Anlisis de Alimentos

Minerales en Alimentos

Laboratorio 07 DETERMINACIN DE HIERRO (A.O.A.C. 1998.method 944.02)

I.

OBJETIVO -

Cuantificar la cantidad de hierro en harinas, pan, etc.

II.

FUNDAMENTO

La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+, originando un complejo de color rojo caracterstico (ferrona) que absorbe notablemente en las regiones del espectro visible de alrededor de 505 nm. El Fe3+ no presenta absorcin a esa longitud de onda y debe ser reducido a Fe2+ mediante un agente reductor apropiado, como la hidroxilamina, (en forma de clorato para incrementar su solubilidad) (Boumans et al., 1997). Un mtodo excelente y muy sensible para la determinacin del hierro se basa en la formacin de un complejo rojo-naranja de hierro (II) con o-fenantrolina. La ofenantrolina es una base dbil; en disolucin cida, la principal especie es el in fenantrolina PhH +. Reduccin de Fe3+ a Fe2+ La reduccin cuantitativa de Fe3+ a Fe2+ ocurre en pocos minutos en un medio cido (pH 3-4) de acuerdo a la siguiente ecuacin:

4Fe3 2NH2OH 4Fe2 N 2O 4H H 2O

Hidroxilamina Complejacin Despus de la reduccin del Fe3+ a Fe2+, se da la formacin de un complejo con la adicin de ortofenantrolina. En un medio acido la ortofenantrolina se encuentra en su forma protonada como ion 1,1 0-fenantrolin (FenH+). La reaccin de complejacin puede ser descrita por la siguiente ecuacin: (La estructura qumica del complejo se muestra en la Figura 1)

Fe 2 3FenH 4Fe(Fen)3 3H
3

O-fenaltrolina

color rojo caracterstico (ferrona)

Figura 1: Estructura qumica de la ferrona. Consiste en 3 molculas de OP (ortofenantrolina) alrededor de un tomo central de Fe. Los tomos de carbono de la ferrona estn representados con sombras grises. Los tomos de N estn representados en blanco.
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III.

MATERIALES Y METODOS

2.1 Materiales Fiola de 1 L (1) Fiola de 500 mL (1) Fiola de 100 mL (10) Fiola de 25 mL (10) Pipeta de 1 mL, 5 mL, 10 mL (1 c/u) Crisoles de porcelana (10) Probeta de 10 mL Bombilla de extraccin (1) Vaso de 150 ml (10) Luna de reloj

2.2 Equipos Espectrofotmetro Balanza analtica Muffla Bao mara Cocinilla de calentamiento Cabina de extraccin

2.3 Reactivos a) Solucin de o-fenantrolina.- Disolver 0,1 g de o- fenantrolina en 80 ml de agua a 80C, enfriar y enrazar a 100 mL en una fiola de 100 mL. Guardar en frasco oscuro en refrigeracin por una semana como mximo. b) Solucin estndar de hierro. Disolver 3,512 g de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O en agua, adicionar 2 gotas de HCl concentrado, y enrazar a 500 mL en una fiola de 500 mL. Diluir 10 mL de esta solucin a 1 Litro. Calculations: Formula: Fe.(NH4)2.(SO4)2.6H2O Molar Mass: 392.118 g/mol Percent composition (by mass): Element count Atom Mass %(by mass) Fe 1 55.84 14.24% c) Solucin de clorhidrato de hidroxilamina (H2NOH.HCl).- disolver 10 g de (H2NOH.HCl) en agua en una fiola de 100 mL. d) Solucin buffer acetato.- Disolver 8,3 g de NaC2H3O2 anhidro (previamente secado a 100C) en agua, adicionar 12 mL de cido actico y diluir a 100 mL con agua. e) f) Solucin de acetato de sodio. 2M.- Disolver 272 g de NaC2H3O2.3H2O en agua y llevar a 1 Litro en una fiola. Solucin buffer, pH 3,5.- Disolver 6,4 mL de solucin 2M de NaC2H3O2, y 93,6 mL de 2M de HC2H3O2 (120 g/L) a 1 litro con agua.

