UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA Biologia do Desenvolvimento

TALIDOMIDA DEFEITOS NO DESENVOLVIMENTO DOS MEMBROS

Discentes: Ariany Rosa Eduardo Ferreira Pimenta Gustavo Bergoli Marcos Vinicios Borges galdino Max williams Vanessa Miranda

Docentes: Thiago e Simone Saboia

Dezembro, 2012

Sumrio

INTRODUO .......................................................................................................... 3

MECANISMOS MOLECULARES DE AO DA TALIDOMIDA ................................ 4

EFEITOS TERATOGNICOS DA TALIDOMIDA ...................................................... 9

USO DA TALIDOMIDA NO TRATAMENTO DE DOENAS .................................... 11

CONCLUSO ........................................................................................................... 13

BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................... 14

INTRODUO A talidomida um frmaco produzido e comercializado nos anos 50 pela empresa farmacutica alem Grunenthal, inicialmente era utilizada como sedativo e posteriormente foi empregada em tratamentos de desordens psquicas, diminuio de anorexia em tuberculosos, lpus, artrite reumatoide, tambm foi altamente empregada em gestantes como antiemitico (OLIVEIRA; BERMUDEZ; SOUZA, 1999; FRANKS; MACPHERSON; FIGG, 2004). Estudos realizados em camundongos no demosntraram efeitos adversos na administrao da droga, nem mesmo foi encontrado uma dose letal. Por conta disso, a droga foi distribuda em mais de 40 pases, mas nos Estados Unidos ela foi impedida de ser comercializada pela FDA (Food and drugs Administration), pois no se tinha comprovaes de sua toxicidade, surgimento de casos de dormncia em mos e ps de pacientes com uso prolongado e baixo conhecimento de seu metabolismo (BERWANGER; COSTA; PEREZ, 2001; MOOS et al., 2003.). A talidomida foi retirada do mercado nos anos 60 quando os primeiros casos de neuropatias apareceram. Alm disso, mais tarde mais de 10 mil recm nascidos na europa foram diagnosticados com um tipo peculiar de m-formao congnita, caracterizada pelo desenvolvimento defeituoso de ossos longos denominada de focomelia (OLIVEIRA BERMUDEZ; SOUZA, 1999). Outros relatos de m formaes como ausncia de orelhas, surdez, defeitos na face e palato e do trato gastro intestinal tambm foram diagnosticados como sendo causados pela ingesto da talidomida pelas mes gestantes (POLITI, 2000; BERWANGER; COSTA; PERES, 2001). Nos ltimos anos, milhares de papers foram publicados acerca dos efeitos teratognicos da Talidomida (HP, KOCH; STEPHEANS, TD, 1990 ) (http://www.nlm.nih.gov/pubs/cbm/thalidomide.html), aps o incidente na europa a administrao deste frmaco que era vendido sem receita mdica passou a ser restrito e seu preo elevado. Muitos experimentos comearam a ser realizados utilizando-se macacos, coelhos, camundongos e Zebrafish. Resultados demonstraram baixa toxicidade em camundongos devida baixa solubilidade do medicamento no soro dos ratos (SCIALLI, 1992), enquanto que nos outros modelos

foram achados diversos efeitos colaterais (NEUBERT; MERKER; NEUBERT, 1999; BERWANGER; COSTA; PERES, 2001). Estudos realizados em embries principalmente de Zebrafish, que por sua transparencia permite a visualizao de m formaes, mostrou que entre o 36 e 50 dia de desenvolvimento (realizada a transposio para cada espcie, neste caso humano) o perodo crucial de ao teratognica da Talidomida. Tambm est associado uma especificidade da talidomida h alguns tipos de tecidos e rgos, visto sua ao em determinados sistemas em detrimento de outros, como por exemplo o corao que afetado enquanto o sistema nervoso permanece intacto (NEUBERT; MERKER; NEUBERT, 1999). Um estudo realizado em meados de 1964 demonstrou um forte e eficiente efeito teraputico da talidomida em pacientes portadores de eritrema nodoso da hansenase, sendo portanto mais tarde a talidomida reconhecida pela Organizao Mundial da Sade como medicamento para tratamento da hansenase (TEO; STIRLING; ZELDIS, 2005). talidomida usada como antiinflmatrio, Outros estudos foram ento relizados e hoje a agente e teraputico por possuir alto potencial MULLER; antiangiognico (MARRIOT;

imunomodulador

DALGLEISH, 1999; CALABRESE; FLEISCHER, 2000; BORGES; FREHLICH, 2003; MOOS et al., 2003; KUMAR; WITZIG; RAJKUMAR, 2004.)

