O Dogma Central da Biologia Molecular

FLUXO DA INFORMAO GENTICA

DNA
Transcrio

mRNA
Traduo

Polipeptdeo

(Controle do fentipo: expresso gnica)

Replicao (Perpetuao da informao gentica de gerao a gerao)

DNA

Estrutura do DNA

A Dupla Hlice (1953)

Trs hipteses

A Replicao do DNA conservativa semiconservativa ou dispersa?

J.H. Taylor, P. Woods & W.Huges, 1957: a replicao semiconservativa em Vicia faba

Matthew Meselson & Franklin Stahl, 1958: a replicao semiconservativa em E. coli

Meselson M & Stahl F W. The replication of DNA in Escherichia coli. Proc. Nat. Acad. Sci. US 44:671-82, 1958.

Istopo pesado

Nitrognio (leve)

Visualizao das forquilhas de replicao por auto-radiografia

Cairns J. The bacterial chromosome and its manner of replication as seen by autoradiography. J. Mol. Biol. 6:208-13, 1963.

John Cairns evidenciou por auto-radiografias a presena de "olhos" ou "bolhas de replicao" nos cromossomos circulares de bactrias crescidas em meio de cultura contendo [3H] - timidina.

Interpretao: A replicao semiconservativa do cromossomo de E. coli comea em um stio especfico, a origem, e continua sequencialmente e unidirecionalmente ao redor da estrutura circular.

Visualizao das forquilhas de replicao por auto-radiografia

A replicao do DNA bidirecional

MILLICENT MASTERS & PAUL BRODA. Evidence for the Bidirectional Replication of the Escherichia coli Chromosome. Nature New Biology 232, 137-140, 1971.

Origens aleatrias ou especficas de replicao? oriC: a origem nica de replicao em E. coli oriC

Cada origem controla a replicao de uma unidade de DNA chamada rplicon

Replicao do DNA

Replicao em procariotos Iniciao Alongamento ou extenso Trmino

Replicao em procariotos

Iniciao Origem de replicao reconhecida por um complexo de protenas (Primossomo). Quebra de pareamento de bases DNA helicase Forquilha de Replicao. Origem nica de replicao (oriC) bidirecional. oriC ligao da protena de iniciao DnaA catlise de dois hexmeros da helicase replicativa DnaB - desnaturao da hlice SSBs se ligam as fitas simples desligamento da DnaC (inibidora) transmigrao da DnaB na direo 5->3, e sntese de oligonucleotdeos iniciadores (primers) atravs de interao com a primase DnaG combinao da DNA polimerase III com a DnaB = primossomo completo >>> incio da fase de extenso.

Pr-priming de replicao do DNA em oriC no cromossomo de E. coli

Bolha de replicao

forquilhas de replicao

Replicao em procariotos

Extenso Sntese do DNA a partir da DNA polimerase III. Necessidade de iniciadores (primers) para comear a sntese da novo fita de DNA a partir da fita molde - DNA polimerase catalisa a reao de desidratao entre hidroxila do carbono 3 e fosfato do carbono 5 (ligao fosfodister). Sem hidroxila 3 no h sntese de DNA. Catlise da reao exclusivamente da direo de leitura 5 -> 3. Uma das fitas sintetizada continuamente (fita lder), enquanto a outra o de maneira descontnua (atrasada ou no-lder) formao dos fragmentos de Okasaki.

Polimerases de E. coli

DNA pol I

Funo Polimerizao 5-3 Exonuclease 3-5 (reviso) Exonuclease 5-3 (retirada de primers e reparo de DNA) Reparo do DNA Polimerizao 5-3 Exonuclease 3-5 (reviso) Replicao do DNA Exonuclease 3-5 (reviso) Replicao do DNA danificado Replicao do DNA danificado

II

III IV V

DNA-polimerase I (E. coli)

Polimerase uma enzima que catalisa a reao de polimerizao de cidos nucleicos a partir dos seus monmeros. As polimerases mais comuns so a RNA polimerase e a DNA polimerase.

DNA-polimerase III: a replicase em E. coli

DNA Polimerase III - a principal enzima na sntese do DNA. A DNA polimerase III um complexo enzimtico, formado por mais de uma cadeia polipeptdica. Cada subunidade desempenha uma funo especfica na replicao do DNA, sendo as mais importantes a polimerizao dos nucleotdeos, monmeros do DNA, e a atividade revisora - exonuclesica.

Funes das DNA-polimerases

Pol I desempenha 3 atividades enzimticas: Atividade de polimerizao 5'->3' requer uma extremidade 3' livre (primer) e uma fita molde. Atividade exonuclesica 3'->5' (edio ou reviso) Atividade exonuclesica 5'->3' (nick translation) no reparo de DNA e na retirada de primers.

