Disjuno dos cromossomas mas inexistncia de citocinese.

Efeitos da poliploidia:

A poliploidia pode conduzir formao de novas espcies; estima-se que as maiorias das espcies de plantas atuais sejam poliploides; As espcies poliploides apresentam vrios conjuntos cromossmicos das espcies de onde provieram, apresentando vantagens adaptativas.

Oncogenes Proto oncogene: genes normais que estimulam a diviso celular, estando implicados na regulao da proliferao e da diferenciao celular; Oncogene: sequncia de DNA resultantes da alterao quantitativa ou qualitativa (mutaes) de proto oncogene em oncogene e que podem conduzir formao de um tumor (cancro); A mutao de um proto oncogene em oncogene resulta da exposio a agentes mutagnicos. Genes supressores do cancro: tal como os proto oncogenes esto envolvidos na diviso das clulas mas as protenas a que do origem contrariam o estmulo proliferativo das proto oncogenes atravs de uma ao inibidora. o Quando estes genes sofrem uma mutao perdem a capacidade de realizar este controlo e a diviso celular realiza-se de forma descontrolada, originando um cancro.

Aparecimento do cancro Todos os cancros so genticos na medida em que resultam de alteraes do DNA mas os cancros hereditrios so raros. Neste caso a alterao gentica est presente em todas as clulas do individuo e manifesta-se muito cedo. A maioria dos cancros, so espordicos e surgem como resultado de mutaes somticas que resultam da interao entre o genoma do individuo e o ambiente (vrus, bactrias, hormonas, fumo do tabaco, radiaes solares poluio do ar, produtos qumicos, ). Consoante o cancro, varia a importncia da componente gentica em relao ambiental.

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Enzimas de restrio Tambm chamadas endonucleases de restrio. Cortam a hlice dupla de DNA em zonas especficas, sempre que as encontram. So enzimas bacterianas, que as defendem dos ataques dos bacterifagos. o Algumas bactrias possuem um sistema de defesa especializada contra este tipo de vrus enzimas de restrio; Estas enzimas cortam o DNA dos bacterifagos, destruindo-o.

Extremidade romba a direito; Extremidade coesiva desvio. Cada enzima tem uma determinada reconhecimento, designada palindrmicas. DNA ligase Quando as extremidades coesivas so compatveis estabelecem-se pontes de H entre si. DNA ligase catalisa a formao de ligaes fosfodiester, de modo a unir vrios nucletidos. DNA polimerase Permite a replicao do DNA; Precisa de uma cadeia molde; Precisa de um fragmento iniciador (primer) para ter uma extremidade 3 livre; Adiciona nucletidos no sentido 53 ; Retirada da Thermus aquaticus (bactria que vive em fontes termais); Est adaptado a altas temperaturas, pelo que todas as suas protenas tm T timas elevadas; No desnatura aos 90C. sequncia de

Transcriptase reversa Foram retiradas de retrovrus, que convertem o seu material gentico (RNA) em DNA quando infetam o hospedeiro; L uma sequncia de mRNA e sintetiza uma cadeia de DNA complementar; Permite obter uma molcula de DNA sem intres.

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Vetores Na transferncia de genes necessria a existncia de um transportador, isto , um vetor que leva o material gentico de um genoma para outro. H diversos tipo de vetores sendo os plasmdeos das bactrias dos mais utilizados. Plasmdeos Servem de veculo para introduzir DNA estranho em clulas vives. So molculas circulares de DNA de cadeia dupla existentes nas bactrias. Podem replicar-se de forma independente do DNA bacteriano. Bacterifagos Servem de veculo para introduzir DNA estranho em clulas vivas. So vrus que atacam bactrias. Permite introduzir fragmentos de DNA maiores. DNA recombinante Nova molcula de DNA formada artificialmente pela recombinao de duas ou mais sequncias de DNA de diferentes origens. DNA complementar DNA sinttico que produzido a partir de um mRNA pela atividade transcriptase reversa. Tcnicas de Engenharia Gentica DNA recombinante 1. Isola-se DNA de dois organismos (clula humana e plasmdeo de bactria); O DNA de cada organismos fragmentado pela mesma enzima de restrio; Extremidades coesivas de duas molculas de DNA; A poro de DNA humano e o DNA do plasmdeo, com as extremidades livres, so postos em contato; Adicionam-se ligase de DNA; O plasmdeo com DNA recombinante entra para algumas bactrias; As bactrias crescem num meio seletivo. Se por exemplo, o plasmdeo possuir naturalmente um gene que lhe confere resistncia a um determinado antibitico. Das bactrias que forem cultivadas num meio com esse antibitico, s as que tm o plasmdeo recombinante se reproduzem, formando colnias; Bactrias tendo cada uma delas cpias do gene humano. 12

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A tcnica do DNA recombinante permite produzir molculas de DNA a partir da combinao de genes com provenincias diferentes; possvel introduzir um gene humano em bactrias para que estas produzam, em larga escala, uma determinada protena humana; Alm disso, o gene com interesse clonado permitindo a duas conservao em diversas cpias para posteriores utilizaes bibliotecas de genes.

