REPLICAO DO DNA Replicao = cpia que reproduz com exatido o original (o que faz o DNA quando se duplica).

Ciclo Celular

Duplicao do DNA (Fase S)

A vida das clulas que se dividem passa por duas etapas que se alternam ciclicamente: a interfase e a mitose. A primeira inclui as fases G1, S e G2. A replicao ocorre na fase S. A condensao do DNA mxima na metfase e na anfase, que passa a se chamar cromossomo depois da separao. Assim, a duplicao constitui o prlogo da diviso celular. Importncia: processo biolgico fundamental da reproduo requer a transmisso fiel da informao gentica dos pais para os filhos; Portanto a replicao acurada do DNA genmico essencial para a existncia de todas as clulas e organismos. Propriedade do DNA - Replicao ou autoduplicao: capacidade de fazer cpias de si mesmo; A replicao do DNA ocorre antes do desenrrolamento das duas cadeias da dupla hlice, cada uma das quais usada como modelo para sintetizar as cadeias novas. A sntese ocorre somente na direo 5 3. Ocorre no ncleo celular; Processo Semiconservativo.

DNA - no sintetizado isoladamente como fita livre mas um molde padro formado por uma fita pr-existente.

A Replicao Semiconservativa:

A Replicao tem algumas semelhanas com a transcrio: Da mesma forma que o RNA, o DNA sintetizado na direo 5 3; Utiliza como modelo uma cadeia de DNA preexistente; Enzimas equivalentes s RNA polimerases, chamadas DNA polimerases, agregam os sucessivos nucleotdeos (tambm um por vez) na extremidade 3 em crescimento. As DNA polimerases catalisam as ligaes fosfodister que se produzem entre OH do C3 da desoxirribose de um nucleotdeo e o fosfato ligado ao C5 do nucleotdeo recm-chegado; As Diferenas entre a Replicao e a Transcrio: O DNA uma molcula dupla e no simples como o RNA; Na sntese do RNA, o DNA transcrito somente nos setores que correspondem aos genes ativos, enquanto na replicao no fica nenhum setor do DNA sem duplicar-se; Para a sntese do RNA, as cadeias do DNA se separam transitoriamente na zona onde se produz a transcrio, e por isso se forma uma espcie de bolha que se desloca na direo 5 3. O RNA copia somente uma das duas cadeias do DNA e, conforme progride a transcrio, se destaca da cadeia que lhe serve de modelo. Na replicao, as duas cadeias servem de molde e uma vez separadas no voltam a se juntar; A replicao exige um nmero consideravelmente maior de enzimas do que na transcrio.

Fidelidade da Replicao: Complementaridade de bases

Atividade corretora das DNAs polimerases exonuclesica 3 5

Incio da Replicao:

 A replicao ocorre sentoriamente (unidades de replicao): O DNA no sintetizado globalmente e sim a partir de mltiplos setores ao longo da molcula (laos). No entanto, no h interrupo da continuidade do DNA, pois a condio unitria de sua molcula no perdida. A duplicao do DNA gerada a partir de mltiplas origens de replicao (seqncias especficas - pb A=T): - Ao longo de cada cromossomo aparecem no DNA mltiplas origens de replicao, o que permite uma duplicao em 7h (fase S) e no em 30dias, no surgindo todas simultaneamente; - Origens de replicao = ARS (DNA especiais) + ORC (complexo de seis protenas); - O ORC alm de participar da ativao das origens de replicao, impede que o DNA se reduplique durante a fase G2, evitando que a clula comece a mitose com um nmero de molculas de DNA acima do normal. - E. Coli uma origem de replicao; - Eucariotas mltiplas origens de replicao.

A Forquilha da Replicao: a replicao do DNA um processo bidirecional, no somente porque as duas cadeias so sintetizadas em direes opostas, mas tambm porque as duas forquilhas avanam em direes divergentes.

Direo da Replicao: As duas fitas so sintetizadas no sentido 5 3 Fita lder contnua: se constri sem maiores complicaes, mediante a agregao contnua de nucleotdeos em sua extremidade 3 medida que a forquilha se desloca;

Fita atrasada descontnua: cresce na direo contrria ao avano da forquilha.