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2.4

Preparacin de curva estandar Construccin De curva estndar con 10 puntos ms cero.

1. 2. 3.

Preparar soluciones conteniendo: 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 45 mL respectivamente a partir de la solucin standar final (Figura 2). Agregar 2 mL de HCl y llevar a 100 mL con agua en una fiola de 100 mL a cada solucin. Tomar 10 mL de cada uno de las soluciones en fiolas de 25 mL, agregar 1 mL de H2NOH.HCl, dejar reposar por 5 minutos y luego adicionar 5 mL de buffer acetato, 1 mL de O- fenantrolina y luego enrazar a 25 mL con agua. Leer la Absorvancia a 510 nm. Construir la curva patrn (Abs vs mg de Fe/ 25 mL) Hacer la regresin lineal por los puntos pasando por el origen y hallar la ecuacin matemtica

4. 5. 6.

A partir de 3512 mg de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O = 500.13 mg Fe

Fe=

55.84 X X= Fe mg 500 10 10

Fe(NH4)2.6H2O Fe(NH4)2.6H2O 0.5001303 Solucion 500 10 1000 mL

10 0.1 10 0.010 25 0.010 0.081

392.118 3.512

2 mL 0.02 mg 10 mL mg/10 mL 0.002 mL mg/25 25 mL Abs 0.002 0.023

5 0.05 10 0.005 25 0.005 0.042

15 0.15 10 0.015 25 0.015 0.138

20 0.2 10 0.020 25 0.020 0.185

25 0.25 10 0.025 25 0.025 0.229

30 0.3 10 0.030 25 0.030 0.278

40 0.4 10 0.040 25 0.040 0.40

45 0.45 10 0.045 25 0.045 0.46

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2.5 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Determinacin de Fe en muestra Pesar 5 g de muestra en crisoles de porcelana o platino. Llevar a incineracin en mufla a 600C hasta color blanco plomizo (2 horas o ms). Enfriar y retirar el crisol de la mufla. Adicionar 2 mL HCl concentrado, permitir que el cido cubra la porcin de la ceniza Evaporar hasta secar en bao mara, tapando en una de luna de reloj. Disolver el residuo por adicin de 1 mL de HCl, 3 mL de agua medida precisa, disolver con una varilla de vidrio y calentar 5 minutos. Transferir lavando la luna de reloj a una fiola de 100 mL y diluir el residuo a 100 mL con agua. (si es necesario disolver las partculas visibles en el residuo de la solucin). Luego filtrar el residuo si es necesario la solucin a travs de papel filtro y descartar los primeros 15 20 mL del filtrado. Pipetear 10 mL de la alcuota en una fiola de 25 mL. Adicionar 1 mL de solucin clorhidrato de hidroxilamina reposar por 5 minutos H2NOH.HCl(d),

8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. IV. V. VI.

Adicionar 5 mL de solucin buffer (f) y 1 mL de O- fenantrolina (a) y diluir hasta el volumen de 25 mL enrazndolo con agua. Leer la absorvancia en un espectrofotmetro a 510 nm. Determinar la concentracin de hierro en el grfico en la ecuacin de regresin lineal obtenida en el grfico. Calcular Fe en la harina como mg/ 100g. RESULTADOS Y DISCUSIONES CONCLUSIONES BIBLIOGRAFA MTODOS OF ANALYSIS OF THE AOAC. 1998.13 th ed. Washington, D.C. the Association

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5 g de muestra

Encinera a 600C Ceniza fra 5 mL HCl

Evaporar en B.M. hasta secar 2 mL de HCl

Calentar 5 minutos sobre bao de vapor tapando en una de luna de reloj

Trasnferir a una fiola de 100 mL

Enrazar con agua

100 mL

Filtrar y eliminar los 10 - 15ml primeros filtrados Filtrado Pipetear 10 mL de la alcuota en una fiola de 25 mL Adicionar 1 mL de solucin H2NOH.HCl, reposar por 5 minutos Adicionar 5 mL de solucin buffer (f) y 1 mL de O- fenantrolina (a) Enrazar con agua hasta 25 mL Leer la absorvancia en un espectrofotmetro a 510 nm.