MECANISMOS MOLECULARES DE AO DA TALIDOMIDA A Talidomida ou N phthalimidoglutarimide um compsto derivado do cido glutmico formado por um sistema de dois anis: L phtalimide e R glutarimide com um carbono assimtrico, que possuem enantimeros que se interconvertem em diferentes condies fisiolgicas.

Figura

1.

Estrutura

da

Talidomida. 1- L phtalimide e 2 - R glutarimide

A talidomida administrada como uma mistura racmica (enantimeros S e + R)e estudos recentes tem investigado os efeitos individuais de cada enantimero. O enntiomero R tem sido relacionado com efeitos sedativos enquanto que respostas imunolgicas esto mais ligadas ao S (WINSTERSK, W.; et al., 1992). Anlises in vivo dessas questes so quase impossveis de serem realizadas visto que ao se ingerer a droga tanto por via oral como por via intravenosa, ocorre uma inverso quiral dos enntiomeros, tornando invivel a separao dos efeitos. Pelo menos 30 hipteses de mecanismos de ao da talidomida foram descritos na literatura. Quartoze destes foram classificados como incorretos, enquanto que outros foram aceitos por possurem suporte de dados, alguns outros ainda permanecem para serem testados e reavaliados segundo reviso feita por STEPHENS, 1988. ARGILES et al, 1998 sugeriu que o a teratogenicidade da talidomida est associada a atividade anti TNF, fator que promove a angiognese necessria na formao dos membros. Os mecanismos restantes de ao da talidomida foram agrupados em seis grandes grupos que se seguem:

1. Sntese ou transcrio de DNA 2. Fatores de crecimento

3. Integrinas

4. Angiognese 5. Condrognese 6. Injria ou morte celular programada

JNSSONS, 1992., elucidou que a talidomida quando possui um efeito no DNA, est associada a regies onde h uma falta de TATA e CCAAT boxes e maior incidncia de sequncias GC, sendo uma chave importante para o entendimento da embriopatia causada pela droga.

O desenvolvimento dos membros depende em parte de uma cascata de eventos que envolve fatores de crescimento como IGF (fator de crescimento ligado a insulia insuline-like growth factor) e FGF (Fator de crescimento de fibroblastos

fibroblast growth factor),principalmente o FGF1, estas citocinas estimulam a produo de protenas transmembranas integrais conhecidas como integrinas , principalmente as subunidades , v, e 3 que estimulam a angiognese para formao dos membros (TRENT D. STEPHENS; BRADLEY J. FILLMORE, 2000).

Figura 2 Representao esquemtica da IGF1. FGF2 --> Via de angiognese em modelo celular. IGF1: Fator de crescimento ligado insulina; FGF2: fator de crescimento de fibroblasto; IGFBP: proteina ligada ao fator de crecimento ligado insulina; IGFR: receptor de fator de crescimento ligado insulina; FGFR: recepetor de fator de crescimento de fibroblasto; IRS-1: Substrato 1 de receptor de fator de crescimento ligao insulina; SP-1: fator de transcrio especifico que se liga a GC boxes em regies especificas de genes promotores; v and 3: subunidades de heterodimero de integrina. IGF1 e FGF@ se ligam aos receptores gerando uma cascata de mensageiros secundrios intracelulares. Essa cascata resulta empromotores, tai como Sp1, ligando-

se a regies promotoras de genes alpha v beta 3. A transcrio desses genes e a subsequente traduo de seus RNAm resultaro em proteinas integrais que estimularo a angiognese. OS * demosntram a TATA-less e CCAAT*, GC-box (GGGCGG) genes promotores.