Primase e sntese da fita descontnua

Fragmentos de Okazaki
Fragmentos de Okazaki: so fragmentos originados da replicao descontnua (sentido contrrio replicaco).

TUNEKO OKAZAKI

Fragmentos de Okazaki e sua unio pela DNA ligase

ligase I, DNA, dependente de ATP

DNA ligase a enzima que une os fragmentos de Okazaki, aps a retirada dos iniciadores (ou primers) pela enzima primase.

Helicase e protenas de ligao ao DNA fita simples (SSB)

A helicase uma enzima que quebra as pontes de hidrognio entre as bases das cadeias de DNA, fazendo com que estas se separem. Esta enzima move-se ao longo da cadeia dupla utilizando energia da hidrlise de ATP para separar as duas cadeias da molcula.

Single stranded binding proteins ou SSB so protenas que impedem um novo pareamento do DNA aps a sepearao da dupla hlice, feito pela enzima helicase.

Ao funcionarem durante o processo de replicao do DNA, as helicases recebem "ajuda" de umas protenas chamadas de DNA-girases (ou topoisomerases), que desenrolam a cadeia, diminuindo a tenso medida que as helicases avanam, f acilitando assim o seu trabalho.

Topoisomerases (DNA girase)

necessrio que a fita de DNA seja desenrolada, para evitar superelicoidizao. Tipo I passa a fita no quebrada por dentro da outra Tipo II quebra ambas fitas e passa um fragmento da hlice

Gentica Molecular

Replicao do DNA

Replicao em procariotos

Replicao em procariotos

Trmino Reconhecimento de sequncias consenso e ligao da protena Tus atividade contra-helicase inibio da abertura da fita de DNA interrupo do movimento da forquilha de replicao. DNA ligase une as duas extremidades das foquilhas quando se encontram.

Mltiplas origens de replicao em cromossomos eucariticos Forquilhas de replicao progridem por sequncias curtas.

Trmino da replicao em eucariotos: Forquilha de replicao alcana a extremidade da molcula parental ou uma outra forquilha de replicao na direo oposta.

Replicao em eucariotos
- Deselicoidizao: DNA helicase e DNA topoisomerase - Protena de ligao ao DNA unifilamentar: ptna A de replicao (Rp-A) - Replissomo (27 componentes): duas ou trs polimerases (Pol , Pol e Pol ) em uma forquilha de replicao - Primase parte constitucional da DNA polimerase - Eucariotos possuem cinco tipos de DNA polimerases - Nucleases retiram os primers: ribonuclease H1 (dplices RNA-DNA) e F1 - Pol preenche os espaos e ligase fecha os cortes

DNA pol , e

Funo Replicao do DNA nuclear (fita descontnua) Reparo do DNA Replicao do DNA mitocondrial Replicao do DNA nuclear (fita contnua) Exonuclease 3-5 (reviso) Reparo do DNA e replicao (?) Exonuclease 3-5

Replicao em eucariotos

Duas ou mais polimerases em uma nica forquilha de replicao

PCNA (Rf-C ativa o grampo permitindo que PCNa circule o DNA)

Replicao em eucariotos
Encurtamento da molcula de DNA durante sucessivas replicaes. A extremidade 3da fita no-lider pode no ser copiada porque o fragmento de Okasaki final no pode receber um primer. fita no-lder menor do que a fita molde o que resultar ao longo de geraes de replicao em molculas-filhas menores do que a molcula-me. Telmeros: sequncias de DNA minisatlites in tandem que ficam nas extremidades dos cromossomos. Atividade da telomerase compensa o encurtamento da molcula de DNA atravs da manuteno do tamanho do telmero por meio de adio de sequncia repetidas.

Replicao em eucariotos: Telomerase Telomerase uma enzima descoberta por Elizabeth Helen Blackburn e Carol Greider, que tem como funo adicionar sequncias especficas e repetitivas de DNA extremidade 3' dos cromossomos, onde se encontra o telmero. Esta enzima uma transcriptase reversa, tendo na sua estrutura um modelo em RNA que utiliza para sintetizar o DNA telomrico, em eucariotos.

Duplicao de nucleossomos nas forquilhas de replicao

Cromatina = DNA e Protenas associadas (Histonas e no-Histonas). As histonas tm um papel estrutural importante (H1, H2a,H2b, H3 e H4) no empacotamento do DNA nos cromossomos

Replicao do DNA

Replicao: ao ou processo de duplicao ou reproduo. Uma entidade original d origem a cpias com propriedades semelhantes. Ocorre na fase S da interfase