25 mL

Figura 1: Flujo para cuantificacin de hierro en la muestra

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Anlisis de Alimentos 2 gotas de HCl, 3,512 g de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O

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Fe = 0,50155 g
500 mL

Enrazar a 500 mL con agua

Tomar 10 mL

agua

1 Litro

2 mL
+ 2 mL HCl Agua

5 mL
+ 2 mL HCl Agua

10 mL
+ 2 mL HCl Agua

15 mL
+ 2 mL HCl Agua

20 mL
+ 2 mL HCl Agua

25 mL
+ 2 mL HCl Agua

30 mL
+ 2 mL HCl Agua

35 mL
+ 2 mL HCl Agua

40 mL
+ 2 mL HCl Agua

45 mL
+ 2 mL HCl Agua

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

100 mL

10mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

10 mL + 1 mL H2NOH.HCl

25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL

Reposar 5 minutos

Adicionar a cada uno 5 mL de buffer acetato Adicionar 1 mL de O- fenantrolina Enrazar a 25 mL con agua Leer la ABS a 510 nm

Figura 2: Diagrama para la construccin de la curva standart con Hierro del Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O

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Ejercicio resuelto: se desea determinar la cantidad de hierro en una muestra de papapan fortificado, para ello se peso 5 g de pan y se llev a incineracin hasta obtener ceniza, esta ceniza es tratada de acuerdo a la metodologa estudiada y obtenindose una Lectura de Abs. =0,435. De acuerdo a las especificaciones el pan deber temer 5 mg de hierro por 75 g de pan, se cumple o no con las especificaciones dadas?. Solucin: La funcin de la curva patrn de abs. En funcin de la concentracin de fe (mg/25 ml alcuota) es: Abs. = 9,763 X(mg Fe/ 25 ml alcuota )

0,435 0,045 mg Fe/25 mL alicuota 9,763

Calculo de hierro en los 10 mL de solucin Haciendo balance de masa para hierro entre 10 mL de solucin

mg 0,045 mg
Calculo de hierro en los 100 mL

0,045 mg 10 mL
X 100 mL 5 g muestra X = 0,45 mg Calculo para los 75 g de pan 0,45 mg 5 g muestra Y ..75 g muestra Y = 6,75 mg X = 6.75 mg Fe / 75 g de pan Conclusin Resultado obtenido en el laboratorio fue de 6,75 mg Fe/75g de pan, que es superior al lmite de 5 mg/75 g de papapan fortificado, el contenido de hierro se encuentra dentro del rango establecido, el cual cumple con los requisitos establecidos.

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LAB. N 07 TEMA: DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE HIERRO EN ALIMENTOS CURSO: ANALISIS DE ALIMENTO GRUPOS: MARTES, JUEVES Y VIERNES FECHA: 01 al 5 de noviembre del 2011

MATERIALES Fiola de 1000 mL Fiola de 500 mL Fiola de 100 mL Fiola de 25 mL Pipeta de 1 mL Pipeta de 5 mL pipeta de 10 mL vaso de 150 mL soporte para embudo Embudo de vidrio Luna de reloj vagueta papel tisue bombilla de succion

cantidad 1 1 10 10 2 2 2 3 1 2 3 1 1

REACTIVOS Fe.(NH4)2.(SO4)2.6H2O acido clorhidrico O- Fenantrolina Clorhidrato de hidroxilamina (H2NOH.HCl)

Acetato de sodio (NaC2H3O2)

acido acetico EQUIPOS A USAR Balanza Espectrofotometro

Ing. Alberto HUAMANI HUAMANI

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