No existem ainda evidncias experimentais que suportem essa hiptese de teratogenicidade ligada sua especificidade ligada a regies promotoras ricas em GC, porm outras duas hipteses tem sido levantadas como a anti-angiognese e os modelos de estresse oxidativo. Estudos realizados por DAMATO, 1994., demosntraram que a talidomida impede a expresso de FGF2, por destruir o RNA responsvel por sua produo, este FGF est diretamente ligado relao angiognese/vasculognese em coelhos. ROS tem sido associada m-formao congnita em coelhos, sua produo desencadeada pelos produtos metablicos da talidomida, realizados no fgado e mediados pelo citocromo p450 (CYP) com produo de produtos hidroxilados. Enzimas CYP catalisam metabolismos oxidativos de diversos compostos xenobiticos (BAUER et al. 1998; ANDO et ak. 2002; HAKKOLA et al. 1998). Experimentos realizados por WELL et al e PARMAN A et al em 1999, e

mostraram que esses efeitos oxidativos foram encontrados em coelhos, porm no houve evidncias de mesmas respostas em ratos. expresso de FGF 8 FGF10 foram inibidas nesses animais expostos a talidomida, e reativados quando pre-tratados com uma substncia chamada phenyl N tert butylnitrone (PBN) (HANSEN et al, 2002). O FGF 8 extremamente importante no desenvolvimento dos membros e juntamente com o FGF10 tralham em um sistema de antagonismo, no controle da morte celular (expresso de BMPs) e angiognese (OHUCHI et al. 1997; LEWANDOSKI et al. 2000; MOON and CAPECCHI 2000; KNOBLOCH et al 2007).

A regulao positiva de BMPs (bone marrow proteins), bloqueia a sinalizao mediada por FGFs, Wnt e Akt (protena kinase B), estas, intimamente ligadas a proliferao celular (PAJNI-UNDERWOOD et al. 2007; KNOBLOCH and RTHER.

2008; KNOBLOCH et al, 2008). Em coelhos os ROS oxidam SH (sulfhydryl reduced) para GSSG (glutationa disulfdica), a qual incapaz de se ligar ao sitio de DNA da NF-B, suprimindo a expresso dos fatores de crescimento de fibroblastos (HANSEN, JM and HARRIS, C. 2004)

Figura oxidativo

por

Mecanismos estresse talidomida

envolvendo

Outro mecanismo de ao teratognico da talidomida a associao direta da talidomida com o CRBN (cereblon). O CRBN uma subunidade importante do complexo E3 ubiquitina ligase, responsvel em zebrafish e em alguns vertebrados,

juntamente com DDB1 e Cu14 como reguladores do desenvolvimento de nadadeiras e membros. Esta associao feita, pois a E3 ligase necessria para a expresso de FGF8, a talidomida por sua vez inibe a funo da E3 CRBN (TAKUMI ITO and HIROSHI HANDA, 2012). Em modelos animais foram encontrados mutantes de CRBN que so resistentes aos efeitos inibitrios da talidomida. espcies

Figura 4 a) Cereblon (CRBN) Normalmente funciona como um componente da E3 ubiquitina ligase para regular mltiplos processos do desenvolvimento atravs da ubiquitinizao de substratos desconhecidos. b) Talidomida ligada ao CRBN, inibindo dessa forma as funes da associao E3 ubiquitina ligase. Grande acumulao de substrate da ligase causa mltiplos defeitos no desenvolvimento, tais como baixo desenvolvimento ou ausncia de mebros, em parte atravs da inibio da expresso de Fgf8/Fgf10.

EFEITOS TERATOGNICOS DA TALIDOMIDA A exposio talidomida nas primeiras semanas de desenvolvimento embrionrio causa diversas problemas congnitos como a m-formao dos membros, ouvido interno e externo, olhos e rgos internos; houve oucos relatos de ataque ao sistema nervoso central (MILLER and STROMLAND 1999). Estudos

epidemiolgicos demonstraram que por volta dos anos 60, a morte de nascidos com defeitos causados pela talidomida chegava prximo dos 40% (MELLIN KATZENTEIN, 1962), alm de um nmero desconhecido de (VARGENSSON, 2009). Os principais defeitos relacionados a m-formao de membros conhecida como focomelia, devido sua semelhana com os membros de focas. membro. J a amelia a completa ausncia de um ou mais membros.
Figura 5 Beb com m formao dos membros.

and

abortos

A focomelia

caracterizada pelo encurtamento ou truncamento do zeugopodo e autopodo do

Microtia ausncia formaes microalftamia, pequenos do

anotia ouvido oculares que

so

formaes no ouvido externo e externo como olhos em respectivamente. Alm desses, mso

so

encontrados

casos de talidomida. Alguns estudos tem mostrado que a talidomida tambm possui efeitos deletrios no desenvolvimento de rgos internos com rins e corao, alguns csos de paralisia de nervura facial e retardo mental. Alguns modelos experimentais tem demonstrado divergncias no mecanismo de teratogenicidade da talidomida. A m formao de membros atinge no s humanos, mas em coelhos e aves e deformaes homologas em nadadeiras de zebrafish (ITO et al. 2010), porm nas aves s ocorre a amelia. Roedores so em suma resistentes aos efeitos da talidomida e seu uso na pesquisa de metabolismo deste frmaco deve ser evitado, os mecanismos dessa imunidade ainda so incertos