3 Sentido da replicao 5

Fitar lder cresce na direo 5 3, na mesma direo da zona de replicao, sendo sintetizada de forma contnua a partir um primer, catalisado por uma RNA polimerase especfica (DNA primase). Fita secundria cresce na direo oposta a zona de replicao e de modo descontnuo. Os pequenos fragmentos de DNA copiados prximo a zona de replicao que servem como elo de ligao para formar uma fita nica so chamados fragmentos de Okazaki (DNA polimerase alfa). A cadeia descontnua necessita que a DNA primase fabrique muitos primers, um para cada fragmento de Okazaki. Mecanismos de Replicao do DNA Procaritico: Etapas da Replicao: 1. Iniciao - Reconhecimento das origens de replicao - Abertura da cadeia DNA - Sntese do iniciador (primer) 2. Elongao - Sntese das novas fitas de DNA 3. Terminao - Bloqueio da forquilha de replicao (reconhecimento de seqncias especficas) Replissoma complexo de enzimas e protenas necessrios replicao Polimerases; Helicases; Topo-isomerases; Protenas de ligao ao DNA (SSB); Primases; Ligases

Complexo enzimtico da forquilha de replicao: a formao da zona de replicao requer o reconhecimento da origem pelo complexo de pr-formao DnaA: requer a utilizao de ATP fazendo com que o DNA se dissolva, separando a dupla fita; SSB: mantm as duas fitas separadas e protegem o DNA das nucleases que clivam o DNA de fita simples DNA-helicases: ligam-se ao DNA fita simples prximo zona de replicao, movendo-se de modo a forar as fitas a se separarem desenrola a dupla hlice Topoisomerases Catalisam quebras e re-ligaes das fitas de DNA frente da forquilha de replicao - No requer ATP; Primase DNA polimerase que sintetiza pequenas molculas de RNA (com aproximadamente 10 nucleotdeos) iniciadores da fita descontnua; DNA ligase Liga os fragmentos de Okazaki; DNA polimerase - Responsvel pela adio de nucleotdeos (elongao) e reparo (removendo nucleotdeos errados); - So incapazes de quebrar as pontes de hidrognio que ligam as duas fitas do DNA; - Requer um modelo ou um primer (segmento de RNA sintetizado pela primase) complementar para inciao alongamento; - Polimerase I (ta)- Substitui o RNA dos primers por DNA - Polimerase III (sigma) Sntese de DNA

Estrutura da origem de replicao bacteriana Estrutura da origem de replicao bacteriana

Separao da fita de DNA

A origem de replicao OriC altamente conservada!

Elongao Sntese das fitas contnua e descontnua

A elongao da cadeia catalisada pela DNA polimerase III, utilizando o grupo 3-OH do iniciador de RNA como aceptor do primeiro desorribonucleotdeo.

- A sntese de DNA estende-se a partir de iniciadores de RNA - Primase (RNA-polimerase especfica): sintetiza fitas curtas de RNA complementares e antiparalelas ao molde - Primossomo (complexo protico + primase): inicia a formao do fragmento de Okazaki movendo-se junto a fita lder (5 3) para sintetizar um primer de RNA - Sntese dos fragmentos de Okazaki:

Terminao:

Mecanismo de Replicao do DNA Eucarioto: DNA polimerases em eucariotos: DNA Polimerase em eucariotos DNA Polimerase DNA Polimerase Funo Replicao do cromossomo nuclear (fita lagging) Reparo de DNA no preenchimento de espaos do cromossomo nuclear. Anloga a Polimerase I Replicao de DNA mitocondrial Replicao do filamento leader a da lagging do cromossomo nuclear

DNA Polimerase DNA Polimerase

DNA Polimerase DNA Polimerase

Reparo do DNA do cromossomo nuclear Aparentemente reparo de DNA

Telmeros: a replicao dos telmeros dirigida pela telomerase.

Como se observa na imagem, a cadeia 3 5 do DNA composta por numerosas , AATCCC consecutivas que, junto com suas complementares TTAGGG da cadeia 5 3, vo se perdendo durante as divises celulares sucessivas. A recuperao do DNA telomrico comea quando a sequencia AUCCCAAUC do RNA da telomerase une-se a extremidade 3 da cadeia 5 3, ficando ao lado da cadeia 3 5.

A telomerase uma DNA polimerase que copia uma sequencia de RNA, comportando-se como uma transcriptase reversa. Reparao do DNA: A DNA polimerase corrige os erros que ela mesma comete (leitura de provas), para tanto se utiliza da atividade exonucleoltica 3 5 de uma de suas subunidades;

Existe um segundo sistema de reparao a cargo de uma nuclease reparadora (a mesma que remove os primers da sntese contnua e descontnua do DNA): corta a ligao fosfodister que conecta o nucleotdeo errado.