DNA complementar 1. Uma molcula de mRNA posta em contacto com a enzima transcriptase reversa; 2. A enzima transcriptase reversa vai catalisar a formao de uma cadeia simples de DNA (molcula hbrida de DNA e mRNA); 3. Quando a sntese da cadeia simples de DNA se completa, o mRNA removido, degradando-se; 4. Promove a replicao do DNA. Vantagens: O mRNA usado uma molcula madura: s/ intres O DNA isolado logo funcional; Utilizao do gene est mais facilitado. - Este DNA obtido a partir do mRNA por complementaridade de bases, um mRNA que j sofreu processamento (s/ intres); - A produo de cDNA possvel por ao da enzima transcriptase reversa. O mRNA funciona como molde para a sntese de uma cadeia de DNA, um processo inverso do que se passa habitualmente na transcrio; - Aps a formao da primeira cadeia de cDNA, a DNA polimerase forma a cadeia complementar, constituindo-se um molcula estvel. - A comparao entre o cDNA (sem intres) e o DNA original, permite localizar as regies codificantes (exes) e as no codificantes (intres) de um determinado gene; - O cDNA facilita a produo de protenas de seres eucariontes em bactrias uma vez que estas no possuem mecanismos de processamento do mRNA, isto em presena de um DNA original transcreveriam todo o gene, incluindo os intres, obtendo-se protenas diferentes das pretendidas; - Ao ser inserido um clone de cDNA garante-se a produo de protena normal.

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Biblioteca Genmica Extrair todo o genoma de um organismo; Cortar com enzimas de restrio; Inserir os fragmentos num vetor; Trsnformar bactrias com esses vetores; Conservar as culturas bacterianas de modo a armazenar o DNA por longos perodos de tempo.

Biblioteca de DNA complementar O processo idntico, mas em vez de utilizarmos todo o genoma do organismo, extramos o mRNA e usando uma transcriptase reversa sintetizamos cDNA.

Reaes de polimerizao em cadeia (PCR) 1. Dupla hlice de DNA a ser copiada. A esta molcula, adicionam-se primers, nucletidos livre e DNA polimerase resistente ao calor. Os primers so oligonucleidos sintticos de DNA de cadeia simples (10 a 30 bases) que se vo ligar ao DNA em pontos especficos, delimitando a zona a copiar; 2. Por aquecimento separam-se as cadeias de DNA; 3. Por arrefecimento alguns primers ligam-se a zonas especficas de cadeia simples de DNA; 4. A partir dos primers reconstitui-se a dupla hlice de DNA, uma vez que o DNA polimerase reconhece os primers como locais de iniciao de sntese.

Electroforese Tcnica utilizada para separar fragmentos de DNA de diferentes tamanhos, com a ajuda de um campo eltrico; As amostras de DNA so carregadas nos poos de um gel de agarose. DNA fingerprinting o Cada indivduo possui o seu prprio DNA, que nico. No seio do DNA encontram-se zonas de restriosequencias repetitivas ao 14

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longo da molcula cujo nmero, tamanho e localizao so variveis de individuo para individuo; Submetido s enzimas de restrio o DNA fragmenta-se em pores de diferentes tamanhos e pesos moleculares; Estes pedaos de DNA, sujeitos a eletroforese, revelam um padro de fragmentos de restrio que nico para cada individuo, funcionando como um cdigo de barras gentico.

Aplicaes: o o Forense; Testes de paternidade;

Organismos geneticamente modificados A manipulao gentica, iniciada em microrganismos, alargou-se a outros seres vivos vulgarmente animais e plantas; Designam-se organismos geneticamente modificados (OGM) ou transgnicos, aqueles cujo genoma foi manipulado, apresentando diferenas relativamente sua constituio original. A manipulao gentica permite obter de forma rpida, organismos com caractersticas vantajosas (ex. plantas mais resistentes a doenas, a herbicidas, ao calor, seca, geada, com menos necessidade de adubos, com frutos maiores, com paladares novos, mais nutritivos, produzindo frmacos, etc.) Os OGM levantam reservas no s em termos d perturbao ambiental. No seguro que os OGM atravs da reproduo, no disseminem genes manipulados, alterando o equilbrio das populaes naturais.

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