Figura de

M por de

formao e ausncia membros ingesto talidomida gestao.

durante

as fases inicias da

USO DA TALIDOMIDA NO TRATAMENTO DE DOENAS O uso teraputico da talidomida se deu em 10964 quando pesquisadores israelenses publicaram trabalhos mostrando os efeitos teraputicos no tratamento da do eritrema nodo leproso. Desde ento, diversas pesquisas tem sido realizadas e aplicaes 2005). Em ratos, a hepatite crnica e posterior cirrose, causada por um aumento de TNF- pelas clulas de Kuppfer, teve seu metabolismo diminudo aps a administrao da talidomida que foi capaz de diminuir reas necrosadas inibindo a produo das TNF- bem como de fatores tumorais. (YEH et al. 2004) A talidomida inibe a produo de TNF-, fator que abundante em articulaes sinoviais acometidas pela artrite reumatoide, causadora de lesionamento decidual e consequente dor juntamente com a Interleucina1 (SARNO et al., 1991; SIGALA., NELLE; HALABE, 2001; KUMAR; WITZIG; RAJKUMAR, 2004). Outros mecanismos relacionados a inibio de TNF- so descritos na literatura por SARNO et al (1991), SIGALA; NELLE; HALABE, 2001.,AARESTRUP; GONALVES DA COSTA; SARNO, 1995;FERNANDEZ-CAMACHO; LEONDORANTES, 2000; WINES; COOPER; WINES, 2002; AZULAY, 2004., E NASCA et al., 1999 no tratamento e recuperao de tuberculose relacionada a benficas da talidomida no tratamento de cncer, problemas dermatolgicos e inflamatrios tem sido elucidados (TEO; STIRLING; ZELDIZ,

AIDS, dermatoses de etiologia autoimune ou inflamatria, doena de Behet, estomatite aftosa, lpus eritematoso, lquen plano, prurigo actinico e nodular e doena de enxerto-versus-hospedeiro. Alm de promover in vitro a migrao e proliferao de ceratincitos. No tratamento de neoplasias, a talidomida empregada devido ao seu efeito anti-inflamatrio, anti- angiognico e imunomodulatorio que capaz de alterar o microambiente e inibindo o desenvolvimento de certos tipos tumorais como maglinidades hematolgicas, tumores slidos e principalmente carcinoma renal que produz altas concentraes de VEGF e TNF- (SAMPAIO, E.P. et al 1991 e 1992; MOREIRA, A.L et al., 1993 ).

CONCLUSO Nos anos 50 houve uma exploso comercial da talidomida como tratamento de reaes adversas da gravidez como enjoos, tonteiras e inibio de abortos. O primeiro foco de distribuio foi a Europa que no tinha um sistema de controle de drogas muito apurado, aceitando a baixa experimentao da droga em ratos e o pocuo uso em outras espcimes. Os estados unidos foi o nico pas que proibiu a comercializao desta droga pois no tinham uma confirmao de seu metabolismo e toxicidade, em meados dos anos 60 mais de 10 mil bebs nasceram com m-formao congnitas causadas pelo uso da talidomida que logo foi retirada do mercado. Durante as experimentaes subsequentes para entender os mecanismos de ao foi elucidado hipteses acerca da ao da talidomida no processo de mformao congnita utilizando-se diversos modelos experimentais como ratos, coelhos, aves e zebrafish. Diversas vias foram descobertas como a supresso de FGFs e IGFs, responsveis pelo desenvolvimento correto dos membros, bem como a diminuio da produo de TNF, fatores de crescimento tumoral. Essas descobertas mudaram a viso acerca do uso da talidomida sendo restrita ao uso em gestantes, mas administrada no tratamento de outras doenas devido ao seu papel anti-inflamatrio e imunomodulatrio. Os estudos em outros animais demonstrou que em ratos existe uma resistncia no efeito congnito da talidomida, vias ainda no descritas, mas que mostram a importncia do uso de modelos experimentais que possam ter seus efeitos transpostos no ser humano.

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